專利名稱：改善生活質(zhì)量的醫(yī)藥品和食品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在口服具有生理活性的蛋白質(zhì)時(shí)運(yùn)用了使其有效發(fā)揮生理活性的方法的醫(yī)藥品和食品。即，本發(fā)明涉及下述醫(yī)藥品和食品口服的生理活性蛋白在不失活的狀態(tài)下通過胃，不喪失生理活性到達(dá)作用部位——從十二指腸到下消化道。另外，本發(fā)明還涉及上述醫(yī)藥品或食品能新治療/預(yù)防的疾病。本發(fā)明的方法中，生理活性蛋白不分解而達(dá)到作用部位，這對發(fā)揮其作用極為有效。
背景技術(shù)：
負(fù)責(zé)食物消化吸收的小腸粘膜表面布滿了微小突起，這些突起表面又被更微小的突起覆蓋，因此其表面積明顯擴(kuò)大。有說法指出，人消化道的表面積有一個(gè)半網(wǎng)球場的大小，小腸占該表面積的大半。腸道內(nèi)腔是生物機(jī)體的外界，有150兆個(gè)腸內(nèi)細(xì)菌生活在其中。如此大面積與外界接觸，但將其與外界相隔的僅僅是一層極薄的粘膜層。一般認(rèn)為，此薄粘膜層對外界的種種刺激作出反應(yīng)，但什么刺激物質(zhì)與粘膜接觸，發(fā)生怎樣的反應(yīng)，受刺激的粘膜部位在何處等具體問題還是個(gè)謎。總之，消化道粘膜在生物機(jī)體中負(fù)有重要功能。
腸道粘膜對刺激作出反應(yīng)的一個(gè)好的例子是其作為防止腸內(nèi)細(xì)菌入侵的粘膜屏障。即，只要?jiǎng)游锝】?，腸內(nèi)細(xì)菌就很少越過屏障入侵。但當(dāng)生物機(jī)體處于外科手術(shù)、外傷或燒傷等受創(chuàng)時(shí)或死亡時(shí)，腸內(nèi)細(xì)菌立即越過粘膜層侵入體內(nèi)。在健康狀態(tài)下，粘膜層是防止不斷想入侵的腸內(nèi)細(xì)菌的防御裝置。一般認(rèn)為，除腸內(nèi)細(xì)菌外，刺激腸道粘膜的還有病毒和食物中包含的有毒物質(zhì)等。在具有很大表面積的腸道粘膜中，應(yīng)該存在接受刺激的傳感器和以傳感器信息為基礎(chǔ)作出反應(yīng)的反應(yīng)器，但不知道是什么樣的傳感器在起作用。例如已知腸道粘膜中有乳鐵蛋白受體，但完全不知道乳鐵蛋白與受體結(jié)合時(shí)會(huì)發(fā)生何種反應(yīng)。
胃分泌鹽酸，其內(nèi)部保持pH為1.0～3.0的強(qiáng)酸性狀態(tài)。當(dāng)攝入被病原性細(xì)菌污染的食品或飲用水時(shí)，胃內(nèi)保持強(qiáng)酸性對殺滅病原菌非常有效，并且，胃液中含有具有最適pH值的酸性蛋白酶和胃蛋白酶，將蛋白質(zhì)水解成肽。在強(qiáng)酸性條件下，受胃蛋白酶的作用，污染食物的病原菌幾乎全部被殺死。因此，胃是擊退病原菌入侵的第一關(guān)。身體不好時(shí)口服具有生理活性的蛋白質(zhì)并期望其發(fā)揮作用，但在胃中的分解是其最大的障礙，這是由于進(jìn)入胃中的生理活性蛋白在強(qiáng)酸性條件下其折疊的三級結(jié)構(gòu)被破壞，在胃蛋白酶的作用下肽鍵水解。在這種狀態(tài)下，蛋白質(zhì)完全喪失生理活性。

發(fā)明內(nèi)容
為了幫助食物消化吸收，口服乳糖分解酶、淀粉酶、蛋白酶或脂肪酶等水解酶。但是，這些水解酶在人體內(nèi)是否真的水解食物、有助于消化吸收尚有疑問。因?yàn)閷⑦@些消化酶以1％的濃度溶于含有50μg/ml胃蛋白酶pH＝1.2的人工胃液中，在37℃溫育1.5小時(shí)后酶完全失活，食物在胃中的停留時(shí)間估計(jì)約為1.5～2.0小時(shí)，由此可知，即使內(nèi)服水解酶也不能期望能改善病癥。
目前，具有抗炎作用的沙雷肽酶和據(jù)說有血清膽固醇降低作用的彈性蛋白酶等生理活性蛋白也作為藥物給患者口服，已知這些生理活性蛋白在胃中溶解時(shí)，也和水解酶一樣被分解，失活。
