專(zhuān)利名稱(chēng)：用于預(yù)防和/或治療慢性排斥的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及下列通式(I)或(II)的化合物用于制造預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的藥物的用途。
背景技術(shù)肝、腎、肺和心臟的器官移植作為晚期器官疾病的治療正在有規(guī)律地進(jìn)行。移植結(jié)果已經(jīng)隨著組織分型、手術(shù)技術(shù)、和更有效的免疫抑制治療方面改進(jìn)的發(fā)展而逐漸提高。然而，由于慢性排斥的問(wèn)題，器官移植對(duì)于不可逆的器官疾病仍然不是一種臨床上可使用的解決方法。
慢性排斥，其表現(xiàn)為漸近性和不可逆的移植物機(jī)能障礙，是臨床移植中晚期器官移植失敗的其中一個(gè)主要原因。
具有預(yù)后的典型的慢性排斥是一種動(dòng)脈硬化-樣改變，如移植物血管病變、移植物脈管疾病、移植物動(dòng)脈硬化、移植物冠狀疾病、血管狹窄、間質(zhì)纖維化等。這種血管損害的特征在于平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖，即，可導(dǎo)致內(nèi)膜增殖和變厚，平滑肌細(xì)胞肥大修復(fù)，并最終導(dǎo)致逐漸性腔閉塞(血管改型)。特別是，在腎中，慢性排斥可被稱(chēng)作慢性同種異體移植腎病。
慢性排斥看起來(lái)是殘酷和不可控制的，這是因?yàn)檫€沒(méi)有已知的有效療法或預(yù)防形式。因此，仍然存在著對(duì)有效預(yù)防和/或治療臨床器官移植中慢性同種異體移植排斥藥物的需要。
有關(guān)本發(fā)明中所用的化合物(I)或(II)，在USP 5,308,865中已知該化合物(I)或(II)可用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、免疫或非-免疫源的慢性炎性疾病，和癌癥。雖然慢性炎性疾病已經(jīng)在該專(zhuān)利中公開(kāi)，但它與特征在于血管損害的移植器官中慢性排斥不同，因此移植器官中的慢性排斥沒(méi)有被公開(kāi)。
在EP 0665013中，已知來(lái)氟洛米和相關(guān)化合物可在血管損傷后減少平滑肌細(xì)胞的過(guò)度增殖，因此這些化合物可用于預(yù)防和治療血管損傷后的血管狹窄和動(dòng)脈硬化。然而，本發(fā)明的化合物(I)或(II)并沒(méi)有在該專(zhuān)利申請(qǐng)中公開(kāi)。此外，本發(fā)明的慢性排斥是由于宿主免疫和非-免疫應(yīng)答而在移植器官的所有脈管中發(fā)現(xiàn)的，而該專(zhuān)利申請(qǐng)中描述的疾病似乎是位于損害恢復(fù)的受損部分中。因此，這些疾病在胚胎學(xué)方面彼此完全不同。
在USP 5,624,946和USP 5,688,824中，已知一般的來(lái)氟洛米化合物對(duì)控制或逆轉(zhuǎn)移植器官中的慢性排斥具有活性。然而，本發(fā)明的化合物(I)或(II)并沒(méi)有在這些專(zhuān)利中公開(kāi)。
因此，完全不知道化合物(I)或(II)對(duì)預(yù)防和/治療移植器官或組織中慢性排斥具有活性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)化合物(I)或(II)可有效預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物受體中移植器官或組織中的慢性排斥。
因此，本發(fā)明提供了用于預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的新方法，包括在哺乳動(dòng)物受體需要時(shí)給予其治療有效量的化合物(I)或(II)。
此外，本發(fā)明提供化合物(I)或(II)用于制造預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的藥物的新用途。
此外，本發(fā)明提供了用于預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的新藥物組合物，其包含治療有效量的化合物(I)或(II)以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
