專利名稱：預(yù)防和治療視網(wǎng)膜和角膜血管新生的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
目前臨床上尚沒(méi)有治療眼內(nèi)血管新生的有效藥物和方法。臨床上采用的激光光凝療法可造成視網(wǎng)膜嚴(yán)重的不可逆損傷。曾有人考慮采用地塞米松治療，但效果并不明顯，且毒副作用很大，限制了其應(yīng)用。因此尋找能夠防治眼內(nèi)血管新生且毒副作用小的藥物具有重大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)意義。
新生血管的形成，包括血管內(nèi)皮細(xì)胞基膜的降解、內(nèi)皮細(xì)胞遷移、內(nèi)皮細(xì)胞增生、新生血管的成熟等幾個(gè)步驟，這些步驟受多種生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF1)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)等。但在這些因子中，唯有VEGF特異性地對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有強(qiáng)有力的促分裂、遷移作用。眼內(nèi)血管新生與VEGF表達(dá)在時(shí)間、空間上有著極高的相關(guān)性，已有越來(lái)越多的證據(jù)表明，VEGF在眼內(nèi)血管新生中起著關(guān)鍵性作用。人類VEGF基因由8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子組成，長(zhǎng)約14kb。由于RNA剪切方式不同，VEGF家族至少有4個(gè)成員，分別為VEGF121，VEGF165，VEGF189，VEGF206。其中VEGF165為最主要的異構(gòu)體。內(nèi)皮細(xì)胞上VEGF受體包括fms樣酪氨酸蛋白激酶(FLT)和激酶插入功能域受體(KDR)，VEGF通過(guò)誘導(dǎo)自身受體磷酸化從而啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)系統(tǒng)。
4’，5，7-三羥基異黃酮(Genistein，簡(jiǎn)寫(xiě)Gen)是主要從豆類等植物中提取的一種異黃酮類化合物，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)Gen可以抑制多種腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，但其作用的生化位點(diǎn)和作用機(jī)制還不清楚，目前提出的幾種可能機(jī)制包括抑制酪氨酸激酶活性，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性，抗氧化作用等。Gen可在腸道通過(guò)被動(dòng)機(jī)制被迅速吸收，在肝臟轉(zhuǎn)化為金雀異黃素-7-氧-β葡糖苷酶(genistein-7-O-βglucuronide)結(jié)合物，經(jīng)膽汁排入十二指腸，再由腸道重吸收，形成腸肝循環(huán)。Gen已有保健食品上市，尚未有作為藥物使用的報(bào)道。Gen屬于低毒物質(zhì)，其對(duì)人體生理代謝有益的調(diào)節(jié)及豐富的大豆資源，為其開(kāi)發(fā)利用展示了廣闊的前景。
經(jīng)整體動(dòng)物試驗(yàn)和培養(yǎng)細(xì)胞試驗(yàn)證實(shí)，該藥物可以明顯抑制疾病模型C57BL/6小鼠的視網(wǎng)膜血管新生，也可抑制多種因素所致兔和大鼠的角膜血管新生。該藥物還可以抑制物理缺氧和化學(xué)缺氧所致的兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞VEGF和HIF1蛋白表達(dá)，表明該藥物通過(guò)抑制血管新生的誘導(dǎo)因子表達(dá)而發(fā)揮預(yù)防和治療視網(wǎng)膜和角膜血管新生。內(nèi)容包括(一)Gen和大豆異黃酮提取物對(duì)小鼠視網(wǎng)膜血管新生的作用C57BL/6小鼠相對(duì)缺氧造成視網(wǎng)膜血管新生模型。