一種抗弓形蟲單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抗弓形蟲單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用，屬于生物制品領(lǐng)域。本發(fā)明通過人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)弓形蟲，對收獲的弓形蟲純化后反復(fù)凍融，免疫小鼠，取脾與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合，篩選得到一株穩(wěn)定分泌弓形蟲單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號為CGMCC No.9559，其分泌的單克隆抗體效價(jià)高，特異性好，可用于弓形蟲的檢測，也可用于制備檢測弓形蟲的試劑盒或診斷試劑，檢測結(jié)果準(zhǔn)確率高，在弓形蟲診斷領(lǐng)域具有較好應(yīng)用前景。CGMCC No955920140812
【專利說明】一種抗弓形蟲單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制品領(lǐng)域與疫苗學(xué)領(lǐng)域，具體地，涉及一種抗抗弓形蟲的單克隆 抗體及產(chǎn)生該抗體的雜交瘤細(xì)胞株和應(yīng)用，以及制備該單克隆抗體的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 弓形蟲又名剛地弓形蟲，呈全球分布，在人和多種動(dòng)物中都能造成廣泛的流行，給 人畜均造成嚴(yán)重的危害。弓形蟲人群的感染率各地不同，許多國家和地區(qū)感染率為25%? 50%，高者達(dá)80%以上，推算全球平均感染率在25%左右，占世界人口的四分之一。我國人 群弓形蟲感染率為4%?9%，被列為"TORCH綜合征"的首要病原體，可經(jīng)胎盤垂直傳播造 成流產(chǎn)，胎兒畸形，死胎等嚴(yán)重后果。
[0003]目前弓形蟲的診斷檢測方法很多，病原學(xué)方法是最準(zhǔn)確的確診手段，但是此方法 靈敏度較低，易漏檢。分子生物學(xué)診斷方法對實(shí)驗(yàn)室條件和操作人員技術(shù)要求較高，不適于 廣泛應(yīng)用。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA)具有簡單、快速、結(jié)果明確、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，已成為臨 床及檢疫診斷領(lǐng)域發(fā)展的一個(gè)方向。因此，為了提高檢測弓形蟲的敏感性和特異性，建立一 種快速、簡易和特異性好的診斷方法是十分必要的，而制備出高親和力的單克隆抗體是其 前提。
[0004] 在已報(bào)道的弓形蟲單克隆抗體制備方法中，根據(jù)免疫小鼠的抗原和抗原的來源不 同，有3種方法。一是通過表達(dá)弓形蟲的某一個(gè)蛋白（?30、5461、5八62、6狀3等）用做免疫 小鼠的抗原來制備單抗，該方法制備的單抗抗體效價(jià)要低于用弓形蟲做抗原制備的單抗。 二是從淋巴細(xì)胞分離液中分離純化弓形蟲，破碎弓形蟲用于免疫小鼠制備單克隆抗體。三 是將弓形蟲注射到小鼠腹腔，從抽取的腹水中分離純化速殖子，破碎速殖子用于免疫小鼠 制備單克隆抗體。第二種方法不適于弓形蟲的大批量擴(kuò)繁。第三種方法在弓形蟲大批量制 備過程中存在成本高，耗時(shí)長，得到的弓形蟲數(shù)量不足等缺點(diǎn)。因此，第二種方法和第三種 方法不易獲取大量的速殖子用于制備弓形蟲的單克隆抗體。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種抗弓形蟲單克隆抗體的制備方法。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供利用上述方法獲得的能夠穩(wěn)定分泌高效抗弓形蟲單 克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
[0007] 本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種生物活性高、特異性高的抗弓形蟲單克隆抗 體，用于檢測弓形蟲。
[0008] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明首先提供一種制備抗弓形蟲單克隆抗體的方法，是采 用人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)弓形蟲，收獲的弓形蟲純化后再免疫小鼠，取脾與骨髓瘤細(xì)胞 SP2/0融合，篩選雜交瘤細(xì)胞株制備腹水，得到抗弓形蟲單克隆抗體。
[0009] 本發(fā)明方法中，使用的人胚肺成纖維細(xì)胞是已經(jīng)商品化應(yīng)用的保藏編號為 CGMCC. 4875的人胚肺成纖維細(xì)胞。
[0010] 具體地，本發(fā)明方法用含8%?10%新生牛血清的MEM培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞， 待細(xì)胞長成單層后棄掉原培養(yǎng)基，換成含1 %?3 %新生牛血清MEM，然后接種弓形蟲，接種 M0I為0. 1?0. 5,5?9天后，待細(xì)胞CPE達(dá)到80%以上時(shí)收獲弓形蟲。優(yōu)選7天后收獲 弓形蟲。
