專利名稱：溶菌酶對(duì)嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥的治療和預(yù)防作用的制作方法
●發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明是采用溶菌酶作為藥物和消毒劑用途，用于治療SARS疾病的治療和預(yù)防。
●背景技術(shù)嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)，這是指近期流行的一種呼吸道傳染病，它首先在我國(guó)廣東地區(qū)發(fā)生流行，目前已在20個(gè)多個(gè)國(guó)家和地區(qū)流行。傳染途徑主要通過短距離飛沫傳播、接觸病人呼吸道分泌物及密切接觸傳播。人群普遍易感，醫(yī)護(hù)人員是本病的高危人群。臨床主要表現(xiàn)為肺炎，典型癥狀為發(fā)高燒(＞38℃)、干咳、呼吸急促或呼吸困難。SARS病患的死亡率約為4％。世界衛(wèi)生組織于2003年3月15日取名為嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥，該病癥狀表現(xiàn)為其潛伏期約為二至十二天之間，通常在四到五天。起病急，以發(fā)熱為首發(fā)癥狀，體溫一般＞38℃，偶有畏寒；可伴有頭痛、關(guān)節(jié)酸痛、肌肉酸痛、乏力、腹瀉；常無上呼吸道其它癥狀；可有咳嗽，多為干咳、少痰，偶有血絲痰；可有胸悶，嚴(yán)重者出現(xiàn)呼吸加速，氣促，或明顯呼吸窘迫。對(duì)于該疾病的預(yù)防與治療，目前沒有疫苗預(yù)防非典型肺炎；沒有特效藥物和治療方法，但經(jīng)及時(shí)的支持性治療和對(duì)癥治療后，絕大多數(shù)病人可以痊愈康復(fù)。世界衛(wèi)生組織于2003年4月16日正式宣布SARS的致病原為一種新的冠狀病毒，命名為SARS病毒。
SARS病毒在分類學(xué)上的地位是ssRNA positive strand virus，noDNA stage，Nidovirales，cornaviridae，cornavirus，SARScornavirus。
SARS病毒為正鏈的單鏈RNA病毒，復(fù)制不經(jīng)過DNA中間體，使用標(biāo)準(zhǔn)密碼子。目前在GeneBank中已有Urbani、CUHK-W1、HKU-39849、BJ01等14個(gè)毒株的全基因組序列和注釋。冠狀病毒是一種ssRNA(+)病毒，在電鏡下，病毒顆粒呈不規(guī)則形，直徑約為60~220nm，有包膜，其表面有梅花形的膜粒，狀如皇冠，故稱為冠狀病毒(coronavirus)。顆粒中心在負(fù)染電鏡下呈不定形態(tài)，核殼體呈疏松狀態(tài)。包膜上有兩種糖蛋白S蛋白刺突糖蛋白，是主要的抗原，與受體結(jié)合，使細(xì)胞融合。M蛋白跨膜，參與包膜形成。在一些亞類中，還有第三種糖蛋白，HE——紅細(xì)胞凝集素酯酶?；蚪MRNA與堿性磷酸蛋白N結(jié)合。人冠狀病毒分別屬于OC43和229E兩個(gè)抗原型，它是引起人類上呼吸道感染的病原，常引起成人的普通感冒。
在對(duì)SARS疾病的治療和預(yù)防過程中，病源學(xué)研究初步證明其是冠狀病毒感染引起的呼吸疾病。臨床觀察發(fā)現(xiàn)死亡患者中老年病例、長(zhǎng)期病患者比較多，患者個(gè)體的抵抗力在治療過程中起了很大的作用，各種抗生素、抗病毒藥物手段的應(yīng)用并未受到預(yù)期效果，使得臨床藥物的應(yīng)用受到了限制。尋找具有不同抗病毒作用機(jī)制的藥物成為一個(gè)重要問題。
溶菌酶是一個(gè)多年臨床用藥，和現(xiàn)有抗生素、抗病毒藥物的機(jī)制不同，其抗菌抗病毒作用機(jī)制獨(dú)特1、溶菌酶抗菌作用是通過破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁中的N-乙酰氨基葡萄糖之間的β-1，4糖苷鍵，使細(xì)胞壁不溶性粘多糖分解成可溶性糖苷，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂，細(xì)胞內(nèi)容物逸出而使細(xì)菌溶解。2、溶菌酶還可以與各種誘發(fā)炎癥的酸性物質(zhì)結(jié)合，使其失活。3、溶菌酶抗病毒作用失通過與帶負(fù)電荷的病毒蛋白結(jié)合，與RNA、DNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。4、最新的研究結(jié)果更證明溶菌酶抗HIV-1型病毒機(jī)制和RNA酶(RNase)一樣。而據(jù)報(bào)道冠狀病毒是RNA病毒。
