一種蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液，由以下組分組成：蛹蟲草粗多糖18～22%，蔗糖4～6%，果蔬酵素18～22%，檸檬酸0.1～0.3%，羧甲基纖維素鈉0.2～0.5%，山梨酸鉀0.005～0.015%，余量為水，以重量比計。本發(fā)明針對野生冬蟲夏草越來越少的狀況，以較容易獲得的材料配制出與野生冬蟲夏草的營養(yǎng)成分十分相仿且人體較易吸收的飲液。本發(fā)明的飲液長期服用具有增強免疫力的功效。本發(fā)明的飲液含有多種多糖、蛋白質(zhì)、有機酸、維生素和高濃度的鋅、硒、鎂等微量元素混合物。
【專利說明】
一種蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液及其制備方法
技術(shù)領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種用藥食同源的蛹蟲草制成的蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 冬蟲夏草為麥角科真菌冬蟲夏草[cordyceps inensis(Berk. )sacc·]寄生在蝙蝠 科昆蟲幼蟲的子座復合體。我國是世界上冬蟲夏草資源分布最多最廣的國家。冬蟲夏草主 要分布在中國青海、西藏、四川、云南等海拔較高(3000~5100m)的高寒草甸區(qū)?，F(xiàn)代藥理學 研究表明，冬蟲夏草具有調(diào)節(jié)人體免疫、抗腫瘤、抗氧化、調(diào)節(jié)人體腎、肝、心血管等功能。
[0003] 隨著人們生活水平的提高，人們的健康意識也隨著逐步提高，市場上出現(xiàn)大量保 健產(chǎn)品，蟲草類保健產(chǎn)品的大量生產(chǎn)，使得人們對野生天然蟲草的盜挖、采挖現(xiàn)象愈演愈 烈，與此同時，蟲草天然的繁殖生長環(huán)境的遭到極具破壞，自然產(chǎn)量隨之驟減，日趨枯竭野 生資源使得相關市場需求產(chǎn)生很大缺口，為解決這些問題，目前主要從天然冬蟲夏草中分 離出菌株，將其接種于蜂蛹通過產(chǎn)生子實體而獲得蟲草。大量相關藥理、藥化及臨床應用表 明：蛹蟲草和天然冬蟲夏草具有相似的化學成分、藥理作用和臨床療效，含有蛋白質(zhì)、脂肪、 礦物質(zhì)、維生素、18種氨基酸等營養(yǎng)成分，研究還發(fā)現(xiàn)，蛹蟲草中蟲草素和多糖的含量高于 冬蟲夏草。目前，市面上主要出售蟲酒、蟲草藥膳、蟲草茶、蟲草飲料和各類膠囊、片劑等產(chǎn) 品。
[0004] 蛹蟲草多糖功效較佳，但直接服用不便于人體吸收，且有較大腥味，難以接受。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為克服直接服用蛹蟲草，其多糖難以吸收、腥味較大等問題，本發(fā)明提供一種蛹蟲 草多糖果蔬酵素復方飲液。
[0006] -種蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液，由以下組分組成:蛹蟲草粗多糖18~22%，蔗 糖4~6 %，果蔬酵素18~22 %，檸檬酸0.1~0.3 %，羧甲基纖維素鈉0.2~0.5 %，山梨酸鉀 0.005~0.015%，余量為水，以重量比計。
[0007] 上述復合酵素，其制備方法包括以下步驟:選取重量份數(shù)為黃瓜1~2份、胡蘿卜1~ 2份、竹筍1~2份、火龍果1~2份、獼猴桃1~2份為原料，去雜，打漿，加入1~3份蜂蜜，于121 °C高溫高壓條件下滅菌15min，在無菌操作條件下，接種10wt%復合發(fā)酵菌液，進行發(fā)酵，發(fā) 酵時間200天，發(fā)酵結(jié)束后于121°C高溫高壓條件下滅菌15min殺滅發(fā)酵菌，過濾后液體為果 蔬酵素。
