專利名稱：具有抑制癌細(xì)胞生長功能的新的人蛋白及其編碼序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及新的編碼具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸和此多核苷酸編碼的多肽。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的用途和制備。
人基因組學(xué)研究目前是國際上的熱點(diǎn)，除人染色體DNA大規(guī)模測序，表達(dá)序列測序(EST)的方法外，還缺少從功能開始的篩選具有功能基因的高通量的方法。
癌癥是危害人類健康的主要疾病之一。為了有效地治療和預(yù)防腫瘤，目前人們已越來越關(guān)注腫瘤的基因治療。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)研究具有抑癌功能的人蛋白及其激動(dòng)劑/抑制劑。
本發(fā)明的目的是提供一類新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、類似物和衍生物。
本發(fā)明的另一目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。
本發(fā)明的另一目的是提供生產(chǎn)這些多肽的方法以及該多肽和編碼序列的用途。
在本發(fā)明的第一方面，提供新穎的分離出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
較佳地，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種分離的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性(a)編碼上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。較佳地，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32。更佳地，該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33的編碼區(qū)序列或全長序列。
在本發(fā)明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞或者被上述多核苷酸直接轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。
在本發(fā)明的第四方面，提供了制備具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制備方法，該方法包含(a)在適合表達(dá)具有抑癌功能的蛋白的條件下，培養(yǎng)上述被轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本發(fā)明的第五方面，提供了與上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特異性結(jié)合的抗體。還提供了可用于檢測的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中連續(xù)10個(gè)核苷酸至全長核苷酸，較佳地它含有連續(xù)的約10-800個(gè)核苷酸。
在本發(fā)明的第六方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及藥學(xué)上可接受的載體。這些藥物組合物可治療癌癥以及細(xì)胞異常增殖等病癥。
本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。
本發(fā)明采用大規(guī)模cDNA克隆轉(zhuǎn)染癌細(xì)胞，在獲得具有抑癌作用的基礎(chǔ)上，經(jīng)測序證明為新的基因，進(jìn)一步得到全長cDNA克隆。DNA轉(zhuǎn)染試驗(yàn)證明，本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白對癌細(xì)胞(肝癌細(xì)胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。
如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細(xì)胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開，則為分離純化的。
如本文所用，“分離的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化具有抑癌功能的蛋白。基本上純的多肽在非還原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。
本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從原核或真核宿主(例如，細(xì)菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)中產(chǎn)生。根據(jù)重組生產(chǎn)方案所用的宿主，本發(fā)明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本發(fā)明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
本發(fā)明還包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和類似物。如本文所用，術(shù)語“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持本發(fā)明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物學(xué)功能或活性的多肽。本發(fā)明的多肽片段、衍生物或類似物可以是(i)有一個(gè)或多個(gè)保守或非保守性氨基酸殘基(優(yōu)選保守性氨基酸殘基)被取代的多肽，而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的，或(ii)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基中具有取代基團(tuán)的多肽，或(iii)成熟多肽與另一個(gè)化合物(比如延長多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導(dǎo)序列或分泌序列或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列)。根據(jù)本文的教導(dǎo)，這些片段、衍生物和類似物屬于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員公知的范圍。
本發(fā)明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。以PP9284蛋白(在本申請中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號(hào))為例，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO3所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡并的變異體。如本文所用，“簡并的變異體”在本發(fā)明中是指編碼具有SEQ ID NO2的蛋白質(zhì)，但與SEQ IDNO3所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。再以PP9320蛋白(在本申請中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號(hào))為例，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO6所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡并的變異體。如本文所用，“簡并的變異體”在本發(fā)明中是指編碼具有SEQ ID NO5的蛋白質(zhì)，但與SEQ ID NO6所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。對于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此類推。
編碼成熟多肽的多核苷酸包括只編碼成熟多肽的編碼序列；成熟多肽的編碼序列和各種附加編碼序列；成熟多肽的編碼序列(和任選的附加編碼序列)以及非編碼序列。
術(shù)語“編碼多肽的多核苷酸”可以是包括編碼此多肽的多核苷酸，也可以是還包括附加編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。
本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體，其編碼與本發(fā)明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。此多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領(lǐng)域所知的，等位變異體是一個(gè)多核苷酸的替換形式，它可能是一個(gè)或多個(gè)核苷酸的取代、缺失或插入，但不會(huì)從實(shí)質(zhì)上改變其編碼的多肽的功能。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交且兩個(gè)序列之間具有至少50％，較佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本發(fā)明特別涉及在嚴(yán)格條件下與本發(fā)明所述多核苷酸可雜交的多核苷酸。在本發(fā)明中，“嚴(yán)格條件”是指(1)在較低離子強(qiáng)度和較高溫度下的雜交和洗脫，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)雜交時(shí)加有變性劑，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)僅在兩條序列之間的相同性至少在95％以上，更好是97％以上時(shí)才發(fā)生雜交。并且，可雜交的多核苷酸編碼的多肽與SEQ IDNO2所示的成熟多肽有相同的生物學(xué)功能(以PP9284蛋白為例)和活性。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的長度至少含15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的擴(kuò)增技術(shù)(如PCR)以確定和/或分離編碼具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本發(fā)明中的多肽和多核苷酸優(yōu)選以分離的形式提供，更佳地被純化至均質(zhì)。
本發(fā)明的DNA序列能用幾種方法獲得。例如，用本領(lǐng)域熟知的雜交技術(shù)分離DNA。這些技術(shù)包括但不局限于1)用探針與基因組或cDNA文庫雜交以檢出同源性核苷酸序列，和2)表達(dá)文庫的抗體篩選以檢出具有共同結(jié)構(gòu)特征的克隆的DNA片段。
編碼具有抑癌功能的蛋白的特異DNA片段序列產(chǎn)生也能用下列方法獲得1)從基因組DNA分離雙鏈DNA序列；2)化學(xué)合成DNA序列以獲得所需多肽的雙鏈DNA。
上述提到的方法中，分離基因組DNA最不常用。當(dāng)需要的多肽產(chǎn)物的整個(gè)氨基酸序列已知時(shí)，DNA序列的直接化學(xué)合成是經(jīng)常選用的方法。如果所需的氨基酸的整個(gè)序列不清楚時(shí)，DNA序列的直接化學(xué)合成是不可能的，選用的方法是cDNA序列的分離。分離感興趣的cDNA的標(biāo)準(zhǔn)方法是從高表達(dá)該基因的供體細(xì)胞分離mRNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，形成質(zhì)粒或噬菌體cDNA文庫。提取mRNA的方法已有多種成熟的技術(shù)，試劑盒也可從商業(yè)途徑獲得(Qiagene)。而構(gòu)建cDNA文庫也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。還可得到商業(yè)供應(yīng)的cDNA文庫，如Clontech公司的不同cDNA文庫。當(dāng)結(jié)合使用聚合酶反應(yīng)技術(shù)時(shí)，即使極少的表達(dá)產(chǎn)物也能克隆。
可用常規(guī)方法從這些cDNA文庫中篩選本發(fā)明的基因。這些方法包括(但不限于)(1)DNA-DNA或DNA-RNA雜交；(2)標(biāo)志基因的功能出現(xiàn)或喪失；(3)測定具有抑癌功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄本的水平；(4)通過免疫學(xué)技術(shù)或測定生物學(xué)活性，來檢測基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物。上述方法可單用，也可多種方法聯(lián)合應(yīng)用。
在第(1)種方法中，雜交所用的探針是與本發(fā)明的多核苷酸的任何一部分同源，其長度至少15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸。此外，探針的長度通常在2kb之內(nèi)，較佳地為lkb之內(nèi)。此處所用的探針通常是在本發(fā)明的基因DNA序列信息的基礎(chǔ)上化學(xué)合成的DNA序列。本發(fā)明的基因本身或者片段當(dāng)然可以用作探針。DNA探針的標(biāo)記可用放射性同位素，熒光素或酶(如堿性磷酸酶)等。
在第(4)種方法中，檢測具有抑癌功能的蛋白基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物可用免疫學(xué)技術(shù)如Western印跡法，放射免疫沉淀法，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。
應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；2301350-1354)被優(yōu)選用于獲得本發(fā)明的基因。特別是很難從文庫中得到全長的cDNA時(shí)，可優(yōu)選使用RACE法(RACE-cDNA末端快速擴(kuò)增法)，用于PCR的引物可根據(jù)本文所公開的本發(fā)明的序列信息適當(dāng)?shù)剡x擇，并可用常規(guī)方法合成?？捎贸Ｒ?guī)方法如通過凝膠電泳分離和純化擴(kuò)增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本發(fā)明的基因，或者各種DNA片段等的核苷酸序列的測定可用常規(guī)方法如雙脫氧鏈終止法(Sanger et al.PNAS，1977，745463-5467)。這類核苷酸序列測定也可用商業(yè)測序試劑盒等。為了獲得全長的cDNA序列，測序需反復(fù)進(jìn)行。有時(shí)需要測定多個(gè)克隆的cDNA序列，才能拼接成全長的cDNA序列。
本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明的多核苷酸的載體，以及用本發(fā)明的載體或具有抑癌功能的蛋白編碼序列經(jīng)基因工程產(chǎn)生的宿主細(xì)胞，以及經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明所述多肽的方法。
