專利名稱：一種提高免疫力的抗病毒藥及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高免疫力的抗病毒藥及制備方法，具體地說(shuō)是涉及異丙肌苷藥物的新劑型及制備方法。
為實(shí)施本發(fā)明目的所采用的技術(shù)方案是由活性成分是肌苷和對(duì)乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯的分子比為1∶3組成的藥物，制成一種用淀粉包埋活性成分的微膠囊劑，其微膠囊劑中含有活性成分淀粉的重量百分比為1∶3～4。
為了改善產(chǎn)品的口感，在微膠囊中，還可以添加適量的藥學(xué)制劑中允許的甜味劑和香料。
本發(fā)明所說(shuō)的異丙肌苷微膠囊的制備方法是按下列步驟進(jìn)行(1)稱取1份肌苷和3.16份的對(duì)乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯及12.48～16.64份的淀粉(重量份)。
(2)將肌苷溶于1～2倍量的水中，將乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯溶于2～4倍量的95％的乙醇中，再將這兩種溶液混合均勻，備用。
(3)將淀粉在攪拌下加到水中，加熱到70～85℃，直至淀粉完全溶解，將上述(2)的溶液加到淀粉溶液中，攪拌均勻后出料，料液用均質(zhì)機(jī)在壓力20Mpa/5Mpa下均質(zhì)成乳化液，乳化液中的固含量為35～65％，然后，乳化液進(jìn)行噴霧干燥，所得的干燥微膠囊分裝即得成品。
為了改善口感，可以在第三步，淀粉水溶液中加適量的液體香料和甜味劑，其他同上操作。
本發(fā)明的技術(shù)是基于采用了包埋技術(shù)，采用了一種價(jià)廉物美的包埋劑是一種淀粉，由美國(guó)National Starch & Chemical(Asia)Pte Ltd公司提供，型號(hào)為N-LOK，它是一種低粘度的特殊功能淀粉，，其抗氧化性能特別好，已廣泛用于包埋香料、脂肪、油和維生素，它完全可代替阿拉伯膠、明膠、β-環(huán)糊精等包埋劑，且包埋率高，可達(dá)95％以上，用它包埋的產(chǎn)品穩(wěn)定性高，保質(zhì)期長(zhǎng)。
用本發(fā)明所述的制備方法制得的含活性成分是肌苷和對(duì)乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯的分子比為1∶3組成的微膠囊，簡(jiǎn)稱異丙肌苷微膠囊，每袋5克微膠囊中含異丙肌苷1克，進(jìn)行如下有關(guān)的主要藥效學(xué)試驗(yàn)。一、體液免疫試驗(yàn)1、對(duì)正常小鼠血清溶血素生成的影響試驗(yàn)用20g左右的小鼠，雌雄各半分成五組，每組10只，連續(xù)灌胃給藥8天，于給藥的第2天，每鼠腹注0.2ml兔紅血球(3∶5)進(jìn)行免疫，在第9天，取血清測(cè)定溶血素含量。按下列公式計(jì)算每只小鼠樣品半數(shù)溶血值HC50。

結(jié)果組別劑量(毫克/)HC50(X±SD) P值蒸餾水 20 159.46±30.98異丙肌苷微膠囊 100175.65±44.84＞0.05異丙肌苷微膠囊 250168.17±51.14＞0.05異丙肌苷微膠囊 500163.82±31.59＞0.05結(jié)果表明本品對(duì)正常小鼠血清溶血素的形成無(wú)影響。
2、對(duì)免疫功能低下小鼠溶血素生成的影響取18～22克小鼠，每組10只，于給藥的第2天進(jìn)行免疫，免疫7天后，測(cè)定血清溶血素含量，結(jié)果見(jiàn)下表腹注異丙肌苷微膠囊對(duì)小鼠抗體生成的影響

灌胃給異丙肌苷微膠囊對(duì)小鼠抗體生成的影響

結(jié)果表明；灌胃劑量為125毫克/千克和250毫克/千克及腹注125毫克/千克異丙肌苷微膠囊有促進(jìn)免疫功能低下小鼠抗體生成的作用，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均有顯著差異。
3、對(duì)小鼠IgG的影響試驗(yàn)用20克左右的小鼠，，每組10只，按表列劑量灌胃給異丙肌苷微膠囊微膠囊，連續(xù)6天，于給藥的第2天各組(對(duì)照組除外)腹注環(huán)磷酰胺80毫克/千克一次。于實(shí)驗(yàn)的第7天，取血清測(cè)定IgG的含量，結(jié)果見(jiàn)表。