另外，蛋白溶菌酶作為有效成分之一加到大部分的大眾綜合感冒藥中，可以說是感冒藥中必不可少的最受歡迎的成分。淚液、唾液和消化液等覆蓋粘膜的分泌液中含有溶菌酶，其具有水解構(gòu)成細(xì)菌細(xì)胞壁的胞壁酰肽的酶活性，因此將其視為殺菌酶。但不可思議的是，感冒患者口服該溶菌酶對咽喉痛等急性炎癥有鎮(zhèn)痛消炎作用。推測其機(jī)理如下與溶菌酶結(jié)合的受體存在于粘膜表面，與溶菌酶結(jié)合后機(jī)體內(nèi)的麻藥——阿片樣物質(zhì)釋放，但該推測尚未被實(shí)驗(yàn)證明。除有鎮(zhèn)痛消炎作用外，該溶菌酶對哺乳動(dòng)物不顯示任何毒性，能放心加入，因此其作為感冒藥的有效成分被廣泛使用。一般認(rèn)為溶菌酶發(fā)揮鎮(zhèn)痛消炎作用的場所在占粘膜面積大部分的小腸，但這點(diǎn)還有待今后進(jìn)一步研究。既便如此，感冒藥片劑在胃中崩解后，溶菌酶也不能逃脫胃蛋白酶的水解作用。推測避開胃蛋白酶的水解作用而進(jìn)入小腸的溶菌酶極少。
另外，免疫球蛋白和乳鐵蛋白等分子量較大的蛋白質(zhì)也能增進(jìn)健康，人們將其作為食品積極攝取。免疫球蛋白是用大量細(xì)菌抗原免疫奶牛后作為細(xì)菌抗原抗體(IgG1)分泌到牛奶中，脫脂后的脫脂免疫牛奶粉能增進(jìn)健康。但是，牛奶中的免疫球蛋白IgG1具有胃蛋白酶敏感性，經(jīng)過胃時(shí)其大部分被分解，是否具有健康增進(jìn)效果尚有疑問。
奶牛在分娩一周內(nèi)分泌的乳汁為初乳，此時(shí)禁止擠奶。因?yàn)槌跞榕c奶牛在分娩一周后分泌的普通乳汁性質(zhì)不同，含有大量免疫球蛋白IgG1，因此在低熱滅菌或高溫瞬間滅菌時(shí)凝固成豆腐狀，不能殺菌。將此初乳脫脂，為避免免疫球蛋白失活而用低溫噴霧干燥法所得的脫脂初乳奶粉也作為健康增進(jìn)物質(zhì)在各國廣泛使用。例如，在美國，已經(jīng)將脫脂初乳奶粉作為保健食品具有改善關(guān)節(jié)炎和高血壓癥的效果。此時(shí)，脫脂初乳與免疫牛奶一樣，它們在胃內(nèi)大部分免疫球蛋白被分解。
近年來，有報(bào)告指出，牛奶中的乳鐵蛋白具有預(yù)防大腸癌的效力，并作為防癌發(fā)生的原料受到人們的矚目。并且，有報(bào)告指出，C型肝炎患者口服大量牛奶乳鐵蛋白后，發(fā)現(xiàn)血中病毒滴度低的輕癥患者癥狀得到改善。80％的C型肝炎患者由肝硬化變成肝癌而死亡，就從這一點(diǎn)來說，如果這一研究成果也能通過其它的醫(yī)療設(shè)施確證，對患者無疑是一大福音。另外，乳鐵蛋白每天的給藥量達(dá)3.6g之多，這阻礙了其實(shí)用化，將用量減至每天1.8g則沒有發(fā)現(xiàn)明顯的病癥改善作用。這時(shí)也確定口服的乳鐵蛋白大部分在胃中被水解。用在胃中不水解、進(jìn)入十二指腸后才開始釋放乳鐵蛋白的制劑進(jìn)行臨床試驗(yàn)，旨在將其改良成在減少劑量的同時(shí)，即使對重癥C型肝炎患者也能改善其癥狀的制劑。
消化道總表面積為網(wǎng)球場面積的1.5倍，胃的表面積僅為900cm2，并且，營養(yǎng)物質(zhì)和藥物等在胃內(nèi)不被吸收，沒有報(bào)告指出溶菌酶、免疫球蛋白和乳鐵蛋白等生理活性蛋白通過與胃壁結(jié)合而改善病癥。進(jìn)一步地，胃壁被厚的粘液層覆蓋，因此上述生理活性蛋白在被胃蛋白酶水解之前透過粘液層與粘膜結(jié)合的希望很小。口服具有生理活性的蛋白質(zhì)使其發(fā)揮藥效時(shí)，最大的障礙是在胃中的分解和失活，如果不解決此問題，則不能實(shí)現(xiàn)作為以增進(jìn)健康為目的的醫(yī)藥品和食品的生理活性蛋白的實(shí)用化。
本發(fā)明人對為了改善病癥和增進(jìn)健康而口服酶、蛋白酶抑制劑和生理活性蛋白進(jìn)行長年研究，因?yàn)殡m然蛋白有細(xì)胞溶素的例外，但總的來說蛋白質(zhì)安全性高，如果通過口服能發(fā)揮藥效，則能成為理想的治療藥。研究的主要對象為乳鐵蛋白和免疫球蛋白。乳鐵蛋白的分子量高達(dá)8萬左右，與粘膜接觸后似乎能引起生物體變化，其一是對病原菌感染的防御能力提高，其二是有阿片樣物質(zhì)的鎮(zhèn)痛作用。從這些作用看，認(rèn)為粘膜上存在叫作乳鐵蛋白傳感器的構(gòu)造，但幾乎不知道其詳細(xì)情況。
