本發(fā)明涉及檸檬酸料渣發(fā)酵領(lǐng)域，尤其涉及一種以檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣為基料發(fā)酵制備高蛋白飼料的方法。
背景技術(shù)：
我國是檸檬酸生產(chǎn)大國，檸檬酸產(chǎn)量位居世界第一，目前檸檬酸工業(yè)生產(chǎn)常用的原料主要是玉米，以玉米作為原料生產(chǎn)檸檬酸，具有低能耗、低污染、高效益等優(yōu)點(diǎn)，越來越受到檸檬酸生產(chǎn)企業(yè)的青睞，而玉米發(fā)酵廢渣產(chǎn)量也呈急劇上升之勢，以玉米發(fā)酵制備檸檬酸產(chǎn)生的主要副產(chǎn)物是玉米淀粉渣和菌絲渣。玉米淀粉渣為玉米經(jīng)液化后過濾得到的渣料，水分含量為50-60％，由于液化過程僅消耗了玉米淀粉，玉米淀粉渣中含有多種營養(yǎng)成分如粗蛋白、多糖、脂肪、粗纖維、氨基酸、維生素等；菌絲渣則是檸檬酸發(fā)酵液經(jīng)壓榨過濾后得到的渣料，水分含量為60-70％，由于經(jīng)過微生物發(fā)酵，菌絲渣中含有大量的黑曲霉菌絲體以及菌體蛋白，并含有糖類、脂肪、無機(jī)鹽、維生素等以及1-3％的檸檬酸。檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣富含多種營養(yǎng)物質(zhì)，但是可被動(dòng)物有效吸收利用的成分有限，目前檸檬酸生產(chǎn)企業(yè)一般將玉米淀粉渣和菌絲渣按照一定比例混合、烘干作為飼料原料直接出售給飼料廠，經(jīng)混合后的檸檬酸廢渣中含總糖約30-36％，粗纖維10-15％，粗蛋白20-26％，粗脂肪11-16％，灰分2.5-3.5％。因未對(duì)各種營養(yǎng)成分進(jìn)行提取分離，檸檬酸渣料蛋白質(zhì)含量有限，粗纖維含量高，動(dòng)物食用后不易吸收和利用，一般需與其他動(dòng)物飼料搭配使用且在飼料中添加量有限，在飼料行業(yè)中未能得到充分利用，售價(jià)一直較低。
如何能夠?qū)崿F(xiàn)上述兩種廢料的更好再生利用，創(chuàng)造更高的附加值，成為現(xiàn)有技術(shù)亟待解決的問題之一。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述情況，提供了一種以檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣為基料經(jīng)混合菌種發(fā)酵制備高蛋白飼料的方法。以檸檬酸發(fā)酵產(chǎn)生的玉米淀粉渣和菌絲渣作為固態(tài)培養(yǎng)基，添加復(fù)合酶制劑和混合菌種進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵后的產(chǎn)品經(jīng)烘干、粉碎制成高蛋白飼料產(chǎn)品。本發(fā)明利用生物發(fā)酵技術(shù)對(duì)檸檬酸生產(chǎn)中的玉米淀粉渣和菌絲渣進(jìn)行高效利用，提高了檸檬酸發(fā)酵渣料的利用價(jià)值，使其成為具有高附加值的新型蛋白飼料。發(fā)酵后的高蛋白飼料富含大量菌體蛋白、有機(jī)酸、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、微量元素、生物酶類及增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的多肽、小肽等物質(zhì)，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值，兼具營養(yǎng)、誘食及益生等多種功能，利于動(dòng)物消化吸收，改善動(dòng)物消化機(jī)能，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：
一種以檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣為基料發(fā)酵制備高蛋白飼料的方法，其具體步驟為：
(1)菌種活化：將低溫保藏的產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉分別接種到馬鈴薯瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于30-35℃條件下培養(yǎng)24-32小時(shí)；
(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)：將活化的菌種分別接種到裝有馬鈴薯液體培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行搖床擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30-35℃，培養(yǎng)36-48小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速為150-250rpm，得到各菌種的菌液，各菌液中活菌數(shù)為2-6×109cfu/mL；
(3)配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：將檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣按照質(zhì)量比1：1.5-4混合并攪拌均勻，濕度控制在55-65％；用10wt％的氫氧化鈉溶液將混合料的pH值調(diào)整為4.8-5.5，在121℃條件下，高溫高壓滅菌20min，自然冷卻至室溫；
(4)添加復(fù)合酶制劑：上述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加復(fù)合酶制劑，包括糖化酶、纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣計(jì)分別為：糖化酶5-10mg，纖維素酶6-8mg，淀粉酶6-12mg，蛋白酶10-15mg；在33-38℃保溫發(fā)酵3-5小時(shí)；