*P＜0.01，**P＜0.001，均與環(huán)磷酰胺組比較，△P＜0.01，與對(duì)照組比較。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，單用異丙肌苷微膠囊組的IgG含量比蒸餾水高，同時(shí)能提高環(huán)磷酰胺抑制小鼠IgG的水平，125毫克/千克與250毫克/千克劑量作用相似。
4、對(duì)小鼠抗體分泌細(xì)胞的作用實(shí)驗(yàn)用18～22克小鼠18只，按表分組，于免疫前腹注可的松1毫克/0.1毫升/鼠，連續(xù)3天，并灌胃給異丙肌苷微膠囊300毫克/0.5毫升/鼠共7天，然后將小鼠斷頭放血，取脾臟，進(jìn)行溶血空斑試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表。
溶血空斑試驗(yàn)

*P＜0.01與醋酸可的松組比較，溶血空斑數(shù)以每百萬(wàn)倍脾細(xì)胞計(jì)算。從上述可見(jiàn)，異丙肌苷微膠囊可以增強(qiáng)小鼠抗體分泌細(xì)胞的功能，對(duì)可的松所至的免疫力低下?tīng)顟B(tài)有對(duì)抗和保護(hù)作用。二、細(xì)胞免疫1、取18～22克小鼠，按表分組，每組10只，按表列劑量給異丙肌苷微膠囊，連續(xù)4天，于最后一次給藥后15分鐘(灌胃給藥為25分鐘)。從尾靜脈注射印度墨汁0.1毫升/10克鼠，注射后分別在1分鐘和5分鐘從小鼠眼眶靜脈叢取血10微升，放入2毫升1％醋酸中，于675nm處比色，測(cè)定光密度，計(jì)算碳廓清率K，結(jié)果見(jiàn)表。
對(duì)小鼠的碳廓清作用


P＜0.05，*P＜0.01結(jié)果表明，灌胃和腹注異丙肌苷微膠囊250毫克/千克，其碳廓清率與對(duì)照組比較有顯著性差異，前者p＜0.01，后者＞0.05。
2、對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的作用，將正常人的外周淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，在刺激源(PHA)作用下，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)換率。按表10用異丙肌苷微膠囊和PHA的不同濃度藥液進(jìn)行試驗(yàn)，觀察在PHA誘導(dǎo)下異丙肌苷對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用的影響。結(jié)果見(jiàn)表。

從上表結(jié)果可見(jiàn)，異丙肌苷本身沒(méi)有促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用。PHA劑量在60微克/毫升。淋轉(zhuǎn)率為62％，當(dāng)減低劑量在20微克/毫克時(shí)，加入不同濃度異丙肌苷均可使淋轉(zhuǎn)率提高，其中異丙肌苷在160微克/毫升，PRA20微克/毫升時(shí)，淋轉(zhuǎn)率可達(dá)65％。
3、對(duì)胰酶消化的人淋巴細(xì)胞活性花環(huán)形成恢復(fù)的促進(jìn)作用取正常人外周血(肝素抗凝)加冷PRMI1660液，進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離，然后進(jìn)行EA花環(huán)試驗(yàn)，安下列計(jì)算出花環(huán)形成平均增高率，結(jié)果見(jiàn)表。

對(duì)胰酶消化的人淋巴細(xì)胞活性花環(huán)形成恢復(fù)的促進(jìn)作用

結(jié)果表明，異丙肌苷濃度在100～500微克/毫克均能促進(jìn)胰酶消化了的淋巴細(xì)胞EA花環(huán)形成恢復(fù)。
4、對(duì)大鼠白細(xì)胞移行的抑制作用取大鼠的外周血，肝素抗凝，于37度靜置1小時(shí)，離心1000轉(zhuǎn)/分，15分鐘去上層白細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)，異丙肌苷濃度分別為10、20、和50微克/毫升，PHA作誘導(dǎo)劑，濃度為5微克/毫升，結(jié)果見(jiàn)表。
對(duì)大鼠白細(xì)胞移行的抑制作用X±SD

