專利名稱：抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體及其在性病治療上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗性病特異性抗體，尤其涉及一種用于防治梅毒、淋病、尖銳濕疣及生殖器皰疹的特異性復(fù)合抗體。本發(fā)明還涉及這種復(fù)合抗體在性病治療上的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供這種復(fù)合卵黃抗體在性病治療上的應(yīng)用。
本發(fā)明的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體可由下述方法制備(A)優(yōu)選引致性病的主要致病菌，制備引起性病的幾種主要的單一致性病的病原體；(B)制備免疫蛋；(C)制備抗性病病原體特異性卵黃抗體粗品，并對(duì)粗品進(jìn)行純化；(D)將單一的特異性卵黃抗體按一定比例制備抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體。
其中，步驟A根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查情況，篩選導(dǎo)致性病的病原體，分別制備單一致性病的病原體作為抗原，進(jìn)行大量繁殖，收集培養(yǎng)物，提純，稀釋分裝；將各種單一的致性病病原體加入福氏佐劑，粉碎并制成乳狀漿液，制得單一的性病致病原體抗原。
步驟B選擇具有高免疫應(yīng)答能力的臨開產(chǎn)或正在產(chǎn)蛋的健康無特定病原體攜帶的產(chǎn)蛋母雞，胸肌或皮下注射單一的性病抗原。
步驟C將不同抗原分別免疫的母雞所產(chǎn)雞蛋分類收集，用0.5％新潔爾滅溶液或0.1％KMnO4溶液或同類消毒液將免疫蛋浸泡15～30分鐘消毒，置打蛋機(jī)中，濾除蛋清留下蛋黃加入4～8倍蒸餾水稀釋，調(diào)PH至5.5～6.0，4℃下靜置過夜，離心，并濃縮干燥得到抗性病特異性卵黃抗體粗品。將粗品用離子交換柱和凝膠交換柱純化。
步驟D是將多種單一的特異性的卵黃抗體按1～10∶1～10∶1～10∶1～10的比例均勻混合，制成抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體。
抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體應(yīng)用于性病的治療上時(shí)，把上述抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體制成洗液；也可制成抗性病噴霧劑；還可制成抗性病乳膏劑；也可制成抗性病泡騰片。
本發(fā)明的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體屬IgG類免疫球蛋白，主要用導(dǎo)致梅毒、淋病、尖銳濕疣和生殖器皰疹的四種病原體免疫良種母雞，使之產(chǎn)生大量相應(yīng)的免疫球蛋白，制得。這種復(fù)合抗體對(duì)引起梅毒、淋病、尖銳濕疣和生殖器皰疹的病原體有特異性結(jié)合和抑制作用。由于它只對(duì)病灶病原體起治療和抑制作用而對(duì)共生有益菌秋毫無犯，不會(huì)破壞病灶部位的微生態(tài)平衡，這在國內(nèi)外防治性病方面是一項(xiàng)開創(chuàng)性的先例。特異性復(fù)合抗體配以一定輔料制成各種抗性病洗液、噴霧劑、凝膠劑、乳膏劑等。將以上劑型直接施于外陰、陰道、子宮頸、龜頭等病原體最集中的部位，可將致病病原體直接殺滅，效果好、見效快，解決了常規(guī)口服或注射使藥物進(jìn)入人體循環(huán)后所產(chǎn)生的各種不良反應(yīng)和毒副作用。同時(shí)，也可解除因手術(shù)切除、激光治療等外科治療帶給患者的痛苦。由于本發(fā)明為一種特異性、純天然的生物制劑，其作用機(jī)理系人體被動(dòng)免疫，安全環(huán)保，不會(huì)像使用抗生素或化學(xué)消毒藥那樣將致病菌和有益菌一起滅殺而破壞微生態(tài)平衡，或造成病原體抗藥性，達(dá)到既治病又預(yù)防保健的雙重作用。
根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果選擇蒼白密螺旋體、淋病雙球菌、人類乳頭瘤病毒和單純皰疹病毒(HSV-2)作為有代表性的性病病原體。2、抗原制備。
選取市售蒼白密螺旋體、淋病雙球菌、人類乳頭瘤病毒和單純皰疹病毒(HSV-2)標(biāo)準(zhǔn)株，分別按其培養(yǎng)特性和最適培養(yǎng)條件，選擇適宜的培養(yǎng)基以常規(guī)方法進(jìn)行大量培養(yǎng)與繁殖，收集培養(yǎng)物，然后提純、計(jì)數(shù)、稀釋分裝。3、選擇具有高免疫應(yīng)答能力的健康無特定病原體攜帶的產(chǎn)蛋禽類(包括產(chǎn)蛋母雞、母鴨、母鵝、火雞和鴕鳥等)進(jìn)行強(qiáng)化免疫。
對(duì)每只健康產(chǎn)蛋禽類在胸肌或皮下注射上述制得的抗原，在第一次注射后間隔7天，再以同樣劑量、方法注射第二次，第二次注射后再間隔7天以相同劑量注射第三次。第一次注射后從第20天開始揀取高免疫蛋。
分別以蒼白密螺旋體、淋病雙球菌、人類乳頭瘤病毒和單純皰疹病毒各10億計(jì)數(shù)制成病原體液，置高速勻漿機(jī)中，以10000～30000rpm高速勻化，即制得蒼白密螺旋體、淋病雙球菌、人類乳頭瘤病毒和單純皰疹病毒(HSV-2)四種抗原，再分別以1∶1比例加福氏佐劑充分混勻，各制得1ml。4、免疫蛋收集和特異性卵黃抗體粗提物制備。
用0.5％新潔爾滅溶液或0.1％KMnO4溶液或其它同類消毒液將免疫蛋浸泡15～30分鐘消毒，無菌蒸餾水沖洗、晾干，置打蛋機(jī)中將蛋殼打碎，用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃，加入4～8倍蒸餾水稀釋攪拌均勻，用1mol/L濃度的NaOH或1mol/L濃度的HCL溶液調(diào)節(jié)pH至5.5～6.0，4℃下靜置過夜，稀釋以10000～30000rpm高速離心30分鐘，取上清液超濾，超濾膜選用的截留分子量為18萬DW左右，超濾濃縮10～20倍。濃縮液用冷凍干燥法噴干即得四種抗性病的特異性卵黃抗體免疫球蛋白粗品。
特異性卵黃抗體純品制備采用離子交換柱和凝膠交換柱進(jìn)行純化，即制得卵黃抗體球蛋白精白，經(jīng)用SDS-PAGE電泳測(cè)得卵黃抗體的含量超過50％。
以蒼白密螺旋體為檢測(cè)抗原，用酶聯(lián)免疫法測(cè)得抗梅毒特異性卵黃抗體結(jié)合效價(jià)，結(jié)果如下表