[0011] 在本發(fā)明的制備抗弓形蟲單克隆抗體的方法中，收獲的弓形蟲在純化前還需滅 活。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中了，滅活方法是經(jīng)56°C水浴滅活30min。
[0012] 對收獲并滅活后的弓形蟲通過蔗糖梯度離心進(jìn)行純化。
[0013] 具體的純化方法為：將收獲的弓形蟲滅活后靜置，去除細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)；蔗糖密度 梯度離心：先添加待離心的弓形蟲樣品，再加入低糖，再加入高糖，低糖和高糖按體積比 1:1添加，其中低糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%?20%，高糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%?55%，10000g? 20000g離心 30min?60min。
[0014] 純化后的弓形蟲蟲體反復(fù)凍融5-10次后，與弗氏完全佐劑等體積混合乳化，免疫 注射小鼠。
[0015] 優(yōu)選地，反復(fù)凍融7次。
[0016] 本發(fā)明方法中，純化后的弓形蟲共免疫小鼠4次。免疫后檢測抗體效價(jià)，若抗體效 價(jià)不低于1 :1〇〇〇〇,采用純化后的弓形蟲腹腔沖擊小鼠，采用小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與小鼠 脾細(xì)胞融合技術(shù)篩選分泌抗弓形蟲單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
[0017] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，免疫小鼠的方法是將凍融后的蛋白用〇.〇lmol/L的 PBS稀釋至終濃度為500yg/mL，使其與弗氏完全佐劑各取lmL混合乳化；乳化后于BALB/c 小鼠的背部皮下4點(diǎn)免疫注射，0. 2mL/只；首次免疫后的第14天、28天用500yg/mL的弓形 蟲和弗氏不完全佐劑各取lmL混合乳化，于BALB/c小鼠的背部皮下4點(diǎn)免注射，0. 2mL/只； 首次免疫后35天眼框采血，分離血清，ELISA檢測血清中的抗體效價(jià)，如果抗體效價(jià)不低于 1 :10000,則進(jìn)行腹腔沖擊，將500iig/mL的弓形蟲注射到BALB/c小鼠腹腔，0.lmL/只。
[0018] 本發(fā)明通過上述方法與采用小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與小鼠脾細(xì)胞融合技術(shù)篩選 得到分泌抗弓形蟲單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，于2014年8月12日在中國微生物菌種保 藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏（地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院 微生物研究所，簡稱CGMCC，郵編100101)，分類命名為弓形蟲單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，其 保藏編號為CGMCCNo. 9559。
[0019] 本發(fā)明提供了保藏編號為CGMCCNo. 9559的雜交瘤細(xì)胞株在制備預(yù)防或治療弓形 蟲藥物中的應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明還提供了由上述雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生的單克隆抗體。
[0021] 本發(fā)明提供了保藏編號為CGMCCNo. 9559的雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體在制 備檢測弓形蟲試劑盒中的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明還提供了一種用于檢測弓形蟲的試劑盒，含有本發(fā)明的單克隆抗體。
[0023] 含有本發(fā)明單克隆抗體的用于檢測弓形蟲抗體的試劑盒或檢測試劑也屬于本發(fā) 明的保護(hù)范圍。
[0024] 本發(fā)明還提供了一種非疾病診斷目的的檢測弓形蟲的方法，是采用保藏編號為 CGMCCNo. 9559的雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體進(jìn)行檢測的。