通過常規(guī)的重組DNA技術(shù)(Science，1984；2241431)，可利用本發(fā)明的多聚核苷酸序列可用來表達(dá)或生產(chǎn)重組的具有抑癌功能的蛋白多肽。一般來說有以下步驟(1).用本發(fā)明的編碼具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或變異體)，或用含有該多核苷酸的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)合適的宿主細(xì)胞；(2).在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的宿主細(xì)胞；(3).從培養(yǎng)基或細(xì)胞中分離、純化蛋白質(zhì)。
本發(fā)明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重組表達(dá)載體中。術(shù)語“重組表達(dá)載體”指本領(lǐng)域熟知的細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體、酵母質(zhì)粒、植物細(xì)胞病毒、哺乳動(dòng)物細(xì)胞病毒如腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒或其他載體。在本發(fā)明中適用的載體包括但不限于在細(xì)菌中表達(dá)的基于T7的表達(dá)載體(Rosenberg，et al.Gene，1987，56125)；在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的pMSXND表達(dá)載體(Lee and Nathans，J Bio Chem.2633521，1988)和在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的來源于桿狀病毒的載體?？傊?，只要能在宿主體內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定，任何質(zhì)粒和載體都可以用。表達(dá)載體的一個(gè)重要特征是通常含有復(fù)制起點(diǎn)、啟動(dòng)子、標(biāo)記基因和翻譯控制元件。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法能用于構(gòu)建含具有抑癌功能的人蛋白編碼DNA序列和合適的轉(zhuǎn)錄/翻譯控制信號(hào)的表達(dá)載體。這些方法包括體外重組DNA技術(shù)、DNA合成技術(shù)、體內(nèi)重組技術(shù)等(Sambroook，et al.)。所述的DNA序列可有效連接到表達(dá)載體中的適當(dāng)啟動(dòng)子上，以指導(dǎo)mRNA合成。這些啟動(dòng)子的代表性例子有大腸桿菌的lac或trp啟動(dòng)子；λ噬菌體PL啟動(dòng)子；真核啟動(dòng)子包括CMV立即早期啟動(dòng)子、早期和晚期SV40啟動(dòng)子、反轉(zhuǎn)錄病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核細(xì)胞或其病毒中表達(dá)的啟動(dòng)子。表達(dá)載體還包括翻譯起始用的核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止子。
此外，表達(dá)載體優(yōu)選地包含一個(gè)或多個(gè)選擇性標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的表型性狀，如真核細(xì)胞培養(yǎng)用的二氫葉酸還原酶、新霉素抗性以及綠色熒光蛋白(GFP)，或用于大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。
包含上述的適當(dāng)DNA序列以及適當(dāng)啟動(dòng)子或者控制序列的載體，可以用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，以使其能夠表達(dá)蛋白質(zhì)。
宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，如細(xì)菌細(xì)胞；或是低等真核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞；或是高等真核細(xì)胞，如哺乳動(dòng)物細(xì)胞。代表性例子有大腸桿菌，鏈霉菌屬；鼠傷寒沙門氏菌的細(xì)菌細(xì)胞；真菌細(xì)胞如酵母；植物細(xì)胞；果蠅S2或Sf9的昆蟲細(xì)胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤細(xì)胞的動(dòng)物細(xì)胞等。
本發(fā)明的多核苷酸在高等真核細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，如果在載體中插入增強(qiáng)子序列時(shí)將會(huì)使轉(zhuǎn)錄得到增強(qiáng)。增強(qiáng)子是DNA的順式作用因子，通常大約有10到300個(gè)堿基對，作用于啟動(dòng)子以增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄?？膳e的例子包括在復(fù)制起始點(diǎn)晚期一側(cè)的100到270個(gè)堿基對的SV40增強(qiáng)子、在復(fù)制起始點(diǎn)晚期一側(cè)的多瘤增強(qiáng)子以及腺病毒增強(qiáng)子等。
本領(lǐng)域一般技術(shù)人員都清楚如何選擇適當(dāng)?shù)妮d體、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和宿主細(xì)胞。
用重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。當(dāng)宿主為原核生物如大腸桿菌時(shí)，能吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞可在指數(shù)生長期后收獲，用CaCl2法處理，所用的步驟在本領(lǐng)域眾所周知?？晒┻x擇的是用MgCl2。如果需要，轉(zhuǎn)化也可用電穿孔的方法進(jìn)行。當(dāng)宿主是真核生物，可選用如下的DNA轉(zhuǎn)染方法磷酸鈣共沉淀法，常規(guī)機(jī)械方法如顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體包裝等。
獲得的轉(zhuǎn)化子可以用常規(guī)方法培養(yǎng)，表達(dá)本發(fā)明的基因所編碼的多肽。根據(jù)所用的宿主細(xì)胞，培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基可選自各種常規(guī)培養(yǎng)基。在適于宿主細(xì)胞生長的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)宿主細(xì)胞生長到適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度后，用合適的方法(如溫度轉(zhuǎn)換或化學(xué)誘導(dǎo))誘導(dǎo)選擇的啟動(dòng)子，將細(xì)胞再培養(yǎng)一段時(shí)間。
在上面的方法中的重組多肽可包被于細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞外或在細(xì)胞膜上表達(dá)或分泌到細(xì)胞外。如果需要，可利用其物理的、化學(xué)的和其它特性通過各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于常規(guī)的復(fù)性處理、用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超處理、超離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術(shù)及這些方法的結(jié)合。
重組的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。這些用途包括(但不限于)直接做為藥物治療具有抑癌功能的蛋白功能低下或喪失所致的疾病，和用于篩選促進(jìn)或?qū)咕哂幸职┕δ艿牡鞍坠δ艿目贵w、多肽或其它配體。例如，抗體可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表達(dá)的重組具有抑癌功能的人蛋白篩選多肽庫可用于尋找有治療價(jià)值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本發(fā)明也提供了篩選藥物以鑒定提高(激動(dòng)劑)或阻遏(拮抗劑)具有抑癌功能的人蛋白的藥劑的方法。激動(dòng)劑提高具有抑癌功能的人蛋白刺激細(xì)胞增殖等生物功能，而拮抗劑阻止和治療與細(xì)胞過度增殖有關(guān)的紊亂如各種癌癥。例如，能在藥物的存在下，將哺乳動(dòng)物細(xì)胞或表達(dá)具有抑癌功能的人蛋白的膜制劑與標(biāo)記的具有抑癌功能的人蛋白一起培養(yǎng)。然后測定藥物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑包括篩選出的抗體、化合物、受體缺失物和類似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑可以與具有抑癌功能的人蛋白結(jié)合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的產(chǎn)生，或是與多肽的活性位點(diǎn)結(jié)合使多肽不能發(fā)揮生物學(xué)功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑可用于治療用途。
在篩選作為拮抗劑的化合物時(shí)，可以將本發(fā)明蛋白加入生物分析測定中，通過測定化合物影響具有抑癌功能的蛋白和其受體之間的相互作用來確定化合物是否是拮抗劑。用上述篩選化合物的同樣方法，可以篩選出起拮抗劑作用的受體缺失物和類似物。
本發(fā)明的多肽可直接用于疾病治療，例如，各種惡性腫瘤、和細(xì)胞異常增殖等。
本發(fā)明的多肽，及其片段、衍生物、類似物或它們的細(xì)胞可以用來作為抗原以生產(chǎn)抗體。這些抗體可以是多克隆或單克隆抗體。多克隆抗體可以通過將此多肽直接注射動(dòng)物的方法得到。制備單克隆抗體的技術(shù)包括雜交瘤技術(shù)，三瘤技術(shù)，人B-細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，EBV-雜交瘤技術(shù)等。
可以將本發(fā)明的多肽和拮抗劑與合適的藥物載體組合后使用。這些載體可以是水、葡萄糖、乙醇、鹽類、緩沖液、甘油以及它們的組合。組合物包含安全有效量的多肽或拮抗劑以及不影響藥物效果的載體和賦形劑。這些組合物可以作為藥物用于疾病治療。
本發(fā)明還提供含有一種或多種容器的藥盒或試劑盒，容器中裝有一種或多種本發(fā)明的藥用組合物成分。與這些容器一起，可以有由制造、使用或銷售藥品或生物制品的政府管理機(jī)構(gòu)所給出的指示性提示，該提示反映出生產(chǎn)、使用或銷售的政府管理機(jī)構(gòu)許可其在人體上施用。此外，本發(fā)明的多肽可以與其它的治療化合物結(jié)合使用。
藥物組合物可以以方便的方式給藥，如通過局部、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)或皮內(nèi)的給藥途徑。具有抑癌功能的蛋白以有效地治療和/或預(yù)防具體的適應(yīng)癥的量來給藥。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和劑量范圍將取決于許多因素，如給藥方式、待治療者的健康條件和診斷醫(yī)生的判斷。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多種治療目的。基因治療技術(shù)可用于治療由于具有抑癌功能的蛋白的無表達(dá)或異常/無活性的具有抑癌功能的蛋白的表達(dá)所致的細(xì)胞增殖、發(fā)育或代謝異常。重組的基因治療載體可用于治療具有抑癌功能的蛋白表達(dá)或活性異常所致的疾病。來源于病毒的表達(dá)載體如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺病毒相關(guān)病毒、單純皰疹病毒、細(xì)小病毒等可用于將具有抑癌功能的蛋白基因轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)。構(gòu)建攜帶具有抑癌功能的蛋白基因的重組病毒載體的方法可見于已有文獻(xiàn)(Sambrook，etal.)。另外重組具有抑癌功能的人蛋白基因可包裝到脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反義RNA和DNA)以及核酶也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。核酶是一種能特異性分解特定RNA的酶樣RNA分子，其作用機(jī)制是核酶分子與互補(bǔ)的靶RNA特異性雜交后進(jìn)行核酸內(nèi)切作用。反義的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技術(shù)獲得，如固相磷酸酰胺化學(xué)合成法合成寡核苷酸的技術(shù)已廣泛應(yīng)用。反義RNA分子可通過編碼該RNA的DNA序列在體外或體內(nèi)轉(zhuǎn)錄獲得。這種DNA序列已整合到載體的RNA聚合酶啟動(dòng)子的下游。為了增加核酸分子的穩(wěn)定性，可用多種方法對其進(jìn)行修飾，如增加兩側(cè)的序列長度，核糖核苷之間的連接應(yīng)用磷酸硫酯鍵或肽鍵而非磷酸二酯鍵。
多聚核苷酸導(dǎo)入組織或細(xì)胞內(nèi)的方法包括將多聚核苷酸直接注入到體內(nèi)組織中；或在體外通過載體(如病毒、噬菌體或質(zhì)粒等)先將多聚核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞中，再將細(xì)胞移植到體內(nèi)等。
本發(fā)明的多肽還可用作肽譜分析，例如，多肽可用物理的、化學(xué)或酶進(jìn)行特異性切割，并進(jìn)行一維或二維或三維的凝膠電泳分析。
本發(fā)明還提供了針對具有抑癌功能的人蛋白抗原決定簇的抗體。這些抗體包括(但不限于)多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和Fab表達(dá)文庫產(chǎn)生的片段。這些抗體可用常規(guī)方法制備?？咕哂幸职┕δ艿娜说鞍椎目贵w可用于免疫組織化學(xué)技術(shù)中，檢測活檢標(biāo)本中的具有抑癌功能的人蛋白。
與具有抑癌功能的人蛋白結(jié)合的單克隆抗體也可用放射性同位素標(biāo)記，注入體內(nèi)可跟蹤其位置和分布。本發(fā)明中的抗體可用于治療或預(yù)防與具有抑癌功能的人蛋白相關(guān)的疾病。給予適當(dāng)劑量的抗體可以刺激或阻斷具有抑癌功能的人蛋白的產(chǎn)生或活性。
抗體也可用于設(shè)計(jì)針對體內(nèi)某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高親和性的單克隆抗體可與細(xì)菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，紅豆堿等)共價(jià)結(jié)合。