觀察正常對(duì)照組小鼠眼切片，僅見(jiàn)極少量有突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞，模型處理組突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)明顯多于正常組，Gen給藥組和給大豆異黃酮提取物組突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)較模型處理組明顯減少，且呈劑量依賴性。模型處理組視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF和HIF1的表達(dá)明顯較正常組強(qiáng)。Gen給藥組和給大豆異黃酮提取物組與模型處理組比較，VEGF和HIF1的表達(dá)明顯減弱。表明Gen和大豆異黃酮提取物可以抑制小鼠視網(wǎng)膜血管新生。(二)Gen和大豆異黃酮提取物對(duì)角膜血管新生的抑制作用觀察縫線所致兔角膜血管新生進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)角膜縫線后第三天，角膜充血，并有新生血管伸入角膜緣內(nèi)，每根縫線上端出現(xiàn)新生血管，長(zhǎng)度0.6mm左右。觀察至縫線后第20天，可見(jiàn)給藥組新生血管的支數(shù)和總長(zhǎng)度較對(duì)照組明顯減少，血管新生的進(jìn)程也減慢。表明Gen和大豆異黃酮提取物可抑制縫線所致兔角膜血管新生。
觀察堿燒傷所致大鼠角膜血管新生進(jìn)展，1周時(shí)周邊有新生血管浸入，給藥組新生血管支數(shù)較對(duì)照組明顯減少，2周后血管閉塞呈線狀，直至消失。對(duì)照組2周后出現(xiàn)血管閉塞，約5周后血管消失。表明Gen和大豆異黃酮提取物可明顯抑制堿燒傷所致的角膜血管新生。(三)Gen對(duì)化學(xué)缺氧和物理缺氧所致兔RPE細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響采用免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)和激光共聚焦顯微鏡，以熒光比值來(lái)表示VEGF的表達(dá)，半定量分析氯化鈷和物理缺氧處理不同時(shí)間對(duì)體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)作用，以及Gen對(duì)氯化鈷和物理缺氧誘導(dǎo)的VEGF表達(dá)的影響。發(fā)現(xiàn)對(duì)照組有低水平VEGF蛋白的表達(dá)，隨著氯化鈷和物理缺氧處理時(shí)間的延長(zhǎng)，熒光比值的變化表現(xiàn)為時(shí)間依賴性，在6h點(diǎn)達(dá)到高峰。Gen(50、100、200μmol/L組)與DMSO對(duì)照組相比，均可明顯抑制氯化鈷和物理缺氧誘導(dǎo)的VEGF的表達(dá)，且此種抑制作用呈濃度依賴性。以上結(jié)果顯示Gen可抑制氯化鈷和物理缺氧誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞VEGF表達(dá)，表明該藥物通過(guò)抑制血管新生的誘導(dǎo)因子VEGF表達(dá)而發(fā)揮預(yù)防和治療視網(wǎng)膜和角膜血管新生。
四、具體實(shí)施方案(一)Gen和大豆異黃酮提取物對(duì)小鼠視網(wǎng)膜血管新生的作用1.材料和方法1.1 材料和主要儀器Gen，98％，購(gòu)自Sigma公司，溶于1％羧甲基纖維素鈉(CMCC)；大豆異黃酮提取物(Gen含量70％)，本室提取，溶于1％CMCC；VEGF蛋白單克隆抗體購(gòu)自NEOMARK公司；HIF-1蛋白單克隆抗體購(gòu)自NOVUS公司；山羊抗小鼠IgG-FITC、羊抗小鼠IgG-CY3購(gòu)自Sigma公司；測(cè)氧儀購(gòu)自上海嘉定學(xué)聯(lián)儀表廠；LSM510型激光共聚焦顯微鏡購(gòu)自德國(guó)Zeiss公司。1.2 動(dòng)物模型的制作選未生育過(guò)的成年C57BL/6母鼠(上海中科院動(dòng)物中心提供)，2只一組分別與1只公鼠同籠飼養(yǎng)，隨機(jī)分為給氧組，三個(gè)給氧給Gen組(Gen 50、100、200mg/kg)，三個(gè)給氧給大豆異黃酮提取物組(70mg/kg、140mg/Kg、280mg/Kg)和對(duì)照組。每組平均出生10只新生C57BL/6小鼠。