一種分離單個(gè)細(xì)胞的裝置制造方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，所述裝置包括依次連接的細(xì)胞采集管、手持管、連通管、微孔過濾器和口吸管；其中，所述細(xì)胞采集管被設(shè)置用于從樣品中吸取單個(gè)細(xì)胞；所述手持管被設(shè)置用于控制所述細(xì)胞采集管；所述微孔過濾器被設(shè)置用于阻隔微生物。使用本實(shí)用新型的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，通過口吸法可以簡單有效地挑取單個(gè)細(xì)胞，以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、基因組測序等科學(xué)研究。
【專利說明】一種分離單個(gè)細(xì)胞的裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地涉及一種分離單個(gè)細(xì)胞的裝置。

【背景技術(shù)】
[0002]近年來，單細(xì)胞水平的研宄已廣泛應(yīng)用于單細(xì)胞PCR擴(kuò)增、基因組測序和組織工程研宄等領(lǐng)域。隨著研宄的深入，單個(gè)腫瘤細(xì)胞的有效分離和培養(yǎng)成為了腫瘤細(xì)胞發(fā)生的分子機(jī)制、腫瘤細(xì)胞的靶向治療以及微環(huán)境相互作用等研宄中迫切解決的難題之一。
[0003]當(dāng)前的單細(xì)胞分離方法包括:(I)熒光流式細(xì)胞技術(shù)分離法:該方法可有效獲得單個(gè)細(xì)胞，但是對細(xì)胞儀的性能要求較高，儀器價(jià)格高昂；(2)激光顯微切割術(shù):能夠從組織中分離單個(gè)細(xì)胞，但是不適用于細(xì)胞培養(yǎng)與擴(kuò)增，需要操作者熟練掌握技術(shù)；(3)顯微操控儀:采用顯微操控技術(shù)從單細(xì)胞懸液中吸取單細(xì)胞，但成本高，操作復(fù)雜；(4)手工機(jī)械分離法:在倒置顯微鏡下直接分離細(xì)胞，但容易損傷細(xì)胞。
[0004]有鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，本領(lǐng)域技術(shù)人員致力于開發(fā)一種簡單、有效、低成本的單細(xì)胞分離裝置。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0005]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中單個(gè)細(xì)胞分離困難、設(shè)備要求高、技術(shù)依賴性強(qiáng)的問題，本實(shí)用新型提供了一種結(jié)構(gòu)簡單、容易操作的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，利用該裝置進(jìn)行分離的單個(gè)細(xì)胞可用于后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)，或者用于核酸或蛋白分析的方法。
[0006]基于以上目的，本實(shí)用新型提供了一種分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，所述裝置包括依次連接的:
[0007]細(xì)胞采集管、手持管、連通管、微孔過濾器和口吸管。
[0008]其中，所述細(xì)胞采集管被設(shè)置用于從樣品中吸取單個(gè)細(xì)胞；
[0009]所述手持管被設(shè)置用于控制所述細(xì)胞采集管；
[0010]所述微孔過濾器被設(shè)置用于阻隔微生物。
[0011]在另一優(yōu)選例中，所述裝置還包括第一接頭，所述細(xì)胞采集管和所述手持管通過所述第一接頭連接。
[0012]在另一優(yōu)選例中，所述第一接頭由硅膠制成，在所述接頭的一端設(shè)有供所述細(xì)胞采集管插入的孔。
[0013]在另一優(yōu)選例中，所述手持管中填充有吸附材料，所述吸附材料優(yōu)選為脫脂棉。
[0014]在另一優(yōu)選例中，所述手持管由硬質(zhì)透明材料制成。所述硬質(zhì)透明材料包括但不限于玻璃、塑料等。
[0015]在另一優(yōu)選例中，所述裝置還包括第二接頭，所述微孔過濾器和所述口吸管通過所述第二接頭連接。
[0016]在另一優(yōu)選例中，所述微孔過濾器的過濾面積為口吸管橫截面面積的2-10倍，優(yōu)選地為3-5倍。
[0017]在另一優(yōu)選例中，所述微孔過濾器孔徑為0.1-0.5 μ m，優(yōu)選地為0.1-0.22 μ m。
[0018]在另一優(yōu)選例中，所述細(xì)胞采集管為微徑玻璃管。
