本發(fā)明屬于食品加工領(lǐng)域，具體涉及一種葉黃素的酵母微膠囊及其制備方法。

背景技術(shù)：

葉黃素(Lutein)屬含氧類胡蘿卜素，廣泛分布于高等植物中，在果實(shí)與花瓣中以酯的形式存在，在光合組織中以單體形式存在。葉黃素分子結(jié)構(gòu)的碳骨架由中央多聚烯鏈和位于兩側(cè)的芳香環(huán)組成，并在每個(gè)芳香環(huán)上各有一個(gè)羥基。其化學(xué)結(jié)構(gòu)決定了其生理功能。葉黃素為天然色素，由于其良好的著色效果被多數(shù)國(guó)家列入適用于食品、飼料、藥物、及化妝品的10種類胡蘿卜素之一。葉黃素具有多種生理學(xué)功能，能夠提高畜禽繁殖力，可以著色，同時(shí)作為著色劑其本身對(duì)人體有良好的營(yíng)養(yǎng)、抗病、保健效果。葉黃素具有良好的抗氧化性能，能防治白內(nèi)障、調(diào)節(jié)人體免疫力、預(yù)防心血管疾病、延緩動(dòng)脈硬化、預(yù)防癌癥、防治年齡相關(guān)性視黃斑退化、修復(fù)紫外線照射對(duì)皮膚造成的損傷等?，F(xiàn)國(guó)內(nèi)外葉黃素日益成為不可缺少的物質(zhì)。

萬(wàn)壽菊屬菊科一年生草本花卉，又名臭芙蓉、萬(wàn)盞燈、蜂窩菊，原產(chǎn)墨西哥，由于其適應(yīng)性較強(qiáng)，現(xiàn)已廣植于世界各地。其性涼、味苦微辛，其有抑制細(xì)菌、鎮(zhèn)靜、解痙、擴(kuò)張支氣管、抗炎之功效。研究報(bào)道，萬(wàn)壽菊花瓣的色素成分主要是葉黃素及其酯，還有其它微量的多種類胡蘿卜素。Philip等報(bào)道萬(wàn)壽菊中葉黃素占類胡蘿卜素的85％，在常見類胡蘿卜素來(lái)源植物中濃度最高。萬(wàn)壽菊花期長(zhǎng)，一般夏、秋采摘、耐暑熱、耐旱、少見病蟲害，適宜于大面積種植，可作為葉黃素工業(yè)上提取分離的理想原料。

葉黃素不溶于水，微溶于油，不穩(wěn)定，極易氧化，加熱、光照等都會(huì)使其氧化失去活性。因此，如何對(duì)葉黃素進(jìn)行高效提取及提取后如何避免失活是影響葉黃素大規(guī)模應(yīng)用的重要因素。

超臨界萃取是利用壓力和溫度對(duì)超臨界流體溶解能力的影響而進(jìn)行的。超臨界流體萃取過程是由萃取和分離組合而成，在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物體接觸，借助減壓、升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體，使其有選擇性按極性大小，沸點(diǎn)高低和相對(duì)分子質(zhì)量大小將各種成分依次萃取出來(lái)，以達(dá)到分離提純的目的。傳統(tǒng)工藝多存在能耗高、溶劑需回收、過程復(fù)雜、產(chǎn)品純度不高等問題，超臨界流體萃取法安全、無(wú)毒、不破壞活性成分，目前很多天然產(chǎn)物的超臨界流體萃取工藝已從試驗(yàn)規(guī)模放大到工業(yè)化生產(chǎn)。此外，微膠囊是一種聚合物壁殼的微型容器或包裝物，包括壁材和芯材兩部分，是具有半透性或密封性的微小粒子。微膠囊應(yīng)用廣泛，現(xiàn)應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、紡織、涂料、農(nóng)業(yè)、化妝品工業(yè)。它具有改善物料狀態(tài)、體積、性能，去除雜質(zhì)，提高芯材穩(wěn)定性，隔離組分，掩蓋不良味道、降低揮發(fā)性，控制芯材釋放等優(yōu)點(diǎn)。目前暫未有利用超臨界萃取技術(shù)和微膠囊包埋技術(shù)處理葉黃素的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了一種葉黃素的酵母微膠囊及其制備方法，是以萬(wàn)壽菊經(jīng)提取制備的凍干粉為芯材，以經(jīng)酶解溫育后除去內(nèi)容物的酵母細(xì)胞為包埋壁材，經(jīng)水浴恒溫震蕩、離心、冷凍干燥制得葉黃素的酵母微膠囊產(chǎn)品。該微膠囊具有控制葉黃素緩慢釋放、生物利用度高、制備工藝較為簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之一是：