將給氧組、給氧給Gen組和給氧給大豆異黃酮提取物組各10只小鼠于生后7d與同籠母鼠一起放入密閉的干燥瓶中。干燥瓶中接入100％濕潤(rùn)的氧氣，維持氧箱內(nèi)氧的體積分?jǐn)?shù)為75±5％，每3-6小時(shí)調(diào)節(jié)一次，用測(cè)氧儀監(jiān)測(cè)。每日一次打開(kāi)氧箱加食，換水。對(duì)照組10只小鼠生活在正常氧環(huán)境中。1.3 視網(wǎng)膜切片計(jì)數(shù)視網(wǎng)膜血管的增生每組小鼠均于生后21d處死，眼球摘除并標(biāo)記方向。摘除的眼球浸泡在4％中性甲醛溶液中24小時(shí)，常規(guī)脫水，石蠟包埋。矢狀面平行視神經(jīng)連續(xù)6μm切片，每只眼隨機(jī)抽取5個(gè)切面(有視神經(jīng)斷面的切面不記入在內(nèi))，雪夫高碘酸—蘇木素(PAS)染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)目。1.4 免疫熒光法檢測(cè)視網(wǎng)膜中VEGF、HIF1的表達(dá)從給氧組、給氧給藥組、給大豆異黃酮提取物組及對(duì)照組中隨機(jī)抽取10張未經(jīng)染色的視網(wǎng)膜切片，常規(guī)脫蠟后，枸櫞酸緩沖液中100℃抗原修復(fù)15分鐘，分別予VEGF，HIF1單抗4℃孵育過(guò)夜。PBS洗3次，每次5分鐘。而后予以FITC或CY3標(biāo)記的二抗孵育1小時(shí)，PBS洗3次，每次5分鐘。在激光共聚焦顯微鏡下觀察，成像。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用非配對(duì)t檢驗(yàn)法分別比較給氧組與對(duì)照組，給氧組與給氧給藥組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)目。P＜0.05，表示有顯著性差異。2.結(jié)果2.1計(jì)數(shù)視網(wǎng)膜血管的新生觀察正常對(duì)照組小鼠眼切片，僅見(jiàn)極少量有突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞，模型處理組突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)明顯多于正常組，Gen給藥組和給大豆異黃酮提取物組突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)較模型處理組明顯減少，且呈劑量依賴性。2.2視網(wǎng)膜中VEGF、HIF1的表達(dá)缺氧處理組視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF、HIF1的表達(dá)明顯較正常組強(qiáng)。Gen給藥組和給大豆異黃酮提取物組與缺氧處理組比較，熒光強(qiáng)度弱，且呈劑量依賴性。(二)Gen和大豆異黃酮提取物對(duì)角膜血管新生的抑制作用1.材料與方法1.1 材料和主要儀器Gen，98％，溶于1％CMCC或0.05％DMSO，大豆異黃酮提取物(Gen含量70％)，本室提取，溶于1％CMCC或0.05％DMSO。1.2 大耳白兔，重2.0～2.2kg。兩眼進(jìn)行角膜縫線，在丁卡因表面麻醉下，以1-0號(hào)絲線在角膜上方縫3針。將兔隨機(jī)分為7組，每組5只。對(duì)照組灌胃0.5％CMCC，給藥組分別灌胃Gen 15、30、60mg/kg和灌胃大豆異黃酮提取物25、50、100mg/kg。1.3Wistar大鼠，重300～350g，全麻后對(duì)角膜中央?yún)^(qū)實(shí)施堿性燒傷，用直徑為5mm的圓形濾紙，浸于1.0M氫氧化鈉溶液10μl，置于大鼠角膜中央，10秒后取下，立即用無(wú)菌生理鹽水沖洗1分鐘。對(duì)照組滴眼0.05％DMSO，每日3次，每次0.1ml，給藥組分別滴眼Gen 0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.08mg/ml，大豆異黃酮提取物0.03、0.06、0.12mg/ml，每日3次，每次0.1ml。2.結(jié)果2.1 Gen和大豆異黃酮提取物對(duì)縫線所致兔角膜血管新生的影響用手術(shù)放大鏡觀察兔角膜血管新生，測(cè)量新生血管的支數(shù)和總長(zhǎng)度。