但是，用作實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物口服上述蛋白質(zhì)而發(fā)現(xiàn)生理活性后，但再以相同的量給與相同條件下的動(dòng)物時(shí)，有時(shí)發(fā)揮作用，有時(shí)則不發(fā)揮作用，缺乏明顯的再現(xiàn)性。例如給BALB/c小鼠以50mg/kg的量口服5-氟尿嘧啶(5-FU)，在由細(xì)菌移位(bacterial translocation(BT))引起菌血癥、很多臟器官功能不全而導(dǎo)致小鼠死亡的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中，在5-FU給藥前一天至同時(shí)給藥口服來自牛奶的乳鐵蛋白，有時(shí)能抑制BT使小鼠存活下來。并且，僅在乳鐵蛋白給與量少(一次2mg/kg)的情況下上述BT抑制作用才有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。如果以2mg/kg的量口服小鼠抗癌劑能抑制BT，則能抑制外科手術(shù)、癌和緊張等引起的人BT，能抑制從傳染病到全身性炎癥反應(yīng)綜合征引起的很多臟器官功能不全，這能給醫(yī)療界帶來很大的影響。
另一方面，在完全相同的條件下口服100mg/kg而沒有任何表現(xiàn)，但這種表達(dá)僅在書面上是真實(shí)的，因?yàn)橥耆嗤臈l件只是本發(fā)明人等的一種想法，而實(shí)際上條件不同，因此沒有表現(xiàn)相同的現(xiàn)象。乳鐵蛋白的BT抑制效果缺乏再現(xiàn)性，究其原因是乳鐵蛋白在消化道中分解?？傊?，生理活性蛋白只有完全保持其結(jié)構(gòu)到達(dá)作用部位才能發(fā)揮其生理活性，因此可得出這樣一種結(jié)論在到達(dá)作用部位之前其分解則不能發(fā)揮作用。
如果口服乳鐵蛋白等生理活性蛋白，其大部分在通過胃時(shí)部分分解而喪失作用。假定口服這些生理活性蛋白偶爾發(fā)揮作用，則是因?yàn)橥ㄟ^胃時(shí)未被分解的極少量進(jìn)入十二指腸后發(fā)揮作用。因此，本發(fā)明人尋求下述方法為了改善病癥和增進(jìn)健康而口服生理活性蛋白，使其在不分解的狀態(tài)下通過胃，進(jìn)入十二指腸后才溶解。
一般認(rèn)為，在現(xiàn)有制劑中，口服的乳鐵蛋白僅與口腔和食道粘膜一過性接觸，進(jìn)入胃后被胃蛋白酶分解成多肽而喪失其作用。對酸性蛋白酶的高度敏感性阻止了現(xiàn)有乳鐵蛋白的廣泛應(yīng)用。乳鐵蛋白是牛奶中的微量成分，價(jià)格較高，對胃蛋白酶和番木瓜蛋白酶等酸性蛋白酶的敏感性高，易水解，這是其最大的缺點(diǎn)。但已知其對其它蛋白酶具有明顯抵抗性，在糞便中放置一周后幾乎不分解(參照本說明書實(shí)施例4)。因此推測，如果能使乳鐵蛋白在不分解的狀態(tài)下通過胃進(jìn)入十二指腸，則口服少量能發(fā)揮改善病癥和增進(jìn)健康的作用，由此完成本發(fā)明。
本發(fā)明提供具有下述控制釋放措施的口服組合物含有一種或一種以上的生理活性蛋白作為活性成分，其中一定比例以上的活性成分幾乎不分解，保持其活性在下消化道內(nèi)釋放。
本說明書中，“口服組合物”包括口服攝取的所有形態(tài)的醫(yī)藥組合物和/或食品。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以制成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑和散劑等各種醫(yī)藥制劑形態(tài)。食品包括功能性食品、保健食品和營養(yǎng)輔助食品。
本發(fā)明的組合物必須有釋放控制措施，所述釋放控制措施是指在組合物的活性成分中，至少10％或以上、優(yōu)選20％或以上、更優(yōu)選50％或以上、進(jìn)一步優(yōu)選80％或以上保證在胃腸內(nèi)不發(fā)生不可逆失活(例如有效成分在胃腸內(nèi)不釋放或溶解，因此不變性和/或分解，保持其活性到達(dá)下消化道(十二指腸、小腸)。
