專利名稱：用于治療TNF－α相關(guān)病癥的人抗體的制劑的制作方法
背景技術(shù)：
腫瘤壞死因子α(TNFα)是由多種類型的細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，包括單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，最初是根據(jù)它們誘導(dǎo)某些小鼠腫瘤壞死的能力鑒定的(例如，參見，Old，L.(1985)Science 230630-632)。隨后，證實了與惡病質(zhì)相關(guān)的被稱為惡病質(zhì)蛋白的因子是與TNFα相同的分子。業(yè)已證實了TNFα與介導(dǎo)休克相關(guān)(例如，參見，Beutler，B.和Cerami，A.(1988)Annu.Rev.Biochem.57505-518；Beutler，B.and Cerami，A.(1989)Annu.Rev.Immunol.7625-655)。另外，業(yè)已證實了TNFα與多種其他人類疾病和失調(diào)的病理生理學(xué)相關(guān)，包括膿毒癥，感染，自身免疫性疾病，移植排斥和移植物抗宿主病(例如，參見，Moeller，A.，等(1990)Cytokine 2162-169；Moeller等的美國專利5,231,024；Moeller，A.等的歐洲專利公開260 610 B1，Vasilli，P.(1992)Annu.Rev.Immunol.10411-452；Tracey，K.J.和Cerami，A.(1994)Annu.Rev.Med.45491-503)。
由于人TNFα(hTNFα)在多種人類疾病中的有害作用，業(yè)已設(shè)計了治療方案，以抑制或抵消hTNFα活性。具體地講，業(yè)已尋求能結(jié)合并且中和hTNFα的抗體，作為抑制hTNFα活性的手段。所述抗體中的一些最早的抗體是由雜交瘤分泌的小鼠單克隆抗體(mAbs)，所述雜交瘤是用hTNFα免疫的小鼠的淋巴細(xì)胞制備的(例如，參見，Hahn T；等，(1985)Proc Natl Acad Sci USA 823814-3818；Liang，C-M.，等(1986)Biochem.Biophys.Res.Commun.137847-854；Hirai，M.，等(1987)J.Immunol.Methods 9657-62；Fendly，B.M.，等(1987)Hybridoma 6359-370；Moeller，A.，等(1990)Cytokine 2162-169；Moeller等的美國專利5,231,024；Wallach，D.的歐洲專利公開186 833 B1；Old等的歐洲專利申請公開218 868 A1；Moeller，A.等的歐洲專利公開260 610 B1)。盡管這些小鼠抗-hTNFα抗體通常表現(xiàn)出對hTNFα的高的親和力(例如，Kd≤10-9M)，并且能夠中和hTNFα活性，它們在體內(nèi)的應(yīng)用可能會受到與將小鼠抗體用于人類相關(guān)的問題的制約，如短的血清半衰期，不能夠誘導(dǎo)某些人效應(yīng)物功能，并且在人體內(nèi)引發(fā)不希望的對所述小鼠抗體的免疫反應(yīng)(″人抗-小鼠抗體″(HAMA)反應(yīng))。
為了克服與將全鼠抗體用于人體相關(guān)的問題，業(yè)已通過遺傳工程方法使鼠抗-hTNFα抗體更“人樣”。例如，業(yè)已制備了嵌合抗體，其中，所述抗體鏈的可變區(qū)是源于鼠的，而所述抗體鏈的恒定區(qū)是源于人的(Knight，D.M，等(1993)Mol.Immunol.301443-1453；Daddona，P.E.，等的PCT公開WO 92/16553)。另外，業(yè)已制備了人源化抗體，其中，所述抗體可變區(qū)的高變區(qū)是源于鼠的，而所述可變區(qū)的其余部分和抗體恒定區(qū)是源于人的(Adair，J.R.等的PCT公開WO 92/11383)。不過，由于所述嵌合的和人源化抗體仍然保持了某些鼠序列，它們?nèi)匀粫T導(dǎo)不希望的免疫反應(yīng)，所述人抗-嵌合抗體(HACA)反應(yīng)，特別是在長期施用時的反應(yīng)，例如，用于慢性疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎時更是如此(例如，參見，Elliott，M.J.，等(1994)Lancet 3441125-1127；Elliot，M.J.，等(1994)Lancet 3441105-1110)。
對鼠mAbs或其衍生物(例如，嵌合的或人源化抗體)的優(yōu)選的hTNFα抑制劑將是全人的抗hTNFα抗體，因為這種試劑不會引起HAMA反應(yīng)，即使是長期使用時也是如此。業(yè)已利用雜交瘤技術(shù)制備了抗hTNFα的人單克隆自身抗體(Boyle，P.，等(1993)Cell.Immunol.152556-568；Boyle，P.，等(1993)Cell.Immunol.152569-581；Boyle等的歐洲專利申請公開614 984 A2)。不過，據(jù)報導(dǎo)，所述雜交瘤衍生的單克隆自身抗體對hTNFα的親和力太低，以至于不能通過常規(guī)方法計算，這種抗體不能結(jié)合可溶性hTNFα，并且不能中和hTNFα-誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性(參見Boyle，等；同上)。另外，人雜交瘤技術(shù)的成功取決于產(chǎn)生對hTNFα特異的自身抗體的淋巴細(xì)胞在人外周血中的天然存在。某些研究業(yè)已檢測到了人類受試者中抗hTNFα的血清自身抗體(Fomsgaard，A.，等(1989)Scand.J.Immureol.30219-223；Bendtzen，K.，等(1990)Prog.Leukocyte Biol.10B447-452)，而其他研究沒有(Leusch，H-G.，等(1991)J.Imunol.Methods 139145-147)。