[0019]在另一優(yōu)選例中，所述微徑玻璃管直徑為15-50 μ m，優(yōu)選地為25-45 μ m，更優(yōu)選地為30 μπ?ο
[0020]在另一優(yōu)選例中，所述連通管的長度為30cm-60cm，優(yōu)選地為50cm。
[0021]在另一優(yōu)選例中，所述連通管由柔性的材質(zhì)制成，所述柔性的材質(zhì)包括但不限于橡膠、PVC、聚烯烴熱塑彈性體(TPE)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1是本實(shí)用新型一個(gè)較佳實(shí)施方式的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本實(shí)用新型。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本實(shí)用新型而不用于限制本實(shí)用新型的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0024]實(shí)施例1
[0025]如圖1所示，本實(shí)用新型的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置包括依次連接的細(xì)胞采集管1、手持管3、連通管4、微孔過濾器5和口吸管6 ;所述細(xì)胞采集管I被設(shè)置用于從樣品中吸取單個(gè)細(xì)胞；所述手持管3被設(shè)置用于控制所述細(xì)胞采集管，通過握持手持管3控制細(xì)胞采集管的運(yùn)動(dòng)方向；所述微孔過濾器5被設(shè)置用于阻隔微生物。
[0026]本實(shí)施例中，細(xì)胞采集管I為內(nèi)徑為30 μπι的微徑玻璃管。所述裝置還包括第一接頭2，所述細(xì)胞采集管I和所述手持管3通過所述第一接頭2連接。接頭2由硅膠制成，在所述接頭2的一端設(shè)有供所述細(xì)胞采集管I插入的孔。該設(shè)計(jì)方便隨時(shí)更換細(xì)胞采集管1，以分離不同的細(xì)胞，或處理不同的樣品，而不用更換整個(gè)細(xì)胞分離裝置。
[0027]在手持管3為外徑為10_的中空中性玻璃管，填充有脫脂棉，可以吸取使用過程中產(chǎn)生的水汽，也可以吸取過量吸入的細(xì)胞培養(yǎng)液。
[0028]本實(shí)施例中，連通管4為50cm長的內(nèi)徑為8mm外徑為12mm的橡膠管，一端于手持管3連接，另一端宇微孔過濾器5連接。
[0029]微孔過濾器5的孔徑為0.2 μ m，可以有效的將人與細(xì)胞樣品相隔離，既能有效的防止人的呼出氣體對細(xì)胞樣品的污染，也可以防止細(xì)胞樣本可能帶有的微生物對人造成感染。微孔過濾器5的過濾面積遠(yuǎn)大于口吸管橫截面的面積，使得吸氣更順暢，操作更穩(wěn)定。
[0030]在其它實(shí)施方式中，在微孔過濾器5和口吸管6之間設(shè)置第二連接頭，在口吸管6內(nèi)放入適量干凈的吸水紙，以吸附呼出氣體中的水蒸氣，當(dāng)需要更換口吸管時(shí)，可以方便地將口器管6取下更換，而不需要更換整個(gè)的分離裝置。
[0031]在使用本實(shí)用新型的裝置前，需要檢測裝置的氣密性，將裝置置于水中，從口吸管6吹氣，觀察各個(gè)連接處是否有氣泡產(chǎn)生，如果沒有氣泡產(chǎn)生，而且只有細(xì)胞采集管I處冒氣泡，說明裝置氣密性好，可以用于單細(xì)胞挑取實(shí)驗(yàn)。
[0032]使用方法:
[0033]挑取細(xì)胞之前，用細(xì)胞采集管蘸少量PBS無菌溶液，在4倍物鏡下，將細(xì)胞采集管緩慢插入到細(xì)胞懸液中，顯微鏡觀察控制，在操作過程當(dāng)中，要確保細(xì)胞采集管沒有吸入細(xì)胞懸液。將顯微鏡切換至10倍鏡下，觀察顯微鏡下的細(xì)胞采集管和細(xì)胞，將細(xì)胞采集管移至只有I個(gè)細(xì)胞的視野，然后對準(zhǔn)細(xì)胞，輕微口吸，保證細(xì)胞進(jìn)入到細(xì)胞采集管。吸取過程中保持呼吸均勻，不能用力過猛，防止吸取多個(gè)細(xì)胞。
[0034]將吸入細(xì)胞的細(xì)胞采集管移出，插入細(xì)胞培養(yǎng)液或者細(xì)胞裂解液，小心吹出。如果是后續(xù)培養(yǎng)，則將吸取的細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)液中；如果是后續(xù)進(jìn)行核酸或蛋白分析，則將細(xì)胞置于相應(yīng)的裂解液中，立即進(jìn)行細(xì)胞裂解。
[0035]本實(shí)用新型的操作簡單，耗時(shí)短，成本低，具有很好的應(yīng)用價(jià)值。
[0036]實(shí)施例2 —種用于后續(xù)培養(yǎng)的活的單個(gè)細(xì)胞的分離