[0025] 本發(fā)明提供的一種制備弓形蟲單克隆抗體的方法，通過人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)弓 形蟲，對收獲的弓形蟲通過蔗糖梯度離心進(jìn)行純化，純化后的弓形蟲經(jīng)反復(fù)凍融后，按弓形 蟲蛋白50yg/只免疫小鼠3次，50yg/只加強(qiáng)免疫一次，取脾與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合，篩 選合適的雜交瘤細(xì)胞株，用篩選的雜交瘤細(xì)胞制備腹水，獲得弓形蟲的單克隆抗體。該方法 同已有的弓形蟲單克隆抗體制備方法相比具有明顯的優(yōu)勢：一是通過細(xì)胞培養(yǎng)解決了弓形 蟲大量培養(yǎng)的問題；二是通過蔗糖梯度離心獲得純度在90%以上的弓形蟲；三是人胚肺成 纖維細(xì)胞培養(yǎng)的弓形蟲免疫原性要高于表達(dá)的弓形蟲的某一個(gè)蛋白，容易篩選到合適的雜 交瘤細(xì)胞株。本發(fā)明方法篩選得到一株穩(wěn)定分泌弓形蟲單克隆合適的雜交瘤細(xì)胞株，其保 藏編號為CGMCCNo. 9559,其分泌的單克隆抗體效價(jià)高，特異性好，可用于弓形蟲的檢測，也 可用于制備檢測弓形蟲的試劑盒或診斷試劑，檢測結(jié)果準(zhǔn)確率高，在弓形蟲診斷領(lǐng)域具有 較好應(yīng)用前景

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1為接種弓形蟲120h的人胚肺成纖維細(xì)胞（100X)
[0027] 圖2為SDS-PAGE鑒定實(shí)施例5的已純化的單抗。

【具體實(shí)施方式】
[0028] 以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離 本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明 的范圍。
[0029] 本發(fā)明實(shí)施例中使用的人胚肺成纖維細(xì)胞保藏編號為CGMCCNo. 4875。BALB/c小 鼠購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為 本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段；實(shí)施例中所用的試劑為市售商品。
[0030] 實(shí)施例1免疫原制備與動(dòng)物免疫（1)
[0031] 1、用人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)弓形蟲（見圖1)，并對收獲的弓形蟲進(jìn)行濃縮純化。
[0032] 弓形蟲培養(yǎng)：用含8%新生牛血清的MEM培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞，待細(xì)胞長成單層 后，棄掉原培養(yǎng)基，加入含1%新生牛血清MEM，接種弓形蟲，接種M0I為0. 1，7天后收獲弓 形蟲。收獲的弓形蟲經(jīng)56°C水浴滅活30min。
[0033] 弓形蟲純化：靜置45min，自然沉降去除細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)；蔗糖密度梯度離心法去除 細(xì)胞碎片：蔗糖密度梯度離心：先添加700ml弓形蟲樣品，再加入低糖溶液500ml，再加入高 糖溶液500ml，其中低糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%，高糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為55%，20000g離心30min取 樣鏡檢純化結(jié)果。在顯微鏡下觀察（200X)到大量的弓形蟲，沒有雜質(zhì)，純度達(dá)到90%以 上。
[0034] 2、純化好的弓形蟲蟲體反復(fù)凍融7次后，將凍融后蛋白為500iig/mL的弓形蟲與 弗氏完全佐劑各取lmL混合乳化；乳化后于BALB/c小鼠的背部皮下4點(diǎn)免疫注射，0. 2mL/ 只。
[0035] 加強(qiáng)免疫；首次免疫后的第14天、28天用500yg/mL的弓形蟲和弗氏不完全佐劑 各取lmL混合乳化，于BALB/c小鼠的背部皮下4點(diǎn)免注射，0. 2mL/只。首次免疫后35天睛 框采血，分離血清，ELISA檢測血清中的抗體效價(jià)。抗體效價(jià)為1 :32768,不低于1 :10000。
[0036] 實(shí)施例2免疫原制備與動(dòng)物免疫（2)
[0037] 1、用人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)弓形蟲，并對收獲的弓形蟲進(jìn)行濃縮純化。
[0038] 弓形蟲培養(yǎng)：用含9%新生牛血清的MEM培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞，待細(xì)胞長成單層 后棄掉原培養(yǎng)基，加入含2%新生牛血清MEM，接種弓形蟲，接種M0I為0. 5, 5天后收獲弓形 蟲。收獲的弓形蟲經(jīng)56°C水浴滅活30min。
[0039] 弓形蟲純化：靜置30min，自然沉降去除細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)；蔗糖密度梯度離心法去除 細(xì)胞碎片：蔗糖密度梯度離心：先添加700ml弓形蟲樣品，再加入低糖溶液500ml，再加入高 糖溶液500ml，其中低糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%，高糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%，10000g離心60min取 樣鏡檢純化結(jié)果。在顯微鏡下觀察（200X)到大量的弓形蟲，沒有雜質(zhì)，純度達(dá)到90%以 上。