作為天然存在的人抗-hTNFα抗體的替代，可以使用重組hTNFα抗體。業(yè)已披露了能以較低的親和力(即，Kd約10-7M)和快的解離速度(即，Koff約10-2秒-1)結(jié)合hTNFα的重組人抗體(Griffiths，A.D.，等(1993)EMBOJ.12725-734)。不過，由于它們較快的解離動力學(xué)，這種抗體可能不適合治療用途。另外，業(yè)已披露了重組人抗-hTNFα不能中和hTNFα活性，相反能促進(jìn)hTNFα與細(xì)胞表面的結(jié)合，并且促進(jìn)hTNFα的內(nèi)化(Lidbury，A.，等(1994)Biotechnol.Ther.527-45；Aston，R.等的PCT公開WO 92/03145)。
另外，業(yè)已披露了能夠以高的親和力和慢的解離動力學(xué)結(jié)合可溶性hTNFα，并且具有中和hTNFα活性的能力的重組人抗體，包括hTNFα-誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性(體外和體內(nèi))和hTNFα-誘導(dǎo)的細(xì)胞活化(參見美國專利6,090,382)。
發(fā)明概述需要具有長的保質(zhì)期的穩(wěn)定的含水藥物制劑，它包括適合治療用途的抗體，以便抑制或抵消有害的hTNFα活性。還需要具有長的保質(zhì)期的穩(wěn)定的含水藥物制劑，它包括適合治療用途的抗體，這種藥物制劑便于施用，并且含有高蛋白濃度。
本發(fā)明提供了液體含水藥物制劑，由存在于緩沖液中的治療有效量的抗體組成，形成了pH大約4-大約8的制劑，并且保質(zhì)期至少為18個月。本發(fā)明還包括含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，形成了pH大約為4-8的制劑，并且在液體狀態(tài)下的保質(zhì)期至少為18個月。在一種實施方案中，所述藥物制劑具有增強了的穩(wěn)定性。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑在經(jīng)過至少3次凍/融循環(huán)之后是穩(wěn)定的。在另一種實施方案中，所述抗體針對TNFα。在另一種實施方案中，所述抗體針對人TNFα。在另一種實施方案中，所述抗體是D2E7。
本發(fā)明還提供了液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，形成了pH為4-8的制劑，并且在2-8℃下具有至少12個月的增強了的穩(wěn)定性。在一種實施方案中，所述制劑具有至少18個月增強了的穩(wěn)定性。在另一種實施方案中，所述抗體針對TNFα。在另一種實施方案中，所述抗體針對TNFα。在另一種實施方案中，所述抗體是D2E7。
本發(fā)明還提供了液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，形成了pH為大約4-大約8的制劑，它是便于施用的。在一種實施方案中，所述抗體針對TNFα。在另一種實施方案中，所述抗體針對人TNFα。在另一種實施方案中，所述抗體是D2E7。
在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑是適合注射的。在另一種實施方案中，所述制劑是適合單次皮下注射使用的。在另一種實施方案中，所述抗體在所述液體含水藥物制劑中的濃度為大約1-150mg/ml。在另一種實施方案中，所述制劑中抗體的濃度為大約50mg/ml。在另一種實施方案中，所述制劑具有高蛋白濃度。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述制劑不是光敏感的。
在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它從人TNFα解離的Kd為1×10-8M或以下，并且Koff速度常數(shù)為1×10-3s-1或以下，兩種參數(shù)都是通過表面等離子共振測定的，并且在標(biāo)準(zhǔn)體外L929測定中能中和人TNFα細(xì)胞毒性，IC50為1×10-7M或以下。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它從人TNFα解離的Koff速度常數(shù)為5×10-4s-1或以下。在另一種實施方案中，所述制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它從人TNFα解離的Koff速度常數(shù)為1×10-4s-1或以下。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，在標(biāo)準(zhǔn)體外L929測定中，IC50為1×10-8M或以下。