能夠預(yù)防慢性排斥的藥物是預(yù)防慢性排斥的功能或組織學(xué)征兆發(fā)生的藥物，可在慢性排斥開(kāi)始前通過(guò)長(zhǎng)期或短期給藥開(kāi)始。因此，本發(fā)明所用的預(yù)防慢性排斥是指移植器官或組織的長(zhǎng)期保護(hù)或維持。
本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)“治療”是指既包括“控制”又包括“逆轉(zhuǎn)”所述疾病的治療。且能夠控制慢性排斥的治療是一種能夠減緩疾病過(guò)程發(fā)展的治療，可分別在慢性排斥的功能或組織學(xué)征兆后開(kāi)始。此外，能夠逆轉(zhuǎn)慢性排斥的治療是一種，當(dāng)在慢性排斥的功能或組織學(xué)征兆(分別)出現(xiàn)后開(kāi)始時(shí)，可逆轉(zhuǎn)疾病過(guò)程并恢復(fù)與正常接近的功能和組織學(xué)結(jié)果的治療。
關(guān)于本發(fā)明的化合物(I)，即(2Z)-2-氰基-3-羥基-N-[4-(三氟甲基)苯基]-2-庚-6-炔酰胺、或化合物(II)，即5-(3-丁炔基)-N-[4-(三氟甲基)苯基]-4-異噁唑甲酰胺，可按照USP 5,308,865的說(shuō)明書(shū)，實(shí)施例14或其相似方式生產(chǎn)，且應(yīng)當(dāng)理解還存在構(gòu)像異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，而這種構(gòu)像異構(gòu)體和立體異構(gòu)體也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，且化合物(I)可以是另一種互變異構(gòu)體形式。例如，化合物(I)可以是其烯醇(I)或酮形式(III)，即2-氰基-3-氧代-N-[4-(三氟甲基)苯基]-6-庚炔酰胺，如下列反應(yīng)方案所示，且這種互變異構(gòu)體形式也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
反應(yīng)方案 烯醇 酮化合物(I)或(II)可以是溶劑化物，其包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。所述溶劑化物優(yōu)選包括水合物及乙醇化物。
本發(fā)明的化合物(I)或(II)可以藥物制劑的形式，例如，固體、半固體或液體形式使用，其包含化合物(I)或(II)作為活性成分以及適于口服、非腸道如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或關(guān)節(jié)內(nèi)，外部如局部，腸內(nèi)、直腸內(nèi)、經(jīng)陰道、吸入、眼用、鼻用或舌下給藥的有機(jī)或無(wú)機(jī)載體或賦形劑?；钚猿煞挚膳c，例如，通常的非-毒性、藥學(xué)上可接受的、用于片劑、丸劑、膠囊劑、滴眼劑、栓劑、溶液(例如生理鹽水)、乳劑、混懸液(例如橄欖油)、軟膏劑、噴霧劑、霜?jiǎng)⑵つw硬膏劑和適于使用的任何其它形式的載體混合?？墒褂玫妮d體是固體、半固體、或液體形式的水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯膠、明膠、甘露糖醇、淀粉糊劑、三硅酸鎂、玉米淀粉、角蛋白、膠態(tài)二氧化硅、馬鈴薯淀粉、尿素或適于制造制劑的其它載體，此外還可使用輔助的穩(wěn)定劑、增稠劑和著色劑以及香料。活性目標(biāo)化合物以足以預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的有效量包含在藥物組合物中。
本發(fā)明治療的哺乳動(dòng)物包括家畜哺乳動(dòng)物如母牛、馬等，家養(yǎng)動(dòng)物如狗、貓、大鼠等，和人，優(yōu)選人。
器官或組織可從供體移植到同一個(gè)體(自體移植)、同基因物種(同基因移植)、相同物種(同種異體移植)、或不同物種(異種移植)的受體中。這種移植器官或組織可以是肝、腎、心臟、肺、合并心肺、氣管、脾、胰腺(完全或部分，例如，胰島)、皮膚、小腸、角膜、骨髓、四肢、肌肉、神經(jīng)、椎間盤(pán)、成肌細(xì)胞或軟骨、或上述任意組合。
用于預(yù)防和/或治療慢性排斥的化合物(I)或(II)可單獨(dú)給藥或與一種或多種其它免疫抑制劑，例如環(huán)孢菌素A、他克莫司、瑞帕霉素、硫唑嘌呤、皮質(zhì)類(lèi)固醇、抗-淋巴細(xì)胞球蛋白或OKT3；特別是環(huán)孢菌素A或他克莫司同時(shí)、分開(kāi)或順序聯(lián)合給藥。此外，用于此用途的化合物(I)或(II)可以藥物組合物與上述一種或多種其它免疫抑制劑的混合物形式給藥。這種組合或混合藥物包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