一種葉黃素的酵母微膠囊的制備方法，所述酵母微膠囊中，酵母細(xì)胞為包埋壁材，葉黃素為芯材，該制備方法包括：

a)取粒徑為30～70目的萬(wàn)壽菊干花粉末，按照料液比1:0.5～8的比例加入30～98％乙醇，在萃取壓力10～35MPa、溫度30～80℃，分離釜Ⅰ壓力2～12MPa、溫度30～65℃，分離釜Ⅱ壓力2～6MPa、溫度18～27℃，萃取劑CO₂流量15～65L/h的條件下超臨界萃取20～200min，萃取液濃縮得葉黃素浸膏；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏，按照料液比1:18～22的比例溶解于正己烷，然后按照體積比4～6:2～4的比例向其中加入4～6％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度250～350r/min，15～25℃下皂化反應(yīng)5～7h；過濾，調(diào)節(jié)pH值至中性，加入1～6倍體積的水脫鹽后，分離收集上清液；

HPLC檢測(cè)上清液中的葉黃素含量：HPLC檢測(cè)條件為：Waters C₁₈色譜柱：(4.6mm×150mm，5μm)、流動(dòng)相A-甲醇/乙睛/水(80:10:10，v/v/v)、流動(dòng)相B-甲醇/乙睛(40:60，v/v)、柱溫25℃、流速0.8mL/min、進(jìn)樣量20μL，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B＝3:1，洗脫20min，后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

c)取步驟b)的上清液，依次用截留分子量4500～5500Dal的聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ，截留分子量12000～14000Dal的聚醚砜超濾膜Ⅱ，截留分子量7500～8500Dal的聚醚砜超濾膜Ⅲ過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為3～5m/s，溫度30～40℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥，粉碎過篩，制得葉黃素凍干粉；

d)取干酵母，例如麥酒酵母菌、發(fā)面酵母菌、圓酵母菌等適合人體攝取的酵母，加入18～22倍量的4～6％NaCl溶液，添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，20～90℃溫育1～50h；離心，菌體殘?jiān)鼜?fù)溶，10～90℃攪拌5～100min，離心，洗滌，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加水分散，20～80℃下按照芯壁比為1:0.2～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～12h，離心，洗滌，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊。

計(jì)算酵母微膠囊包埋率：測(cè)定方法利用酵母細(xì)胞包埋前后干燥后的質(zhì)量差計(jì)算包埋率：W％＝(m_a-m_b)/m_a*100％；式中：W(％)為包埋率，m_b為包埋前凍干酵母細(xì)胞的質(zhì)量，m_a為包埋后獲得的酵母細(xì)胞總質(zhì)量。上述葉黃素的酵母微膠囊的包埋率為60～85％。

一實(shí)施例中：所述步驟a)中，按照料液比1:2～4的比例加入65～75％乙醇，在萃取壓力12～18MPa、溫度35～45℃，分離釜Ⅰ壓力7～9MPa、溫度50～60℃，分離釜Ⅱ壓力3～5MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量20～30L/h的條件下超臨界萃取50～70min；所述步驟d)中，45～55℃溫育25～27h；菌體殘?jiān)鼜?fù)溶后，75～85℃攪拌55～65min；所述步驟e)中，65～75℃下按照芯壁比為1:3～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～3h，得到的葉黃素的酵母微膠囊包埋率為80～81％。。

一實(shí)施例中：所述步驟a)中，按照料液比1:5～7的比例加入65～75％乙醇，在萃取壓力22～28MPa、溫度50～60℃，分離釜Ⅰ壓力7～9MPa、溫度50～60℃，分離釜Ⅱ壓力3～5MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量45～55L/h的條件下超臨界萃取110～130min；所述步驟d)中，45～55℃溫育25～27h；菌體殘?jiān)鼜?fù)溶后，35～45℃攪拌25～35min；所述步驟e)中，65～75℃下按照芯壁比為1:3～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～3h，得到的葉黃素的酵母微膠囊包埋率為83～84％。