(5)一段固態(tài)發(fā)酵：將米曲霉和枯草芽孢桿菌菌液接種固態(tài)培養(yǎng)基中，添加量按照步驟(3)中固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)分別為：枯草芽孢桿菌0.4-0.8％，米曲霉菌1.5-2.0％；攪拌均勻，在溫度為28-35℃的條件下，培養(yǎng)48-60小時(shí)，獲得一段發(fā)酵培養(yǎng)液；
(6)二段固態(tài)發(fā)酵：將產(chǎn)阮假絲酵母菌菌液接種到一段固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)液中，菌種添加量按照步驟(3)中固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)為0.6-1.2％；攪拌均勻，在溫度為28-35℃的條件下，培養(yǎng)60-72小時(shí)；
(7)烘干、粉碎：將發(fā)酵完成的固態(tài)培養(yǎng)基進(jìn)行烘干，至水分含量為10％左右，粉碎成粉末狀，即可得到高蛋白飼料。
上述獲得的飼料中蛋白質(zhì)含量可達(dá)到45-60％，纖維素含量降低到2.5-4.0％。
為了更好的適應(yīng)微生物菌種的生長，可在步驟(3)配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)，按檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣混合物質(zhì)量加入1-1.5％硫酸銨、0.4-0.6％磷酸二氫鉀，0.1-0.2％硫酸鎂。
本發(fā)明采用混合菌種協(xié)同發(fā)酵，經(jīng)前期進(jìn)行菌種優(yōu)化篩選，采用的混合菌種包括產(chǎn)阮假絲酵母、枯草芽孢桿菌和米曲霉，上述產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉均購自中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，具體可選擇為米曲霉(菌種保藏號(hào)CGMCC3.4437)、枯草芽孢桿菌(菌種保藏號(hào)CGMCC1.831)、產(chǎn)阮假絲酵母(菌種保藏號(hào)CGMCC2.2066)，除上述備選菌種除上述備選外，還可采用其他備選的產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉菌種；
產(chǎn)阮假絲酵母中蛋白質(zhì)和維生素B的含量均較高，可利用各種工業(yè)廢液進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)出動(dòng)物可利用的蛋白質(zhì)。米曲霉是一類產(chǎn)復(fù)合酶的菌株，可產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、纖維素酶、植酸酶等。在淀粉酶、糖化酶、纖維素酶的作用下，可將原料中的直鏈、支鏈淀粉、纖維素降解為糊精及各種小分子糖類，酵母菌以這些糖類為營養(yǎng)生長繁殖，將其轉(zhuǎn)化為菌體蛋白，不斷增加產(chǎn)物中蛋白質(zhì)含量；在蛋白酶的作用下，可將渣料中不易消化的大分子蛋白降解為蛋白胨、多肽及各種氨基酸，而且可使原料中的粗纖維、植酸等難吸收的物質(zhì)降解，提高渣料的營養(yǎng)價(jià)值、保健功效和消化率?？莶菅挎邨U菌可產(chǎn)纖維素酶，降解纖維素，且在生長過程中可產(chǎn)生枯草菌素、制霉菌素、短桿菌肽等多種對(duì)致病菌有明顯抑制作用的活性物質(zhì)，菌體中含有不易致死的芽孢，飼喂時(shí)以活菌狀態(tài)進(jìn)入動(dòng)物的消化系統(tǒng)，可抑制腸道中有害菌的生長。
為提高微生物發(fā)酵效率、增強(qiáng)發(fā)酵效果，在利用混合菌種進(jìn)行發(fā)酵之前，本發(fā)明在固態(tài)培養(yǎng)基中添加了復(fù)合酶制劑，包括糖化酶、纖維素酶、中溫淀粉酶、蛋白酶以初步分解渣料中的淀粉、纖維素、果膠及粗蛋白等物質(zhì)。同時(shí)采用兩段式固態(tài)發(fā)酵，在固態(tài)培養(yǎng)基上首先接入枯草芽孢桿菌和米曲霉，將培養(yǎng)基中的淀粉、纖維素、果膠等物質(zhì)進(jìn)一步分解為小分子糖類，然后接入產(chǎn)阮假絲酵母可直接利用已產(chǎn)生的小分子糖類進(jìn)行繁殖生長，產(chǎn)生大量的菌體蛋白。
檸檬酸玉米淀粉渣為玉米經(jīng)液化后的產(chǎn)物，僅消耗了玉米中的淀粉，其他營養(yǎng)成分不僅未減少，反而相對(duì)增加，其與菌絲渣混合經(jīng)產(chǎn)阮假絲酵母發(fā)酵產(chǎn)生大量菌體蛋白，菌體蛋白氨基酸齊全，配比組成合理，是一種營養(yǎng)價(jià)值高的優(yōu)質(zhì)蛋白，可促進(jìn)動(dòng)物新陳代謝，提高動(dòng)物生長速度和繁殖能力。且微生物產(chǎn)生的各種酶類及活性因子能夠抑制腸道中有害菌的生長、促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)有益菌體的繁殖，從而提高動(dòng)物的免疫力和抗病能力。
本發(fā)明在固態(tài)發(fā)酵過程中添加多種益生菌和酶制劑，可產(chǎn)生大量菌體蛋白、多種有機(jī)酸、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、微量元素、生物酶類及增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的多肽、小肽等物質(zhì)，使得飼料不僅含有豐富的活性蛋白質(zhì)及各類易消化吸收的營養(yǎng)成分，還含有足量的益生菌，大大提高了檸檬酸渣料的營養(yǎng)水平和消化利用率。且在發(fā)酵過程中會(huì)產(chǎn)生一定的香氣成分，可增加動(dòng)物的適口性，促進(jìn)消化液的分泌，刺激動(dòng)物食欲。經(jīng)本發(fā)明混合菌種發(fā)酵制備的飼料具有營養(yǎng)、誘食及益生等多種功能，經(jīng)測定蛋白質(zhì)含量可提高到45-60％，纖維素降低到2.5-4.0％，且飼料中含有多種利于吸收的營養(yǎng)成分及益生菌類。