發(fā)現(xiàn)角膜縫線后第三天，角膜充血，并有新生血管伸入角膜緣內(nèi)，每根縫線上端出現(xiàn)3～7支新生血管，長(zhǎng)度0.6mm左右。觀察至縫線后第20天，可見(jiàn)給藥組新生血管的支數(shù)和總長(zhǎng)度較對(duì)照組明顯減少，血管新生的進(jìn)程也減慢。表明Gen和大豆異黃酮提取物可抑制縫線所致兔角膜血管新生。2.2 Gen和大豆異黃酮提取物對(duì)堿燒傷所致大鼠角膜血管新生的影響以裂隙燈觀察角膜新生血管進(jìn)展，1周時(shí)周邊有新生血管浸入，給藥組新生血管支數(shù)較對(duì)照組明顯減少，2周后血管閉塞呈線狀，直至消失。對(duì)照組2周后出現(xiàn)血管閉塞，約5周后血管消失。表明Gen可明顯抑制堿燒傷所致的角膜血管新生。(三)Gen對(duì)化學(xué)缺氧和物理缺氧所致兔RPE細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響1.材料和方法1.1材料和儀器；Dulbecco`s modified eagle medium(DMEM)培養(yǎng)基，胰蛋白酶購(gòu)自GIBCO公司；胎生牛血清購(gòu)自上海浦東高橋獸醫(yī)站；Dimethyl sulfoxide(DMSO)購(gòu)自AMRESCO公司；VEGF蛋白單克隆抗體購(gòu)自NEOMARK公司；山羊抗小鼠IgG-FITC購(gòu)自Sigma公司；多聚賴氨酸購(gòu)自上海生物工程技術(shù)有限公司；Gen購(gòu)自Sigma公司，以DMSO助溶(DMSO終濃度＜0.05％)；TY80B型脫色搖床購(gòu)自南京大學(xué)生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司；6孔培養(yǎng)板購(gòu)自丹麥NUNC公司；LSM510型激光共聚焦顯微鏡為德國(guó)Zeiss公司產(chǎn)品。1.2兔RPE細(xì)胞的培養(yǎng)空氣針處死灰兔2～3只后，即刻取下兔眼，浸泡于0.1M PBS(NaCl 8.00g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，K2HPO40.2g溶于1000ml蒸餾水，pH7.4)中，4℃冰箱1h。無(wú)菌條件下剪開(kāi)眼球，棄去眼前節(jié)及玻璃體，完整吸除視網(wǎng)膜神經(jīng)層。眼杯內(nèi)用D-Hanks液(NaCl 8.00g，KCl 0.40g，Na2HPO4·H2O 0.06g，KH2PO40.06g，NaHCO30.35g溶于1000ml蒸餾水，pH7.4)沖洗二遍，加入0.25％胰蛋白酶，37℃消化30min，用滴管吹打使RPE細(xì)胞分離，收集細(xì)胞，離心洗滌后加入DMEM培養(yǎng)液(含100U/ml青霉素鈉，100μg/ml鏈霉素，20％新生牛血清，pH7.4)，接種于50ml培養(yǎng)瓶中，每3d換液一次。細(xì)胞長(zhǎng)至近融合狀態(tài)時(shí)，用0.25％胰酶消化，傳代。3～4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。1.3 氯化鈷模擬缺氧將25×25mm蓋玻片洗凈常規(guī)消毒處理后，浸泡于0.1％多聚賴氨酸中2～4h，取出晾干2～4h，放入6孔培養(yǎng)板中備用。將傳至第三代的RPE細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中的蓋玻片上，待細(xì)胞長(zhǎng)滿玻片的50％～60％時(shí)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。傾去培養(yǎng)液，用D-Hanks液沖洗2～3遍后，加入含有終濃度為125μmol/L氯化鈷的DMEM培養(yǎng)液，分別繼續(xù)培養(yǎng)0，1，2，4，6h。傾去培養(yǎng)液，用于免疫熒光試驗(yàn)。1.4 物理缺氧將傳至第三代的RPE細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中的蓋玻片上，待細(xì)胞長(zhǎng)滿玻片的50％～60％時(shí)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。傾去培養(yǎng)液，用D-Hanks液沖洗2～3遍后，置于95％N2、5％CO2的37℃培養(yǎng)箱中，分別繼續(xù)培養(yǎng)0，1，2，4，6h。