治療有效量的化合物(I)或(II)的劑量可發(fā)生改變，并取決于所治療每個(gè)個(gè)體患者的年齡和情況，通常給予約1mg-10g/體重、優(yōu)選5mg-5g/體重、更優(yōu)選10mg-2g/體重的活性成分每日劑量用于預(yù)防和/或治療這種疾病，且通常給予約0.5-1mg、5mg、10mg、50mg、100mg、250mg、500mg、1g、2g和3g的平均單一劑量。用于預(yù)防或治療慢性排斥的人類(lèi)給藥的每日劑量是約0.1-50mg/kg。在組合或混合藥物中，例如，他克莫司可以約0.01-5mg/kg、優(yōu)選0.05-0.5mg/kg的每日劑量給予人類(lèi)。
給予化合物(I)或(II)預(yù)防慢性排斥的期限可根據(jù)物種、所預(yù)防疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度而改變，化合物(I)或(II)通?？啥唐诨蜷L(zhǎng)期給予人類(lèi)，即移植后給予1周-1年或更長(zhǎng)，除非慢性排斥開(kāi)始。
化合物(I)或(II)預(yù)防和治療慢性排斥的可能機(jī)理與抗-小球基底膜(GBM)抗體的減少，接著是TGF的持續(xù)抑制有關(guān)。
下列實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解那些實(shí)施例不是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
實(shí)施例1.慢性排斥的預(yù)防(1)方法將重250-300g的近交雄性L(fǎng)ewis大鼠(LEW)(RT1I)用作腎移植受體。將重250-350g的近交雄性L(fǎng)EW和Fisher(F344)(RT1IVI)分別用作同基因移植和同種異體移植的供體大鼠。腎移植是使用Fisher和Lee.[Fisher等人，Surgery，58904-914，1965]的改進(jìn)技術(shù)進(jìn)行的。隨受體大鼠存活的時(shí)間測(cè)量腎移植物的存活。每周一次采集血液和24小時(shí)尿液樣品用于血漿肌酸酐、蛋白尿和抗供體小球基底膜蛋白(GBM)的抗體滴定度的測(cè)量。在移植后第90天采集腎移植物，并經(jīng)過(guò)組織學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分析。在移植后第0天-第9天，每天口服給予受體大鼠10mg/kg和20mg/kg劑量的化合物(I)。對(duì)照同基因移植受體和同種異體移植受體在移植后沒(méi)有接受藥物。
受體的腎臟功能是通過(guò)每周一次測(cè)量它們的血漿肌酸酐和蛋白尿共90天而測(cè)定的。采集上述具有腎移植物的受體的血液和尿液樣品。利用Sigma肌酸酐試劑盒檢測(cè)血漿肌酸酐，并利用Bio-Rad蛋白測(cè)定法檢測(cè)蛋白尿。
在移植后第90天采集受體的腎移植物組織用于組織學(xué)分析。將移植物樣品固定在10％NBF中，隨后加工，然后立即包埋在ParaPlastTM石蠟包埋培養(yǎng)基中。將樣品切成3μm的切片、預(yù)溫?zé)帷⒚撌?、再水合，隨后用下列4種方法中的1種染色蘇木精和曙紅染色法、過(guò)碘酸希夫染色法、維爾赫夫結(jié)合彈性三色染色法和過(guò)碘酸銀六亞甲基四胺染色法。由兩名組織學(xué)家在不知情的情況下評(píng)估組織學(xué)切片，并以用于移植病理學(xué)的改進(jìn)Banff’標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)進(jìn)行半定量評(píng)分。[Solez等人，Kidney Int.，44411-422，1993]TGFβ被認(rèn)為對(duì)引起慢性同種異體移植排斥起著決定性作用。使在移植后第90天從受體采集的腎移植物組織經(jīng)過(guò)RT-PCR用于TGFβ基因的表達(dá)。利用TRIZOL提取移植腎臟組織中的總RNA。按照Overbergh等人[Overbergh等人，Cytokine，11305，1999]所述，使用ABI Prism7700序列檢測(cè)系統(tǒng)和PE Biosystems的試劑進(jìn)行實(shí)時(shí)RT-PCR，并將其標(biāo)準(zhǔn)化至嚙齒動(dòng)物的GAPDH。大鼠TGFβ的引物和探針是5’-GCTGCTGACCCCCACTGAT-(正義)、5’-GCCACTGCCGGACAACTC-(反義)，和CGCCTGAGTGGCTGTCTTTTGACGT-TAMRA。嚙齒動(dòng)物GAPDH的引物和探針是利用PE Biosystem設(shè)計(jì)的。