本發(fā)明的有益效果為：
從發(fā)酵原料來看，本發(fā)明利用檸檬酸企業(yè)的副產(chǎn)品玉米淀粉渣和菌絲渣作為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵，原料價(jià)格低廉且易于獲取，制備獲得的飼料營養(yǎng)豐富、易于吸收，提高了檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣的利用附加值。
從飼料品質(zhì)來看，經(jīng)微生物發(fā)酵后，檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣中難以被消化利用的淀粉、纖維素、果膠等物質(zhì)分解轉(zhuǎn)化為單糖或多糖以進(jìn)一步被利用；無機(jī)蛋白質(zhì)則分解轉(zhuǎn)化為多肽、小肽、氨基酸。本發(fā)明利用混合菌種進(jìn)行發(fā)酵，并加入復(fù)合酶制劑進(jìn)行協(xié)同發(fā)酵分解，可獲得良好的生物轉(zhuǎn)化效率；玉米淀粉渣和菌絲渣經(jīng)發(fā)酵分解后含有多種有益微生物活菌、菌體蛋白以及消化酶和小分子類營養(yǎng)物質(zhì)，能夠被動(dòng)物充分吸收利用?；旌暇N發(fā)酵還可提高飼料的安全性，能夠發(fā)酵脫毒。
從經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益來看，本發(fā)明經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，對(duì)檸檬酸發(fā)酵產(chǎn)生的玉米淀粉渣和菌絲渣進(jìn)行微生物發(fā)酵，方法安全高效綠色，從根本上改變了玉米淀粉渣和菌絲渣營養(yǎng)價(jià)值有限、利用價(jià)值低的缺點(diǎn)，投放市場后能有很高的經(jīng)濟(jì)回報(bào)；利用本發(fā)明生產(chǎn)的高蛋白飼料，所用原料易于獲取，且價(jià)格低廉，制備工藝簡單，適于規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明，應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、產(chǎn)阮假絲酵母和米曲霉的斜面培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基，其配制方法按照行業(yè)內(nèi)常用的方法進(jìn)行，將馬鈴薯洗凈去皮切成薄片，稱取200g加蒸餾水煮沸，保持微沸30min，用四層紗布過濾，濾液中加入35-40g葡萄糖，20g瓊脂，補(bǔ)水至1000ml，分裝至試管中，121℃滅菌20min，冷卻后備用。
用于菌種擴(kuò)大培養(yǎng)的為馬鈴薯液體培養(yǎng)基，也按照行業(yè)內(nèi)常用方法進(jìn)行，將馬鈴薯洗凈去皮切成薄片，稱取200g加蒸餾水煮沸，保持微沸30min，用四層紗布過濾，濾液中加入20g葡萄糖，補(bǔ)水至1000ml，用三角瓶分裝，121℃滅菌20min，冷卻后備用。
本發(fā)明所用菌種購自中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；本實(shí)施中選自米曲霉(菌種保藏號(hào)CGMCC3.4437)、枯草芽孢桿菌(菌種保藏號(hào)CGMCC1.831)、產(chǎn)阮假絲酵母(菌種保藏號(hào)CGMCC2.2066)，但不局限于上述選擇。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)特征作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1：
(1)菌種活化：將低溫保藏的產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉分別接種到馬鈴薯瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于33℃條件下培養(yǎng)28小時(shí)。
(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)：將活化的菌種分別接種到裝有馬鈴薯液體培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行搖床擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為33℃，培養(yǎng)42小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm，得到各菌種的菌液，其中產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉菌液中活菌數(shù)分別為3.5×109cfu/mL、5.9×109cfu/mL、2.6×109cfu/mL。
(3)配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：取檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣按照質(zhì)量比1:2.5進(jìn)行混合并攪拌均勻，添加少量水分使料渣濕度為60％；按檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣混合物質(zhì)量加入1.2％硫酸銨、0.5％磷酸二氫鉀，0.15％硫酸鎂；用10wt％的氫氧化鈉溶液將混合料的pH值調(diào)整為5.2，在121℃條件下，高溫高壓滅菌20min，自然冷卻至室溫；
(4)添加復(fù)合酶制劑：固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加復(fù)合酶制劑，包括糖化酶、纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣計(jì)分別為：糖化酶8mg，纖維素酶7mg，淀粉酶10mg，蛋白酶12mg，在35℃保溫發(fā)酵4小時(shí)。