傾去培養(yǎng)液，用于免疫熒光試驗(yàn)。1.5 免疫組織化學(xué)試驗(yàn)和激光共聚焦顯微鏡下半定量觀察分別將經(jīng)缺氧和氯化鈷處理及Gen預(yù)處理的RPE細(xì)胞置于脫色搖床上用4℃PBS沖洗2次，每次5min。100％甲醇室溫固定10min。用4℃PBS沖洗細(xì)胞2次。加入小鼠抗VEGF蛋白的單克隆抗體(1∶200稀釋)50μl，4℃孵育1h。用4℃PBS沖洗細(xì)胞4次。加入山羊抗小鼠IgG-FITC(1∶200稀釋)50μl，4℃孵育1h。用4℃PBS沖洗細(xì)胞4次。每待測(cè)樣品加入200μl PBS后，分別置于聯(lián)結(jié)電腦的激光共聚焦顯微鏡下，×40物鏡，7％濾光片，激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm，預(yù)掃描后選定最佳細(xì)胞掃描參數(shù)，并在實(shí)驗(yàn)中保持不變。每個(gè)視野激光掃描2次后，可紀(jì)錄全細(xì)胞中的平均熒光強(qiáng)度，并存儲(chǔ)所采集的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本實(shí)驗(yàn)以全細(xì)胞中的平均熒光強(qiáng)度作為判斷VEGF表達(dá)的指標(biāo)。2、結(jié)果2.1 RPE細(xì)胞培養(yǎng)及形態(tài)觀察原代培養(yǎng)的兔RPE細(xì)胞多呈扁平多角形，胞漿內(nèi)充滿黑色或褐色色素顆粒。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入分裂期后，細(xì)胞內(nèi)色素顆粒隨多次分裂逐漸稀釋減少，細(xì)胞逐漸透明，至第三、四代，細(xì)胞內(nèi)無(wú)明顯的色素顆粒，而成均一透明的單層梭形細(xì)胞。2.2 氯化鈷模擬缺氧對(duì)RPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響125μmol/L氯化鈷處理后，選取0、1、2、4、6h細(xì)胞。在激光共聚焦熒光顯微鏡下可觀察到與不加一抗組相比，缺氧0h組胞漿中有較弱的熒光，提示有低水平VEGF蛋白的表達(dá)。而后隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，熒光比值的增加表現(xiàn)為時(shí)間依賴性，氯化鈷處理4h后胞漿中熒光比值的增加趨緩，形成平臺(tái)期，在缺氧6h達(dá)到高峰。(圖1)2.3 Gen對(duì)氯化鈷模擬缺氧4h RPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響以125μmol/L氯化鈷+DMSO處理RPE細(xì)胞4h為對(duì)照組，125μmol/L氯化鈷+終濃度分別為50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L Gen處理RPE細(xì)胞4h后的熒光比值明顯降低，且隨濃度的增高依次遞減。平均熒光強(qiáng)度比值分析提示Gen可顯著抑制氯化鈷模擬缺氧4h后RPE細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá)，且呈濃度依賴性。(圖2)2.4 物理缺氧對(duì)RPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響將接種RPE的六孔板置于95％N2、5％CO2的37℃培養(yǎng)箱中，分別繼續(xù)培養(yǎng)0，1，2，4，6h。在激光共聚焦熒光顯微鏡下可觀察到與不加一抗組相比，缺氧0h組胞漿中有較弱的熒光。隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，熒光比值的增加表現(xiàn)為時(shí)間依賴性。(圖3)2.5 Gen對(duì)物理缺氧4h RPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響以缺氧+DMSO處理RPE細(xì)胞4h為對(duì)照組，終濃度分別為50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L Gen處理RPE細(xì)胞4h后的熒光比值明顯降低，且隨濃度的增高依次遞減。(圖4)五