通過(guò)使用ELISA測(cè)定法，還在移植后近20、40、和90天，用10mg/kg和20mg/kg劑量的化合物治療過(guò)的同種異體移植物、未治療過(guò)的同種異體移植物和同基因移植物中測(cè)量了具有F344腎臟的LEW受體血漿中抗F344大鼠小球基底膜蛋白的特異性抗體。
(2)結(jié)果同基因移植物存活超過(guò)90天。相反，僅有40％的對(duì)照同種異體移植物在移植后存活超過(guò)90天。接受10mg/kg劑量化合物(I)和20mg/kg劑量化合物(I)的那些的同種異體移植物在移植后存活超過(guò)90天的分別為80％和100％。(表1)表1
在沒(méi)有進(jìn)行化合物(I)治療的情況下，受體血漿肌酸酐在第7周增加，蛋白尿在第5周檢測(cè)為陽(yáng)性。用10mg/kg和20mg/kg劑量的化合物(I)治療過(guò)的受體可在隨后的周期內(nèi)維持與天然大鼠和同基因移植受體相同的正常肌酸酐和檢測(cè)不到的蛋白尿。(
圖1-4)在未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照中可觀(guān)察到漸近性組織學(xué)慢性排斥的發(fā)展。與未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照相比，用10mg/kg和20mg/kg化合物(I)治療過(guò)的受體腎臟移植物Banff’得分的近似累積減少分別如下間質(zhì)炎癥50％和67％，tubulitis100％和100％，結(jié)節(jié)性脈管炎33％和50％，mesangiolysis83％和100％，腎小球炎75％和38％，管萎縮40％和85％，腎小球硬化癥83％和100％，纖維-內(nèi)膜增生63％和<p>實(shí)施例2將‘生物殺傷劑D’加入到在燒杯中的河水(pH7.8)中達(dá)到各種濃度，和‘生物殺傷劑D’的抗菌活性按如上所述那樣測(cè)量。結(jié)果也示于下表4中。如在表4中所示，當(dāng)水用超過(guò)50ppm的量的‘生物殺傷劑C’處理時(shí)微生物個(gè)數(shù)顯著地減少，表明‘生物殺傷劑D’具有強(qiáng)烈的抗菌活性。
表4
實(shí)施例3為了將根據(jù)本發(fā)明的方法制備的‘生物殺傷劑C’和‘生物殺傷劑D’的抗菌活性與‘生物殺傷劑A’和‘生物殺傷劑B’的那些進(jìn)行對(duì)比，在收集河水(pH7.8)后，所制備的生物殺傷劑在添加到含有河水的燒杯中達(dá)到各種濃度之后被測(cè)試抗菌活性，以及總微生物個(gè)數(shù)和總鹵素殘留水平按如上所述測(cè)量。結(jié)果示于表5和6中。
每周1次采集具有腎移植物的受體的血液和尿液樣品共90天，用于測(cè)量它們的血漿肌酸酐和蛋白尿。血漿肌酸酐是利用Sigma肌酸酐試劑盒檢測(cè)的，蛋白尿是通過(guò)Bio-Rad蛋白測(cè)定法檢測(cè)的。
使用實(shí)施例1中描述的方法，分析慢性同種異體移植排斥的組織學(xué)改變。由兩名組織學(xué)家在不知情的情況下評(píng)價(jià)組織學(xué)切片，并以用于移植病理學(xué)的改進(jìn)Banff’s標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)進(jìn)行半定量評(píng)分。
通過(guò)使用實(shí)施例1中描述的方法，在移植后近20、40、和90天，用3mg/kg劑量的化合物(I)和1mg/kg劑量的他克莫司聯(lián)合治療過(guò)的同種異體移植物、未治療過(guò)的同種異體移植物和同基因移植物中測(cè)量了具有F344腎臟的LEW受體血漿中抗F344大鼠小球基底膜蛋白的特異性抗體。
(2)結(jié)果同基因移植物存活超過(guò)90天。相反，僅有40％的對(duì)照同種異體移植物在移植后存活超過(guò)90天。接受1mg/kg劑量他克莫司和接受3mg/kg劑量化合物(I)以及1mg/kg劑量他克莫司的那些的同種異體移植物在移植后存活超過(guò)90天的均為100％。(表3)
表3.