可以用現(xiàn)有藥物釋放控制的各種方法作為本發(fā)明組合物的釋放控制措施，其中包括例如將含有活性成分的母核用腸溶性薄膜或適當(dāng)厚度的疏水性物質(zhì)包衣和活性成分以基質(zhì)為載體在規(guī)定的環(huán)境下釋放有效成分。
本發(fā)明能適用于在胃腸內(nèi)變性和/或分解、失活的所有蛋白質(zhì)性質(zhì)的活性成分。這些活性成分包括在酸性蛋白酶即胃蛋白酶和番木瓜蛋白酶的作用下失活的具有生理活性的蛋白質(zhì)。更具體地，包括具有免疫賦活作用和鎮(zhèn)痛消炎作用的乳鐵蛋白和溶菌酶等堿性蛋白質(zhì)、抑制病原菌生長的免疫球蛋白、幫助小腸內(nèi)食物消化吸收的水解酶和抑制這些酶活性的蛋白質(zhì)性質(zhì)或肽性質(zhì)的抑制劑。幫助食物消化吸收的水解酶可以列舉各種蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等。特別優(yōu)選活性成分為乳鐵蛋白。乳鐵蛋白對目前難治的各種疾病有速效性治療效果(參照本說明書實(shí)施例中的治療效果項(xiàng))。
本發(fā)明適用于治療全身性炎癥反應(yīng)綜合征，炎癥性腸疾病，包括肥胖、糖尿病或高血壓癥的生活習(xí)慣疾病，惡性淋巴瘤，由包括C型肝炎病毒、輪狀病毒、皰疹病毒或巨細(xì)胞病毒的病原病毒引起的傳染病，病原微生物引起的傳染病和自身免疫疾病，和/或適用于治療或改善伴隨上述疾病或狀態(tài)的癥狀、降低病人生活質(zhì)量的各種癥狀。
全身性炎癥反應(yīng)綜合征是各種疾病患者中廣泛發(fā)生的炎癥，包括傳染病、胰腺炎、缺血、多重外傷、出血性休克、免疫介導(dǎo)性臟器損傷、敗血癥和全身性炎癥反應(yīng)綜合征的常見并發(fā)癥(急性肺損傷、休克、腎機(jī)能不全、各種臟器機(jī)能不全綜合征和器官系統(tǒng)機(jī)能異常)。炎癥性腸疾病包括克羅恩病和潰瘍性大腸炎。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施形態(tài)是用使乳鐵蛋白顆?；蚱瑒┑谋砻嬖谖钢胁蝗芙舛M(jìn)入腸內(nèi)溶解的腸溶性薄膜包衣的組合物，更詳細(xì)地說是以下物質(zhì)。
來自牛奶的乳鐵蛋白凍干粉末體積比重非常小，難于直接打成片劑。另外，水分和高溫使其不穩(wěn)定，因此優(yōu)選在干燥狀態(tài)下制劑。因此，將乳鐵蛋白和賦形劑、粘合劑、崩解劑混合，用打碎機(jī)(slug machine)強(qiáng)壓成薄大平坦的圓盤，然后將其粉碎過篩，制成一定大小的均勻顆粒。將所得的顆粒用腸溶性薄膜包衣，定量裝入硬膠囊中即可制成產(chǎn)品。當(dāng)制成片劑時(shí)，往顆粒中加入潤滑劑后打片，將所得片劑用腸溶性薄膜包衣即可制成產(chǎn)品。
將按上述方法制備的乳鐵蛋白腸溶片和腸溶性顆粒用下述溶液進(jìn)行崩解試驗(yàn)(參照《日本藥典》(第九版)，一般試驗(yàn)法41；或《日本藥典》(第十三版)，一般試驗(yàn)法47，崩解試驗(yàn)法，(6)腸溶性制劑)往2.0g氯化鈉中加入稀鹽酸(24ml)和水溶解，再加水至1000ml作為第一溶液(pH＝1.2)；往250ml 0.2M的磷酸二氫鉀溶液中加入118ml 0.2N的氫氧化鈉溶液，再加水至1000ml作為第二溶液(pH＝6.8)。按本發(fā)明方法制備的片劑和顆粒在第一溶液中浸泡120分鐘不崩解，在第二溶液中浸泡60分鐘即崩解。因此，能制備在胃中不崩解、進(jìn)入十二指腸后才開始崩解溶出乳鐵蛋白的制劑。