[0040] 2、純化好的弓形蟲蟲體反復(fù)凍融10次后，將凍融后蛋白為500i!g/mL的弓形蟲與 弗氏完全佐劑各取lmL混合乳化；乳化后于BALB/c小鼠的背部皮下4點(diǎn)免疫注射，0. 2mL/ 只。
[0041] 加強(qiáng)免疫；首次免疫后的第14天、28天用500yg/mL的弓形蟲和弗氏不完全佐劑 各取lmL混合乳化，于BALB/c小鼠的背部皮下4點(diǎn)免注射，0. 2mL/只。首次免疫后35天睛 框采血，分離血清，ELISA檢測血清中的抗體效價(jià)?？贵w效價(jià)為1:16384,不低于1 :10000。
[0042] 實(shí)施例3免疫原制備與動(dòng)物免疫（3)
[0043] 1、用人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)弓形蟲，并對收獲的弓形蟲進(jìn)行濃縮純化。
[0044] 弓形蟲培養(yǎng)：用含10%新生牛血清的培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞，待細(xì)胞長成單 層后棄掉原培養(yǎng)基，加入含2 %新生牛血清MEM，接種弓形蟲，接種M0I為0. 1，6天后收獲弓 形蟲。收獲的弓形蟲經(jīng)56°C水浴滅活30min。
[0045] 弓形蟲純化：靜置60min，自然沉降去除細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)；蔗糖密度梯度離心法去除 細(xì)胞碎片：蔗糖密度梯度離心：先添加700ml弓形蟲樣品，再加入低糖溶液500ml，再加入高 糖溶液500ml，其中低糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%，高糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為53%，15000g離心45min取 樣鏡檢純化結(jié)果。在顯微鏡下觀察（200X)到大量的弓形蟲，沒有雜質(zhì)，純度達(dá)到90%以 上。
[0046] 2、純化好的弓形蟲蟲體反復(fù)凍融5次后，將凍融后蛋白為500iig/mL的弓形蟲與 弗氏完全佐劑各取lmL混合乳化；乳化后于BALB/c小鼠的背部皮下4點(diǎn)免疫注射，0. 2mL/ 只。
[0047] 加強(qiáng)免疫；首次免疫后的第14天、28天用500yg/mL的弓形蟲和弗氏不完全佐劑 各取lmL混合乳化，于BALB/c小鼠的背部皮下4點(diǎn)免注射，0. 2mL/只。首次免疫后35天睛 框采血，分離血清，ELISA檢測血清中的抗體效價(jià)。抗體效價(jià)為1:16384,不低于1 :10000。
[0048] 實(shí)施例4細(xì)胞融合與建株
[0049] 實(shí)施例1-3方法得到的免疫原的抗體效價(jià)均符合制備腹水的要求。本實(shí)施例采用 實(shí)施例1方法制得的弓形蟲對小鼠進(jìn)行腹腔沖擊，500yg/mL的弓形蟲注射到BALB/c小鼠 腹腔，0.lmL/只。
[0050] (1)骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備：細(xì)胞融合前兩周復(fù)蘇培養(yǎng)SP2/0細(xì)胞株，融合前3天擴(kuò)大 培養(yǎng)，融合前1天將細(xì)胞培養(yǎng)液去除，重新添加培養(yǎng)液。
[0051] (2)脾細(xì)胞制備：處死進(jìn)行動(dòng)物免疫的小鼠，按照常規(guī)方法制備小鼠脾細(xì)胞懸液。
[0052] (3)根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果將脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0分別加入適量無血清1640培養(yǎng) 液，SP2/0細(xì)胞晃動(dòng)混勻，脾細(xì)胞吹打均勻。
[0053] (4)將脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞按2:1?5:1(本實(shí)施例為2:1)的比例混合于一支 50ml離心管中，混勻。
[0054] (5)加無血清1640培養(yǎng)液至50ml，1500rpm離心5min，將上清盡量倒凈，可用移液 器將管口液體吸凈。
[0055] (6)輕擊融合管底，使沉淀細(xì)胞松散均勻，離心管置于37°C水浴，準(zhǔn)備融合。
[0056] (7)將37°C保溫的lmlPEG1500,用滴管緩慢滴入離心管，邊滴邊轉(zhuǎn)動(dòng)離心管，使 細(xì)胞保存在混勻狀態(tài)。
[0057] (8)靜置90s，立即在2?4min(本實(shí)施例為3min)內(nèi)緩慢加入15ml無血清的1640 培養(yǎng)基（37°C)，盡可能不攪動(dòng)細(xì)胞。
[0058] (9) 1500rpm離心 5min，棄去上清。
[0059] (10)加入含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液，輕輕混勻，將混懸液分別加至96孔細(xì) 胞培養(yǎng)板中，每孔1〇〇U1。
[0060](11)將培養(yǎng)板放到37°C，5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
