專利名稱：：人工培養(yǎng)巴西蟲草的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種微生物方法，特別是巴西蟲草(CordycepsbrasiliensisHenn)的人工培養(yǎng)方法。冬蟲夏草(CordycepsSinensisSacc)是蟲草屬真菌的一個種，為我國傳統(tǒng)的名貴強壯滋補中藥材，有很高的藥用價值，臨床用于降血脂、抗心律失常、治療呼吸系統(tǒng)疾病及慢性腎炎等，近年來，冬蟲夏草抗腫瘤作用的發(fā)現(xiàn)，更受到國內(nèi)外的重視。冬蟲夏草原產(chǎn)我國四川、西藏、青海等省區(qū)海拔3000公尺雪線以上，因生態(tài)環(huán)境的限制及過度的采挖，資源逐年減少，不能滿足保健藥用及出口需要。為了彌補天然冬蟲夏草的不足，國內(nèi)外學(xué)者均試圖以人工的方法培養(yǎng)冬蟲夏草，但難度太大，不少學(xué)者又紛紛轉(zhuǎn)向人工培養(yǎng)菌絲體的研究，希望從中提取冬蟲夏草的有效藥理成份或直接以干燥菌絲體粉末入藥。近年來國內(nèi)對蟲草屬真菌的研究進展較快，沈南英(1980，1983)報導(dǎo)在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)出子座類似物，菌種初步鑒定為頭孢霉菌屬(Cephalosporium)新種，后利用此種的人工培養(yǎng)菌絲體制成成藥“寧心寶”對心血管疾病有良好的效果;史學(xué)瑤(1985)和海軍醫(yī)學(xué)研究所(1985)等先后對蟲草進行發(fā)酵工藝研究;模擬生態(tài)環(huán)境、在土壤中繁殖寄生昆蟲蝙蛹蛾，人工施菌接種培養(yǎng)冬蟲夏草的研究正在進行，但很難大規(guī)模進行;中科院藥物研究所、吉林省蠶業(yè)研究所分別報導(dǎo)用蛹蟲草(Cordycepsmilitaris(Lr)Link)在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)出子座，吉林省蠶業(yè)研究所(1986)進一步用柞蠶做寄主，接種蛹蟲草菌培養(yǎng)菌(子座)蟲(僵蟲)體成功，但是由于蟲草屬真菌的寄主比較專一，利用家蠶或蓖麻蠶蛹作為寄主人工培養(yǎng)其它蟲草的菌蟲體，國內(nèi)外至今仍未見有成功的報導(dǎo)。本發(fā)明的目的是尋找一種利用廣東的蟲草品種之一的巴西蟲草(該種已保存于中國微生物菌種保藏管理委員會，普通微生物中心，即CGMCC，保存號為NO.0159)，利用家蠶蛹或蓖麻蠶蛹作為寄主人工培養(yǎng)蟲草菌蟲體的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是在廣泛采集廣東野生蟲草菌株并進行分離、純化、鑒定、篩選的基礎(chǔ)上，選出巴西蟲草菌種的菌株，把巴西蟲草菌接種到家蠶或蓖麻蠶的蠶蛹上，使蛹體在20～22℃較干燥的條件下僵化，12～14天后再用復(fù)合維生素、蛋白棟、葡萄糖、蒸餾水按0.3∶1∶10∶1000的比例組成的復(fù)合外源性營養(yǎng)液包埋至浸過蛹體為度，再用藍紫光照射誘發(fā)基原，前期保護溫度為18～21℃，基原誘發(fā)后改為21～24℃保護，間隔光照，等子座長出至3～4厘米便可收獲菌蟲體。