注白細(xì)胞游走范圍直徑為放大8倍的值實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，異丙肌苷微膠囊在PHA參與下，對(duì)大白鼠細(xì)胞的移行有明顯的抑制作用，在一定范圍內(nèi)其抑制作用隨劑量增加而增強(qiáng)。三、對(duì)HSV的抑制作用1、異丙肌苷的毒性測(cè)定選生長(zhǎng)良好，成層均勻的原代兔細(xì)胞，加不同濃度的異丙肌苷微膠囊，凡細(xì)胞出現(xiàn)變圓、鄒縮、斷層、脫落者均為毒性反應(yīng)，反之，無(wú)毒性。每一濃度接種兩管，加藥后第5天判斷結(jié)果。結(jié)果見(jiàn)表。
對(duì)原代兔腎細(xì)胞的毒性作用

試驗(yàn)結(jié)果；無(wú)毒性，細(xì)胞呈多角形，排列規(guī)則，單層均勻，異丙肌苷微膠囊的最低毒性為5000微克/毫升，表現(xiàn)為細(xì)胞變圓，折光性增強(qiáng)、堆積、斷層、脫落。2、對(duì)HsV-1和HsV-2的抑制作用取生長(zhǎng)良好的原代兔腎細(xì)胞分三組，試驗(yàn)組感染病毒10TCID50、0.1ml，然后加不同濃度異丙肌苷微膠囊0.5ml，每一濃度接種兩管，加維持液0.8ml，每天觀察細(xì)胞病變(CPE)，以病毒對(duì)照細(xì)胞管出現(xiàn)CPE達(dá)到時(shí)判斷結(jié)果，與病毒對(duì)照組比凡CPE減低者為有抑制病毒作用，否則，為無(wú)。結(jié)果見(jiàn)表藥物劑量于藥物作用的關(guān)系

結(jié)果表明，異丙肌苷濃度在125～750微克/毫升范圍內(nèi)有抗病毒作用，但不能完全抑制CPE的產(chǎn)生，高于或低于此范圍均無(wú)明顯抗病毒作用。
從上述試驗(yàn)表面異丙肌苷微膠囊在體內(nèi)的抗病毒作用，不是通過(guò)直接抑制病毒入侵而起效，而是通過(guò)間接地提高宿主的免疫反應(yīng)而繼發(fā)抗病毒作用。在病毒感染期間，肌體的淋巴細(xì)胞受抑制，而異丙肌苷能使抑制狀態(tài)的恢復(fù)正常，異丙肌苷對(duì)靜止淋巴細(xì)胞無(wú)明顯的興奮作用，但對(duì)受到抑制的淋巴細(xì)胞有較明顯的增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的作用。
另用異丙肌苷微膠囊進(jìn)行初步穩(wěn)定性試驗(yàn)，測(cè)定其保質(zhì)期。
采用低溫恒溫加速試驗(yàn)法。試驗(yàn)步驟調(diào)節(jié)培養(yǎng)箱溫度40℃，相對(duì)濕度75％，將樣品放入箱內(nèi)，定時(shí)取樣，測(cè)定其含量和觀察外觀結(jié)果