制備本發(fā)明腸溶性制劑時(shí)所用的賦形劑包括乳糖、蔗糖和葡萄糖等單糖或二糖類，玉米淀粉和土豆淀粉等淀粉類，結(jié)晶纖維素和輕質(zhì)硅膠、合成硅酸鋁、偏硅酸鋁酸鎂、磷酸氫鈣等無機(jī)物等。粘合劑包括淀粉類、羧甲基纖維素(CMC)、羥丙基纖維素(HPC)、羧甲基纖維素鈉和聚乙烯吡咯烷酮等。另外，為使其在下消化道中也只崩解成初級粒子，所用的崩解劑包括淀粉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和羧甲基淀粉鈉等。給片劑和顆粒進(jìn)行腸溶性包衣的包膜劑包括在pH為5～6的環(huán)境中溶解的羥丙甲基纖維素酞酸酯、羧甲基乙基纖維素、乙酸酞酸纖維素、甲基丙烯酸共聚物或在堿性范圍內(nèi)溶解的蟲膠等。
必須用本發(fā)明組合物治療或改善癥狀的患者可以服用本發(fā)明的組合物，一般來說，活性成分的日劑量約為0.1～100,000mg，優(yōu)選1～50,000mg，更優(yōu)選10～10,000mg，可以一次或分開服用。給藥量可以根據(jù)患者的年齡、體重和用藥目的個(gè)別確定。
實(shí)施例實(shí)施例1(幽門結(jié)扎大鼠實(shí)驗(yàn)，其1)用6只禁食隔夜、體重約為300g的雄性Wistar大鼠，在乙醚麻醉下將相當(dāng)于幽門上部的腹部切開小口，在保證胃內(nèi)容物不流入十二指腸的條件下用手術(shù)線將幽門和十二指腸的接合部位輕輕結(jié)扎，然后迅速縫合切開部位。大鼠麻醉蘇醒1小時(shí)后，分別口服5ml溶有從牛奶中提取的乳鐵蛋白和免疫球蛋白(Tatua Milk Biologics公司產(chǎn)品，純度分別為90％和75％)各50mg的蒸餾水。在給與乳鐵蛋白后15分鐘、30分鐘和1小時(shí)分別處死兩只大鼠，將胃內(nèi)容物洗至300ml的燒杯中，再用生理鹽水將胃壁充分洗凈。合并胃內(nèi)容物和洗滌液，精確配成200ml作為受檢液，用高效液相色譜法測定受檢液中溶解的乳鐵蛋白和免疫球蛋白IgG1的含量。
結(jié)果如下表所示，殘留乳鐵蛋白含量分別為給藥15分鐘后，4.6％；30分鐘后，痕跡量；60分鐘后，0。
表1生理活性蛋白在胃中的水解時(shí)間(分鐘)乳鐵蛋白(mg/每只胃) IgG1(胃)152.1(4.6％)3.1(8.3％)30痕跡量痕跡量600 0()中數(shù)據(jù)表示殘留量與給藥量的比率實(shí)施例2(幽門結(jié)扎大鼠實(shí)驗(yàn)，其2)用6只禁食隔夜、體重約為250g的雄性Wistar大鼠，在乙醚麻醉下將相當(dāng)于幽門上部的腹部切開小口，用手術(shù)線將幽門和十二指腸的接合部位輕輕結(jié)扎，然后迅速縫合切開部位。大鼠麻醉蘇醒1小時(shí)后，分別口服5ml溶有從牛奶中提取的乳鐵蛋白和免疫球蛋白IgG1(Tatua Milk Biologics公司)各100mg和5mg胃蛋白酶抑制劑的生理鹽水。在給與乳鐵蛋白后15分鐘、30分鐘和1小時(shí)分別處死兩只大鼠，按實(shí)施例1的方法洗出胃內(nèi)容物，精確配成200ml，用高效液相色譜法測定受檢液中溶解的乳鐵蛋白含量。
結(jié)果如下表所示，殘留乳鐵蛋白含量分別為給藥15分鐘后，53％；30分鐘后，23％；60分鐘后，10％。與實(shí)施例1相比，乳鐵蛋白的殘留量明顯較多，由此可知與其胃內(nèi)分解密切相關(guān)的是胃蛋白酶。
表2胃蛋白酶抑制劑存在時(shí)生理活性蛋白在胃中的水解時(shí)間(分鐘) 乳鐵蛋白(mg/每只胃) IgG1(胃)15 47.7(53％)15.7(20.9％)30 20.7(23％)8.3(11.1％)60 0.9(10％) 11.0(14.7％)()中數(shù)據(jù)表示殘留量與給藥量的比率實(shí)施例3用6只自由攝食飲水、體重約為300g的雄性Wistar大鼠，在乙醚麻醉下將腹部切開小口，結(jié)扎幽門部和盲腸上部的回腸部，作成小腸環(huán)，然后分別用注射筒將5ml溶有從牛奶中提取的乳鐵蛋白和免疫球蛋白IgG1(TatuaMilk Biologics公司，純度約為90％)各100mg的生理鹽水注入小腸環(huán)中，迅速縫合腹部的切開部位，將大鼠放回籠中。分別在30分鐘、60分鐘和120分鐘后摘除小腸環(huán)，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到燒杯中，用生理鹽水洗凈腸管壁，合并內(nèi)容物和洗滌液作為受檢液。用高效液相色譜法測定受檢液中乳鐵蛋白的含量，結(jié)果如下表所示。