多克隆抗體的生產(chǎn)可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫動(dòng)物，如家兔，小鼠，大鼠等。多種佐劑可用于增強(qiáng)免疫反應(yīng)，包括但不限于弗氏佐劑等。
具有抑癌功能的人蛋白單克隆抗體可用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)(Kohler and Milstein.Nature，1975，256495-497)。將人恒定區(qū)和非人源的可變區(qū)結(jié)合的嵌合抗體可用已有的技術(shù)生產(chǎn)(Morrison et al，PNAS，1985，816851)。而已有的生產(chǎn)單鏈抗體的技術(shù)(U.S.PatNo.4946778)也可用于生產(chǎn)抗具有抑癌功能的人蛋白的單鏈抗體。
能與本發(fā)明蛋白結(jié)合的多肽分子可通過篩選由各種可能組合的氨基酸結(jié)合于固相物組成的隨機(jī)多肽庫而獲得。篩選時(shí)，必須對具有抑癌功能的人蛋白分子進(jìn)行標(biāo)記。
本發(fā)明還涉及定量和定位檢測具有抑癌功能的人蛋白水平的診斷試驗(yàn)方法。這些試驗(yàn)是本領(lǐng)域所熟知的，且包括FISH測定和放射免疫測定。試驗(yàn)中所檢測的具有抑癌功能的人蛋白水平，可以用作解釋具有抑癌功能的人蛋白在各種疾病中的重要性和用于診斷具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相關(guān)疾病的診斷和治療。在診斷方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于檢測具有抑癌功能的蛋白的表達(dá)與否或在疾病狀態(tài)下具有抑癌功能的蛋白的異常表達(dá)。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于對活檢標(biāo)本的雜交以判斷具有抑癌功能的蛋白的表達(dá)異常。雜交技術(shù)包括Southern印跡法，Northern印跡法、原位雜交等。這些技術(shù)方法都是公開的成熟技術(shù)，相關(guān)的試劑盒都可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA芯片(又稱為“基因芯片”)上，用于分析組織中基因的差異表達(dá)分析和基因診斷。用具有抑癌功能的蛋白特異的引物進(jìn)行RNA-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)體外擴(kuò)增也可檢測具有抑癌功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
檢測具有抑癌功能的蛋白基因的突變也可用于診斷具有抑癌功能的蛋白相關(guān)的疾病。具有抑癌功能的蛋白突變的形式包括與正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的點(diǎn)突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等?？捎靡延械募夹g(shù)如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測突變。另外，突變有可能影響蛋白的表達(dá)，因此用Northern印跡法、Western印跡法可間接判斷基因有無突變。
本發(fā)明的序列對染色體鑒定也是有價(jià)值的。這些序列會(huì)特異性地針對某條人染色體具體位置且并可以與其雜交。目前，需要鑒定染色體上的各基因的具體位點(diǎn)。然而現(xiàn)在只有很少的基于實(shí)際序列數(shù)據(jù)(重復(fù)多態(tài)性)的染色體標(biāo)記物可用于標(biāo)記染色體位置。為了將這些序列與疾病相關(guān)基因相關(guān)聯(lián)。第一步就是將本發(fā)明DNA序列定位于染色體上。
簡而言之，根據(jù)cDNA制備PCR引物(優(yōu)選15-35bp)，可以將序列定位于染色體上。然后，將這些引物用于PCR篩選含各條人染色體的體細(xì)胞雜合細(xì)胞。只有那些含有相應(yīng)于引物的人基因的雜合細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生擴(kuò)增的片段。
體細(xì)胞雜合細(xì)胞的PCR定位法，是將DNA定位到具體染色體的快捷方法。使用本發(fā)明的的寡核苷酸引物，通過類似方法，可利用一組來自特定染色體的片段或大量基因組克隆而實(shí)現(xiàn)亞定位?？捎糜谌旧w定位的其它類似策略包括原位雜交、用標(biāo)記的流式分選的染色體預(yù)篩選和雜交預(yù)選，從而構(gòu)建染色體特異的cDNA庫。
將cDNA克隆與中期染色體進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)，可以在一個(gè)步驟中精確地進(jìn)行染色體定位。此技術(shù)的綜述，參見Verma等，Human Chromosomesa Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。
一旦序列被定位到準(zhǔn)確的染色體位置，此序列在染色體上的物理位置就可以與基因圖數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)。這些數(shù)據(jù)可見于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通過與Johns Hopkins University Welch Medical Library聯(lián)機(jī)獲得)。然后可通過連鎖分析，確定基因與業(yè)已定位到染色體區(qū)域上的疾病之間的關(guān)系。
接著，需要測定患病和未患病個(gè)體間的cDNA或基因組序列差異。如果在一些或所有的患病個(gè)體中觀察到某突變，而該突變在任何正常個(gè)體中未觀察到，則該突變可能是疾病的病因。比較患病和未患病個(gè)體，通常涉及首先尋找染色體中結(jié)構(gòu)的變化，如從染色體水平可見的或用基于cDNA序列的PCR可檢測的缺失或易位。
本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全長序列或其片段通?？梢杂肞CR擴(kuò)增法、重組法或人工合成的方法獲得。對于PCR擴(kuò)增法，可根據(jù)本發(fā)明所公開的有關(guān)核苷酸序列，尤其是開放閱讀框序列來設(shè)計(jì)引物，并用市售的cDNA庫或按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫作為模板，擴(kuò)增而得有關(guān)序列。當(dāng)序列較長時(shí)，常常需要進(jìn)行兩次或多次PCR擴(kuò)增，然后再將各次擴(kuò)增出的片段按正確次序拼接在一起。
一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細(xì)胞，然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細(xì)胞中分離得到有關(guān)序列。
此外，還可用人工合成的方法來合成有關(guān)序列，尤其是片段長度較短時(shí)。通常，通過先合成多個(gè)小片段，然后再進(jìn)行連接可獲得序列很長的片段。
目前，已經(jīng)可以完全通過化學(xué)合成來編碼本發(fā)明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可將該DNA序列引入本領(lǐng)域中的各種DNA分子(如載體)和細(xì)胞中。此外，還可通過化學(xué)合成將突變引入本發(fā)明蛋白序列中。
此外，由于本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，與來源于其他物種的同族蛋白相比，預(yù)計(jì)在施用于人時(shí)將具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人體內(nèi)的免疫原性更低或沒有)。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(New YorkCold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實(shí)施例1cDNA基因的獲得及對癌細(xì)胞克隆形成的抑制作用PP9284、PP9320、PP10122、PP12744、PP13624、PP13671、PP13759、PP14328、PP14450、PP14733和PP14762是通過用常規(guī)方法構(gòu)建人胎盤cDNA文庫獲得的。取3、6、10月齡的胎盤組織，用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說明書提取總RNA，用mRNA提純試劑盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-scriptTMXR cDNA文庫構(gòu)建試劑盒(Stratagene公司)構(gòu)建上述mRNA的cDNA文庫。其中反轉(zhuǎn)錄酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)在42℃進(jìn)行。轉(zhuǎn)化XL10-Gold感受細(xì)胞，獲得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文庫。第一輪隨機(jī)挑取cDNA克隆，其后以高豐度cDNA克隆和已證明有抑癌細(xì)胞生長功能的cDNA克隆為探針，雜交篩選cDNA文庫，挑取弱陽性及陰性克隆。用Qiagen 96孔板質(zhì)粒抽提試劑盒，按廠家說明書進(jìn)行質(zhì)粒DNA的提取。質(zhì)粒DNA和空載體同時(shí)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H2O溶解，待轉(zhuǎn)染。每份DNA樣品中加0.74μl脂質(zhì)體及9.3μl無血清培液，混勻后，室溫放置10分鐘。每管中加150μl無血清培液，均分加入3孔生長于96孔板的7721細(xì)胞中，37℃放置2小時(shí)，每孔再加50μl無血清培液，37℃24小時(shí)。每孔換100μl全培液，37℃24小時(shí)，換含G418的全培液100μl，37℃24～48小時(shí)，邊觀察，邊換G418濃度不等的培液。約2～3次后，直到鏡檢細(xì)胞有克隆形成，計(jì)數(shù)。發(fā)現(xiàn)以上克隆有抑制細(xì)胞克隆形成作用，結(jié)果如下表所示。
cDNA克隆轉(zhuǎn)染細(xì)胞(7721)克隆形成情況
對cDNA克隆采用雙脫氧終止法，在ABI377 DNA自動(dòng)測序儀上測定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，確定為新基因克隆，進(jìn)行另一端測序，仍未獲得全長cDNA序列，設(shè)計(jì)引物，再次進(jìn)行測序，直到獲得全長序列(SEQ ID NO1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31)。
實(shí)施例2從胎盤cDNA中PCR獲得全長基因取3、6、10月齡的胎盤組織，用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說明書提取總RNA，用mRNA提純試劑盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptII(GIBCO BRL)，反轉(zhuǎn)錄酶在42℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得胎盤cDNA。利用各個(gè)基因的轉(zhuǎn)異引物(如下表所示)，按97℃3′1個(gè)循環(huán)。94℃30″，60℃30″，72℃1′，35個(gè)循環(huán)，72℃10′1個(gè)循環(huán)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得含有完整開放閱讀框序列的各蛋白基因的擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測序驗(yàn)證，與實(shí)施例1測得的序列相符，隨后用常規(guī)技術(shù)將擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，獲得重組蛋白(SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32)。
基因特異引物
實(shí)施例3cDNA克隆序列分析1.PP9284A核苷酸序列(SEQ ID NO1)長度23941 GGGACCTCAG ACGTATAGTT TTCTCAGATT TCTGTGCTTT CTGGGGCTGG GCTACTAGTG61 GAAGAAAGCA GTCTATTCTG TCTTCTCCCA AATCTCCCAG ATGCCCAGTC TGTTGAAGGA121 GGAGCAGAAC CAGGGGGCCT TTCCCGCTGA GGCCCGACCT GTGTCTCCTT CAAATGACAC181 GCGGGACTCA GGGCCTTCCC ATGACCATGG GGCCCAGGGG GCGTCACCTG GCCCAGGGCC241 CAGTGCTAGA AACAGATGAC CCCAGGAGGA GGAGGCAGGG CAGGAGGGAA GCTGGCAGGG301 CTGGGATGGT CAGCCAGGCT GAGGGGCGGA CTCGCACCAG GATGGAGCTA GGAAATGATC361 CAGGTGTGTT TGGCGGCTGC AGGTGGGTCC GCATGGCTGT GCAGGGAGGG AAGGGCTGCG421 TGGCAGGAGA GCAGCCGGGG GAGGCCCAGA CTCTGCTGAA GAGATGCCTG TTGTGCCGGC481 CTCCACATCC GCTGCCCGCT CCTTCCGGAG CTCCTGCCCC GCCATGCTCA GCCTGACTCT541 GACCAACACG TTGGAGAGAA GAATGATCCC TTTGTGCTAT TAAGCTTGCT TATTTGGTTT601 CTAAGTGCTT CATGCGAACC TAGAGGAAAA AATTATTTTC CACCTTTGTT TGTCTTAAGA661 AAATAACACA CTTTTTTTTT TCCTATTTGA ACAGGCAGAC GGCTAATCCA CATGGTCTTC721 GTCCTTGACG TCGTTTTACA AGAAAACAAT GGGGCTGGTT TTGCTTCCCC GTGCATGATT781 TACTCTTAGA GATGATTCAG AGGTCACTTC ATTTTTATTA 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SGAPAPPCSAC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO3) 克隆號(hào)PP9284起始編碼子174 ATG 終止編碼子534 TGA 蛋白質(zhì)分子量12778.12(注(1)給出的是起始和終止編碼子第一個(gè)核苷酸的位置，(2)分子量單位是道爾頓)1 GG GAC CTC AGA CGT ATA GTT TTC TCA GAT TTC TGT GCT TTC TGG GGC4748 TGG GCT ACT AGT GGA AGA AAG CAG TCT ATT CTG TCT