一實(shí)施例中：所述步驟a)中，按照料液比1:4～6的比例加入65～75％乙醇，在萃取壓力28～32MPa、溫度50～60℃，分離釜Ⅰ壓力7～9MPa、溫度50～60℃，分離釜Ⅱ壓力3～5MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量40～50L/h的條件下超臨界萃取80～100min；所述步驟d)中，75～85℃溫育46～50h；菌體殘?jiān)鼜?fù)溶后，65～75℃攪拌75～85min；所述步驟e)中，65～75℃下按照芯壁比為1:3～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～3h，得到的葉黃素的酵母微膠囊包埋率為74～75％。

一實(shí)施例中：所述步驟a)中，按照料液比1:5～7的比例加入65～75％乙醇，在萃取壓力12～18MPa、溫度60～70℃，分離釜Ⅰ壓力7～MPa、溫度40～50℃，分離釜Ⅱ壓力3～5MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量40～50L/h的條件下超臨界萃取110～130min；所述步驟d)中，35～45℃溫育24～28h；菌體殘?jiān)鼜?fù)溶后，65～75℃攪拌25～35min；所述步驟e)中，65～75℃下按照芯壁比為1:3～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～3h，得到的葉黃素的酵母微膠囊包埋率為80～81％。

一實(shí)施例中：所述步驟a)中，按照料液比1:3～5的比例加入65～75％乙醇，在萃取壓力28～32MPa、溫度55～65℃，分離釜Ⅰ壓力7～9MPa、溫度45～55℃，分離釜Ⅱ壓力3～5MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量20～30L/h的條件下超臨界萃取110～130min；所述步驟d)中，55～65℃溫育24～28h；菌體殘?jiān)鼜?fù)溶后，65～75℃攪拌75～85min；所述步驟e)中，65～75℃下按照芯壁比為1:3～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～3h，得到的葉黃素的酵母微膠囊包埋率為79～80％。

一實(shí)施例中：所述步驟a)中，按照料液比1:1～3的比例加入65～75％乙醇，在萃取壓力12～18MPa、溫度55～65℃，分離釜Ⅰ壓力6～8MPa、溫度40～50℃，分離釜Ⅱ壓力3～5MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量20～30L/h的條件下超臨界萃取110～130min；所述步驟d)中，35～45℃溫育24～28h；菌體殘?jiān)鼜?fù)溶后，35～45℃攪拌55～65min；所述步驟e)中，65～75℃下按照芯壁比為1:3～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～3h，得到的葉黃素的酵母微膠囊包埋率為80～81％。

一實(shí)施例中：所述步驟a)中，按照料液比1:4～6的比例加入65～75％乙醇，在萃取壓力18～22MPa、溫度50～60℃，分離釜Ⅰ壓力7～9MPa、溫度50～60℃，分離釜Ⅱ壓力3～5MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量30～40L/h的條件下超臨界萃取110～130min；所述步驟d)中，45～55℃溫育18～22h；菌體殘?jiān)鼜?fù)溶后，25～35℃攪拌25～35min；所述步驟e)中，65～75℃下按照芯壁比為1:3～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～3h，得到的葉黃素的酵母微膠囊包埋率為75～76％。

一實(shí)施例中：所述步驟a)中，按照料液比1:3～5的比例加入65～75％乙醇，在萃取壓力12～18MPa、溫度35～45℃，分離釜Ⅰ壓力7～9MPa、溫度40～50℃，分離釜Ⅱ壓力3～5MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量20～30L/h的條件下超臨界萃取110～130min；所述步驟d)中，45～55℃溫育34～38h；菌體殘?jiān)鼜?fù)溶后，65～75℃攪拌5～15min；所述步驟e)中，65～75℃下按照芯壁比為1:3～5的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，4000～6000rpm攪拌1～3h，得到的葉黃素的酵母微膠囊包埋率為83～84％。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之二是：