從以上檢測(cè)結(jié)果看出，本發(fā)明所制備的抗蒼白密螺旋體特異性卵黃抗體對(duì)梅毒致病病原體有很強(qiáng)的結(jié)合和抵制作用，所檢測(cè)到的抗體結(jié)合效價(jià)十分理想。
以淋病雙球菌為檢測(cè)抗原，用酶聯(lián)免疫法測(cè)得抗淋病雙球菌特異性卵黃抗體結(jié)合效價(jià)，結(jié)果如下表

從以上檢測(cè)結(jié)果看出，本發(fā)明所制備的抗淋病雙球菌特異性卵黃抗體對(duì)引起淋病的致病菌有很強(qiáng)的結(jié)合和抵制作用，所檢測(cè)到的抗體結(jié)合效價(jià)十分理想。
以人乳頭瘤病毒為檢測(cè)抗原，用酶聯(lián)免疫法測(cè)得抗人乳頭瘤病毒特異性卵黃抗體結(jié)合效價(jià)，結(jié)果如下表

從以上檢測(cè)結(jié)果看出，本發(fā)明所制備的抗人乳頭瘤病毒特異性卵黃抗體對(duì)引起尖銳濕疣的致病病原體有很強(qiáng)的結(jié)合和抵制作用，所檢測(cè)到的抗體結(jié)合效價(jià)十分理想。
以單純皰疹病毒為檢測(cè)抗原，用酶聯(lián)免疫法測(cè)得抗單純皰疹病毒特異性卵黃抗體結(jié)合效價(jià)，結(jié)果如下表