本發(fā)明的巴西蟲草人工培養(yǎng)方法由于采用了巴西蟲草菌，采用家蠶蛹(或蓖麻蠶蛹)為人工寄主，(1)由于家蠶(或蓖麻蠶)是易繁易養(yǎng)的昆蟲，因此，可以實行工廠化大批量生產(chǎn)，滿足人們保健和藥用的需要，而且成本比天然冬蟲夏草大為降低;(2)培養(yǎng)出的巴西蟲草菌蟲體的外觀具有中國傳統(tǒng)中藥材的形狀(較接近天然冬蟲夏草的形狀)，因而易為人們所接受;(3)培養(yǎng)出巴西蟲草菌蟲體經(jīng)有效藥理成份的分析測定結(jié)果，其含有的蟲草酸(Cordycepicacid)和麥角甾醇(Ergost-erol)兩種藥理成份含量與天然冬蟲夏草相似，游離氨基酸略低于冬蟲夏草，但酸解氨基酸比天然冬蟲夏草高，也比文獻報導(dǎo)的香棒蟲草、秦巴蛹蟲草、涼山蟲草等高，并含有豐富的人體必需的多種微量元素(見附表);(4)培養(yǎng)出的巴西蟲草菌蟲體經(jīng)毒性試驗測定，其NIH小鼠急性毒性LD50＞43.0克/公斤體重，SD大鼠急性毒性LD50＞50.0克/公斤體重，安全性大(附急性毒性試驗報告);(5)本發(fā)明還為養(yǎng)蠶的綜合開發(fā)利用開辟了一條新的途徑;(6)以家蠶蛹培養(yǎng)巴西蟲草菌蟲體的成功，還為在實驗室條件下研究蟲草屬真菌的生物學(xué)特性提供了新的研究素材與途徑。圖1是巴西蟲草人工培養(yǎng)方法流程圖。表1是家蠶蛹人工培養(yǎng)巴西蟲草的麥角甾醇和甘露醇含量表2是家蠶蛹人工培養(yǎng)巴西蟲草的游離氨基酸含量表3是家蠶蛹人工培養(yǎng)巴西蟲草的酸解氨基酸含量表4是家蠶蛹人工培養(yǎng)巴西蟲草與幾種蟲草的酸解氨基酸含量的文獻值比較表5是家蠶蛹人工培養(yǎng)巴西蟲草的微量元素含量下面結(jié)合附圖表說明本發(fā)明的實施如圖1所示在廣泛采集廣東野生蟲草菌株并進行分離、純化、鑒定、篩選的基礎(chǔ)上，選出巴西蟲草菌種的菌株，在無菌條件下把它接種到家蠶(或者蓖麻蠶)的蛹體上，把接種后的蠶蛹置于20～22℃較干燥的條件下，保護約12～14天，使其充分僵化，再用復(fù)合維生素、蛋白棟、葡萄糖、蒸溜水按0.3∶1∶10∶1000的比例組成的復(fù)合外源性營養(yǎng)液包埋，至浸過蛹體為度，再用藍紫光照射誘發(fā)基原，前期保護溫度為18～21℃左右，通氣、間隔光照，基原誘發(fā)后21～24℃保護，間隔光照，稍通氣，一直到子座長出至3～4厘米，便可收獲菌蟲體，將菌蟲體洗去表面厚垣孢子，烘干，便成巴西蟲草產(chǎn)品。表1家蠶蛹人工培養(yǎng)巴西蟲草的麥角甾醇和甘露含量</tables>表4家蠶蛹人工培養(yǎng)巴西蟲草與幾種蟲草的酸解氨基酸含量的文獻值比較(％)</tables>權(quán)利要求1.利用蟲草屬真菌培養(yǎng)蟲草菌蟲體的方法，其特征在于所用的菌種是屬蟲草屬真菌中的巴西蟲草(CordycepsbrasiliensisHenn)巳保存CGMCC，保存號為NO.0159；采用的寄主是家蠶蛹(或蓖麻蠶蛹)，即把巴西蟲草菌種接種到家蠶(或蓖麻蠶)的蠶蛹中，把接種后的蠶蛹置于20～22℃較干燥的條件下僵化12～14天后，用復(fù)合外源性營養(yǎng)液包埋再用藍紫光照射誘發(fā)基源，前期保護溫度為18～21℃，基源誘發(fā)后改為21～24℃保護，等子座長出至3～4厘米便可收獲菌蟲體；2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于外源復(fù)合性營養(yǎng)液是由復(fù)合維生素、蛋白棟、葡萄糖、蒸溜水按0.3∶1∶10∶1000的比例組成。全文摘要本發(fā)明涉及一種微生物方法，特別是巴西蟲草的人工培養(yǎng)方法，其特征是采用的菌種是蟲草屬真菌中的巴西蟲草，采用的寄主是家蠶(或蓖麻蠶)的蠶蛹，用其培養(yǎng)出的巴西蟲草菌蟲體的藥理成分與天然冬蟲夏草相似，對人體安全，可進行大規(guī)模的人工培養(yǎng)，生產(chǎn)成本較低。文檔編號C12N1/14GK1051388SQ90109380公開日1991年5月15日申請日期1990年11月19日優(yōu)先權(quán)日1990年11月19日發(fā)明者方定堅,鄭祥明,廖森泰,朱德貞,陳衛(wèi)東,張嘉健,梁淑娃,黃義勇,黃起鵬,連泳朋申請人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所,廣州市微生物研究所,中山大學(xué)化學(xué)系測試中心