專利名稱：一種凍干人血漿病毒滅活方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用材料消毒方法，特別是一種凍干人血漿病毒滅活方法。
背景技術(shù)：
長期以來成分輸血在救死扶傷中成為醫(yī)學(xué)上的重要手段。然而自二十世紀六十年代以后，肝炎病毒通過輸血引起肝炎傳染的嚴重事件，人們對血漿的病毒安全性有了新的關(guān)注。八十年代中期，艾滋病的出現(xiàn)以及艾滋病毒通過注射血液制品導(dǎo)致傳染的事件，引起了世界各國的高度重視。歐美各國臨床上要求使用經(jīng)病毒滅活的全血漿。我國政府1995年禁止使用未經(jīng)病毒滅活的凍干人全血漿，生產(chǎn)凍干人血漿的廠家均已停止生產(chǎn)。但現(xiàn)在國內(nèi)各地的中心血站提供的新鮮冰凍血漿仍未使用病毒滅活的技術(shù)措施，因此，我國現(xiàn)行使用新鮮冰凍血漿應(yīng)認為是一種高危險度的血液制品。全血漿的病毒滅活技術(shù)成為我國輸血界急迫需要解決的一項課題。
目前，國外在制備病毒滅活血漿或血液制品時，已經(jīng)使用S/D、低PH孵放和巴氏滅活法等，其中S/D病毒滅活技術(shù)得到了美國衛(wèi)生部門的認可，其使用有十五年的歷史，其病毒滅活效果是肯定的。S/D滅活病毒的方法是，在血漿中加入1％的TNBP(磷酸三丁酯)和1％的Tritonx-100(曲拉通一100)，加熱至30±1℃，攪拌4小時，即可滅活病毒。盡管S/D、低PH孵放和巴氏滅活法能使原有的血液制品病毒傳播的可能性大為降低，由于上述滅活病毒方法對病毒滅活機制的差異性而不能保證受者在大量、多次輸注這些制品而不受其感染。已知S/D法僅能滅活脂包膜病毒，而對細小病毒不能滅活，而目前國外的病毒滅活血漿僅采用一步法進行病毒滅活，因此，這種一步法制備的病毒滅活血漿仍存在有病毒感染的危險性，同時，S/D滅活病毒血漿為冰凍劑型，其儲存和運輸要求-30℃的條件，為儲存和運輸造成較大困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，采用雙病毒滅活方法使血漿中的病毒滅活更徹底，并且便于儲存和運輸。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的，本方法包含有以下步驟，(1)將冰凍血漿置于融漿罐中，融漿水溫≤30℃，使?jié){液溫度升至20-25℃，(2)上述的融漿置于滅活病毒罐中，將重量比1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血漿中并攪拌均勻和升溫，當(dāng)血漿升溫至30±1℃時，保持4小時，其間攪拌不停止，(3)將滅活病毒的血漿從滅活病毒罐中移入杯式離心機中，并加入體積比5％的植物油，進行離心分離20分鐘，棄油相保留水相血漿備用，(4)將分離后的水相血漿經(jīng)含有C18樹脂層析柱流出，制得不含磷酸三丁酯和曲拉通-100的血漿，(5)將上述血漿經(jīng)超濾膜進行濃縮，(6)將濃縮的血漿經(jīng)孔徑為0.2微米的濾膜過濾除菌后進行分裝，其特征在于還有以下步驟，(7)將分裝的血漿瓶在0-4℃環(huán)境中預(yù)凍，并于-40℃以下旋凍，然后置于冷凍干燥機內(nèi)冷凍至-40℃以下，并進行抽真空，真空度為10pa以下，升華40～45小時，然后緩慢升溫至小于35℃，整個過程為100～120小時，瓶內(nèi)血漿呈粉末狀，對瓶口進行真空密封，(8)將冷凍干燥后的瓶裝血漿置于沸水中浴加溫30分鐘，沸水溫度為98-100℃。本發(fā)明由于在現(xiàn)有的S/D病毒滅活工藝制取的血漿進一步實施干熱滅活技術(shù)，和冷凍干燥技術(shù)，血漿的劑型為粉末狀，因此，本發(fā)明所制取的血漿具有輸注更安全，且存儲溫度為2-8℃，三年，便于存儲和運輸。