圖1.氯化鈷模擬缺氧對(duì)RPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響。A氯化鈷模擬缺氧后0、1、2、4、6h RPE細(xì)胞激光共聚焦熒光顯微鏡圖像。BRPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)以對(duì)照組的熒光百分比表示。n＝8，x±S.D，××P＜0.01vs 0h。圖2. Gen對(duì)氯化鈷模擬缺氧引起的RPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的作用。AGen(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)處理RPE細(xì)胞后激光共聚焦熒光顯微鏡圖像。BRPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)以對(duì)照組的熒光百分比表示。n＝8，x±S.D，××P＜0.01 vs 0μmol/L Gen。圖3.物理缺氧對(duì)RPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響。A物理缺氧后0、1、2、4、6h RPE細(xì)胞激光共聚焦熒光顯微鏡圖像。BRPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)以對(duì)照組的熒光百分比表示。n＝8，x±S.D，××P＜0.01vs 0h。圖4.Gen對(duì)物理缺氧引起的RPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的作用。AGen(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)處理RPE細(xì)胞后激光共聚焦熒光顯微鏡圖像。BRPE細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)以對(duì)照組的熒光百分比表示。n＝8，x±S.D，××P＜0.01 vs 0μmol/L Gen。
權(quán)利要求
1.一類4’，5，7-三羥基異黃酮(Genistein，簡(jiǎn)寫(xiě)Gen)的應(yīng)用，其特征在于該藥物為Gen純品，或含有Gen的豆類及相關(guān)植物的提取物，或以Gen為主要成分的復(fù)方制劑，可用于制備預(yù)防和治療視網(wǎng)膜和角膜血管新生的藥物。
2.一類預(yù)防和治療視網(wǎng)膜和角膜血管新生的藥物，其特征在于Gen純品，或含有Gen的豆類及相關(guān)植物的提取物，或以Gen為主要成分的復(fù)方制劑，可制備成片劑、膠囊、口服液、靜脈及肌肉注射劑、脂質(zhì)體、微膠囊和滴眼液等制劑形式。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及預(yù)防和治療視網(wǎng)膜和角膜血管新生的藥物。該藥物為4’，5，7－三羥基異黃酮(Genistein，簡(jiǎn)寫(xiě)Gen)純品，或含有Gen的豆類及相關(guān)植物的粗提取物，或以Gen為主要成分的復(fù)方制劑?？芍苽涑善瑒?、膠囊、口服液、靜脈及肌肉注射劑、脂質(zhì)體、微膠囊和滴眼液等制劑形式。經(jīng)整體動(dòng)物試驗(yàn)和培養(yǎng)細(xì)胞試驗(yàn)證實(shí)，該藥物可以明顯抑制疾病模型C57BL/6小鼠的視網(wǎng)膜血管新生，也可抑制多種因素所致兔和大鼠的角膜血管新生。該藥物還可以抑制物理缺氧和化學(xué)缺氧所致的兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞VEGF和HIF1蛋白表達(dá)，表明該藥物通過(guò)抑制血管新生的誘導(dǎo)因子表達(dá)而發(fā)揮預(yù)防和治療視網(wǎng)膜和角膜血管新生。
文檔編號(hào)A61P27/02GK1424030SQ02148598
公開(kāi)日2003年6月18日 申請(qǐng)日期2002年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月23日
發(fā)明者王斌, 鄒穎, 肖繼皋 申請(qǐng)人:南京醫(yī)科大學(xué)