表3生理活性蛋白在小腸中的水解時(shí)間(分鐘) 乳鐵蛋白(mg/每只胃) IgG1(胃)15 83(92％) 47(63％)30 89(99％) 22(29％)60 80(89％) 7(9％)()中數(shù)據(jù)表示殘留量與給藥量的比率由表3可知，乳鐵蛋白在小腸中幾乎不分解，但免疫球蛋白IgG1在半衰期(30分鐘)緩慢分解。
實(shí)施例4將10g雄性Wistar大鼠的新鮮糞便加到50ml蒸餾水中，用組織搗碎勻漿機(jī)(Polytron Homogenizer)均漿。往10ml勻漿中加入從牛奶中提取的乳鐵蛋白和免疫球蛋白IgG1各100mg溶解，37℃在氮取代厭氧瓶中溫育24、72和168小時(shí)后，用高效液相色譜法測定溶解的乳鐵蛋白和免疫球蛋白的含量。
結(jié)果如表4所示，乳鐵蛋白和糞便一起溫育一周后幾乎不分解，但免疫蛋白溫育72小時(shí)后完全消失。由此可知，免疫球蛋白IgG1在腸內(nèi)細(xì)菌的作用下被水解，乳鐵蛋白對腸內(nèi)細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白酶具有明顯抵抗性。
表4在腸內(nèi)細(xì)菌作用下生理活性蛋白的分解時(shí)間(分鐘) 乳鐵蛋白(mg/每只胃) IgG1(胃)15 72(80％) 13(17％)30 70(78％) 0(0％)60 76(84％) 0(0％)()中數(shù)據(jù)表示殘留量與給藥量的比率實(shí)施例5往日本藥典1號的腸溶性硬膠囊中裝入含有10份乳鐵蛋白和5份羥甲基纖維素鈣的微粒狀物(不加水，將兩者在干燥狀態(tài)下混合，然后在干燥狀態(tài)下用打碎機(jī)強(qiáng)壓成型，制成薄大平坦的圓盤，將其粉碎，過16目篩制成粒徑約為0.1mm的顆粒)150mg，嵌合部用腸溶性基質(zhì)密封，制成腸溶性乳鐵蛋白硬膠囊制劑。所述腸溶性硬膠囊是將在pH＝3.0以下的酸性環(huán)境中不溶解，在中性至弱堿性環(huán)境中溶解的羥烷基纖維素(信越化學(xué)工業(yè)，商品名HP-55)成型加工而成的。
實(shí)施例6將10份含有8％免疫球蛋白的脫脂牛初乳和10份微晶纖維素混合，按照實(shí)施例5的相同方法制成微粒狀物，將150mg裝入實(shí)施例5所述的硬膠囊中，嵌合部用腸溶性基質(zhì)密封，制成腸溶性脫脂初乳制劑。
實(shí)施例7用下述方法制備含有50mg乳鐵蛋白、直徑為8mm的片劑將乳鐵蛋白粉末和乳糖、纖維素、羧甲基纖維素鈣在干燥狀態(tài)下混合，不加水，所得混合物在干燥狀態(tài)下用打碎機(jī)強(qiáng)壓成型，制成薄大平坦的圓盤，將其粉碎，過16目篩制成一定粒徑的顆粒，往顆粒中加入脂肪酸蔗糖酯，打片。往10份明膠和20份核糖核酸鈉中加水，加熱溶解制成0.7mm厚的膜，用平板法形成外衣后干燥，制備腸溶性制劑。
實(shí)施例8往包衣機(jī)(Freund產(chǎn)業(yè)有限公司產(chǎn)品，Hi-coater HCT-48N)中裝入實(shí)施例7所述的外衣形成前的含有50mg乳鐵蛋白、直徑為8mm、重量為180mg的片劑，噴霧由羧甲基乙基纖維素9％、脂肪酸甘油酯1％、乙醇45％和二氯甲烷45％組成的腸溶性包衣液，按與片劑重量比為12％的量進(jìn)行腸溶性包衣。
實(shí)施例9往包衣機(jī)(Freund產(chǎn)業(yè)有限公司產(chǎn)品，HC-MINI)中裝入實(shí)施例7所述的外衣形成前的含有50mg乳鐵蛋白、直徑為8mm、重量為180mg的片劑，僅按計(jì)算量噴霧將來自玉米粒中得到的蛋白質(zhì)、8份吐溫和2份甘油溶于150份70％乙醇所得的溶液，按與片劑重量比為10％的量制成包衣片。
實(shí)施例10往包衣機(jī)(Freund產(chǎn)業(yè)有限公司產(chǎn)品，HC-MINI)中裝入實(shí)施例7所述的外衣形成前的含有50mg乳鐵蛋白、直徑為8mm、重量為180mg的片劑，僅按計(jì)算量噴霧將30份蟲膠和7份蓖麻子油溶于63份異丙醇所得的溶液，按與片劑重量比為10％的量制成包衣片。