具體實施例方式取AB型或者同種凝集素含量較低的A型或者B型的血漿20l置于(1)融漿罐中進行融漿，融漿水溫20-30℃，不停地進行攪拌，當(dāng)漿液溫度升至23℃為止；(2)將上述融漿置于滅活病毒罐中，在罐外先配2LS/D濃液，即取磷酸三丁酯224.4Ml(11％，W/V)和曲拉通-100為220克(11％，W/V)加入注射用水至2L攪勻后以500ml/分鐘的速度加入到滅活病毒罐內(nèi)的血漿中，此時血漿的體積為22L，攪拌并升溫至30±1℃后，繼續(xù)攪拌4小時，實現(xiàn)滅活病毒；(3)將滅活病毒的血漿置于杯式離心機，取1.1L蓖麻油加入到血漿中攪拌30分鐘進行萃取后，開動離心機，其轉(zhuǎn)速為2500轉(zhuǎn)/分，保持溫度20±1℃，分離20分鐘，用泵抽出上層油層廢棄物約1.3L，大部分的滅活劑磷酸三丁酯和曲拉通-100從血漿中取出，得水相血漿約21.6L；(4)將上述的水相血漿注入樹脂C18層析柱流出進行層析分離，將血漿中的殘余滅活劑吸附在C18樹脂中。要求每次經(jīng)過C18樹脂的血漿量為6倍的樹脂量，流速為60cm/小時，得層析柱流出液約25L，由于注射用水進行沖洗樹脂柱，所以流出液量會增加；(5)將上述的層析柱流出液在分子量為10K的超濾膜中進行濃縮，得濃縮液約18-19L，其濃度約為5-5.5％；(6)濃縮液經(jīng)孔徑為0.2微米的濾膜過濾進行除菌后用玻璃瓶分裝，分裝瓶規(guī)格可以有100毫升、50毫升和25毫升/瓶，瓶塞半壓在瓶口中；(7)對分裝瓶中的血漿進行冷凍干燥，首先對分裝瓶進行4℃的預(yù)凍，然后將分裝瓶放在凍干機內(nèi)，凍干機溫度為-40℃以下，同時抽真空，真空度為10pa以下進行升華40-45小時后，逐漸地緩緩升溫到≤35℃，全部過程為100-120小時，得粉末血漿，血漿中的水份小于1％，對分裝瓶進行真空密封；(8)對密封的瓶內(nèi)粉末血漿進行干熱滅活病毒處理，將分裝瓶置于沸水浴中加熱30分鐘，沸水溫度為98-100℃，得到二次滅活病毒的凍干血漿成品。
凍干血漿的適應(yīng)癥與使用方法，本品主要用于防止手術(shù)、燒傷、失血、創(chuàng)傷性休克及治療低蛋白血癥，凝血因子水平低下者。使用本品時應(yīng)先用30-37℃的0.1％枸櫞酸溶液溶解，并以帶有濾網(wǎng)的輸血器進行靜脈輸注，輸注劑量一般為12-15毫升/公斤體重。
本發(fā)明制品于2002年1月已經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢測，各項指標(biāo)均符合要求。
權(quán)利要求
1.一種凍干人血漿病毒滅活方法，本方法包含有以下步驟，(1)將冰凍血漿置于融漿罐中，融漿水溫≤30℃，使?jié){液溫度升至20-25℃，(2)上述的融漿置于滅活病毒罐中，將重量比1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血漿中并攪拌均勻和升溫，當(dāng)血漿升溫至30±1℃時，保持4小時，其間攪拌不停止，(3)將滅活病毒的血漿從滅活病毒罐中移入杯式離心機中，并加入體積比5％的植物油，進行離心分離20分鐘，棄油相保留水相血漿備用，(4)將分離后的水相血漿經(jīng)含有C18樹脂層析柱流出，制得不含磷酸三丁酯和曲拉通-100的血漿，(5)將上述血漿經(jīng)超濾膜進行濃縮，(6)將濃縮的血漿經(jīng)孔徑為0.2微米的膜過濾除菌后進行分裝，其特征在于還有以下步驟，(7)將分裝的血漿瓶在0-4℃冷浴中預(yù)凍，并于-40℃下旋凍，然后置于冷凍干燥機內(nèi)冷凍至-40℃以下，并進行抽真空，真空度為10pa以下，升華40～45小時，然后緩慢升溫至小于35℃，整個過程為100～120小時，瓶內(nèi)血漿呈粉末狀，對瓶口進行真空密封，(8)將冷凍干燥后的瓶裝血漿置于沸水浴中加溫30分鐘。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種凍干人血漿病毒滅活方法，其特征在于步驟(8)所述的沸水溫度為98-100℃。
全文摘要
一種凍干人血漿病毒滅活方法,它包含有以下步驟,冰凍血漿→融漿→S/D滅活病毒→植物萃取滅活劑→C18層析柱吸附滅活劑→超濾濃縮→濾膜除菌分裝,其特征在于:將分裝的血漿置于凍干機內(nèi)進行真空低溫升華干燥密封→在沸水浴中進行干熱滅活制得粉狀成品血漿。本發(fā)明的血漿制品病毒滅活更徹底,使用更安全,且具有保存和運輸更方便的優(yōu)點。
文檔編號A61L2/16GK1376520SQ02103960
公開日2002年10月30日 申請日期2002年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月28日
發(fā)明者安康, 馬小偉, 潘若文, 劉文芳, 范蓓 申請人:華蘭生物工程股份有限公司