[0008] 上述復合發(fā)酵菌液是將乳酸菌、酵母菌、干酪乳桿菌的菌種活化培養(yǎng)制備而成。具 體包括以下步驟：（1)將乳酸菌、酵母菌、干酪乳桿菌分別在LB平板培養(yǎng)基上劃線接種，放入 30°C培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)至長滿菌絲；（2)挑取平板上的菌落分別接入裝有50ml培養(yǎng)液的三 角培養(yǎng)瓶中，置于搖床，轉(zhuǎn)速200rpm，溫度30°C，恒溫培養(yǎng)48~72小時，得到三種菌液；（3)將 三種菌液按乳酸菌:酵母菌:干酪乳桿菌=1:1:1比例配成濃度為每毫升含2.5 X 107個孢子 的菌液，作為復合發(fā)酵液。
[0009] 上述蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液的制備方法，包括以下步驟：
[0010] (1)蛹蟲草粉以物料重量比為1:15加蒸餾水，超聲30min，在100°C下油浴提取2h， 離心得提取液，將提取液濃縮，加入3-5倍無水乙醇進行醇沉過夜；
[0011] (2)離心并用無水乙醇洗沉淀，得到粗多糖，將蛹蟲草粗多糖進行冷凍干燥，得到 蛹蟲草多糖粉；
[0012] (3)取蟲草粗多糖20%，蔗糖5%，果蔬酵素20%，檸檬酸0.2%，羧甲基纖維素鈉 0.3%，山梨酸鉀0.01%，用去離子水加至100%混合，均質(zhì)、瞬時滅菌，滅菌溫度在100-120 °C，時間在30-60分鐘，灌裝封口。
[0013]有益效果
[0014] 1.本發(fā)明針對野生冬蟲夏草越來越少的狀況，以較容易獲得的材料配制出與野生 冬蟲夏草的營養(yǎng)成分十分相仿且人體較易吸收的飲液。本發(fā)明的飲液長期服用具有增強免 疫力的功效。本發(fā)明的飲液含有多種多糖、蛋白質(zhì)、有機酸、維生素和高濃度的鋅、硒、鎂等 微量元素混合物。
[0015] 2.在蛹蟲草多糖飲液的加工制備中，有效成分的生物活性易削弱或喪失，且多糖 是大分子物質(zhì)，其生物利用度極低。而本發(fā)明不僅能夠改善腸胃消化系統(tǒng)功能，加速多糖的 吸收，而且能夠提高多糖的生物利用度，使得產(chǎn)品在水解吸收過程中產(chǎn)生更多的寡糖、低聚 糖，利于與體內(nèi)免疫系統(tǒng)發(fā)生作用，例如與粘膜上的細胞受體結(jié)合，從而激活一些信號通 路、引起免疫反應，不但可以增多功效，而且還可以提高藥理作用和臨床療效。
【具體實施方式】
[0016] 下面對本發(fā)明做進一步詳細說明。以下實施例僅限于說明本發(fā)明而不用于限制本 發(fā)明的范圍。
[0017] 實施例！
[0018] -種蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液，其原料重量份數(shù)是:蛹蟲草粗多糖20 %，蔗糖 5 %，果蔬酵素20 %，檸檬酸0.2 %，羧甲基纖維素鈉0.3 %，山梨酸鉀0.01 %，用去離子水加 至100 %混合，以重量百分比計。
[0019] 制備方法為：
[0020] (1)篩選蛹蟲草，清洗，烘干，磨粉。熱水回流侵提取，離心，濃縮，醇沉，離心，冷凍 干燥，得粗多糖。
[0021] (2)選取重量份數(shù)為黃瓜1份、胡蘿卜1份、竹筍1份、火龍果1份、獼猴桃1份為原料， 去雜，打漿，過濾(排出種子得到新鮮純果汁），加入2份蜂蜜，于121°C高溫高壓條件下滅菌 15min殺滅空氣中的微生物和雜菌，加入10wt %的復合發(fā)酵菌液，發(fā)酵，121°C高溫高壓條件 下滅菌15min殺滅發(fā)酵菌，終止發(fā)酵，過濾后液體為酵素。
[0022] 上述復合發(fā)酵菌液是將乳酸菌、酵母菌、干酪乳桿菌的菌種活化培養(yǎng)制備而成。具 體包括以下步驟:①將乳酸菌、酵母菌、干酪乳桿菌分別在LB平板培養(yǎng)基上劃線接種，放入 30 °C培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)至長滿菌絲;②挑取平板上的菌落分別接入裝有50ml培養(yǎng)液的三角 培養(yǎng)瓶中，置于搖床，轉(zhuǎn)速200rpm，溫度30°C，恒溫培養(yǎng)48~72小時，得到三種菌液;③將三 種菌液按乳酸菌:酵母菌:干酪乳桿菌=1:1:1比例配成濃度為每毫升含2.5 X 107個孢子的 菌液，作為復合發(fā)酵液。