TCT CCC AAA TCT9596 CCC AGA TGC CCA GTC TGT TGA AGG AGG AGC AGA ACC AGG GGG CCT TTC 143144 CCG CTG AGG CCC GAC CTG TGT CTC CTT CAA ATG ACA CGC GGG ACT CAG 1911 Met Thr Arg Gly Thr Gln 6192 GGC CTT CCC ATG ACC ATG GGG CCC AGG GGG CGT CAC CTG GCC CAG GGC 2397 Gly Leu Pro Met Thr Met Gly Pro Arg Gly Arg His Leu Ala Gln Gly 22240 CCA GTG CTA GAA ACA GAT GAC CCC AGG AGG AGG AGG CAG GGC AGG AGG 28723 Pro Val Leu Glu Thr Asp Asp Pro Arg Arg Arg Arg Gln Gly Arg Arg 38288 GAA GCT GGC AGG GCT GGG ATG GTC AGC CAG GCT GAG GGG CGG ACT CGC 33539 Glu Ala Gly Arg Ala Gly Met Val Ser Gln Ala Glu Gly Arg Thr Arg 54336 ACC AGG ATG GAG CTA GGA AAT GAT CCA GGT GTG TTT GGC GGC TGC AGG 38355 Thr Arg Met Glu Leu Gly Asn Asp Pro Gly Val Phe Gly Gly Cys Arg 70384 TGG GTC CGC ATG GCT GTG CAG GGA GGG AAG GGC TGC GTG GCA GGA GAG 43171 Trp Val Arg Met Ala Val Gln Gly Gly Lys Gly Cys Val Ala Gly Glu 86432 CAG CCG GGG GAG GCC CAG ACT CTG CTG AAG AGA TGC CTG TTG TGC CGG 47987 Gln Pro Gly Glu Ala Gln Thr Leu Leu Lys Arg Cys Leu Leu Cys Arg 102480 CCT CCA CAT CCG CTG CCC GCT CCT TCC GGA GCT CCT GCC CCG CCA TGC 527103 Pro Pro His Pro Leu Pro Ala Pro Ser Gly Ala Pro Ala Pro Pro Cys 118528 TCA GCC TGA CTC TGA CCA ACA CGT TGG AGA GAA GAA TGA TCC CTT TGT 575119 Ser Ala *** 121576 GCT ATT AAG CTT GCT TAT TTG GTT TCT AAG TGC TTC ATG CGA ACC TAG 623624 AGG AAA AAA TTA TTT TCC ACC TTT GTT TGT CTT AAG AAA ATA ACA CAC 671672 TTT TTT TTT TCC TAT TTG AAC AGG CAG ACG GCT AAT CCA CAT GGT CTT 719720 CGT CCT TGA CGT CGT TTT ACA AGA AAA CAA TGG GGC TGG TTT TGC TTC 767768 CCC GTG CAT GAT TTA CTC TTA GAG ATG ATT CAG AGG TCA CTT CAT TTT 815816 TAT TAA ACA GTG AAC TTG TCT GGC TTT GGC ACT CTC TGC CAT TCT GTG 863864 CAG GCT GCA GTG GCT CCC CTG CCC AGC CTG CTC TCC CTA ACC CCT TGT 911912 CCG CAA GGG GTG ATG GCC GGC TGG TTG TGG GCA CTG GCG GTC AAG TGT 959960 GGA GGA GAG GGG TGG AGG CTG CCC CAT TGA GAT CTT CCT GCT GAG TCC10071008 TTT CCA GGG GCC AAT TTT GGA TGA GCA TGG AGC TGT CAC CTC TCA GCT10551056 GCT GGA TGA CTT GAG ATG AAA AAG GAG AGA CAT GGA AAG GGA GAC AGC11031104 CAG GTG GCA CCT GCA GCG GCT GCC CTC TGG GGC CAC TTG GTA GTG TCC11511152 CCA GCC TAC CTC TCC ACA AGG GGA TTT TGC TGA TGG GTT CTT AGA GCC11991200 TTA GCA GCC CTG GAT GGT GGC CAG AAA TAA AGG GAC CAG CCC TTC ATG12471248 GGT GGT GAC GTG GTA GTC ACT TGT AAG GGG AAC AGA AAC ATT TTT GTT12951296 CTT ATG GGG TGA GAA TAT AGA CAG TGC CCT TGG TGC GAG GGA AGC AAT13431344 TGA AAA GGA ACT TGC CCT GAG CAC TCC TGG TGC AGG TCT CCA CCT GCA13911392 CAT TGG GTG GGG CTC CTG GGA GGG AGA CTC AGC CTT CCT CCT CAT CCT14391440 CCC TGA CCC TGC TCC TAG CAC CCT GGA GAG TGC ACA TGC CCC TTG GTC14871488 CTG GCA GGG CGC CAA GTC TGG CAC CAT GTT GGC CTC TTC AGG CCT GCT15351536 AGT CAC TGG AAA TTG AGG TCC ATG GGG GAA ATC AAG GAT GCT CAG TTT15831584 AAG GTA CAC TGT TTC CAT GTT ATG TTT CTA CAC ATT GCT ACC TCA GTG16311632 CTC CTG GAA ACT TAG CTT TTG ATG TCT CCA AGT AGT CCA CCT TCA TTT16791680 AAC TCT TTG AAA CTG TAT CAT CTT TGC CAA GTA AGA GTG GTG GCC TAT17271728 TTC AGC TGC TTT GAC AAA ATG ACT GGC TCC TGA CTT AAC GTT CTA TAA17751776 ATG AAT GTG CTG AAG CAA AGT GCC CAT GGT GGC GGC GAA GAA GAG AAA18231824 GAT GTG TTT TGT TTT GGA CTC TCC GTG GTC CCT TCC AAT GCT GTG GGT18711872 TTC CAA CCA GGG GAA GGG TCC CTT TTG CAT TGC CAA GTG CCA TAA CCA19191920 TGA GCA CTA CTC TAC CAT GGT TCT GCC TCC TGG CCA AGC AGG CTG GTT19671968 TGC AAG AAT GAA ATG AAT GAT TCT ACA GCT AGG ACT TAA CCT TGA AAT20152016 GGA AAG TCT TGC AAT CCC ATT TGC AGG ATC CGT CTG TGC ACA TGC CTC20632064 TGT AGA GAG CAG CAT TCC CAG GGA CCT TGG AAA CAG TTG GCA CTG TAA21112112 GGT GCT TGC TCC CCA AGA CAC ATC CTA AAA GGT GTT GTA ATG GTG AAA21592160 ACG TCT TCC TTC TTT ATT GCC CCT TCT TAT TTA TGT GAA CAA CTG TTT 22072208 GTC TTT TTT TGT ATC TTT TTT AAA CTG TAA AGT TCA ATT GTG AAA ATG 22552256 AAT ATC ATG CAA ATA AAT TAT GCG ATT TTT TTT TCA AAA AAA AAA AAA 23032304 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 23512352 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 23942. 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CATTCACTGG TTCCAGGGAT TAAGGAATGA2581 ACCTCTTTTG TTGGGGAAGG GTGGCATTCT GCTGACCACA GCACTCCAAC CAAAAGCCAA2641 AAACCAAAGC AAGACTTACT AACGCATATC AAATAAATTA AAGGTACAAA ATCGTGAATC2701 TCAGTTATCT TAAATATTCC AATACTATTT ACAAAATTAT TCAAATTCTC ACGCCTTCCA2761 ACTCAAAATT AGCAATCTAA AGTAATTTCC ATATCCTAGA TGGAAACCCT CATGCTAAAC2821 TGTCTGATTA TGCATGGTTC TAAATGGTTT CAGTGGCAAA TACATAACAT TGTACTACTG288 ATTAAACTGA ACTTAAAAGC ATCAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAB核苷酸序列(SEQ ID NO5)長度2931MVLQSQNPAV LKLRGPGPGL AAAAGTPPYG HPCMSCVSLR RDMGNSGATS PRTAGPEQRA61LAHHQPLLPV PQEFILCCLA RDPARRPSAH SLLFHRVLFE VHSLKLLAAH CFIQHQYLMP121ENVVEEKTKA MDLHAVLAEL PRPRRPPLQW RYSEVSFMEL DKFLEDVRNG IYPLMNFAAT181RPLGLPRVLA PPPEEVQKAK TPTPEPFDSE TRKVIQMQCN LERSEDKARW HLTLLLVLED241RLHRQLTYDL LPTDSAQDLA SELVHYGFLH EDDRMKLAAF LESTFLKYRG TQAC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO6) 克隆號(hào)PP9320起始編碼子105 ATG 終止編碼子984 TGA 蛋白質(zhì)分子量33139.571 GC CGA GCT GAG CCG ATC AAA AGG CCA TGG GTA GGA GGC TTG CAG GTG 4748 TGA CTT TAG GAT CAT GGC TTC TCC CCA CGA TTT TTT GGG GGT CGA 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CAG TAC CTC ATG CCT GAG AAT GTG GTG GAG 479110 His Cys Phe Ile Gln His Gln Tyr Leu Met Pro Glu Asn Val Val Glu 125480 GAG AAG ACC AAG GCC ATG GAC CTG CAC GCG GTC TTG GCG GAG CTT CCC 527126 Glu Lys Thr Lys Ala Met Asp Leu His Ala Val Leu Ala Glu Leu Pro 141528 CGG CCC CGC AGG CCC CCG CTG CAG TGG CGG TAC TCG GAA GTC TCC TTC 575142 Arg Pro Arg Arg Pro Pro Leu Gln Trp Arg Tyr Ser Glu Val Ser Phe 157576 ATG GAG CTG GAC AAA TTC CTG GAG GAT GTC AGG AAT GGA ATC TAC CCA 623158 Met Glu Leu Asp Lys Phe Leu Glu Asp Val Arg Asn Gly Ile Tyr Pro 173624 CTG ATG AAC TTT GCA GCC ACT CGA CCC CTG GGG CTG CCC CGT GTG CTG 671174 Leu Met Asn Phe Ala Ala Thr Arg Pro Leu Gly Leu Pro Arg Val Leu 189672 GCC CCA CCC CCG GAG GAG GTC CAA AAG GCC AAG ACC CCG ACG CCA GAG 719190 Ala Pro Pro Pro Glu Glu Val Gln Lys Ala Lys Thr Pro Thr Pro Glu 205720 CCC TTT GAC TCT GAG ACC AGA AAG GTC ATC CAG ATG CAG TGC AAC CTG 767206 Pro Phe Asp Ser Glu Thr Arg Lys Val Ile Gln Met Gln Cys Asn Leu 221768 GAG AGA AGC GAG GAC AAG GCG 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Tyr Trp Pro Asp Asp Leu 1591009 GCC CAC GGC AGC AGA GGA GGA GCC AGG GAG GCA CAG GAC AGA AGG AAT1056160 Ala His Gly Ser Arg Gly Gly Ala Arg Glu Ala Gln Asp Arg Arg Asn 1751057 TGA GAA GGG GGC GGG GCT CCC TGG CTG GGC TTC CGG TGT GGC CGG TAG1104176 *** 1761105 GAA GTG GGG GCC AGG AGA GCA GCG GGC ACT CCT TCC TGG GCA GGG TGG11521153 GGC AGG ATG CAG TGA GCC AGC CCC AGG GCC AGA GGA GTT GGG GTC ATC12001201 TGT TAC CTT GAC ACC CTC TGC ACA CAG CAT AGC CCT CTC TCT CTC CAG12481249 GGC TGT TGG TTC TTT CTC CTG ACT CCT GTG GTT TTG CTA ATG GCA CTT12961297 TAC AGA CTC CAT GGA GAT GTC AGG TGG ACC ATC TTC TAG GGC CCA GCA13441345 GGA GTA GGG AAT GTG CCA ACA GAC TGC CCA GGT TGC CGT GGC CTT CCC 13921393 CAC CCC CCA GAT CTC CTG AGT CAT CAT GCT GTG CTA ATG AAA GGG ATC 14401441 ATA TCA TCC TCT CTG GGG ATG GTG GGT GGG GGG TGT CAA TAT CCT GGA 14881489 GCT CCC TTA CCC CAA CTC AAT GAC TTG GGG GTA AAG TTC TCT TCC TTT 15361537 TGT TGC CTA CCT CTT CCT CCA CTC ATT