[0037]取培養(yǎng)好的細(xì)胞懸液100 μ L,置于96孔板的一個(gè)小孔中，使用實(shí)施例1中的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置進(jìn)行單細(xì)胞分離。
[0038](I)在倒置顯微鏡下面觀察96孔板中的細(xì)胞，確定細(xì)胞挑取視野。
[0039](2)先將細(xì)胞采集管插入PBS中并迅速取出再插入PBS，由于毛細(xì)管吸附和大氣壓強(qiáng)的作用，玻璃口吸管中會(huì)自動(dòng)吸入由一個(gè)氣泡分隔成兩段的PBS液體。
[0040](3)在4倍物鏡下，將細(xì)胞采集管緩慢插入到細(xì)胞懸液中，在顯微鏡下觀察管孔，直到能清楚地看到管孔為止，在操作過程當(dāng)中，要確保細(xì)胞采集管沒有吸入細(xì)胞懸液。根據(jù)目的細(xì)胞大小，將顯微鏡切換至10倍或20倍鏡下，觀察顯微鏡下的細(xì)胞采集管和細(xì)胞，將細(xì)胞采集管管孔移至只有I個(gè)細(xì)胞的視野，然后管孔對準(zhǔn)細(xì)胞，輕微用口吸取，保證細(xì)胞進(jìn)入到細(xì)胞采集管。吸取過程中保持呼吸均勻，不能用力過猛，防止吸取多個(gè)細(xì)胞。
[0041](4)將吸入細(xì)胞的細(xì)胞采集管移出，插入細(xì)胞培養(yǎng)液中，小心吹出至PBS氣泡處。將吸取的細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)液中進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)胞培養(yǎng)。
【權(quán)利要求】
1.一種分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述裝置包括依次連接的細(xì)胞采集管、手持管、連通管、微孔過濾器和口吸管； 其中，所述細(xì)胞采集管被設(shè)置用于從樣品中吸取單個(gè)細(xì)胞； 所述手持管被設(shè)置用于控制所述細(xì)胞采集管； 所述微孔過濾器被設(shè)置用于阻隔微生物。
2.如權(quán)利要求1所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述裝置還包括第一接頭，所述細(xì)胞采集管和所述手持管通過所述第一接頭連接。
3.如權(quán)利要求1所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述手持管中填充有脫脂棉。
4.如權(quán)利要求1所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述手持管由硬質(zhì)透明材料制成。
5.如權(quán)利要求1所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述裝置還包括第二接頭，所述微孔過濾器和所述口吸管通過所述第二接頭連接。
6.如權(quán)利要求1所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述微孔過濾器的過濾面積為口吸管橫截面面積的2-10倍。
7.如權(quán)利要求1所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述微孔過濾器孔徑為0.1-0.5 μ m。
8.如權(quán)利要求1所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述細(xì)胞采集管為微徑玻璃管。
9.如權(quán)利要求8所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述微徑玻璃管內(nèi)徑為25-45 μm0
10.如權(quán)利要求1所述的分離單個(gè)細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述連通管的長度為30cm_60cmo
【文檔編號(hào)】C12M1/12GK204224593SQ201420693779
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月18日
【發(fā)明者】張楨珍, 李晶, 樓敬偉, 許騁, 吳云鳴, 易靜, 丁飛飛 申請人:上海張江轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研發(fā)中心有限公司, 上海寶藤生物醫(yī)藥科技有限公司, 上海寶藤醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司