治療效果用上述方法制得的腸溶性組合物有令人驚奇的效果。例如，乳鐵蛋白腸溶性制劑對目前難治的多種疾病有速效性治療效果。
(1)如果通過輸血感染C型肝炎，變成急性肝炎后，由慢性肝炎變成肝硬化，最終變成肝癌而死亡。C型肝炎患者的肝癌發(fā)病率高，達(dá)到80％左右。給由C型肝炎發(fā)展成肝癌而腹水潴留的住院患者內(nèi)服乳鐵蛋白腸溶劑(實(shí)施例8或9中制備的制劑)，其療效顯著，簡直讓人難以置信。每天僅內(nèi)服0.9g乳鐵蛋白，3天后腹水被完全吸收、消失，黃疸改善，C型肝炎病毒血中標(biāo)記大幅降低。被醫(yī)生斷言只能存活數(shù)月的患者內(nèi)服一周后就能走路出院。
(2)惡性淋巴瘤發(fā)病的某醫(yī)生用化療法控制癌癥的發(fā)展，苦于其副作用多發(fā)而生活苦惱。為了擺脫這種狀態(tài)，嘗試了多種藥物都無效，甚至還采用了數(shù)個(gè)民間療法，但癥狀仍未見改善。但是，內(nèi)服上述實(shí)施例8或9所制的乳鐵蛋白腸溶片(乳鐵蛋白的日劑量為0.45g)兩天后開始有食欲，三天后臨床試驗(yàn)檢查值的改善程度讓主管醫(yī)生都感到驚訝。此前該患者一直苦于疲勞、嘔吐、傳染病多發(fā)和食欲減退等，生活質(zhì)量低下。由此可知，內(nèi)服乳鐵蛋白腸溶片改善了生活質(zhì)量。
(3)給胃癌手術(shù)后復(fù)發(fā)而引起癌性腹水潴留的患者內(nèi)服乳鐵蛋白腸溶片，其痛苦減輕，因此幾次抽出其腹水。但是，內(nèi)服實(shí)施例8或9所制備的乳鐵蛋白腸溶片(乳鐵蛋白的日劑量為0.45g)一周后腹水才被完全吸收、消失。該患者微熱持續(xù)，脈搏為95次/分鐘，呼吸頻率為23次/分鐘，呈典型的全身性炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndromeSIRS)癥狀，但內(nèi)服乳鐵蛋白一周后上述癥狀消失，食欲恢復(fù)。
(4)13年前開始患有特應(yīng)性皮炎、全身搔癢導(dǎo)致晚上不能熟睡的女性患者服用上述實(shí)施例8或9所制備的乳鐵蛋白腸溶片(乳鐵蛋白的日劑量為0.45g)，內(nèi)服兩天后特應(yīng)性皮疹引起的皮膚發(fā)疹開始減輕，同時(shí)搔癢感消失，能熟睡，因此發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白有解除自身免疫性疾病患者壓力的效果。另外，由于斯耶格倫綜合征(Soegren′s syndrome)導(dǎo)致唾液分泌減少的患者口服乳鐵蛋白綜合征后，唾液pH值立即上升并且分泌量增加，口腔干燥大幅度改善。因此，乳鐵蛋白有明顯改善自身免疫性疾病伴隨的生活質(zhì)量低下的效果。
(5)如上述說明，具有生理活性的某種蛋白質(zhì)其作用發(fā)揮場所多在從十二指腸開始的下消化道。本說明書重點(diǎn)說明了乳鐵蛋白，但在不發(fā)生變化的狀態(tài)下通過胃，進(jìn)入小腸后才溶解，能發(fā)揮至今未有的作用或能大幅減少給藥量的生理活性蛋白不僅僅是乳鐵蛋白。免疫球蛋白和溶菌酶制成腸溶性制劑后也能發(fā)揮乳鐵蛋白的類似效果。另外，為幫助食物消化吸收而口服淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶，其作用發(fā)揮場所在小腸，因此必須制成腸溶性制劑。并且，值得注意的是，現(xiàn)代人的肥胖多能通過在飯后給與生物機(jī)體分泌的消化酶，減少營養(yǎng)成分的吸收來抑制。已知來源于植物的某種蛋白質(zhì)能抑制生物機(jī)體分泌的消化酶，因此在飯后口服淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的抑制劑的腸溶性制劑能抑制肥胖，明顯改善II型糖尿病、高血壓和動(dòng)脈硬化等生活習(xí)慣疾病。因此，本發(fā)明不單單局限于乳鐵蛋白，還能適用于廣范圍的具有生理活性的蛋白質(zhì)。
權(quán)利要求