TGG GTT CAG AAT AAA CAT GCC 15841585 CTG AAG TTA AAG 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CTG CAC 576138 Ala Lys Arg His Leu Thr Thr Ser Ile Thr Thr Leu Asn His Leu His 153577 ATG CTG GCA GGA GGT GTC GAC TCC CTC GAA GCC ATG ACC AGG CGA AGA 624154 Met Leu Ala Gly Gly Val Asp Ser Leu Glu Ala Met Thr Arg Arg Arg 169625 CAA TAC GGA GAA GTT GCT AAT CTC CTT CAG GGT GTG ATG AAT GTC CTG 672170 Gln Tyr Gly Glu Val Ala Asn Leu Leu Gln Gly Val Met Asn Val Leu 185673 GAG CAC TTC CAC AAG TAT ATG GGG ATT CCG CAG ATC CGG CAG CTT TCC 720186 Glu His Phe His Lys Tyr Met Gly Ile Pro Gln Ile Arg Gln Leu Ser 201721 GAA AGA GTG AAG GCT GCA CAG ACT GAG TTA GGA CAG CAA ATC CTG GCA 768202 Glu Arg Val Lys Ala Ala Gln Thr Glu Leu Gly Gln Gln Ile Leu Ala 217769 GAT TTT GAA GAA GCG TTT CCT TCC CAG GGC ACC AAG AGA CCA GGA GGA 816218 Asp Phe Glu Glu Ala Phe Pro Ser Gln Gly Thr Lys Arg Pro Gly Gly 233817 CCC AGC AAT GTT CTA GGA GAT GCA TGT CTG GTT GCT AAT ATT CTA GAT 864234 Pro Ser Asn Val Leu Arg Asp Ala Cys Leu Val Ala Asn Ile Leu Asp 249865 CCC AGG ATC AAA CAG GAA ATC ATC AAA AAG TTT ATT AAA CAG CAT 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TCT1248362 Phe Ser Gly Cys Thr Leu Thr Asp Gly Thr Leu Lys Lys Leu Glu Ser 3771249 CCA CCC CCA TCT ACC AAT CCC TTC CTG GAA GAT GAG CCA ACA CCA GAG1296378 Pro Pro Pro Ser Thr Asn Pro Phe Leu Glu Asp Glu Pro Thr Pro Glu 3931297 ATG GAG GAA CTG GCA ACG GAG AAA GGA GAT TTA GAT CAA CCA AAG AAG1344394 Met Glu Glu Leu Ala Thr Glu Lys Gly Asp Leu Asp Gln Pro Lys Lys 4091345 CCT AAA GCC CCA GAC AAT CCA TTT CAT GGC ATT GTT TCC AAG TGT TTT1392410 Pro Lys Ala Pro Asp Asn Pro Phe His Gly Ile Val Ser Lys Cys Phe 4251393 GAG CCT CAT CTC TAC GTG TAT ATC GAA TCC CAA GAC AAG AAC CTC GGA1440426 Glu Pro His Leu Tyr Val Tyr Ile Glu Ser Gln Asp Lys Asn Leu Gly 4411441 GAG CTG ATA GAT CGG TTT GTG GCT GAT TTC AAA GCC CAG GGG CCA CCT1488442 Glu Leu Ile Asp Arg Phe Val Ala Asp Phe Lys Ala Gln Gly Pro Pro 4571489 AAG CCC AAC ACT GAT GAA GGG GGT GCC GTG CTC CCC AGC TGC GCC GAC1536458 Lys Pro Asn Thr Asp Glu Gly Gly Ala Val Leu Pro Ser Cys Ala Asp 4731537 CTC TTT GTC TAC TAC AAG AAG TGC ATG GTG CAA TGC TCT CAG CTC 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CAG19201921 TAT TCA GCT GCT GGT TCA GGA TCT GGA TGC TGC CTG TGA TCC TGC CCT19681969 GAC TGC CAT GAG CAA GAT GCA GTG GCA GAA CGT GGA GCA CGT TGG TGA20162017 CCA GAG CCC CTA CGT CAC CTC TGT CAT TCT GCA CAT CAA GCA GAA CGT20642065 CCC CAT CAT CCG TGA CAA CCT GGC CAA CAT GGC AAA ATC CCA TCT CTA21122113 CTA AAA ATA CAA AAA AAA AAA AAA AAA A 21406.PP13671A核苷酸序列(SEQ ID NO16)長度29861 GGGAGGACCC GCGACACAGC TCGGGATCCG CGCGCGCTGG GCCTTCGGCG CCGCTCGTGG61 GGTTCGGGAG GCCGGGACCC TGCCCGGGAG ATGTGGACGC CGGGCGGACC CCCGGGGTCC121 GCGGGCTGGG ACCGCCGTAG GTTGGGCGCG AGGTTGCGCG CGGCGTTCGC GGGGCTGCAG181 GAGCTGCAGG GGCTGCGAGC CACGCAGCAG GAGCGGGTAC GGGGCGCCCT GGCCCTGCAG241 CCCCCGCCCG CGCCCGCCGC GCCCTGCGGC CCCCACGGCC TCCACGGCCC CGAGCAGCAG301 CTGGAGGCGG CGCTGGCCGC GCTGCAGGAG CAGCTGTCCC GGCTGAGACA ACAGGACATC361 GGCCTGAAGA CCCACCTGGA CCAGCTGGAC CTGCAGATTA GCAAGCTGCA GCTCGATGTG421 GGCACAGCCT CAGGGGAGGC CCTCGACAGC GACAGCAGGC CCAGCTCAGG CTTTTACGAG481 ATGAGCGACG GTGGATCCTG CTCCCTGTCC ACGTCCTGTG CCTCCGTCTG CAGTGACCAC541 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TCA GTG GCC AGG AGG AAG CAT CGC CGC TGG CAG1919187 Ala Ser Leu Leu Thr Ser Val Ala Arg Arg Lys His Arg Arg Trp Gln 2021920 TCC ACC GTG GAG ATC TCG GCC CGG GCC CGC CTG GCC AGC TGT CCT GAG1967203 Ser Thr Val Glu Ile Ser Ala Arg Ala Arg Leu Ala Ser Cys Pro Glu 2181968 TCT AAC CTG GGG CCC CCC AGG CCC GTG GCC AGG AGA GCA GGT GGC CCA2015219 Ser Asn Leu Gly Pro Pro Arg Pro Val Ala Arg Arg Ala Gly Gly Pro 2342016 CTG GCC CGG GGC CGT CCC TCA CTG GTC CGC CAG GAC GCC TAC ACC AGG2063235 Leu Ala Arg Gly Arg Pro Ser Leu Val Arg Gln Asp Ala Tyr Thr Arg 2502064 AGC GAC TCA GAG CCC TCC AAG CAC TCG GCC GAG TGT GAC CCG CGG TTC2111251 Ser Asp Ser Glu Pro Ser Lys His Ser Ala Glu Cys Asp Pro Arg Phe 2662112 CCG TCA GTC ATC CCG GAG ACC AGC GAG GGA GAG TCC AGT GAC CAC ACC2159267 Pro Ser Val Ile Pro Glu Thr Ser Glu Gly Glu Ser Ser Asp His Thr 2822160 ACC AAC CGA TTC GGA GAC CGT GAG TCC AGC AGC AGC GAC GAG GAG GGC2207283 Thr Asn Arg Phe Gly Asp Arg Glu Ser Ser Ser Ser Asp Glu Glu Gly 2982208 GGC GCC CAG AGC AGG 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AAGGTACCTG CCGTCGGCAG ATTTGAGCTT TCTTCTTGGA CACCTAATAC CCAGAGTCCT481 CCAGGCTCCG GTAGATTGCA AATGACCTGC TTTCTTTCTG TTCCCGGGCG GCATCGGACC541 CGTCGGAGAG TAAATCCCAA GTAAGGTACC TGCCGTTGGC AGATTTGAGC TTTCTTCTTG601 GACACCTAAT ACCCACAGTC CTCCAGGCTC CGGTAGATTG CAAATGACCT GCTTTCTTTC661 TGTTCCCGGG TGGCATCGAC CCGTCGGAGA GTAAATCCCA AGTAAGGTAC CTGCCGTTGG721 CAGATTTGAG CTTTCTTCTT GGACACCTAA TACCCACAGT CCTCCAGTAA ATCCCAAGCA781 AGGTACCTGC CGTCAGCAGA TTTGAGCTTT CTTCTTGGAC ACCTAATACC CACAGTCCTC841 CAGGCTCCGG TAGATTGCAA ATGACCTGCT TTCTTTCTGT TCCCGGGCTG CGTTCGGACC901 CCTGTCGGAT AGTAACTCCC AAGTAAGGTA CCTGCCGTCG GCAGATTGGA GCTTTCTTCT961 TGGAGACCTA ATACCCACAG TCCTCCAGAA AAACAAACAA AGACATGGAT TTACTGTGCA1021 TATTAGCAGA TCCATACTGG AAAATGCATG GAGGTTTCAT ATACACCACT TACAGTTTTC1081 AGCTCCTCAG TAGTGACAAA GCCATACCCA TCATTGTCGA TTCGATCAAC AATCTTCCCT1141 AGCCTCTCCT TGCTCTCGTC CGGGGTGAGC TCGTCGAAGT TCTTGGAGTC CTCCTTGCCC1201 AGGAAGGCCT CGTGGTCGTA CTGGAAGCTC TGGTTGTCCT CAGGGGGCCG CTCGCCCAGC1261 TCCGAGTCGG GCCGCACCAC 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TTC CTA AAA TAG AGC TCT 288289 CAA AAC CTG GCT GTT TTC CTT CAG AGC ACT GGC CTC CAA TTG CTC CGG 336337 TAG ATT GCA AAT GAC CTG CTT TCT TTC TGT TCC CGG GCG TTT GGA CCC 384385 CTG TCT TGG ACC GCT GTC GGA TAG TAA ATC CCA AGT AAG GTA CCT GCC 432433 GTC GGC AGA TTT GAG CTT TCT TCT TGG ACA CCT AAT ACC CAG AGT CCT 480481 CCA GGC TCC GGT AGA TTG CAA ATG ACC TCC TTT CTT TCT GTT CCC GGG 528529 CGG CAT CGG ACC CGT CGG AGA GTA AAT CCC AAG TAA GGT ACC TGC CGT 576577 TGG CAG ATT TGA GCT TTC TTC TTG GAC ACC TAA TAC CCA CAG TCC TCC 624625 AGG CTC CGG TAG ATT CCA AAT GAC CTG CTT TCT TTC TGT TCC CGG GTG 672573 GCA TCG ACC CGT CGG AGA GTA AAT CCC AAG TAA GGT ACC TGC CGT TGG 720721 CAG ATT TGA GCT TTC TTC TTG GAC ACC TAA TAC CCA CAG TCC TCC AGT 768769 AAA TCC CAA GCA AGG TAC CTG CCG TCA GCA GAT TTG AGC TTT CTT CTT 816817 GGA CAC CTA ATA CCC ACA GTC CTC CAG GCT CCG GTA GAT TGC AAA TGA 864865 CCT GCT TTC TTT CTG TTC CCG GGC TGC GTT CGG ACC CCT GTC GGA TAG 912913 TAA CTC CCA AGT AAG GTA CCT CCC GTC GGC AGA TTG GAG CTT TCT TCT 960961 TGG AGA CCT AAT ACC CAC AGT CCT CCA GAA AAA CAA ACA AAG ACA TGG10081009 ATT TAC TGT GCA TAT TAG CAG ATC CAT ACT GGA AAA TGC ATG GAG GTT10561 Met Glu Val 31057 TCA TAT ACA CCA CTT ACA GTT TTC AGC TCC TCA GTA GTG ACA AAG CCA11044 Ser Tyr Thr Pro Leu Thr Val Phe Ser Ser Ser Val Val Thr Lys Pro 191105 TAC CCA TCA TTG TCG ATT CGA TCA ACA ATC TTC CCT AGC CTC TCC TTG115220 Tyr Pro Ser Leu Ser Ile Arg Ser Thr Ile Phe Pro Ser Leu Ser Leu 351153 CTC TCG TCC GGG GTG AGC TCG TCG AAG TTC TTG GAG TCC TCC TTG CCC120036 Leu Ser Ser Gly Val Ser Ser Ser Lys Phe Leu Glu Ser Ser Leu Pro 511201 AGG AAG GCC TCG TGG TCG TAC TGG AAG CTC TGG TTG TCC TCA GGG GGC124852 Arg Lys Ala Ser Trp Ser Tyr Trp Lys Leu Trp Leu Ser Ser Gly Gly 671249 CGC TCG CCC AGC TCC GAG TCG GGC