一種根據(jù)上述制備方法所制備的葉黃素的酵母微膠囊，所述酵母微膠囊中，酵母細(xì)胞為包埋壁材，葉黃素為芯材，其包埋率為60～85％。

本技術(shù)方案與背景技術(shù)相比，它具有如下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明制備的葉黃素的酵母微膠囊，以葉黃素為芯材，以酵母細(xì)胞為壁材，利用不同的滲透壓，使芯材物質(zhì)滲透過細(xì)胞壁進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，即可形成微膠囊。微膠囊的芯物質(zhì)載荷能力高，不僅保留了葉黃素防治年齡相關(guān)性視黃斑退化、防治白內(nèi)障、抗氧化性能、預(yù)防心血管疾病、延緩動(dòng)脈硬化、預(yù)防癌癥調(diào)節(jié)人體免疫力、修復(fù)紫外線照射對(duì)皮膚造成的損傷等活性，而且具有酵母細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)；微膠囊化還可以避免加熱、光照等因素引起的葉黃素失活，增加了葉黃素的穩(wěn)定性；微膠囊大小均一，無(wú)毒，生物相容性好，生物利用度高，可實(shí)現(xiàn)葉黃素的緩慢釋放。且微膠囊呈干燥粉末狀，方便應(yīng)用，保存性能好，易生物降解，對(duì)環(huán)境友好。制作工藝簡(jiǎn)單，不需要或很少引入其他化學(xué)試劑，沒有溶劑殘留的危險(xiǎn)，非常適合藥物和食品添加劑的包埋；同時(shí)母來(lái)源廣泛，可使用發(fā)酵工廠回收價(jià)格低廉的廢酵母，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明的工藝流程示意圖。

具體實(shí)施方式

下面通過實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容：

實(shí)施例1

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，按照料液比1:3的比例加入3000mL的70％乙醇，在萃取壓力20MPa、溫度50℃，分離釜Ⅰ壓力8MPa、溫度55℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，25℃，萃取劑CO₂流量25L/h的條件下超臨界萃取120min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏63.5g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，按干酵母：組合酶1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶(市售)，然后在50℃溫育36h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，60℃攪拌70min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為62.8％。

實(shí)施例2

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，按照料液比1:3的比例加入3000mL的70％乙醇，在萃取壓力15MPa、溫度40℃，分離釜Ⅰ壓力8MPa、溫度55℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，25℃，萃取劑CO₂流量25L/h的條件下超臨界萃取60min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏58.8g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：組合酶＝1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，然后在50℃溫育26h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，80℃攪拌60min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為80.5％。

實(shí)施例3

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過50目篩，按照料液比1:6的比例加入6000mL的70％乙醇，在萃取壓力25MPa、溫度55℃，分離釜Ⅰ壓力8MPa、溫度55℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，25℃，萃取劑CO₂流量50L/h的條件下超臨界萃取120min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏62.5g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：酶＝1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，然后在50℃溫育26h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，40℃攪拌30min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為83.1％。

實(shí)施例4

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，按照料液比1:5的比例加入5000mL的70％乙醇，在萃取壓力30MPa、溫度55℃，分離釜Ⅰ壓力8MPa、溫度55℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，25℃，萃取劑CO₂流量45L/h的條件下超臨界萃取90min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏58.5g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：組合酶＝1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，然后在80℃溫育48h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，70℃攪拌80min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為74.3％。

實(shí)施例5

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，按照料液比1:6的比例加入6000mL的70％乙醇，在萃取壓力15MPa、溫度65℃，分離釜Ⅰ壓力8MPa、溫度45℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，25℃，萃取劑CO₂流量45L/h的條件下超臨界萃取120min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏50.3g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：組合酶＝1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，然后在40℃溫育26h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，70℃攪拌50min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為80.2％。

實(shí)施例6

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過50目篩，按照料液比1:4的比例加入4000mL的70％乙醇，在萃取壓力30MPa、溫度60℃，分離釜Ⅰ壓力8MPa、溫度50℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，溫度25℃，萃取劑CO₂流量25L/h的條件下超臨界萃取120min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏58.1g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：組合酶＝1：50的比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，然后在60℃溫育26h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，70℃攪拌80min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為79.6％。

實(shí)施例7

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，按照料液比1:2的比例加入2000mL的70％乙醇，在萃取壓力15MPa、溫度60℃，分離釜Ⅰ壓力7MPa、溫度45℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，溫度25℃，萃取劑CO₂流量25L/h的條件下超臨界萃取120min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏55.4g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：組合酶＝1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，然后在40℃溫育26h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，40℃攪拌60min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為80.2％。