[0023] (3)取粗多糖20%，蔗糖5%，果蔬酵素20%，檸檬酸0.2%，羧甲基纖維素鈉0.3%， 山梨酸鉀0.01%，用去離子水加至100%混合，均質(zhì)、瞬時滅菌，滅菌溫度在100-120 °c，時間 在30-60分鐘，灌裝封口為本發(fā)明蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液。制得的產(chǎn)品效果驗證如 下：
[0024] 1.保健功能試驗：
[0025] (1)抗腫瘤作用
[0026]選取20只健康且體重相近（18±2g)的清潔型ICR小鼠，在小鼠背部皮下接種5 X 106個S180細胞。隨機分為A(0.9%生理鹽水作為對照組）、B(實施例1作為實驗組)兩組，每 組10只。A組灌入0.4ml生理鹽水，B組灌入0.4ml蛹蟲草多糖液，每天同一時間灌胃1次，連續(xù) 灌胃10天后放血處死，取瘤稱重。實驗組瘤重0.408 ± 0.104g，對照組瘤重0.866 ± 0.130g。 [0027]結(jié)論:本產(chǎn)品具有良好的抗腫瘤作用。
[0028] (2)抗氧化作用
[0029] 首先配制好9mmo 1 /LFeS〇4、9mmo 1 /L水楊酸乙醇溶液、8.8mmo L/L過氧化氫溶液和 不同濃度梯度的本產(chǎn)品（分別為5mg/mL、1 Omg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL)。取15支試管 分成5組依次做好編號，每組3個平行試驗，每支試管中加入lmL 9mmol/L FeS04、2mL 9mmo 1 /L水楊酸乙醇溶液，按照編號依次加入不同濃度的多糖溶液2mL，再分別加入2mL 8.8mmol/L過氧化氫溶液，室溫下反應lh后。蒸餾水空白調(diào)零，在510nm處測定各試管的吸光 度，計算不同濃度本產(chǎn)品對羥自由基的清除率。
[0030] 計算公式:羥自由基清除率（％) = (Aq-As)/AqX100%
[0031] 其中:Aq-一空白對照管的吸光度；
[0032] As 加入樣品后的吸光度
[0033] 結(jié)果表明本產(chǎn)品多糖濃度為15mg/mL時，羥自由基的抑制率達到最高70%以上，試 驗表明本廣品具有良好的還原能力。
[0034]結(jié)論:本產(chǎn)品具有良好的體外抗氧化作用。
[0035] (3)降血糖
[0036]選取12只健康且體重相近（18 ± 2g)的清潔型ICR小鼠，以多次低劑量鏈脲霉素 (multiple low-dose streptozotocin，MLD_STZ)方法腹腔注射BALB/c小鼠，成功誘導出糖 尿病小鼠。隨后隨機分成A、B兩組，每組6只。每天同一時間，分別給A組小鼠注射本產(chǎn)品 300mL/kg、B組小鼠注射飲用蒸餾水，每天注射一次，連續(xù)注射6周，每周斷尾取血，用血糖儀 測定血糖濃度。實驗組血糖濃度由17.88 ± 2.88 (mmol/L，η = 6)變成12.00 ± 1.06 (mmol/L，η =6)，對照組由 17·82±2·88(mmol/L，n = 6)變成19·81 ± 1 · 70(mmol/L，n = 6) 〇
[0037] 結(jié)論:本產(chǎn)品對糖尿病小鼠有較好的降糖作用。
[0038] (4)護肝作用。
[0039] 選取30只健康且體重相近（18±2g)的清潔型ICR小鼠，隨機分成正常對照組(飼喂 正常飼料）、急性CC14肝損傷模型組(簡稱模型對照組，正常飼料+CC14)、產(chǎn)品組(正常飼料+ CC14+本產(chǎn)品為500mg/kg多糖），每組10只。每天晚上7:00，產(chǎn)品組灌胃0.2mL，正常對照組與 模型對照組灌胃等體積0.2mL生理鹽水，連續(xù)灌胃7天，末次灌胃2小時后，正常對照組注射 0.2mL花生油，其他各組每只鼠腹腔注射0.2 %CCl4花生油溶液0.2mL。禁食16h，斷頭取血約 3mL，室溫放置2h，3000r/min離心10min后取血清，-20°C密封保存?zhèn)溆茫蝗「巫笕~用生理鹽 水制成10%的組織勻漿。取肝右葉，用10%甲醛溶液固定，冰凍保存。用考馬斯亮藍法測定 組織中蛋白含量，采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性。