1.一種口服組合物，其含有一種或一種以上選自酶、乳鐵蛋白、免疫球蛋白、溶菌酶、淀粉酶抑制劑、脂肪酶抑制劑和蛋白酶抑制劑的具有生理活性的蛋白質(zhì)作為活性成分，其特征在于，該組合物具有釋放控制措施，其至少10％或以上的活性成分保持其活性并在下消化道內(nèi)釋放。
2.權(quán)利要求1記載的口服組合物，其中所述活性成分為乳鐵蛋白。
3.權(quán)利要求1或2記載的口服組合物，其用于治療或改善全身性炎癥反應(yīng)綜合征，炎癥性腸疾病，肥胖、糖尿病或高血壓癥等生活習(xí)慣疾病，惡性腫瘤，由C型肝炎病毒、輪狀病毒、皰疹病毒或巨細(xì)胞病毒等病原病毒引起的傳染病，病原微生物引起的傳染病和自身免疫疾病，和/或伴隨上述疾病或狀態(tài)的癥狀。
4.一種口服組合物，其含有一種或一種以上選自酶、乳鐵蛋白、免疫球蛋白、溶菌酶、淀粉酶抑制劑、脂肪酶抑制劑和蛋白酶抑制劑的具有生理活性的蛋白質(zhì)作為活性成分，其特征在于，該組合物具有釋放控制措施，該釋放控制措施包括腸溶性包衣。
5.權(quán)利要求4記載的口服組合物，其中所述活性成分為乳鐵蛋白。
6.權(quán)利要求4或5記載的口服組合物，其用于治療或改善全身性炎癥反應(yīng)綜合征，炎癥性腸疾病，肥胖、糖尿病或高血壓癥等生活習(xí)慣疾病，惡性腫瘤，由C型肝炎病毒、輪狀病毒、皰疹病毒或巨細(xì)胞病毒等病原病毒引起的傳染病，病原微生物引起的傳染病和自身免疫疾病，和/或伴隨上述疾病或狀態(tài)的癥狀。
7.權(quán)利要求4～6任意一項(xiàng)記載的口服組合物，其中，腸溶性包衣含有選自蟲膠、吐溫、羥丙甲基纖維素酞酸酯、羧甲基乙基纖維素、乙酸酞酸纖維素、甲基丙烯酸共聚物、不溶于水的乙基纖維素和甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物的基質(zhì)。
8.權(quán)利要求4記載的口服組合物，其中所述活性成分為乳鐵蛋白，其為散劑、顆粒劑、定量填充散劑或顆粒的膠囊劑或片劑形式，可以通過包括以下的步驟方法制備將乳鐵蛋白粉末和可藥用添加劑在干燥狀態(tài)下混合；根據(jù)需要，將混合物在干燥狀態(tài)下強(qiáng)壓成型，將成型物制成一定大小的微粒狀物或顆粒；然后將微粒狀物或顆粒進(jìn)行腸溶性包衣，或者將混合物、微粒狀物或顆粒打片，再將打片物進(jìn)行腸溶性包衣。
9.一種腸溶性口服組合物的制備方法，該組合物為散劑、顆粒劑、定量填充散劑或顆粒的膠囊劑或片劑形式，其制備方法包括以下步驟將乳鐵蛋白粉末和可藥用添加劑在干燥狀態(tài)下混合；根據(jù)需要，將混合物在干燥狀態(tài)下強(qiáng)壓成型，將成型物制成一定大小的微粒狀物或顆粒；然后將微粒狀物或顆粒進(jìn)行腸溶性包衣，或者將混合物、微粒狀物或顆粒打片，再將打片物進(jìn)行腸溶性包衣。
10.權(quán)利要求4記載的口服組合物，其中所述活性成分為乳鐵蛋白，其適合日本藥典一般試驗(yàn)方法中腸溶性制劑的崩解試驗(yàn)。
全文摘要
本發(fā)明涉及在口服具有生理活性的蛋白質(zhì)時(shí)運(yùn)用了使其有效發(fā)揮生理活性方法的醫(yī)藥品和食品。本發(fā)明的口服組合物含有一種或一種以上生理活性蛋白質(zhì)，它具有釋放控制措施。本發(fā)明組合物至少10％或以上的活性成分保持其活性到達(dá)下消化道。通過使具有生理活性的蛋白質(zhì)在胃中不被分解而到達(dá)小腸，使其發(fā)揮至今未有的作用或確切地發(fā)揮作用。本發(fā)明組合物所含的生理活性蛋白優(yōu)選乳鐵蛋白、免疫球蛋白、溶菌酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶或消化酶抑制劑。
文檔編號A61P43/00GK1481253SQ01820597
公開日2004年3月10日 申請日期2001年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月24日
發(fā)明者安藤邦雄, 吉, 鈴木清吉, 男, 福田昭男, 川合樹里, 里, 利近, 小笠原利近, 井草一夫, 夫 申請人:株式會(huì)社核內(nèi)受容體研究所