專(zhuān)利名稱(chēng)：菜籽餅和棉籽餅混合的微生物脫毒方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種菜籽餅和棉籽餅混合的微生物脫毒制備發(fā)酵飼料蛋白的方法。
我國(guó)菜籽、棉籽榨油后的菜籽餅、棉籽餅，蛋白含量都高達(dá)35～40%。但由于菜籽餅含有毒性物質(zhì)葡萄糖硫苷、棉籽餅則含有游離棉酚，目前大部分用作肥料，造成蛋白資源的浪費(fèi)。我國(guó)糧食雖然總產(chǎn)量不低，但我國(guó)人多地少，現(xiàn)有耕地占世界耕地面積7%，要養(yǎng)活占世界21%的人口。世界平均每人占有耕地5.5畝，我國(guó)僅1.5畝，而且還在不斷減少。我國(guó)不可能提供更多的糧食做為飼料，特別是蛋白源更感不足，近年來(lái)由于沿海海域污染嚴(yán)重，魚(yú)粉產(chǎn)量銳減、價(jià)格暴漲，大豆種植面積減少，特別在自然災(zāi)害的威脅下問(wèn)題更加突出。因此，開(kāi)發(fā)不爭(zhēng)奪糧食的飼料資源菜籽餅、棉籽餅具有明顯的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
CN 89100503.X和CN 90104543.8兩份專(zhuān)利申請(qǐng)分別公開(kāi)了棉籽餅和菜籽餅的微生物脫毒方法。它們所利用的微生物的脫毒作用都是單一的，前者只能對(duì)棉籽餅進(jìn)行脫毒，而不能對(duì)菜籽餅脫毒，后者則只能對(duì)菜籽餅進(jìn)行脫毒而不能對(duì)棉籽餅脫毒。因此，當(dāng)需要同時(shí)對(duì)菜籽餅和棉籽餅進(jìn)行脫毒時(shí)，必須培育兩種不同的脫毒菌種，而且脫毒過(guò)程必須分開(kāi)進(jìn)行，工藝比較煩瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。
本發(fā)明的目的是提供一種能同時(shí)對(duì)棉籽餅和菜籽餅進(jìn)行脫毒的方法，以克服上述已有技術(shù)所存在的缺點(diǎn)。
本發(fā)明是通過(guò)篩選對(duì)菜籽餅、棉籽餅的毒性都具有脫毒作用的曲霉(Aspergillus.SP.)或根霉(Rhizopus.SP.)菌種，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后接入菜籽餅和棉籽餅的混合原料中進(jìn)行發(fā)酵脫毒，原料中適當(dāng)加入玉米粉或(和)麥麩或(和)糠，可以促進(jìn)微生物生長(zhǎng)，如果再加入少量羽毛粉、血粉，可以提高產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
本發(fā)明所用的曲霉或根霉菌種，是通過(guò)常規(guī)方法從霉變的菜籽餅或施用菜籽餅作肥料的土壤中分離培養(yǎng)得到的。具體方法如下1.制備菜籽餅抽提液的查氏(Czapek)培養(yǎng)基量取100ml水煮沸，稱(chēng)取20g菜籽餅倒入沸水中、再煮沸5分鐘，過(guò)濾，再加水補(bǔ)充到100ml，即為抽提液。用100ml查氏培養(yǎng)基劑量加入抽提液中，15磅/英寸2滅菌20分鐘，即為菜籽餅抽提液查氏培養(yǎng)基。
2.制備醋酸棉酚查氏培養(yǎng)基a.稱(chēng)取400mg醋酸棉酚，用10ml無(wú)菌碳酸鈉水溶液(碳酸鈉濃度0.75%)溶解，然后加無(wú)菌水稀釋至30ml，制成醋酸棉酚碳酸鈉水溶液，用鹽酸調(diào)至PH6.5，沸水浴加熱5分鐘。
b.用100ml查氏培養(yǎng)基劑量，配制成70ml濃縮培養(yǎng)基15磅/英寸2滅菌20分鐘。
c.將上述a、b兩種成分混合后倒平板。
3.從霉變的菜籽餅或施用菜籽餅作肥料的土壤中取樣，稀釋后涂布在菜籽餅抽提液查氏培養(yǎng)基平板上，30℃培養(yǎng)3-4天，選出對(duì)菜籽餅具有脫毒作用的菌種。(菌種特征如CN90104543.8號(hào)專(zhuān)利申請(qǐng)所述)。
4.將上述對(duì)菜籽餅有脫毒作用的菌種，制成孢子懸浮液涂布在含有醋酸棉酚查氏培養(yǎng)基平板上，30℃培養(yǎng)3～4天，即可選出既保留對(duì)菜籽餅仍有脫毒力又能對(duì)棉籽餅游離棉酚進(jìn)行降解轉(zhuǎn)化的具有雙重脫毒作用的菌株。
5.菌種鑒別經(jīng)過(guò)分離純化后進(jìn)行鑒別測(cè)定，選出對(duì)菜籽餅和棉籽餅都具有脫毒作用的菌種其中一種屬于曲霉屬(Aspergillus.SP.)，其特征菌落直徑1～2厘米，呈密絨毛狀，菌絲白色，有橫隔，具足細(xì)胞，頂囊球狀，孢子黃綠色，表面疣狀。另一種屬于根霉(Rhizopus.SP.)，菌落2～3厘米，疏松棉絮狀，菌絲白色，無(wú)橫隔，有假根，孢子囊黑色，孢子表面有棘狀突起。
6.制備孢子斜面菌種將分離出來(lái)的具有脫毒能力，生長(zhǎng)快的曲霉或根霉菌種，按常規(guī)方法分別純化培養(yǎng)后，分別接種于馬鈴薯斜面培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)3～4天長(zhǎng)出孢子后，于4～5℃保存，做為孢子斜面菌種，制備生產(chǎn)菌種時(shí)，只需用曲霉或根霉一種。