取甲醛固定的肝右葉組織，常規(guī)石蠟 切片，HE染色、20 X 10倍光鏡鏡檢。正常對照組SOD活性30.45 ± 2.43 (U/mg pro)，MDA含量 2.69±3.33(腦〇1/11^?『〇)，?。亢?5.23±2.56(11^/1111^?『〇) ;模型對照組500活性15.13 ±2.85(11/11^卩1'〇)，]\0八含量9.10±3.19(111]1〇1/11^卩1'〇)，丁？含量57.28±2.25(11^/11114)1'〇); 產(chǎn)品組SOD活性25 · 61 ± 2 · 12(U/mg pro)，MDA含量3 · 72 ± 3 · 60(nmo 1 /mg pro)，TP含量60 · 59 ±2.98(mg/m L pro)。
[0040] 結(jié)論:模型對照組SOD水平顯著低于正常對照組(P<0.01)，說明肝細胞已受到破 壞。產(chǎn)品組S0D水平顯著高于模型對照組(P<0.01)，表明產(chǎn)品組起到了抑制S0D降低的作 用。模型對照組MDA含量顯著高于正常對照組(P<0.01)，說明CC1 4誘導的急性肝損傷模型 成功。產(chǎn)品組MDA水平顯著低于模型對照組(P<0.01)，表明本產(chǎn)品起到了抑制MDA升高的作 用。因此，本產(chǎn)品具有護肝作用。
[0041] (5)保護腎功能
[0042] 健康witsra大鼠12只，雌、雄各半，50天齡，雌性體重160~180g，雄性體重170~ 200g，隨機分成三組，正常對照組、模型組對照組、產(chǎn)品組，每組4只。模型對照組、產(chǎn)品組分 別在水合氯醛麻醉下行左側(cè)腎臟2/3切除術(shù)。術(shù)后大鼠單獨飼養(yǎng)3天后分組置飼養(yǎng)籠群養(yǎng)。 第三天開始進行千預治療：（A)產(chǎn)品組，4只，每天給予本產(chǎn)品500mg/kg灌胃；（B)模型對照 組，4只，（C)正常對照組，4只。模型組和正常對照組每大給予等量的飲用水灌胃，大鼠自山 飲水、進食。次術(shù)后4周各組分別處死大鼠2只。術(shù)后9周處死剩余的2只。開放腎臟靜脈，用4 °C預冷的生理鹽水沖洗腎臟直至變白，摘下腎臟，將其剖開，取部分腎組織(兼顧皮、髓質(zhì)） 置10%福爾馬林固定液固定24小時，流水沖洗2小時，常規(guī)剃度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟 包埋，3pm厚連續(xù)切片，用HE染色、PSA染色，檢查腎小球硬化指數(shù)。采用半定量方法評估腎小 球硬化程度，每張切片均觀察20個完整腎小球。4周時腎小球硬化指數(shù)，正常對照組2.50土 〇. 05、模型對照組27.67 ± 0.27、蛹蟲草多糖組24.67 ± 0.23，9周時腎小球硬化指數(shù)，正常對 照組2.67 ± 0.21、模型對照組44.67 ± 0.87、產(chǎn)品組30.33 ± 0.74。
[0043] 結(jié)論:模型對照組腎小球硬化指數(shù)顯著低于正常對照組(P<0.01 )，說明腎小球已 受到破壞。產(chǎn)品組腎小球硬化指數(shù)顯著低于模型對照組(P<〇.01)，表明產(chǎn)品組對腎小球起 到了保護作用。模型對照組腎小球硬化指數(shù)顯著高于正常對照組(P<〇.01)，說明腎小球損 傷模型成功。因此，本產(chǎn)品具有能保護腎功能。
[0044] (6)改善腸胃消化系統(tǒng)
[0045] 選取20只健康且體重相近（18±2g)的清潔型ICR小鼠，禁食20-24小時，隨機分為2 組，即產(chǎn)品組（20.0ml/kg灌胃），對照組（等量生理鹽水灌胃），每組10只動物，用苦味酸標 記。90分鐘后各組給予0.3ml墨汁液灌胃。20分鐘后，頸椎脫臼處死，打開腹腔分離腸膜，上 端至幽門、下端至回盲部剪取腸管，置于托盤上。輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度作為 小腸總長度。從幽門至墨汁前沿的距離作為"墨汁在腸內(nèi)推進距離"。用公式計算墨汁推進 百分率。墨汁推進率（％ )=墨汁在腸內(nèi)推進距離（cm)/小腸全長(cm) X 100%。各組小鼠小 腸推動功能。正常對照組推進率64.274± 7.002%，產(chǎn)品組推進率83.017 ±8.796%。