CGC ACC ACG CCC TCT TTG CGC ACC129668 Arg Ser Pro Ser Ser Glu Ser Gly Arg Thr Thr Arg Ser Leu Arg Thr 831297 GTG GGC TTG GCC CGC AGA ACC CGC GGC GCC AGC ACC AGC GCC AGC AGC134484 Val Gly Leu Ala Arg Arg Thr Arg Gly Ala Ser Thr Ser Ala Ser Ser 991345 AGC CCC AGG GCT AAC CCC AGG CGG CCA CCG CGC GCC ATC GTC CCG AGG1392100 Ser Pro Arg Ala Asn Pro Arg Arg Pro Pro Arg Ala Ile Val Pro Arg 1151393 AGA GGG CGG CCG GGA GGG AGA CGC TGA GCG AGC GAC AAC AGC GGC AGC1440116 Arg Gly Arg Pro Gly Gly Arg Arg *** 1241441 TCG GGA ATG GGG GCT CGG AGC GCG GCG GCC AAG TTT TAT GTT ATG TAT14881489 ATT TTA CAA GTA AAA AAA TTT TTT CAC CTC AGC CTG AAA AAA AAA AAA15361537 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA15818.PP14328A核苷酸序列(SEQ ID NO22)長度12901 GCGCGGGCGT TCCTGGTTCG CGCTCCCGCC CCCTCCGCCC CGCCGACTCG CCGCTTCCTC61 CGGAGCCCCA GCGTCCCGAA CCAGGGACTG CATTTCCCGG CAGGCGCCGC GGCCCGCGGC121 CAATGAGGGG CTGAGGATTT GGCGGCGGCG GCGCCCCGAG AGTCGGGGTG GGGGGGCTTT181 GTGCGCGCGG GCGGCGGGAG AGGCGGCGGC GGCGGCCAGC ACGGAGGCGG AGGCCGAGGG241GGCTGTGCAC AGGTCGCCGC GGAGAGGCGT GCGAATTCCG AGCCGAGCGC CGAGGACCGT301GCTACCCAGG CCGGGCTGCC AGCCGCAGGC TCCTCTCTGG CAGCAGCGGC GGCGCGGCGA361CCCCCGTCCC TCGGCCTCCC CTTCCCATCC CACCTCCCGA GCCTTCCTCT TCCCGCAGCA421CGCCCGGCCC GGCCCGGCCG TGGCCCTCCT CAGTGCCGGC CGCCATGGCA GAGGCGTCCG481GCGCGGGGAA AATCTAGCCC GGGGATTTCA TGCGGCCTAG CTCGGTTCCG CCTCCTCCTC541GCGCGGCCCC AGCGGCTGCC CGCACCCCAG CCCCACTCCG GGCCTCCGTG TCTCTCCTGT601GATCGCACTG ACACGGCCGG GGGGTTAGAA TGGAACAAAC TGAAGGCCCG ATGAGAGAAA661GGGAAAGTTA AGGATGCTGG AGCAGAACAA TGGATTTCTC TTTCTCTTTC ATGCAAGGGA721TCATGGGAAA CACAATTCAG CAACCACCTC AACTCATTGA CTCCGCCAAC ATCCGTCAGG781AGGATGCCTT TGATAACAAC AGTGACATTG CTGAAGATGG TGGCCAGACA CCATATGAAG841CTACTTTGCA GCAAGGCTTT CAGTACCCAG CTACAACAGA AGATCTTCCT CCACTCACAA901ATGGGTATCC ATCATCAATC AGTGTGTATG AAACTCAAAC CAAATACCAG TCATATAATC961AGTATCCTAA TGGGTCAGCC AATGGCTTTG GTGCAGTTAG AAACTTTAGC CCCACTGACT1021ATTATCATTC AGAAATTCCA AACACAAGAC CACATGAAAT TCTGGAAAAA CCTTCCCCTC1081CACAGCCACC ACCTCCTCCT TCGGTACCAC AAACTGTGAT TCCAAAGAAG ACTGGCTCAC1141CTGAAATTAA ACTAAAAATA ACCAAAACTA TCCAGAATGG CAGGGAATTG TTTGAGTCTT1201CCCTTTGTGG AGACCTTTTA AATGAAGTAC AGGCAAGTGA GCACACGAAA TCAAAGCATG1261AAAGCAGAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO23)長度1111 MPLITTVTLL KMVARHHMKL LCSKAFSTQL QQKIFLHSQM GIHHQSVCMK LKPNTSHIIS61 ILMGQPMALV QLETLAPLTI IIQKFQTQDH MKFWKNLPLH SHHLLLRYHK LC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO24) 克隆號(hào)PP14328起始編碼子784 ATG 終止編碼子1117 TGA 蛋白質(zhì)分子量12935.101 GCG CGG GCG TTC CTG GTT CGC GCT CCC GCC CCC TCC GCC CCG CCG ACT 4849 CGC CGC TTC CTC CGG ACC CCC AGC GTC CCG AAC CAG GGA CTG CAT TTC 9697 CCG GCA GGC GCC GCG GCC CGC GGC CAA TGA GGG GCT GAG GAT TTG GCG 144145 GCG GCG GCG CCC CGA GAG TCG GGG TGG GGG GGC TTT GTG CGC GGC GGC 192193 GGC GGG AGA GGC GGC GGC GGC GGC CAG CAC GGA GGC GGA GGC CGA GGG 240241 GGC TGT GCA CAG GTC GCC GCG GAG AGG CGT GCG AAT TCC GAG CCG AGC 288289 GCC GAG GAC CGT GCT ACC CAG GCC GGG CTG CCA GCC GCA GGC TCC TCT 336337 CTG GCA GCA GCG GCG GCG CGG CGA CCC CCG TCC CTC GGC CTC CCC TTC 384385 CCA TCC CAC CTC CCG AGC CTT CCT CTT CCC GCA GCA CGC CCG GCC CGG 432433 CCC GGC CGT GGC CCT CCT CAG TGC CGG CCG CCA TGG CAG AGG CGT CCG 480481 GCG CGG GGA AAA TCT ACC CCG GGG ATT TCA TGC GGC CTA GCT CGG TTC 528529 CGC CTC CTC CTC GCG CGG CCC CAG CGG CTG CCC GCA CCC CAG CCC CAC 576577 TCC GGG CCT CCG TGT CTC TCC TGT GAT CGC ACT GAC ACG GCC GGG GGG 624625 TTA GAA TGG AAC AAA CTG AAG GCC CGA TGA GAG AAA GGG AAA GTT AAG 672673 GAT GCT GGA GCA GAA CAA TGG ATT TCT CTT TCT CTT TCA TGC AAG GGA 720721 TCA TGG GAA ACA CAA TTC AGC AAC CAC CTC AAC TCA TTG ACT CCG CCA 768769 ACA TCC GTC AGG AGG ATG CCT TTG ATA ACA ACA GTG ACA TTG CTG AAG 8161 Met Pro Leu Ile Thr Thr Val Thr Leu Leu Lys 11817 ATG GTG GCC AGA CAC CAT ATG AAG CTA CTT TGC AGC AAG GCT TTC AGT 86412 Met Val Ala Arg His His Met Lys Leu Leu Cys Ser Lys Ala Phe Ser 27865 ACC CAG CTA CAA CAG AAG ATC TTC CTC CAC TCA CAA ATG GGT ATC CAT 91228 Thr Gln Leu Gln Gln Lys Ile Phe Leu His Ser Gln Met Gly Ile His 43913 CAT CAA TCA GTG TGT ATG AAA CTC AAA CCA AAT ACC AGT CAT ATA ATC 96044 His Gln Ser Val Cys Met Lys Leu Lys Pro Asn Thr Ser His Ile Ile 59961 AGT ATC CTA ATG GGT CAG CCA ATG GCT TTG GTG CAG TTA GAA ACT TTA100860 Ser Ile Leu Met Gly Gln Pro Met Ala Leu Val Gln Leu Glu Thr Leu 751009 GCC CCA CTG ACT ATT ATC ATT CAG AAA TTC CAA ACA CAA GAC CAC ATG105676 Ala Pro Leu Thr Ile Ile Ile Gln Lys Phe Gln Thr Gln Asp His Met 911057 AAA TTC TGG AAA AAC CTT CCC CTC CAC AGC CAC CAC CTC CTC CTT CGG110492 Lys Phe Trp Lys Asn Leu Pro Leu His Ser His His Leu Leu Leu Arg 1071105 TAC CAC AAA CTG TGA TTC CAA AGA AGA CTG GCT CAC CTG AAA TTA AAC1152108 Tyr His Lys Leu *** 1121153 TAA AAA TAA CCA AAA CTA TCC AGA ATG GCA GGG AAT TGT TTG AGT CTT12001201 CCC TTT GTG GAG ACC TTT TAA ATG AAG TAC AGG CAA GTG AGC ACA CGA12481249 AAT CAA AGC ATG AAA GCA GAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA12909.PP14450A核苷酸序列(SEQ ID NO25)長度18161 GAGACGGAGT CTCACTCTGT CGCCCAGGCT GGAGTACAAT GGCATGATCT CGGCTCACTG61 CAACCTACAC CTCCCAGGTT CAAGCGATTC TCTTGCCTCA GCCTCCCAGC TCCTGCTCGC121 CGGACGGCTC CCAGGGAGAG CAGACGCGCC AGACGCGCCA CCCTCGGGGC GCCGACGGTC181 ACGGAGCATG GGGTCGGCCT TTGAGCGGGT AGTCCGGAGA GTGGTCCAGG AGCTGGACCA241 TGGTGGGGAG TTCATCCCTG TGACCAGCCT 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終止編碼子1320 TGA 蛋白質(zhì)分子量12272.401 GA GAC GGA GTC TCA CTC TGT CGC CCA GGC TGG AGT ACA ATG GCA TGA4748TCT CGG CTC ACT GCA ACC TAC ACC TCC CAG GTT CAA GCG ATT CTC TTG9596CCT CAG CCT CCC AGC TCC TGC TCG CCG GAC GGC TCC CAG GGA GAG CAG 143144 ACG CGC CAG ACG CGC CAC CCT CGG GGC GCC GAC GGT CAC GGA GCA TGG 191192 GGT CGG CCT TTG AGC GGG TAG TCC GGA GAG TGG TCC AGG AGC TGG ACC 239240 ATG GTG GGG AGT TCA TCC CTG TGA CCA GCC TGC AGA GCT CCA CTG GCT 287288 TCC AGC CCT ACT GCC TGG TGG TTA GGA AGC CCT CAA GCT CAT GGT TCT 335336 GGA AAC CCC GTT ATA AGT GTG TCA ACC TGT CTA TCA AGG ACA TCC TGG 383384 AGC CGG ATG CCG CGG AAC CAG ACG TGC AGC GTG GCA GGA GCT TCC ACT 431432 TCT ACG ATG CCA TGG ATG GGC AGA TAC AGG GCA GCG TGG AGC TGG CAG 479480 CCC CAG GAC AGG CAA AGA TCG CAG GCG GGG CCG CGG TGT CTG ACA GCT 527528 CCA GCA CCT CAA TGA ATG TGT ACT CGC TGA GTG TGG ACC CTA ACA CCT 575576 GGC AGA CTC TGC TCC ATG AGA GGC ACC TGC GGC AGC CAG AAC ACA AAG 623624 TCC TGC AGC AGC TGC GCA GCC GCG GGG ACA ACG TGT ACG TGG TGA CTG 671672 AGG TGC TGC AGA CAC AGA AGG AGG TGG AAG TCA CGC GCA CCC ACA AGC 719720 GGG AGG GCT CGG GCC GGT TTT CCC TGC CCG GAG CCA CGT GCT TGC AGG 767768 GTG AGG GCC AGG GCC ATC TGA GCC AGA AGA AGA CGG TCA CCA TCC CCT 815816 CAG GCA GCA CCC TCG CAT TCC GGG TGG CCC AGC TGG TTA TTG ACT CTG 863864 ACT TGG ACG TCC TTC TCT TCC CGG ATA AGA AGC AGA GGA CCT TCC AGC 911912 CAC CCG CGA CAG GCC ACA AGC GTT CCA CGA GCG AAG GCG CCT GGC CAC 959960 AGC TGC CCT CTG GCC TCT CCA TGA TGA GGT GCC TCC ACA ACT TCC TGA10071008 CAG ATG GGG TCC CTG CGG AGG GGG CGT TCA CTG AAG ACT TCC AGG GCC10551 Met Gly Ser Leu Arg Arg Gly Arg Ser Leu Lys Thr Ser Arg Ala 151056 TAC GGG CAG AGG TGG AGA CCA TCT CCA AGG AAC TGG AGC TTT TGG ACA110316 Tyr Gly Gln Arg Trp Arg Pro Ser Pro Arg Asn Trp Ser Phe Trp Thr 311104 GAG AGC TGT GCC AGC TGC TGC