在未治療過(guò)的同種異體移植中，受體血漿肌酸酐在第7周增加，蛋白尿在第5周被檢測(cè)為陽(yáng)性。與未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照相比，用3mg/kg劑量的化合物(I)聯(lián)合1mg/kg劑量的他克莫司治療過(guò)的受體顯示出血漿肌酸酐和蛋白尿水平均降低。(圖10、11)在未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照中，可觀(guān)察到漸近性組織學(xué)慢性排斥的發(fā)展。與未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照相比，用3mg/kg劑量的化合物(I)和1mg/kg劑量的他克莫司治療過(guò)的受體腎臟移植物Banff’得分的近似累積減少分別如下間質(zhì)炎癥50％，tubulitis85％，結(jié)節(jié)性脈管炎92％，mesangiolysis75％，腎小球炎38％，管萎縮55％，腎小球硬化癥58％，纖維-內(nèi)膜增生63％，移植性腎小球病57％。且以腎臟移植病理學(xué)的Banff’s標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)，(-)、(+)、(++)和(+++)的定義與表2相同。(表4)
表4.
1*炎癥，2*Tubulitis，3*結(jié)節(jié)性脈管炎，4*Mesangiolysis，5*腎小球炎，6*管萎縮，7*腎小球硬化癥，8*纖維-內(nèi)膜增生，9*移植性腎小球病在同基因移植對(duì)照組中，沒(méi)有檢測(cè)到血漿抗-GBM。在未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照中，它是在移植后20天檢測(cè)到的，此后增加。像在同基因移植對(duì)照組中一樣，用3mg/kg劑量的化合物(I)聯(lián)合1mg/kg劑量的他克莫司治療過(guò)的受體沒(méi)有可檢測(cè)水平的抗供體GBM的抗體。(圖12)實(shí)施例3.慢性排斥的治療(1)方法使用實(shí)施例1中描述的大鼠和腎移植方法。從顯示血漿肌酸酐增加或可檢測(cè)到蛋白尿的時(shí)間開(kāi)始，口服給予受體大鼠20mg/kg劑量的化合物(I)共3周。將同基因移植物和未治療過(guò)的同種異體移植物作為對(duì)照組。按照實(shí)施例1中所述，每周1次采集具有腎移植物的受體的血液和尿液樣品，用于測(cè)量它們的血漿肌酸酐和蛋白尿。血漿肌酸酐是利用Sigma肌酸酐試劑盒檢測(cè)的，蛋白尿是通過(guò)Bio-Rad蛋白測(cè)定法檢測(cè)的。
使用實(shí)施例1中描述的方法，分析在化合物(I)的挽救治療下，慢性同種異體移植排斥的組織學(xué)改變。由兩名組織學(xué)家在不知情的情況下評(píng)價(jià)組織學(xué)切片，并以用于移植病理學(xué)的改進(jìn)Banff’s標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)進(jìn)行半定量評(píng)分。
(2)結(jié)果在未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照中，受體血漿肌酸酐在第7周增加，蛋白尿在第5周被檢測(cè)為陽(yáng)性。雖然化合物(I)挽救治療不能立即改善受體的腎臟功能，但在藥物治療中斷后，血漿肌酸酐和蛋白尿均傾向處于正常水平。(圖13、14)在未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照中，可觀(guān)察到漸近性組織學(xué)慢性排斥的發(fā)展。與未治療過(guò)的同種異體移植對(duì)照相比，在進(jìn)行的慢性同種異體移植排斥過(guò)程中，用20mg/kg劑量的化合物(I)治療3周的受體腎臟移植物Banff’得分的近似累積減少分別如下間質(zhì)炎癥50％，tubulitis70％，結(jié)節(jié)性脈管炎92％，mesangiolysis33％，腎小球炎38％，管萎縮42％，纖維-內(nèi)膜增生53％，移植性腎小球病89％。且以腎臟移植病理學(xué)的Banff’s標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)，(-)、(+)、(++)和(+++)的定義與表2相同。(表5)
表2