結(jié)論異丙肌苷微膠囊采用低溫加速試驗(yàn)90天內(nèi)含量和外觀均無(wú)明顯變化，說(shuō)明，本品是穩(wěn)定的，推測(cè)保質(zhì)期至少二內(nèi)以上。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)產(chǎn)品穩(wěn)定，藥效作用顯著，它既有抗病毒作用又有提高機(jī)體免疫功能，它是通過(guò)提高提高機(jī)體免疫功能而起抗病毒作用；制備方法簡(jiǎn)便，復(fù)合物的制備和制劑是一步同時(shí)完成，生產(chǎn)成本低。
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。實(shí)施例1、異丙肌苷微膠囊的制備(5∶1g)(1)稱取1Kg的肌苷、3.16Kg對(duì)乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯、淀粉16.64Kg。
(2)取肌苷溶解于2L的水中，乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯溶解于6.5L的95％乙醇中，再將這兩個(gè)溶液混合均勻備用。
(3)量取35Kg水置混合鍋中，攪拌下加淀粉，使分散均勻后，漸漸升溫加熱至80℃，保持在80℃左右繼續(xù)攪拌直至淀粉完全溶解，然后加入(2)自動(dòng)的混合溶液，加完后繼續(xù)攪拌半小時(shí)，停止加熱，攪拌下出料，將料液用均質(zhì)機(jī)在壓力20Mpa/5Mpa下均質(zhì)成乳化液，迅速將乳化液進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥的條件進(jìn)風(fēng)溫度130～145℃，出風(fēng)溫度85～90℃，空氣流量3000m/hr，加料速度30L/hr，噴霧干燥結(jié)束后收得的噴干粉為含異丙肌苷的微膠囊劑，共19.45Kg，分裝成每袋5g，用真空包裝封口，微膠囊劑中含異丙肌苷1g。實(shí)施例2、異丙肌苷微膠囊的制備(5∶1g)(1)稱取0.5Kg的肌苷、1.58Kg對(duì)乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯、淀粉8.32Kg。
(2)取肌苷溶解于1L的水中，乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯溶解于6L的95％乙醇中，再將這兩個(gè)溶液混合均勻備用。
(3)量取15Kg水置混合鍋中，攪拌下加淀粉，使分散均勻后，漸漸升溫加熱至75℃，保持在75℃左右繼續(xù)攪拌直至淀粉完全溶解，然后加入(2)制備的混合溶液，加完后繼續(xù)攪拌半小時(shí)，停止加熱，攪拌下出料，將料液用均質(zhì)機(jī)在壓力20Mpa/5Mpa下均質(zhì)成乳化液，迅速將乳化液進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥的條件進(jìn)風(fēng)溫度140～150℃，出風(fēng)溫度85～90℃，空氣流量3000m/hr，加料速度28Lhr，噴霧干燥結(jié)束后收得的噴干粉為含異丙肌苷的微膠囊劑，共9.5Kg，分裝成每袋5g，用真空包裝封口。
權(quán)利要求
1.一種提高免疫作用的抗病毒藥，由活性成分是肌苷和對(duì)乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯的分子比為1∶3組成的藥物，其特征在于這種藥物是一種用淀粉包埋活性成分的微膠囊劑，其微膠囊劑中含有活性成分淀粉的重量百分比為1∶3～4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗病毒藥的制備方法，其特征在于，以下列步驟進(jìn)行(1)稱取1份肌苷和3.16份的對(duì)乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯及12.48～16.64份的淀粉(重量份)。(2)將肌苷溶于1～2倍量的水中，將乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯溶于2～4倍的95％的乙醇中，再將這兩種溶液混合均勻，備用。(3)將淀粉在攪拌下加到水中，加熱到70～85℃，直至淀粉完全溶解，將上述(2)的溶液加到淀粉溶液中，攪拌均勻后出料，料液用均質(zhì)機(jī)在壓力20Mpa/5Mpa下均質(zhì)成乳化液，乳化液中的固含量為35～65％，然后，乳化液進(jìn)行噴霧干燥，所得的干燥微膠囊粉分裝即得成品。
全文摘要
一種提高免疫力的抗病毒藥物及其制備，涉及異丙肌苷藥物的新劑型及制備方法。它是由肌苷和對(duì)乙酰胺基苯甲酸二甲胺基異丙醇酯的分子比為1∶3組成的藥物，用淀粉包埋的微膠囊劑，活性成分淀粉的重量百分比為1∶3～4。產(chǎn)品穩(wěn)定，藥效作用顯著，它既有抗病毒作用又有提高肌體免疫功能，它是通過(guò)提高提高肌體免疫功能而起抗病毒作用，制備方法簡(jiǎn)便，復(fù)合物的制備和制劑是一步同時(shí)完成，生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)A61K31/7076GK1478484SQ0313971
公開(kāi)日2004年3月3日 申請(qǐng)日期2003年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月7日
發(fā)明者黃芝瑛, 倪慶純, 張寶恩 申請(qǐng)人:廣州市醫(yī)藥工業(yè)研究所