溶菌酶是內(nèi)源性活性物質(zhì)，是人體自身抵抗外界侵犯的自衛(wèi)反應(yīng)機(jī)制、非特異性免疫因子之一，其增強(qiáng)免疫力效果是通過增強(qiáng)巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞的吞噬功能，以及改善細(xì)胞抑制劑導(dǎo)致的白細(xì)胞減少，增強(qiáng)細(xì)胞的免疫力?，F(xiàn)有臨床資料已經(jīng)證明治療SARS疾病提高自身免疫機(jī)制是重要環(huán)節(jié)。
溶菌酶是臨床使用多年的老藥，已有中國(guó)藥物的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，且是OTC藥物，溶菌酶原料從雞蛋中提取，其安全性獲得多年臨床使用的證明。
根據(jù)溶菌酶的作用機(jī)制和其抗病毒特點(diǎn)，我們對(duì)溶菌酶抗冠狀病毒活性和對(duì)SARS疾病的治療和預(yù)防作用進(jìn)行了試驗(yàn)，證明溶菌酶有較好的抗冠狀病毒效果，對(duì)SARS病例有治療和預(yù)防的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種溶菌酶新的藥物用途和消毒劑用途，用于SARS疾病的預(yù)防和治療。
本發(fā)明提供一種溶菌酶新的藥物用途，包括含有溶菌酶、以及一種或多種輔助劑或、和賦型劑的藥物組合，所描述的藥物組合可以被制備成針劑、輸液、溶液劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、糖衣丸劑、口含片、腸溶片、栓劑、滴眼液、凝膠、噴劑等藥物劑型。
本發(fā)明提供一種溶菌酶新的消毒劑用途，包括含有溶菌酶、以及一種或多種輔助劑或、和賦型劑的消毒劑組合，所描述的藥物組合可以被制備成洗手液、凝膠、乳劑、噴劑、面膜、消毒水等消毒劑型。
實(shí)施實(shí)例實(shí)例一溶菌酶對(duì)離體培養(yǎng)細(xì)胞的毒性損傷試驗(yàn)1)試驗(yàn)方法細(xì)胞培養(yǎng)將傳代細(xì)胞接種在細(xì)胞培養(yǎng)板上，置37℃培養(yǎng)箱中，長(zhǎng)成單層細(xì)胞。測(cè)定藥液按如下分組制備測(cè)試藥液A細(xì)胞對(duì)照組空白對(duì)照，普通培養(yǎng)液。B溶菌酶藥液組，采用普通培養(yǎng)液溶解，經(jīng)過0.22μm的濾膜過濾，使其終濃度達(dá)到200mg/ml。C溶菌酶藥液組，采用普通培養(yǎng)液溶解，經(jīng)過0.22μm的濾膜過濾，使其終濃度達(dá)到400mg/ml。
培養(yǎng)細(xì)胞做如下處理將培養(yǎng)孔內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)液換成A-C藥液，于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)。
觀察溶菌酶對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞損傷情況采用倒置顯微鏡觀察，連續(xù)觀察72h，記錄各孔細(xì)胞變化情況。
2)試驗(yàn)結(jié)果空白對(duì)照組細(xì)胞在72小時(shí)內(nèi)無明顯變化，細(xì)胞生長(zhǎng)正常，細(xì)胞密度增加。200，400mg/ml溶菌酶組對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒有顯著影響。
實(shí)例二溶菌酶離體抗病毒試驗(yàn)1)試驗(yàn)方法細(xì)胞培養(yǎng)將傳代細(xì)胞接種在細(xì)胞培養(yǎng)板上，置37℃培養(yǎng)箱中，長(zhǎng)成單層細(xì)胞。測(cè)定藥液按如下分組制備測(cè)試藥液A細(xì)胞對(duì)照組空白對(duì)照，普通培養(yǎng)液，亦未感染病毒組。B病毒感染組，普通培養(yǎng)液，病毒感染，但不加任何試驗(yàn)藥品。C陽性對(duì)照組，病毒感染后，普通培養(yǎng)液中加入三氮唑核苷，經(jīng)過0.22μm的濾膜過濾，使其終濃度達(dá)到0.25mg/ml。D測(cè)試藥物組，病毒感染后，采用普通培養(yǎng)液溶解，經(jīng)過0.22μm的濾膜過濾，使其終濃度達(dá)到20mg/ml。E組測(cè)試藥物組，配制同D組，經(jīng)過0.22μm的濾膜過濾，其終濃度達(dá)到80mg/ml，F(xiàn)組測(cè)試藥物組，配制同D組，經(jīng)過0.22μm的濾膜過濾，其終濃度達(dá)到320mg/ml。