實(shí)施例3在實(shí)施例3中，兩種不同的包含超級(jí)吸收材料的超薄婦女衛(wèi)生襯墊被測(cè)定，以便確定這種包含多部件液體吸收結(jié)構(gòu)的吸收用品與更常規(guī)市售的婦女衛(wèi)生襯墊相比所具有的有效性。在該實(shí)施例中，一種具有多部件液體吸收結(jié)構(gòu)的襯墊被標(biāo)識(shí)為C-超薄型，更常規(guī)市售的婦女衛(wèi)生襯墊是可以從在香港的Procter& Gamble公司得到的Whisper超薄型襯墊。表3顯示了每種襯墊測(cè)定的特定值。
該C-超薄型襯墊具有從法國(guó)Guial Film得到的Guial多孔薄膜頂片和液體不可滲透的底片。該襯墊包括多部件液體吸收結(jié)構(gòu)，其中第一液體吸收部件具有約38平方厘米的面積，第二液體吸收部件具有約131平方厘米的面積。
第一液體吸收部件具有大約1.5毫米(0.15厘米)的厚度，從而產(chǎn)生大約6cm3的計(jì)算體積。
第一液體吸收部件按是可以從Buckeye Technologies，Inc.得到的一種材料，商品代碼為Unicore 8001。該材料具有大致230gsm的基重，具有每克材料大約6克的液體吸收能力。第二液體吸收部件是包括約60％重量的木漿絨移植物在移植后存活到90天。在移植后，單獨(dú)接受1mg/kg劑量他克莫司共10天的那些的同種異體移植物顯示100％的同種異體移植存活率。用簡(jiǎn)單劑量的他克莫司治療并從移植后第28天-第60天用10mg/kg或15mg/kg化合物(I)治療的受體的個(gè)體同種異體移植存活率將在動(dòng)物病例數(shù)增加后得到。(表6)表6
受體的腎臟功能是通過(guò)每周一次測(cè)量它們的血漿肌酸酐和蛋白尿共90天而測(cè)定的。在同種異體移植對(duì)照中，血漿肌酸酐在移植7周后迅速增加，在用簡(jiǎn)單劑量的他克莫司治療過(guò)的同種異體移植物中，血漿肌酸酐在移植8周后迅速增加，而在同基因移植對(duì)照中，血漿肌酸酐維持在正常范圍內(nèi)。在整個(gè)研究期間，在第28天-第60天給予10mg/kg化合物(I)可維持血漿肌酸酐水平低于1.5mg/dL的正常值。雖然用15mg/kg/天化合物(I)治療過(guò)的受體從移植后第3周開(kāi)始到第9周顯示血漿肌酸酐增加，但它可在那之后逆轉(zhuǎn)并維持在正常水平。(圖15、16)在40％同種異體移植對(duì)照大鼠和100％用簡(jiǎn)單劑量他克莫司治療過(guò)的同種異體移植大鼠中，在移植超過(guò)90天后都存活了下來(lái)，蛋白尿分別是在移植后第2周和第5周檢測(cè)到的，且與同基因移植對(duì)照相比，此后顯著增加。從第28天開(kāi)始10mg/kg和15mg/kg化合物(I)的治療到第60天，降低了腎臟受體中蛋白尿的發(fā)展。(圖17、18)
化合物(I)或(II)被證實(shí)具有預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的活性。因此，本發(fā)明提供了用于預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的有效免疫抑制劑。
附圖簡(jiǎn)述圖1表示用10mg/kg劑量化合物(I)治療后的血漿肌酸酐濃度。(實(shí)施例1)圖2表示用20mg/kg劑量化合物(I)治療后的血漿肌酸酐濃度。(實(shí)施例1)圖3表示用10mg/kg劑量化合物(I)治療后的蛋白尿量。(實(shí)施例1)圖4表示用20mg/kg劑量化合物(I)治療后的蛋白尿量。(實(shí)施例1)圖5表示用化合物(I)治療時(shí)TGFβ基因表達(dá)的抑制。(實(shí)施例1)圖6表示在同基因移植受體中抗GBM的抗體的產(chǎn)生。(實(shí)施例1)圖7表示在同種異體移植受體中抗GBM的抗體的產(chǎn)生。(實(shí)施例1)圖8表示在用10mg/kg劑量化合物(I)治療過(guò)的同種異體移植受體中GBM抗體的產(chǎn)生。(實(shí)施例1)圖9表示在用20mg/kg劑量化合物(I)治療過(guò)的同種異體移植受體中GBM抗體的產(chǎn)生。(實(shí)施例1)圖10表示用3mg/kg劑量化合物(I)聯(lián)合1mg/kg劑量他克莫司治療過(guò)的移植受體中的血漿肌酸酐濃度。(實(shí)施例2)圖11表示用3mg/kg劑量化合物(I)聯(lián)合1mg/kg劑量他克莫司治療過(guò)的移植受體中的蛋白尿量。(實(shí)施例2)圖12表示用化合物(I)聯(lián)合他克莫司治療過(guò)的同種異體移植受體中GBM抗體的產(chǎn)生。