(5)一段固態(tài)發(fā)酵：將米曲霉和枯草芽孢桿菌菌液接種固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)分別為：枯草芽孢桿菌0.7％，米曲霉菌1.8％，攪拌均勻，在溫度為30℃的條件下，培養(yǎng)52小時(shí)，獲得一段發(fā)酵培養(yǎng)液。
(6)二段固態(tài)發(fā)酵：將產(chǎn)阮假絲酵母菌菌液接種到一段固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)液中，菌種添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)為1.1％，攪拌均勻，在溫度為30℃的條件下，培養(yǎng)66小時(shí)。
(7)烘干、粉碎：將發(fā)酵完成的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行烘干，至水分含量為10％左右，并粉碎成粉末狀，得到高蛋白飼料，其中蛋白質(zhì)含量可達(dá)到58％，纖維素含量降低到2.1％。
實(shí)施例2：
(1)菌種活化：將低溫保藏的產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉分別接種到馬鈴薯瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于33℃條件下培養(yǎng)28小時(shí)。
(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)：將活化的菌種分別接種到裝有馬鈴薯液體培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行搖床擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為33℃，培養(yǎng)42小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm，得到各菌種的菌液，其中產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉菌液中活菌數(shù)分別為3.6×109cfu/mL、5.5×109cfu/mL、2.8×109cfu/mL。
(3)配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：取檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣按照質(zhì)量比1:2.5進(jìn)行混合并攪拌均勻，添加少量水分使料渣濕度為60％；用10wt％的氫氧化鈉溶液將混合料的pH值調(diào)整為4.9，在121℃條件下，高溫高壓滅菌20min，自然冷卻至室溫。
(4)添加復(fù)合酶制劑：固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加復(fù)合酶制劑，包括糖化酶、纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣計(jì)分別為：糖化酶8mg，纖維素酶7mg，淀粉酶10mg，蛋白酶12mg。在35℃保溫發(fā)酵4小時(shí)。
(5)一段固態(tài)發(fā)酵：將米曲霉和枯草芽孢桿菌菌液接種固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)分別為：枯草芽孢桿菌0.6％，米曲霉菌1.8％。攪拌均勻，在溫度為30℃的條件下，培養(yǎng)52小時(shí)，獲得一段發(fā)酵培養(yǎng)液。
(6)二段固態(tài)發(fā)酵：將產(chǎn)阮假絲酵母菌菌液接種到一段固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)液中，菌種添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)為1.0％。攪拌均勻，在溫度為30℃的條件下，培養(yǎng)66小時(shí)。
(7)烘干、粉碎：將發(fā)酵完成的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行烘干，至水分含量為10％左右，并粉碎成粉末狀，得到高蛋白飼料，其中蛋白質(zhì)含量可達(dá)到52％，纖維素含量降低到2.9％。
實(shí)施例3
(1)菌種活化：將低溫保藏的產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉分別接種到馬鈴薯瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于30℃培養(yǎng)32小時(shí)。
(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)：將活化的菌種分別接種到裝有馬鈴薯液體培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行搖床擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30℃，培養(yǎng)48小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速為250rpm，得到各菌種的菌液，其中產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉菌液中活菌數(shù)分別為3.0×109cfu/mL、5.8×109cfu/mL、2.3×109cfu/mL。
(3)配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：取檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣按照質(zhì)量比1:4進(jìn)行混合并攪拌均勻，添加少量水分使料渣濕度為65％。用10wt％的氫氧化鈉溶液將混合料的pH值調(diào)整為5.0，，并加入1.5％硫酸銨、0.6％磷酸二氫鉀，0.2％硫酸鎂，在121℃條件下，高溫高壓滅菌20min，自然冷卻至室溫；