[0046] 結(jié)論:本產(chǎn)品能改善腸胃消化系統(tǒng)。
[0047] 2.吸收率試驗驗證：
[0048] 選取20只健康且體重相近（18±2g)的清潔型ICR小鼠，隨機分2組，即本產(chǎn)品組(簡 稱實驗組，本產(chǎn)品20.0ml/kg灌胃），對照組(等量生理鹽水灌胃），每組10只動物，10分鐘后 每只小鼠灌入〇.4mL2%葡聚糖藍2000溶液，30分鐘后頸椎脫臼處死動物，開腹取出全部胃 腸，自幽門括約肌處取胃，將其內(nèi)殘留的葡聚糖藍2000充分溶2mL去離子水中，3500rpm離心 15分鐘，取上清液，濾液用723型分光光度計，在620nm處測定吸光度，為胃內(nèi)葡聚糖藍2000 殘留量，并求出實驗組均值。以對照組均值為100%，得實驗組相對胃內(nèi)色素殘留率50.9%。
[0049] 結(jié)論:本產(chǎn)品有助于機體對對營養(yǎng)的吸收。
[0050] 3.感官評定試驗:選擇20名專業(yè)評判人員，對本產(chǎn)品進行感官評價。表1為本產(chǎn)品 感官評價指標，表2為評價結(jié)果。
[0051 ]表1實施例1的蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液感官評分標準
[0052]
[0053] 表2實施例1的蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液感官評價結(jié)果
[0054]
[0055] 由表2可以看出，本發(fā)明蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液酸甜味適中，基本無苦味， 不含不溶性顆粒，澄清度較好，黏稠度適中，整體口感好，滿足消費者需求。
【主權(quán)項】
1. 一種蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液，由以下組分組成:蛹蟲草粗多糖18~22%，蔗糖4 ~6%，果蔬酵素18~22%，檸檬酸0.1~0.3%，羧甲基纖維素鈉0.2~0.5%，山梨酸鉀0.005~ 0.015%，余量為水，以重量比計。2. 如權(quán)利要求1所述蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液，所述的復合酵素的原料為黃瓜1~ 2份、胡蘿卜1~2份、竹輿1~2份、火龍果1~2份、獼猴桃1~2份為原料，1~3份蜂蜜，以重量 份數(shù)計。3. 如權(quán)利要求1所述蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液，所述的復合酵素制備方法包括以 下步驟:選取果蔬原料，去雜，打衆(zhòng)，加入蜂蜜，于121°C高溫高壓條件下滅菌15min，接種 10wt%復合發(fā)酵菌液，進行發(fā)酵，發(fā)酵時間200天，然后121°C高溫高壓條件下滅菌15min殺滅 發(fā)酵菌，過濾后液體為果蔬酵素。4. 如權(quán)利要求1-3任一所述蛹蟲草多糖果蔬酵素復方飲液的制備方法，包括以下步驟： (1) 蛹蟲草粉以物料重量比為1:15加蒸餾水，超聲30min，在100°C下油浴提取2h，離心 得提取液，將提取液濃縮，加入3-5倍無水乙醇進行醇沉過夜； (2) 離心并用無水乙醇洗沉淀，得到粗多糖，將蛹蟲草粗多糖進行冷凍干燥，得到蛹蟲 草多糖粉； (3) 取蟲草粗多糖20%，蔗糖5%，果蔬酵素20%，檸檬酸0.2%，羧甲基纖維素鈉0.3%，山梨 酸鉀0.01%，用去離子水加至100%混合，均質(zhì)、瞬時滅菌，滅菌溫度在100-120°C，時間在30-60分鐘，灌裝封口。
【文檔編號】A23L2/38GK106036306SQ201610303890
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月10日
【發(fā)明人】肖艷文
【申請人】香格里拉東旺生物科技有限公司