TGG AGG GCC TGG AGG GGG TGC TGC GGG115132 Glu Ser Cys Ala Ser Cys Cys Trp Arg Ala Trp Arg Gly Cys Cys Gly 471152 ACC AGC TGG CCC TGC GAG CCT TGG AGG AGG CCC TGG AGC AGA GCC AGA119948 Thr Ser Trp Pro Cys Glu Pro Trp Arg Arg Arg Trp Ser Arg Ala Arg 631200 GCC TTG GGC CGG TGG AGC CCC TGG ACG GTC CAG CAG GTG CTG TCC TGG124764 Ala Leu Gly Arg Trp Ser Pro Trp Thr Val Gln Gln Val Leu Ser Trp 791248 AGT GCC TGG TGT TGT CCT CCG GAA TGC TGG TGC CGG AAC TCG CTA TCC129580 Ser Ala Trp Cys Cys Pro Pro Glu Cys Trp Cys Arg Asn Ser Leu Ser 951296 CTG TTG TCT ACC TGC TGG GGG CAC TGA CCA TGC TGA GTG AAA CGC AGC134396 Leu Leu Ser Thr Cys Trp Gly His *** 1041344 ACA ACC TTG CTG GCG GAG GCG CTG GAG TCG CAG ACC CTG TTG GGG CCG13911392 CTC GAG CTG GTG GGC AGC CTC TTG GAG CAG AGT GCC CCG TGG CAG GAG14391440 CGC AGC ACC ATG TCC CTG CCC CCC GGG CTC CTG GGG AAC AGC TGG GGC14871488 GAA GGA GCA CCG GCC TGG GTC TTG CTG GAC GAG TGT GGC CTA GAG CTG15351536 GGG GAG GAC ACT CCC CAC GTG TGC TGG GAG CCG CAG GCC CAG GGC CGC15831584 ATG TGT GCA CTC TAC GCC TCC CTG GCA CTG CTA TCA GGA CTG AGC CAG16311632 GAG CCC CAC TAG CCT GTG CCC GGG CAT GGC CTG GCA GCT CTC CAG CAG16791680 GGC AGA GTG TTT GCC 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ATATCTAGTT ATTCCCAAAC TGTTAAAAAG TTATTCATAC721 TAATGATAAA ATTTTAGCAT ACCATTGTCT TAAACTCTGA CTGAAGGCCT TTTTTAAAAA781 ATTATTTTCA GGGGCCAGGC ACAGTGGCTC ACGCCTGTAA TCCCAGCGTT TTGGGAGGCC841 GAAGCAGGTG GATCGCCTCA GGTCAGGAGT GCGAGACCAG CCTGGCCAAC ATGGTGAAAC901 CCCGTCTCCA CTAAAAATAC AAAAAAATTA GCTAGGTATG GTGGCGGGCA CCTGTAATTC961 CAGCTACTTG GGAGGCTGAG GCAGGAGAAT CATTCGACCC AGGAGTCGGA GGTTGCAGTG1021 AGCCAAGATC ACGCCACTGC ACTCCAGCCT GGGCAACAAG CACAAAACTC CGTCTCAAAA1081 AAAAAATTAT TTTTAGGAGC ATTAGAGAAA ACCCTTGAAA TGTTTCCACT GTAACATTTA1141 CTGGTTTCAT GAACCTCAAA TTGATGGAAA GGTCATGTCA TAGTGAAAGT AAACCTGATT1201 CACTATTGCC TGGTAATGTC AGATATAGTT ATAAATGAAG TCAGTTTCAT TGAAAGTTAA1261 ATGAAGGTTA GGAAAAATAA TGATGCTTAT TTACTAGACA AGAACAAAAT TAATATGGAT1321 TGTTTCATTA GCTGTTTCTT TAAAAAGATG TTAACCACCC TCATGTTTTC ACATTCAGGT1381 ATCCTTAGTC TGTTGGAGCA TGGAGAAGAG TACACATTTT CTCTACCCTG TGCATATGCT1441 CGGTCAATTT TGACTGTTCC TTGGGTAGAA CTGGGTGGCA AAGTCAGTGT CAACTGTGCA1501 AAAACTGGAT ATTCAGCCAG CATCACTTTT CATACCAAGC CATTTTATGG TGGCAAACTG1561 CATCCGTAAG AACATTTTAA TGATTATCTA GTTCTTATTC TTCCACTTTG ATTTTGTATT1621 ACAACTCCTT ATTCTTTTTC TGCTCTGTTC TATGTGAAGT TGGATTTGTA TTAATGTTTA1681 TTTCTTATTT AAAATATTTC ATCTTTAAAG CATTCTGAAA GTCATGCTCT GTTTTTAAAA1741 GTAGTAACAT TAAGATATCT ACTCTTAAAA ATTTTCCTGA TGAAGTAACT AGTGAGCTTT1801 ATAGTAGAAT TTCTAACAAG TGAACATGCA GTCTCTGGCC CAATTCTGCC TTTAAGGGAT1861 ACAGATTTGG ATCTGGACCT CAGTGAAGGC AGCTATAGCT ATAAGTTAGG GTGGAAATAT1921 ATCTAATCAT GAAGAATGGT TCAAGAAGCA CAATGATTAA AGCCAGTGTA TGTGCTTCAT1981 TAGATGCTTA GGTGGAAGCA ACTTGCAGTG ATAAATTTCT AGATCCAGTA CTTCTTATTG2041 TCAATGATAT TGATGCATTT TTTTTTTTTG TCATTTGTTT TTTTGAGACA GAGTCTCACT2101 CTGTCGCCTA GGCTGGAGTG CAGTGGCACA ATCTTGGCTC CTTGCAGCCG CCTCCTGGGT2161 TCAAGCGATT TTTGTGCCTC AGCCTCCCAA GTAGCTGTGA TTACGGCATG TGCCACCATG2221 CCTGGCTGCT TTTTGTATTT TTAGTTGAGA TGGGCTTTCA CCATGTTGGC CAGGCTGGTC2281 TCAAACTCCT GGCCTTAAGT GATCTGCCTG CCTCAACCTC CCAAAGTGCT GGGAGCCACC2341 ACACCTGGCT AATATTGATG TATTTCTTAG TCACATGTGA TTTTTTAGTC 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GAG GTT GCA GTG AGC CAA GAT CAC GCC ACT GCA CTC CAG CCT GGG CAA10561057 CAA GCA CAA AAC TCC GTC TCA AAA AAA AAA TTA TTT TTA GGA GCA TTA11041105 GAG AAA ACC CTT GAA ATG TTT CCA CTG TAA CAT TTA CTG GTT TCA TGA11521153 ACC TCA AAT TGA TGG AAA GGT CAT GTC ATA GTG AAA GTA AAC CTG ATT12001201 CAC TAT TGC CTG GTA ATG TCA GAT ATA GTT ATA AAT GAA GTC AGT TTC12481249 ATT GAA AGT TAA ATG AAG GTT AGG AAA AAT AAT GAT GCT TAT TTA CTA12961 Met Lys Val Arg Lys Asn Asn Asp Ala Tyr Leu Leu 121297 GAC AAG AAC AAA ATT AAT ATG GAT TGT TTC ATT AGC TGT TTC TTT AAA134413 Asp Lys Asn Lys Ile Asn Met Asp Cys Phe Ile Ser Cys Phe Phe Lys 281345 AAG ATG TTA ACC ACC CTC ATG TTT TCA CAT TCA GGT ATC CTT AGT CTG139229 Lys Met Leu Thr Thr Leu Met Phe Ser His Ser Gly Ile Leu Ser Leu 441393 TTG GAG CAT GGA GAA GAG TAC ACA TTT TCT CTA CCC TGT GCA TAT GCT144045 Leu Glu His Gly Glu Glu Tyr Thr Phe Ser Leu Pro Cys Ala Tyr Ala 601441 CGG TCA ATT TTG ACT GTT CCT TGG GTA GAA CTG GGT GGC AAA GTC AGT148861 Arg Ser Ile Leu Thr Val Pro Trp Val Glu Leu Gly Gly Lys Val Ser 761489 GTC AAC TGT GCA AAA ACT GGA TAT TCA GCC AGC ATC ACT TTT CAT ACC153677 Val Asn Cys Ala Lys Thr Gly Tyr Ser Ala Ser Ile Thr Phe His Thr 921537 AAG CCA TTT TAT GGT GGC AAA CTG CAT CGG TAA GAA CAT TTT AAT GAT158493 Lys Pro Phe Tyr Gly Gly Lys Leu His Arg *** 1031585 TAT CTA GTT CTT ATT CTT CCA CTT TGA TTT TGT ATT ACA ACT CCT TAT16321633 TCT TTT TCT GCT CTG TTC TAT GTG AAG TTG GAT TTG TAT TAA TGT TTA16801681 TTT CTT ATT TAA AAT ATT TCA TCT TTA AAG CAT TCT GAA AGT CAT GCT17281729 CTG TTT TTA AAA GTA GTA ACA TTA AGA TAT CTA CTC TTA AAA ATT TTC17761777 CTG ATG AAG TAA CTA GTG AGC TTT ATA GTA GAA TTT CTA ACA AGT GAA18241825 CAT GCA GTC TCT GGC CCA ATT CTG CCT TTA AGG GAT ACA GAT TTG GAT18721873 CTG GAC CTC AGT GAA GGC AGC TAT AGC TAT AAG TTA GGG TGG AAA TAT19201921 ATC TAA TCA TGA AGA ATG GTT CAA GAA GCA CAA TGA TTA AAG CCA GTG19681969 TAT GTG CTT CAT TAG ATG CTT AGG TGG AAG CAA CTT GCA GTG ATA AAT20162017 TTC TAG ATC CAG TAC TTC TTA TTG TCA ATG ATA TTG ATG CAT TTT TTT20642065 TTT TTG TCA TTT GTT TTT TTG AGA CAG AGT CTC ACT CTG TCG CCT AGG21122113 CTG GAG TGC AGT GGC ACA ATC TTG GCT CCT TGC AGC CGC CTC CTG GGT21602161 TCA AGC GAT TTT TGT GCC TCA GCC TCC CAA GTA GCT GTG ATT ACG GCA22082209 TGT GCC ACC ATG CCT GGC TGC TTT TTG TAT TTT TAG TTG AGA TGG GCT22562257 TTC ACC ATG TTG GCC AGG CTG GTC TCA AAC TCC TGG CCT TAA GTG ATC23042305 TGC CTG CCT CAA CCT CCC AAA GTG CTG GGA GCC ACC ACA CCT GGC TAA23522353 TAT TGA TGT ATT TCT TAG TCA CAT GTG ATT TTT TAG TCA TGG GTG GAT24002401 CAC CTG AGG TCA GGA TTT CGA GAC CAG CCT AGC CAA CAT GAC GAG ACT24482449 CCG TCT CTA CTA AAA ATA CAA AAT TAG CTG AGT ATG GTG GCG CAT GCC24962497 TGT AAT CCC AGC TAT TCA GGA GGC AAG GCT GGA GGA TCA CTT GAA CCC25442545 AGT AGG CAG AGG TTG CAG TGA GCT GAG GTT GCA CCA CTG CTC TCC AGC25922593 CGG GGT GAC AAG AGT GAA ACT CCG TCT CAA AAA AAA AAA AAA AAA A 263811.PP14762A核苷酸序列(SEQ ID NO31)長度22051 GATCTCACAG GGATTGAGTG GGCCCCAAAC GGCTGTGTGC TGGCAGTGTG GGACACCTGC61 TTGGAGGTAT GAAGATGACC AGGTGACATG TTTGCTTTCG AGAGCTTTTC CCGGAATTTC121 ATGCTTTCTG AATGCTGCAA TATAGTTTGC TTTATCTTAT TTCAGATAAC AAGTTGAGCT181 TTGTTTTAAA AGACAGGGTC TTGCTCTGTC ACCCAGGCTG GAGTGCAGTG GTGTGATCAC241 GGCCCACTGC AGCCTCGACC TCCTGGACTC AAGTGATCCT CCTACCTCAG CCTCCCAAGT301 AGCTGGGACC ACAAGCATGC ACCACCACGC CCGGCTAATT TTTGTATTCT TTGTAGAGAT361 GGGGTTTCAC CGTGTTGCCC AGACTGCTCT TGAACTTCTG TGTTCAAGTG ATCTGCCAGC421 TTCGGCCTCC CAAAGTGCTG GGATTACAGG CGTGAGCCAC AGTGCCCGGC CGAGTTGAAC481 TTTTATCAGC GAGCCATTAG GTTGACCTCC CAATTTCCCC TTTTTCCTCA TGCTCTCACT541 GCCTCTCCGT GACTATCTCA GTACTAGCTG GCAGTTCCAG CTTTTCCACG GCCACGCGGA601 CAGTCCTGCC AGCTTTGTGC TATCTGCACC AATGTCACTC TGCAGCACCC GCGTCTGTGG661 TGTGTTCCTG GCGACGGGGG TGTATTCATT ATTAACTGAA ATGTCTCATC TGCAGTACAA721 GATTCTGCTG TACTCATTGG ATGGCCGGTT GTTGTCCACG TACAGCGCTT ACGAGTGGTC781 CTTGGGCATC AAGTCTGTGG CCTGGAGGCC CAGCAGTCAG TTCCTGGCAG