(4)添加復(fù)合酶制劑：固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加復(fù)合酶制劑，包括糖化酶、纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣計(jì)分別為：糖化酶10mg，纖維素酶8mg，淀粉酶12mg，蛋白酶15mg。在38℃保溫發(fā)酵3小時(shí)。
(5)一段固態(tài)發(fā)酵：將米曲霉和枯草芽孢桿菌菌液接種固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)分別為：枯草芽孢桿菌0.4％，米曲霉1.5％。攪拌均勻，在溫度為35℃的條件下，培養(yǎng)48小時(shí)，獲得一段發(fā)酵培養(yǎng)液；
(6)二段固態(tài)發(fā)酵：將產(chǎn)阮假絲酵母菌菌液接種到一段固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)液中，菌種添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)為0.6％。攪拌均勻，在溫度為35℃的條件下，培養(yǎng)60小時(shí)；
(7)烘干、粉碎：將發(fā)酵完成的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行烘干，至水分含量為10％左右，并粉碎成粉末狀，得到高蛋白飼料，其中蛋白質(zhì)含量可達(dá)到51％，纖維素含量降低到3.3％。
實(shí)施例4
(1)菌種活化：將低溫保藏的產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉分別接種到馬鈴薯瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于35℃培養(yǎng)24小時(shí)；
(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)：將活化的菌種分別接種到裝有馬鈴薯液體培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行搖床擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35℃，培養(yǎng)36小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速為150rpm，得到各菌種的菌液，其中產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉菌液中活菌數(shù)分別為4.2×109cfu/mL、5.8×109cfu/mL、2.5×109cfu/mL；
(3)配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：取檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣按照質(zhì)量比1:1.5進(jìn)行混合并攪拌均勻，使料渣濕度為55％。用10wt％的氫氧化鈉溶液將混合料的pH值調(diào)整為4.8，并加入1.0％硫酸銨、0.4％磷酸二氫鉀，0.1％硫酸鎂，在121℃條件下，高溫高壓滅菌20min，自然冷卻至室溫；
(4)添加復(fù)合酶制劑：固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加復(fù)合酶制劑，包括糖化酶、纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣計(jì)分別為：糖化酶5mg，纖維素酶6mg，淀粉酶6mg，蛋白酶10mg。在33℃保溫發(fā)酵5小時(shí)。
(5)一段固態(tài)發(fā)酵：將米曲霉和枯草芽孢桿菌菌液接種固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)分別為：枯草芽孢桿菌0.8％，米曲霉菌2.0％。攪拌均勻，在溫度為28℃的條件下，培養(yǎng)60小時(shí)，獲得一段發(fā)酵培養(yǎng)液；
(6)二段固態(tài)發(fā)酵：將產(chǎn)阮假絲酵母菌菌液接種到一段固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)液中，菌種添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)為1.2％。攪拌均勻，在溫度為28℃的條件下，培養(yǎng)72小時(shí)；
(7)烘干、粉碎：將發(fā)酵完成的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行烘干，至水分含量為10％左右，并粉碎成粉末狀，得到高蛋白飼料，其中蛋白質(zhì)含量可達(dá)到55％，纖維素含量降低到3.1％。
實(shí)施例5
(1)菌種活化：將低溫保藏的產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉分別接種到馬鈴薯瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于30℃培養(yǎng)32小時(shí)。
(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)：將活化的菌種分別接種到裝有馬鈴薯液體培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行搖床擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30℃，培養(yǎng)48小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速為250rpm，得到各菌種的菌液，其中產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉菌液中活菌數(shù)分別為3.0×109cfu/mL、5.8×109cfu/mL、2.3×109cfu/mL。