(實(shí)施例2)圖13表示用20mg/kg劑量化合物(I)挽救治療過(guò)的移植受體中的血漿肌酸酐濃度。(實(shí)施例3)圖14表示用20mg/kg劑量化合物(I)挽救治療過(guò)的移植受體中的蛋白尿量。(實(shí)施例3)圖15表示用10mg/kg劑量化合物(I)聯(lián)合他克莫司簡(jiǎn)單治療所治療過(guò)的移植受體中的血漿肌酸酐濃度。(實(shí)施例4)圖16表示用15mg/kg劑量化合物(I)聯(lián)合他克莫司簡(jiǎn)單治療所治療過(guò)的移植受體中的血漿肌酸酐濃度。(實(shí)施例4)圖17表示用10mg/kg劑量化合物(I)聯(lián)合他克莫司簡(jiǎn)單治療所治療過(guò)的移植受體中的蛋白尿量。(實(shí)施例4)圖18表示用15mg/kg劑量化合物(I)聯(lián)合他克莫司簡(jiǎn)單治療所治療過(guò)的移植受體中的蛋白尿量。(實(shí)施例4)
權(quán)利要求
1.一種用于預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的方法，包括在哺乳動(dòng)物受體需要時(shí)給予其治療有效量的通式(I)或(II)的化合物
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中該方法用于預(yù)防慢性排斥。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述移植是同種異體移植。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括給予治療有效量的他克莫司。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，進(jìn)一步包括給予治療有效量的他克莫司。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中該方法是口服給藥。
7.通式(I)或(II)的化合物 用于制造預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的藥物的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中所述藥物用于預(yù)防慢性排斥。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其中所述移植是同種異體移植。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于制造含有他克莫司的藥物的用途。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用于制造含有他克莫司的藥物的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中所述藥物用于口服給藥。
13.用于預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的藥物組合物，其包含治療有效量的通式(I)或(II)的化合物 以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其中該組合物用于預(yù)防慢性排斥。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其中所述移植是同種異體移植。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其用于與治療有效量的他克莫司聯(lián)合給藥。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其用于與治療有效量的他克莫司聯(lián)合給藥。
18.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其用于口服給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及下列通式(I)或(II)的化合物用于制造預(yù)防和/或治療移植器官或組織中慢性排斥的藥物的用途。
文檔編號(hào)A61K31/445GK1646122SQ03808499
公開(kāi)日2005年7月27日 申請(qǐng)日期2003年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月16日
發(fā)明者小林正和, 江宏思, 潘凡, L·埃里克森, A·埃布石, C·懷恩 申請(qǐng)人:藤澤藥品工業(yè)株式會(huì)社