從以上檢測(cè)結(jié)果看出，本發(fā)明所制備的抗單純皰疹病毒特異性卵黃抗體對(duì)作為抗原免疫的HSV-2有很高的抗體結(jié)合效價(jià)，提示有很好的抑制作用；對(duì)沒有直接作為抗原免疫的同種不同型的HSV-1也有一定的抑制作用。故本實(shí)驗(yàn)加大了HSV-2作為免疫原的可行性。5、制備抗性病復(fù)合卵黃抗體。
分別取上述抗蒼白密螺旋體卵黃抗體凍干粉250克、抗淋病雙球菌卵黃抗體凍干粉250克、抗人類乳頭瘤病毒卵黃抗體凍干粉250克和抗單純皰疹病毒卵黃抗體凍干粉250克充分混合，過80目篩，包裝，即得抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體凍干粉1000克。
以蒼白密螺旋體、淋病雙球菌、人乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒(HSV-2)作為檢測(cè)抗原，用酶聯(lián)免疫法測(cè)得抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體的抗體結(jié)合效價(jià)，結(jié)果如下表

從以上結(jié)果看出，以上述抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體對(duì)作為抗原直接導(dǎo)致性病的致病病原體具有相當(dāng)高抗體結(jié)合效價(jià)，達(dá)到理想的效果。
香橙香精 0.1％冰片 0.1％乙醇 0.75％蒸餾水加至100升先取蒸餾水80升，然后分別加入甘油、復(fù)合卵黃抗體攪拌溶解；再取配方量的桉葉油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在攪拌下緩緩加入前述溶液中；充分?jǐn)嚢杈鶆?，調(diào)整溶液pH值至6.5～7.0之間，最后補(bǔ)加蒸餾水至100升，過濾即得。
抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體凍干粉 2％甘油11％十八烷酸6.0％薄荷醇 0.2％液體石蠟9.0％白凡士林6.0％Span-80 0.85％山梨醇鉀0.1％吐溫-80 4.5％蒸餾水 加至100升油相和水相分別加熱至80℃，將水相緩緩加入油相中，攪拌冷凝至40℃左右，加入復(fù)合卵黃抗體溶液，充分研磨攪拌均勻制成水色油乳膏，即得。
權(quán)利要求
1.抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體，其特征在于該抗體可由下述方法制備(A)優(yōu)選引致性病的主要致病菌，制備引起性病的兩種或兩種以上的單一致性病的病原體；(B)分別用步驟(A)的病原體制備免疫蛋；(C)制備抗性病病原體特異性卵黃抗體粗品，并對(duì)粗品進(jìn)行純化；(D)將單一的特異性卵黃抗體按比例混合，制成抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體，其特征在于步驟(A)中所述的抗原由單一致性病的病原體制備而得，所述病原有四種，分別為蒼白密螺旋體、淋病雙球菌、人乳頭瘤病毒及單純皰疹病毒。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體，其特征在于步驟(D)是將多種單一的特異性的卵黃抗體按1～10∶1～10∶1～10∶1～10的比例均勻混合，制成抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體，其特征在于步驟(D)是將多種單一的特異性的卵黃抗體按1∶1∶1∶1的比例均勻混合，制成抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體。
5.權(quán)利要求1～4任一權(quán)利要求的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體在制備治療性病的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體在治療性病上的應(yīng)用，其特征在于將所制備的復(fù)合卵黃抗體按0.02～80％的質(zhì)量百分含量配以99.98～20％的輔料制成抗性病組合制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體在治療性病上的應(yīng)用，其特征在于所述組合制劑為抗性病洗液。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體在治療性病上的應(yīng)用，其特征在于所述組合制劑為抗性病噴霧劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體在治療性病上的應(yīng)用，其特征在于所述組合制劑為抗性病乳膏劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體在治療性病上的應(yīng)用，其特征在于所述組合制劑為抗性病泡騰片。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體，該抗體可由下述方法制備優(yōu)選引致性病的主要致病菌，制備引起性病的兩種或兩種以上的單一致性病的病原體；制備免疫蛋；制備抗性病病原體特異性卵黃抗體粗品，并對(duì)粗品進(jìn)行純化；將單一的特異性卵黃抗體按比例混合，制成抗性病特異性復(fù)合卵黃抗體。本發(fā)明還公開了這種復(fù)合卵黃抗體在性病治療上的應(yīng)用。本發(fā)明能直接對(duì)常見性病病原體起治療和抑制作用，不會(huì)破壞微生態(tài)平衡，也不會(huì)產(chǎn)生耐藥性，對(duì)性病的治療效果顯著。
文檔編號(hào)A61K9/12GK1477127SQ0313968
公開日2004年2月25日 申請(qǐng)日期2003年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月3日
發(fā)明者許承杰, 嚴(yán)維 申請(qǐng)人:廣州新崴生物醫(yī)藥科技有限公司