(3)配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：取檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣按照質(zhì)量比1:4進(jìn)行混合并攪拌均勻，添加少量水分使料渣濕度為65％；用10wt％的氫氧化鈉溶液將混合料的pH值調(diào)整為5.5，并加入1.5％硫酸銨、0.6％磷酸二氫鉀，0.2％硫酸鎂，在121℃條件下，高溫高壓滅菌20min，自然冷卻至室溫；
(4)添加復(fù)合酶制劑：固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加復(fù)合酶制劑，包括糖化酶、纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣計(jì)分別為：糖化酶10mg，纖維素酶8mg，淀粉酶12mg，蛋白酶15mg。在38℃保溫發(fā)酵3小時(shí)。
(5)一段固態(tài)發(fā)酵：將米曲霉和枯草芽孢桿菌菌液接種固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)分別為：枯草芽孢桿菌0.4％，米曲霉1.5％。攪拌均勻，在溫度為35℃的條件下，培養(yǎng)48小時(shí)，獲得一段發(fā)酵培養(yǎng)液；
(6)二段固態(tài)發(fā)酵：將產(chǎn)阮假絲酵母菌菌液接種到一段固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)液中，菌種添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)為0.6％。攪拌均勻，在溫度為35℃的條件下，培養(yǎng)60小時(shí)；
(7)烘干、粉碎：將發(fā)酵完成的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行烘干，至水分含量為10％左右，并粉碎成粉末狀，得到高蛋白飼料，其中蛋白質(zhì)含量可達(dá)到51％，纖維素含量降低到3.3％。
實(shí)施例6
(1)菌種活化：將低溫保藏的產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉分別接種到馬鈴薯瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于35℃培養(yǎng)24小時(shí)；
(2)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)：將活化的菌種分別接種到裝有馬鈴薯液體培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行搖床擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35℃，培養(yǎng)36小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速為150rpm，得到各菌種的菌液，其中產(chǎn)阮假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉菌液中活菌數(shù)分別為4.2×109cfu/mL、5.8×109cfu/mL、2.5×109cfu/mL；
(3)配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：取檸檬酸玉米淀粉渣和菌絲渣按照質(zhì)量比1:1.5進(jìn)行混合并攪拌均勻，使料渣濕度為55％。用10wt％的氫氧化鈉溶液將混合料的pH值調(diào)整為4.8，并加入1.0％硫酸銨、0.4％磷酸二氫鉀，0.1％硫酸鎂，在121℃條件下，高溫高壓滅菌20min，自然冷卻至室溫；
(4)添加復(fù)合酶制劑：固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加復(fù)合酶制劑，包括糖化酶、纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣計(jì)分別為：糖化酶5mg，纖維素酶6mg，淀粉酶6mg，蛋白酶10mg。在33℃保溫發(fā)酵5小時(shí)。
(5)一段固態(tài)發(fā)酵：將米曲霉和枯草芽孢桿菌菌液接種固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)分別為：枯草芽孢桿菌0.8％，米曲霉菌2.0％。攪拌均勻，在溫度為28℃的條件下，培養(yǎng)60小時(shí)，獲得一段發(fā)酵培養(yǎng)液；
(6)二段固態(tài)發(fā)酵：將產(chǎn)阮假絲酵母菌菌液接種到一段固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)液中，菌種添加量按照固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量計(jì)為1.2％。攪拌均勻，在溫度為28℃的條件下，培養(yǎng)72小時(shí)；
(7)烘干、粉碎：將發(fā)酵完成的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行烘干，至水分含量為10％左右，并粉碎成粉末狀，得到高蛋白飼料，其中蛋白質(zhì)含量可達(dá)到49％，纖維素含量降低到3.4％。
本發(fā)明的上述實(shí)施例僅僅是為說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式的限定。對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可作出其他不同形式的變化和變動(dòng)，這里無法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。凡是屬于本發(fā)明的技術(shù)方案所引申出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。