專利名稱：甘薯中粘液蛋白的提取純化方法
本方法介紹一種甘薯中粘液蛋白的提取純化方法。
據(jù)《本草綱目》記載，甘薯性味甘平無毒，健脾胃，補(bǔ)虛弱，使人長壽少病。甘薯是一種生理堿性食品(含堿度高達(dá)10.3％)，起著維持健康人體的血液弱堿性作用。日本國立癌癥預(yù)防研究所通過對40多種蔬菜實(shí)驗(yàn)性抑癌試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)抑制腫瘤效應(yīng)最好的為甘薯，抑癌效應(yīng)達(dá)90％以上。我們通過SOS顯色試驗(yàn)和Ames試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甘薯中的粘液蛋白具有顯著的抗突變作用，并且對一月齡昆明種小白鼠的特異性細(xì)胞免疫(遲發(fā)型過敏反應(yīng))，非特異性免疫(巨噬細(xì)胞吞噬功能)，體液免疫(溶血素含量、對胸腺的增重)都有顯著的增強(qiáng)作用，表明甘薯粘液蛋白能有效地增強(qiáng)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能，還發(fā)現(xiàn)甘薯粘液蛋白具有明顯的降血脂作用。正因?yàn)槿绱?，近年來日本和歐美一些國家紛紛將甘薯作為營養(yǎng)佳品甚至作為藥物來食用，掀起了一場吃甘薯的熱潮。但有關(guān)甘薯粘液蛋白的分離提取方法及其保健作用研究至今國內(nèi)外還未見報道。
本發(fā)明的目的是提供一種甘薯中粘液蛋白的提取純化方法，這種方法在提取時不影響甘薯淀粉制品的加工。將制備純化好了的甘薯粘液蛋白作為保健食品的功能因子，與其它食物原料進(jìn)行科學(xué)配方，合理加工成各種各樣的保健食品，或者將其制成象“丙種球蛋白”那樣的免疫藥物針劑。
本發(fā)明提供的甘薯中粘液蛋白的提取純化方法如下一、甘薯粘液蛋白的提取選用無腐爛的甘薯(鮮或干甘薯均可)，去泥沙后用篩孔直徑為1.0～2.0mm的粉碎機(jī)粉碎后，用甘薯重4～6倍的水在40～60℃下浸提3次，合并浸提液，浸提殘?jiān)芍聘适淼矸?。浸提液?000rpm下離心15mmin，上清液真空濃縮至 加入95％的酒精或丙酮后靜置沉淀18～20h，再在2000rpm下離心15min，收集沉淀物，上清液回收酒精或丙酮。
二、甘薯粘液蛋白的初步純化將“一項(xiàng)”得到的沉淀物用適量水(1～2倍水)溶解后，用氯仿-正丁醇(4∶1)脫游離蛋白3次，取水溶液層透析48h，透析袋的分子截留量為1000Mr。透析內(nèi)液在3000rpm下離心20min，上清液進(jìn)行真空干燥(真空5～10mmHg)即得甘薯粘液蛋白的粗品，純度約為84.5％。
三、甘薯粘液蛋白的進(jìn)一步純化將“二項(xiàng)”得到甘薯粘液蛋白粗品用適量去離子水(1～2倍)溶解后，上DEAE52纖維素柱層析，用0.05mol/L，0.1mol/L和0.5mol/L碳酸氫鈉溶液階段洗脫，洗脫速度為1.5ml/min，洗脫液透析48h后(透析袋分子截留量為1000Mr)，真空濃縮至 再上Sephadex G100層析柱，This-HCl(pH7.2)洗脫，洗脫速度為0.6ml/min，洗脫液透析48h后(透析袋分子截留量為1000Mr)，真空干燥(真空度5～10mmHg)，即得甘薯粘液蛋白純品，純度約為99.2％。
四、包裝將“二項(xiàng)”得到的甘薯粘液蛋白粗品和“三項(xiàng)”得到的甘薯粘液蛋白純品裝袋或裝瓶或裝罐，密封后入庫保存，要求包裝袋或玻瓶透光性極差為宜。
由于該方法制備的甘薯粘液蛋白純度高，方法簡便，重復(fù)性也好，并且又不影響甘薯淀粉的加工，因此是一種具有廣闊應(yīng)用前景的甘薯深加工方法。


圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
本發(fā)明的實(shí)施例如下取北京2號鮮甘薯5kg，去泥沙后用篩孔直徑為1.0～2.0mm的粉碎機(jī)粉碎后，用25kg水在50℃下浸提3次，合并浸提液在2000rpm下離心15min，上清液真空濃縮至2kg，加95％的酒精后靜置沉淀20h，再在2000rpm下離心15min收集沉淀物并稱重，上清液回收酒精。將沉淀物用0.3kg水溶解，用氯仿-正丁醇(4∶1)脫游離蛋白3次，取水液層透析48h，透析內(nèi)液在3000rpm下離心20min，上清液進(jìn)行真空干燥(真空度5～10mmHg)即得到純度約為84.5％的甘薯粘液蛋白粗品(淡黃色粉末)約23.5g，得率約為0.47％。如將該甘薯粘液蛋白粗品用0.04kg去離子水溶解后，上DEAE52纖維素柱層析，用0.05mol/L、0.1mol/L和0.5mol/L碳酸氫鈉溶液階段洗脫，洗脫速度為1.5ml/min，透析后真空濃縮至0.04kg，再上Sephadex G100層析柱，用pH7.2的Tris-HCl洗脫，洗脫速度為0.6ml/min，透析后真空干燥(真空度5～10mmHg)即可得純度約為99．2％的甘薯粘液蛋白純品(白色粉末)約10.16g，得率約為0.20％。
權(quán)利要求
本發(fā)明是一種甘薯中粘液蛋白的提取純化方法，其特征如下1、在甘薯粘液蛋白提取中，先將甘薯去泥沙后粉碎，再用水在40～60℃下浸提3次，合并浸提液并離心，再真空濃縮，加95％酒精或丙酮靜置沉淀18～20h，再離心收集沉淀物，上清液回收酒精或丙酮。
2.在甘薯粘液蛋白初步純化中，將沉淀物用適量水溶解后，用氯仿-正丁醇(4∶1)脫游離蛋白3次，取水層透析48h，透析內(nèi)液離心，上清液進(jìn)行真空干燥即得甘薯粘液蛋白粗品(淡黃色粉末)。
3.在甘薯粘液蛋白進(jìn)一步純化中，將粗品用適量去離子水溶解后，上DEAE52纖維素柱層析，用碳酸氫鈉溶液階段洗脫。洗脫液透析后真空濃縮至 再上Sephadex G100層析柱，Tris-HCl洗脫，洗脫液透析后真空干燥即得甘薯粘液蛋白純品(白色粉末)。
4.將所得的甘薯粘液蛋白粗品或純品按常規(guī)方法裝袋，裝瓶或裝罐，要求包裝袋、瓶透光性極差為宜。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甘薯中粘液蛋白的提取純化方法,將甘薯粉碎后(篩孔直徑1.0～2.0mm),用甘薯重4～6倍的水在40～60℃下浸提3次,每次0.5～1h,合并浸提液,在2000rpm下離心15min,上清液真空濃縮至1/10～1/15,加95%的酒精或丙酮沉淀,靜置18～20h后離心(2000rpm)15min,上清液回收酒精或丙酮,沉淀用適量水溶解后用氯仿－正丁醇(4∶1)脫游離蛋白3次后,取水層透析48h,收集透析內(nèi)液,離心(3000rpm)20min,取上清液真空干燥(真空度5—10mmHg)得甘薯粘液蛋白粗品(純度約為84.5%),如再經(jīng)DEAE52和SephadexG100柱層析后,可提到純度約為99.2%的甘薯粘液蛋白純品,采用本法制備的甘薯粘液蛋白純度高、方法簡便,重復(fù)性好。
文檔編號A23L3/32GK1287811SQ9911828
公開日2001年3月21日 申請日期1999年9月13日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月13日
發(fā)明者闞建全, 賀雅非, 李洪軍, 陳宗道, 王光慈, 趙國華 申請人:西南農(nóng)業(yè)大學(xué)