保護(hù)試驗(yàn)培養(yǎng)細(xì)胞做如下處理將培養(yǎng)孔內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)液換成A-F藥液，培養(yǎng)30分鐘后，將每孔內(nèi)分別加入一定滴度的冠狀病毒培養(yǎng)溶液，37℃吸附30分鐘后，吸去培養(yǎng)液，用普通培養(yǎng)液洗兩次。再加入A-F藥液，于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)。
治療試驗(yàn)培養(yǎng)細(xì)胞做如下處理將培養(yǎng)孔內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)液換成普通培養(yǎng)液，每孔內(nèi)分別加入一定滴度的冠狀病毒培養(yǎng)溶液，37℃吸附30分鐘后，吸去病毒液，用普通培養(yǎng)液洗兩次。再加入A-F藥液，于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)。
觀察藥物抗病毒作用采用倒置顯微鏡觀察，連續(xù)觀察72h，記錄各孔細(xì)胞病變情況。
2)試驗(yàn)結(jié)果空白對(duì)照組細(xì)胞在72小時(shí)內(nèi)無明顯變化，細(xì)胞生長(zhǎng)正常，細(xì)胞密度增加。病毒感染組細(xì)胞出現(xiàn)損傷，其表現(xiàn)為細(xì)胞表面出現(xiàn)顆粒狀突起，細(xì)胞出現(xiàn)破碎、溶解，最后細(xì)胞死亡，碎片漂浮在培養(yǎng)液中。陽性對(duì)照組三氮唑核苷(0.25mg/ml)能有效抑制病毒引起的細(xì)胞病變，其效果表現(xiàn)為最初細(xì)胞病變出現(xiàn)的時(shí)間延緩，細(xì)胞損傷的進(jìn)程變緩慢，最終細(xì)胞大面積死亡出現(xiàn)的機(jī)會(huì)降低。
在采用溶菌酶進(jìn)行保護(hù)試驗(yàn)中，20mg/ml溶菌酶在早期能有效保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗病毒引起的細(xì)胞病變。溶菌酶(80，320mg/ml)能夠有效地保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗冠狀病毒引起的細(xì)胞病變，其特征為延緩最初細(xì)胞病變出現(xiàn)的時(shí)間，減慢細(xì)胞損傷的進(jìn)程，降低細(xì)胞大面積死亡。
在采用溶菌酶進(jìn)行治療試驗(yàn)中，20mg/ml溶菌酶在早期能有效保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗病毒引起的細(xì)胞病變。溶菌酶(80，320mg/ml)能夠有效地保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗冠狀病毒引起的細(xì)胞病變，其特征為延緩最初細(xì)胞病變出現(xiàn)的時(shí)間，減慢細(xì)胞損傷的進(jìn)程，降低細(xì)胞大面積死亡。
實(shí)例三、含溶菌酶的混合酶溶液的離體抗病毒試驗(yàn)1)采用柱形假絲酵母脂肪酶和溶菌酶的混合酶，使脂肪酶活力單位達(dá)到5，500酶活力單位/克(U/g)，溶菌酶含量為5，300mg/g，配成如下試驗(yàn)組

2)試驗(yàn)方法同實(shí)例二。
3)試驗(yàn)結(jié)果空白對(duì)照組細(xì)胞在72小時(shí)內(nèi)無明顯變化，細(xì)胞生長(zhǎng)正常，細(xì)胞密度增加。病毒感染組細(xì)胞出現(xiàn)損傷，其表現(xiàn)未，細(xì)胞表面出現(xiàn)顆粒狀突起，細(xì)胞出現(xiàn)破碎、溶解，最后細(xì)胞死亡，碎片漂浮在培養(yǎng)液中。陽性對(duì)照組三氮唑核苷(0.25mg/ml)能有效抑制病毒引起的細(xì)胞病變，其效果表現(xiàn)為最初細(xì)胞病變出現(xiàn)的時(shí)間延緩，細(xì)胞損傷的進(jìn)程變緩慢，最終細(xì)胞大面積死亡出現(xiàn)的機(jī)會(huì)降低。
在采用溶菌酶和脂肪酶混合試驗(yàn)組進(jìn)行保護(hù)試驗(yàn)中，低劑量配比的A組和高劑量配比的D組均在早期能有效保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗病毒引起的細(xì)胞病變，隨時(shí)間延長(zhǎng)，B、C兩組混合液對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用更好，其特征為延緩最初細(xì)胞病變出現(xiàn)的時(shí)間，減慢細(xì)胞損傷的進(jìn)程，降低細(xì)胞大面積死亡。