TTGGGAGCCG841 TCCCCCAGCC GCCCAACCTC CTAAGCGCTG AAGGAATTAT TTTTGGGAGT CATGACCATA901 GCTGCCTGCT TCCCCCAACC CTCGACGACG AAAAGGACTT CGGCCCCCGG CCGGGCGGCT961 CCGGGGGAAA AAAGAGAGAG CGACCTCCGC CCCGCGCTCA GGGCCACTCT AGAGGGAGAA1021 GCTGCCCCGA GGCTGGCAGA GCGCCCAGCC GCGGTGGAGA CCGGAAGCCT TCTGGAGCCC1081 AAGGCTGTGC ACGTCCCCTG TGCTGATTCT CTGCCTAGGA AAGGACCATG CAGCTGGAGA1141 TCAAAGTAGC CCTGAACTTC ATCATCTTCT ACTTGTACAA CAAGCTGCTC TGGCGCCTCT1201 GAAAAAGAAA TAAGAAGCCC ACTGGTACCC TGACAAACCA CTGAAGGGCT CTGGCTTCCA1261 CACCGAGGAG ATGGTGGACC CCGTTGGGGA GCTGGCCGCT AAGCGAAGTG GCCTGACAGT1321 GGAAGATGTG CGGGCCAATG TGCCTGAGGA GCTGAGCATA TGGATTGACC CCTTCGGGGT1381 GTCCTACCAG ATTGGTGAGA AGGGAGCAGT GAAAGTGCTG TACCTGGATG ACAGTGACGG1441 CTGTGGGGCC CCGGAGCTGG ACATGAAGAT CAAGAGCAGT TTCACTCCTG ACGACCAGAT1501 GCTCTTTCTC CTCGGAAGCC AGGACAGCTC CTTGTCCAAC TCCCCGTCGC TATGCTTTGC1561 CCATCACCCA GCCCCACCTT CATCCTCTGC CTCGCCCAGC CCATCACCTT CACCATGGAC1621 TCCTTTGCTG CCACCAAATT AGGCTCCACT AAGATGAAGA AGAGGGGTGG GGCAACAAGT1681 GGTAGGGGTG CAGCCAGCGG TGAAGCAGGT GGCCAGCAGC CAGTACAGCA GCCTCCACGG1741 CCCGCTTCAA CACCAACAGC TTGTTGAAAC ACAGGAGTCT TTCTCTGTCT GTGCATTCAT1801 TGAACTTCAT CCCAGCCAAC CGGCCTCTCA ATCCCAGCTC TCGCCCCAAG GCCACGTACA1861 GTCTCAAGTA CAACAGTGGT GGCTTGCCCA GTTTCTTCCT TGATGGGGCC AATGGCCAGG1921 GTAGTGACAC CCGAGCCCTC TTTGGAGGCA GTGGGACTGT CACCTGCAAC GCCAGCAGCT1981 TCTACATGGT CTAGGTATTT GGAGGTGGTG CCACCGCCTC TTCCTGGAGA AGGCACCCTT2041 CATGGAAGAC CTCAGCTACA ACCTGAACAC CATGCAATAT CCTAGTCAAC CGTTCCAGTC2101 CGTGGTGCTG GCCAACTGAC CGTCTACCTG CCCTGGGGCC GGGAGCACCC AAGACCACAG2161 AAAAGAGAAA GAAAAGGAAA GGCCAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO32)長度1231 MVDPVGELAA KRSGLTVEDV RANVPEELSI WIDPFGVSYQ IGEKGAVKVL YLDDSDGCGA61 PELDMKIKSS FTPDDQMLFL LGSQDSSLSN SPSLCFAHHP APPSSSASPS PSPSPWTPLL121 PPNC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO33) 克隆號(hào)PP14762起始編碼子1271 ATG 終止編碼子1640 TAG 蛋白質(zhì)分子量13037.871 G ATC TCA CAG GGA TTG AGT GGG CCC CAA ACG GCT GTG TGC TGG CAG 4647 TGT GGG ACA CCT GCT TGG AGG TAT GAA GAT GAC CAG GTG ACA TGT TTG 9495 CTT TGG AGA GCT TTT CCC GGA ATT TCA TGC TTT CTG AAT GCT GCA ATA142143 TAG TTT GCT TTA TCT TAT TTC AGA TAA CAA GTT GAG CTT TGT TTT AAA190191 AGA CAG GGT CTT GCT CTG TCA CCC AGG CTG GAG TGC AGT GGT GTG ATC238239 ACG GCC CAC TGC AGC CTC GAC CTC CTG GAC TCA AGT GAT CCT CCT ACC286287 TCA GCC TCC CAA GTA GCT GGG ACC ACA AGC ATG CAC CAC CAC GCC CGG 334335 CTA ATT TTT GTA TTC TTT GTA GAG ATG GGG TTT CAC CGT GTT GCC CAG 382383 ACT GCT CTT GAA CTT CTG TGT TCA AGT GAT CTG CCA GCT TCG GCC TCC 430431 CAA AGT GCT GGG ATT ACA GGC GTG AGC CAC AGT GCC CGG CCG AGT TGA 478479 ACT TTT ATC AGC GAG CCA TTA GGT TGA CCT CCC AAT TTC CCC TTT TTC 526527 CTC ATG CTC TCA CTG CCT CTC CGT GAC TAT CTC AGT ACT AGC TGG CAG 574575 TTC CAG CTT TTC CAC GGC CAC GCG GAC AGT CCT GCC AGC TTT GTG CTA 622623 TCT GCA CCA ATG TCA CTC TGC AGC ACC CGC GTC TGT GGT GTG TTC CTG 670671 GCG ACC GGG GTG TAT TCA TTA TTA ACT GAA ATG TCT CAT CTG CAG TAC 718719 AAG ATT CTG CTG TAC TCA TTG GAT GGC CGG TTG TTG TCC ACG TAC AGC 766767 GCT TAC GAG TGG TCC TTG GGC ATC AAG TCT GTG GCC TGG AGC CCC AGC 814815 AGT CAG TTC CTG GCA GTT GGG AGC CGT CCC CCA GCC GCC CAA CCT CCT 862863 AAG CGC TGA AGG AAT TAT TTT TGG GAG TCA TGA CCA TAG CTG CCT GCT 910911 TCC CCC AAC CCT CGA CGA CGA AAA GGA CTT CGG CCC CCG GCC GGG CGG 958959 CTC CGG GGG AAA AAA GAG AGA GCG ACC TCC GCC CCG CGC TCA GGG CCA10061007 CTC TAG AGG GAG AAG CTG CCC CGA GGC TGG CAG AGC GCC CAG CCG CGG10541055 TGG AGA CCG GAA GCC TTC TGG AGC CCA AGG CTG TGC ACG TCC CCT GTG11021103 CTG ATT CTC TGC CTA GGA AAG GAC CAT GCA GCT GGA GAT CAA AGT AGC11501151 CCT GAA CTT CAT CAT CTT CTA CTT GTA CAA CAA GCT GCT CTG GCG CCT11981199 CTG AAA AAG AAA TAA GAA GCC CAC TGG TAC CCT GAC AAA CCA CTG AAG12461247 GGC TCT GGC TTC CAC ACC GAG GAG ATG GTG GAC CCC GTT GGG GAG CTG12941 Met Val Asp Pro Val Gly Glu Leu 81295 GCC GCT AAG CGA AGT GGC CTG ACA GTG GAA GAT GTG CGG GCC AAT GTG13429 Ala Ala Lys Arg Ser Gly Leu Thr Val Glu Asp Val Arg Ala Ash Val 241343 CCT GAG GAG CTG AGC ATA TGG ATT GAC CCC TTC GGG GTG TCC TAC CAG139025 Pro Glu Glu Leu Ser Ile Trp Ile Asp Pro Phe Gly Val Ser Tyr Gln 401391 ATT GGT GAG AAG GGA GCA GTG AAA GTG CTG TAC CTG GAT GAC AGT GAC143841 Ile Gly Glu Lys Gly Ala Val Lys Val Leu Tyr Leu Asp Asp Ser Asp 561439 GGC TGT GGG GCC CCG GAG CTG GAC ATG AAG ATC AAG AGC AGT TTC ACT148657 Gly Cys Gly Ala Pro Glu Leu Asp Met Lys Ile Lys Ser Ser Phe Thr 721487 CCT GAC GAC CAG ATG CTC TTT CTC CTC GGA AGC CAG GAC AGC TCC TTG153473 Pro Asp Asp Gln Met Leu Phe Leu Leu Gly Ser Gln Asp Ser Ser Leu 881535 TCC AAC TCC CCG TCG CTA TGC TTT GCC CAT CAC CCA GCC CCA CCT TCA158289 Ser Asn Ser Pro Ser Leu Cys Phe Ala His His Pro Ala Pro Pro Ser 1041583 TCC TCT GCC TCG CCC AGC CCA TCA CCT TCA CCA TGG ACT CCT TTG CTG1630105 Ser Ser Ala Ser Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Trp Thr Pro Leu Leu 1201631 CCA CCA AAT TAG GCT CCA CTA AGA TGA AGA AGA GGG GTG GGG CAA CAA1678121 Pro Pro Asn *** 1241679 GTG GTA GGG GTG CAG CCA GCG GTG AAG CAG GTG GCC AGC AGC CAG TAC17261727 AGC AGC CTC CAC CGC CCG CTT CAA CAC CAA CAG CTT GTT GAA ACA CAG17741775 GAG TCT TTC TCT GTC TGT GCA TTC ATT GAA CTT CAT CCC AGC CAA CCG18221823 GCC TCT CAA TCC CAG CTC TCG CCC CAA GGC CAC GTA CAG TCT CAA GTA18701871 CAA CAG TGG TGG CTT GCC CAG TTT CTT CCT TGA TGG GGC CAA TGG CCA19181919 GGG TAG TGA CAC CCG AGC CCT CTT TGG AGG CAG TGG GAC TGT CAC CTG19661967 CAA CGC CAG CAG CTT CTA CAT GGT CTA GGT ATT TGG AGG TGG TGC CAC20142015 CGC CTC TTC CTG GAG AAG GCA CCC TTC ATG GAA GAC CTC AGC TAC AAC20622063 CTG AAC ACC ATG CAA TAT CCT AGT CAA CCG TTC CAG TCC GTG GTG CTG21102111 GCC AAC TGA CCG TCT ACC TGC CCT GGG GCC GGG AGC ACC CAA GAC CAC21582159 AGA AAA GAG AAA GAA AAG GAA AGG CCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 220權(quán)利要求
1.一種分離的具有抑癌功能的人蛋白，其特征在于，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32。
3.一種分離的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性(a)編碼如權(quán)利要求1和2所述多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。
4.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32。
5.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33的編碼區(qū)序列或全長序列。
6.一種載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
7.一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞，其特征在于，它是選自下組的一種宿主細(xì)胞(a)用權(quán)利要求6所述的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b)用權(quán)利要求3所述的多核苷酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。
8.一種具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制備方法，其特征在于，該方法包含(a)在適合表達(dá)具有抑癌功能的人蛋白的條件下，培養(yǎng)權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9.一種能與權(quán)利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特異性結(jié)合的抗體。
10.一種藥物組合物，其特征在于，它含有安全有效量的權(quán)利要求1所述的多肽以及藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新的具有抑癌功能的人蛋白,編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生該多肽的方法。本發(fā)明還公開了此多肽用于治療多種疾病如癌癥等的方法。本發(fā)明還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明還公開了編碼這類新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
文檔編號(hào)C07K16/18GK1368509SQ01105310
公開日2002年9月11日 申請日期2001年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月8日
發(fā)明者顧健人 申請人:上海市腫瘤研究所