下面對(duì)本發(fā)明的棉籽餅和菜籽餅混合脫毒方法作具體的描述
1.制備生產(chǎn)菌種用孢子斜面菌種一支，分開(kāi)接種于4個(gè)1000ml三角瓶的擴(kuò)大培養(yǎng)基，培養(yǎng)基成份為(每瓶)麥麩150～200g，K2HPO41.5～2g，加水90～120ml混勻，滅菌冷卻。接種后，在30～32℃培養(yǎng)3～4天，即為一級(jí)三角瓶菌種。每瓶一級(jí)三角瓶菌種可再擴(kuò)大培養(yǎng)30～40個(gè)二級(jí)三角瓶菌種。每瓶二級(jí)三角瓶菌種可接入生產(chǎn)菌種培養(yǎng)基2～3Kg。生產(chǎn)菌種培養(yǎng)基成份為菜籽餅1份、棉籽餅1份、麥麩4份、玉糠4份，按總重量的50～70%加水混勻，滅菌冷卻。接種后在30～35℃培養(yǎng)3～4天即為生產(chǎn)菌種。
2.原料配比按重量比為菜籽餅3份，棉籽餅1～9份，再加入占原料總重量(5～15)%的麥麩、玉米粉和糠(其中的一種或一種以上)。常用的配比(重量比)為菜籽餅3份，棉籽餅1.5～6份，再加入占原料總重量10%的麥麩、玉米粉和糠(其中的一種或一種以上)。原料中還可再加入適量的羽毛粉或(和)血粉，加入量一般為原料總干重量的(3～15)%，這樣可提高產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
按照本發(fā)明的方法，如果原料中的菜籽餅和棉籽餅采用上述比例范圍以外的任意比例，或者單獨(dú)采用菜籽餅或棉籽餅，也能達(dá)到一定的脫毒效果。
3.接種發(fā)酵按所需配比將原料混勻，然后接入生產(chǎn)菌種，接種量一般為原料干重的1～1.5%，接種后，再按原料重量的50～70%加水，混勻后在25～40℃保溫，固態(tài)發(fā)酵14～30小時(shí)，(通常為18～24小時(shí))，然后烘干粉碎即為發(fā)酵蛋料蛋白產(chǎn)品。
表1是本發(fā)明的實(shí)施例1～3的原料配比。各實(shí)施例的工藝過(guò)程與前面所述相同，其中發(fā)酵溫度為30～35℃，實(shí)施例1、2、3的發(fā)酵時(shí)間分別為18、20和22小時(shí)。
產(chǎn)品經(jīng)毒性分析實(shí)施例1異硫氰酸酯(ITC)+惡唑烷硫酮(OZT)為0.032%，游離棉酚為0.024%，實(shí)施例2ITC+OZT為0.028%，游離棉酚0.027%，實(shí)施例3ITC+OZT為0.014%，游離棉酚為0.037%。
本發(fā)明方法所生產(chǎn)的發(fā)酵飼料蛋白產(chǎn)品，符合飼料的安全要求，蛋白含量可達(dá)(40～45)%，營(yíng)養(yǎng)更加互補(bǔ)齊全，可直接做為飼料蛋白使用。
權(quán)利要求
1.一種菜籽餅和棉籽餅混合的微生物脫毒制備發(fā)酵飼料蛋白的方法，其特征是在菜籽餅和棉籽餅混合原料中接種對(duì)菜籽餅和棉籽餅均具有脫毒作用的曲霉(Aspergillus.sp.)或根霉(Rhizopus.sp.)菌，再加入占原料干重50～70%的水，混勻后在25～40℃固態(tài)發(fā)酵14～30小時(shí)，然后烘干、粉碎即為產(chǎn)品。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所說(shuō)的原料的組成和配比(按重量比)為菜籽餅3份，棉籽餅1～9份，再加入占原料總重量(5～15)%的麥麩、玉米粉和糠(其中的一種或一種以上)。
3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征是原料的組成和配比(按重量比)為菜籽餅3份，棉籽餅1.5～6份，再加入占原料總重量10%的麥麩、玉米粉和糠(其中的一種或一種以上)。
4.按照權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征是在原料中再添加占原料干重量(3～15)%的羽毛粉或(和)血粉。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是發(fā)酵溫度為30～35℃，發(fā)酵時(shí)間為18～24小時(shí)。
6.按照權(quán)利要求1或5所述的方法，其特征是所用的脫毒菌種的接種量為原料干重的(1～1.5)%。
全文摘要
本發(fā)明是菜籽餅和棉籽餅混合脫毒生產(chǎn)發(fā)酵飼料蛋白的方法，利用對(duì)菜籽餅和棉籽餅同時(shí)具有脫毒作用的曲霉或根霉菌種，接種于菜籽餅和棉籽餅的混合原料中，在25～40℃經(jīng)14～30小時(shí)發(fā)酵，然后烘干粉碎即為產(chǎn)品。產(chǎn)品符合飼料的安全要求、蛋白含量可達(dá)40～45％，營(yíng)養(yǎng)更加互補(bǔ)齊全，可直接做飼料蛋白使用。本發(fā)明采用固體開(kāi)放式發(fā)酵，工藝和設(shè)備簡(jiǎn)單，無(wú)三廢，容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A23L1/211GK1074096SQ9210551
公開(kāi)日1993年7月14日 申請(qǐng)日期1992年7月10日 優(yōu)先權(quán)日1992年7月10日
發(fā)明者鐘英長(zhǎng), 周世寧, 朱汝舫, 陳家平 申請(qǐng)人:中山大學(xué)