在采用溶菌酶進(jìn)行治療試驗(yàn)中，低劑量配比的A組和高劑量配比的D組均在早期能有效保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗病毒引起的細(xì)胞病變，隨時(shí)間延長(zhǎng)，B、C兩組混合液對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用更好，其特征為延緩最初細(xì)胞病變出現(xiàn)的時(shí)間，減慢細(xì)胞損傷的進(jìn)程，降低細(xì)胞大面積死亡。
實(shí)例四、溶菌酶片對(duì)SARS病例的治療作用采用隨機(jī)、對(duì)照方法，在SARS病例中，隨機(jī)選取兩組，每組6例，一組給予溶菌酶100mg/次，每日3-6次，連續(xù)給藥10天，作為試驗(yàn)組；另外一組不給溶菌酶作為對(duì)照組，觀察溶菌酶對(duì)SARS病人的治療效果。
觀察結(jié)果和對(duì)照組相比，給予溶菌酶藥物組的病例發(fā)熱癥狀得到緩解，體溫較快下降恢復(fù)正常，病程縮短，咳嗽癥狀得到緩解甚至消失，胸片顯示片狀陰影有所減少，肺紋理變清晰。
實(shí)例五、溶菌酶片對(duì)SARS高危人群的預(yù)防作用采用隨機(jī)方法，以生活在SARS疫區(qū)，每日需要經(jīng)常出現(xiàn)在公共場(chǎng)所的成年人，男女不限，作為SARS高危人群。每例給予口服溶菌酶腸溶片，50mg/次，每日3次，連續(xù)給藥20天，觀察溶菌酶對(duì)SARS高危人群的預(yù)防效果。
觀察結(jié)果給予溶菌酶藥物組未出現(xiàn)明顯呼吸道癥狀，體溫保持正常，胸片顯示正常。
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權(quán)利要求
1)一種采用溶菌酶作為藥物和消毒劑用途，用于SARS疾病的治療和預(yù)防。
2)根據(jù)權(quán)利要求1的藥物，其特征在于含有溶菌酶、以及一種或多種輔助劑或、和賦型劑的藥物組合，所描述的藥物組合可以被制備成針劑、輸液、溶液劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、糖衣丸劑、口含片、腸溶片、栓劑、滴眼液、凝膠、噴劑等藥物劑型。
3)根據(jù)權(quán)利要求2的藥物或、和藥物組合，其特征在于其中溶菌酶的每日給藥量在10mg-10g，用于SARS疾病的治療和預(yù)防。
4)根據(jù)權(quán)利要求1的消毒劑，其特征在于含有溶菌酶、以及一種或多種輔助劑或、和賦型劑的消毒劑組合，所描述的藥物組合可以被制備成洗手液、凝膠、乳劑、噴劑、面膜、消毒水等消毒劑。
5)根據(jù)權(quán)利要求4的消毒劑，其特征在于其中溶液中的溶菌酶含量在于0.1mg/ml-1g/ml，各種固體制劑中的溶菌酶含量在于0.1mg/g-800mg/g。
6)根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其特征在于采用混合酶制劑為原料的藥物或、和消毒劑，其中含有溶菌酶成分的比例達(dá)到混合酶制劑總量的1％以上的。
7)根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其特征在于采用混合酶制劑為原料的藥物或、和消毒劑，其中含有溶菌酶成分每日給藥量達(dá)到權(quán)利要求3所描述的范圍的，和、或溶菌酶的含量達(dá)到權(quán)利要求5所描述的范圍的。
8)根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其特征在于采用溶菌酶用于其他病毒性感染疾病的治療和預(yù)防。
全文摘要
本發(fā)明是采用溶菌酶作為藥物和消毒劑用途，用于治療嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(Severe Acute RespiratorySyndrome，SARS)疾病的治療和預(yù)防。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1548152SQ0312660
公開日2004年11月24日 申請(qǐng)日期2003年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月20日
發(fā)明者孫明杰 申請(qǐng)人:孫明杰