實(shí)施例8

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，按照料液比1:5的比例加入5000mL的70％乙醇，在萃取壓力20MPa、溫度55℃，分離釜Ⅰ壓力8MPa、溫度55℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，溫度25℃，萃取劑CO₂流量35L/h的條件下超臨界萃取120min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏63.8g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：組合酶＝1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，然后在50℃溫育20h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，30℃攪拌30min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為75.3％。

實(shí)施例9

a)取萬(wàn)壽菊干花1000g，中藥粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，按照料液比1:4的比例加入4000mL的70％乙醇，在萃取壓力15MPa、溫度40℃，分離釜Ⅰ壓力8MPa、溫度45℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa，溫度25℃，萃取劑CO₂流量25L/h的條件下超臨界萃取120min，萃取液過濾，回收溶劑，濃縮得葉黃素浸膏50.8g；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏5g按照料液比1:20的比例溶解于100mL正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入60mL的5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，用36％乙酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加入等體積的水混勻，脫鹽，靜置，離心分離后收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次經(jīng)聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ(膜面積0.17m²，膜截留分子量5000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅱ(面積2.51m²，膜截留分子量13000Dal)，聚醚砜超濾膜Ⅲ(膜面積2.51m²，膜截留分子量8000Dal)過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥制得葉黃素凍干粉；

d)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：組合酶1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，然后在50℃溫育36h；5000rpm離心10min，棄去上清液，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，70℃攪拌10min，5000rpm離心10min，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加入5倍蒸餾水形成水分散液，70℃水浴加熱下，按照芯壁比為1:4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2h，5000rpm離心10min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為83.5％。

本領(lǐng)域技術(shù)人員可知，當(dāng)本發(fā)明的技術(shù)參數(shù)在如下范圍內(nèi)變化時(shí)，可以預(yù)期得到與上述實(shí)施例相同或相近的技術(shù)效果：

a)取粒徑為40～60目的萬(wàn)壽菊干花粉末，按照料液比1:1～6的比例加入40～95％乙醇，在萃取壓力15～30MPa、溫度40～70℃，分離釜Ⅰ壓力5～8MPa、溫度40～55℃，分離釜Ⅱ壓力4MPa、溫度20～25℃，萃取劑CO₂流量25～55L/h的條件下超臨界萃取30～180min，萃取液濃縮得葉黃素浸膏；

b)取步驟a)的葉黃素浸膏，按照料液比1:20的比例溶解于正己烷，然后按照體積比5:3的比例向其中加入5％的KOH的甲醇溶液，在攪拌速度300r/min，20℃下皂化反應(yīng)6h；過濾，調(diào)節(jié)pH值至中性，加入1～5倍體積的水脫鹽后，分離收集上清液；

c)取步驟b)的上清液，依次用膜面積0.1～0.2m²、截留分子量5000Dal的聚偏氟乙烯超濾膜Ⅰ，膜面積2.5～2.6m²、截留分子量13000Dal的聚醚砜超濾膜Ⅱ，膜面積2.5～2.6m²、截留分子量8000Dal的聚醚砜超濾膜Ⅲ過濾分離雜質(zhì)，表面流速均為4m/s，溫度35℃；濾液濃縮至浸膏，冷凍干燥，制得葉黃素凍干粉；

d)取干酵母，加入20倍量的5％NaCl溶液，以干酵母：組合酶1：50比例添加脂肪酶與蛋白酶的組合酶，30～80℃溫育1～48h；離心，向菌體殘?jiān)屑尤?5％乙醇，20～80℃攪拌10～90min，離心，洗滌，冷凍干燥，完成酵母細(xì)胞預(yù)處理；

e)取步驟d)得到的預(yù)處理后的酵母細(xì)胞，加水分散，30～70℃下按照芯壁比為1:0.25～4的比例加入步驟c)得到的葉黃素凍干粉，5000rpm攪拌2～10h，離心，洗滌，冷凍干燥，即得所述之葉黃素的酵母微膠囊，其包埋率為60～85％。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，即依本發(fā)明專利范圍及說(shuō)明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。