[0061] (12)融合第2天，添加HAT培養(yǎng)液，每孔100y1。
[0062] (13)每2?3天換一次HAT培養(yǎng)液，連續(xù)兩周觀察雜交瘤是否出現(xiàn)，兩周后換用 HT培養(yǎng)基，觀察融合細(xì)胞的生長狀況。
[0063] (14)雜交瘤細(xì)胞的篩選：細(xì)胞融合后第七天開始觀察雜交瘤細(xì)胞生長情況，待細(xì) 胞覆蓋孔底面積1/10以上時(shí)吸出上清進(jìn)行抗體ELISA檢測。陽性孔細(xì)胞轉(zhuǎn)入24孔板擴(kuò)大 培養(yǎng)，及時(shí)做亞克隆。
[0064] (15)經(jīng)3次亞克隆得到穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系，命名為Tox-Gl。將雜交瘤細(xì)胞 株進(jìn)行保藏，保藏號CGMCCN0. 9559,分類命名為：弓形蟲單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；保藏 時(shí)間：2014年8月12日；保藏單位：中國普通微生物菌種保藏管理中心（ChinaGeneral MicrobiologicalCultureCollectionCenter，CGMCC)，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路 1 號 院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。
[0065]實(shí)施例5單抗細(xì)胞株腹水制備與抗體效價(jià)檢測及單抗的純化 [0066] 按常規(guī)方法將凍存的實(shí)施例4獲得的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，培養(yǎng)到細(xì)胞覆蓋瓶底 的80 %左右時(shí)搖下細(xì)胞，計(jì)數(shù)5X106個(gè)/mL，腹腔免疫BALB/c小鼠，0. 5mL/只，制備腹水。 [0067] 弓形蟲單抗腹水鑒定：采用間接ELISA法檢測抗體的效價(jià)。弓形蟲5iig/ml包被 過夜后檢測腹水的抗體效價(jià)，抗體效價(jià)為1〇6。具體結(jié)果見表1。
[0068] 表1腹水中抗體效價(jià)檢測結(jié)果
[0069]

【權(quán)利要求】
1. 一種制備抗弓形蟲單克隆抗體的方法，其特征在于，采用人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)弓 形蟲，收獲的弓形蟲純化后免疫小鼠。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，人胚肺成纖維細(xì)胞長成單層后棄掉原培養(yǎng) 基，換用含1 %?3 %新生牛血清MEM培養(yǎng)基，接種弓形蟲，接種MOI為0. 1?0. 5,培養(yǎng)弓形 蟲5?9天后，待細(xì)胞CPE達(dá)到80%以上時(shí)，收獲弓形蟲。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，對收獲的弓形蟲通過蔗糖梯度離心進(jìn)行 純化：對收獲的弓形蟲滅活后靜置，去除細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)；加入低糖，再加入高糖，低糖和高 糖的體積比為1:1，其中低糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%?20%，高糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%?55%， 10000g ?20000g 離心 30min ?60min。
4. 一種抗弓形蟲單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號為CGMCC No. 9559。
5. 權(quán)利要求4所述雜交瘤細(xì)胞株在制備檢測弓形蟲試劑盒中的應(yīng)用。
6. 由權(quán)利要求4所述雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的單克隆抗體。
7. -種用于檢測弓形蟲或其抗體的試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求6所述的單克 隆抗體。
8. 含有權(quán)利要求6所述單克隆抗體的檢測試劑。
9. 權(quán)利要求4所述的雜交瘤細(xì)胞株或權(quán)利要求6所述的單克隆抗體在制備預(yù)防或治療 弓形蟲藥物中的應(yīng)用。
10. -種非疾病診斷目的的檢測弓形蟲的方法，其特征在于，采用保藏編號為CGMCC No. 9559的雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體進(jìn)行檢測。
【文檔編號】C12N5/20GK104387470SQ201410613919
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月4日
【發(fā)明者】童欽, 張星星, 姚志東, 劉可心, 高強(qiáng), 尹衛(wèi)東 申請人:北京科興生物制品有限公司