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述要求保護(hù)的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分在標(biāo)準(zhǔn)體外L929測定中能中和人TNFα細(xì)胞毒性，其IC50為1×10-9M或以下。本發(fā)明的另一種實施方案中包括制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，在標(biāo)準(zhǔn)體外L929測定中，它能中和人TNFα細(xì)胞毒性，其IC50為1×10-10M或以下。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它是重組抗體或其抗原結(jié)合部分。在另一種實施方案中，所述制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它能抑制人TNFα-誘導(dǎo)的ELAM-1在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)。在另一種實施方案中，所述要求保護(hù)的制劑包括D2E7抗體。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它從人TNFα解離的Koff速度常數(shù)為1×10-3s-1或以下，該參數(shù)是通過表面等離子共振測定的；b)具有輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO3的氨基酸序列，或通過在1，4，5，7或8號位置上進(jìn)行單丙氨酸取代或通過在1，3，4，6，7，8和/或9號位置上進(jìn)行1-5個保守性氨基酸取代對SEQ ID NO3進(jìn)行修飾所得到的氨基酸序列；c)具有重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，包括SEQ ID NO4的氨基酸序列，或通過在2，3，4，5，6，8，9，10或11號位置上進(jìn)行單丙氨酸取代或在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12號位置上進(jìn)行1-5個保守性氨基酸取代對SEQ ID NO4進(jìn)行修飾的所得到的氨基酸序列。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它從人TNFα解離的Koff速度常數(shù)為5×10-4S-1或以下。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它從人TNFα解離的Koff速度常數(shù)為1×10-4s-1或以下。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑，包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它具有輕鏈可變區(qū)(LCVR)，該可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，它包括SEQ ID NO3的氨基酸序列，或通過在1，4，5，7或8號位置上進(jìn)行單丙氨酸取代對SEQ ID NO3進(jìn)行修飾所得到的氨基酸序列，并且具有重鏈可變區(qū)(HCVR)，它具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO4的氨基酸序列，或通過在2，3，4，5，6，8，9，10或11號位置上進(jìn)行單丙氨酸取代對SEQ ID NO4進(jìn)行修飾所得到的氨基酸序列。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分的LCVR還具有CDR2結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO5的氨基酸序列，并且所述抗體或其抗原結(jié)合部分的HCVR還具有CDR2結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO6的氨基酸序列。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分的LCVR還具有CDR1結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO7的氨基酸序列，并且，HCVR具有CDR1結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO8的氨基酸序列。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，包含在所述液體含水藥物制劑中的所述抗體或其抗原結(jié)合部分具有輕鏈可變區(qū)(LCVR)，該可變區(qū)包括SEQ IDNO1的氨基酸序列，并且具有重鏈可變區(qū)(HCVR)，該可變區(qū)包括SEQ IDNO2的氨基酸序列。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分具有IgG1重鏈恒定區(qū)。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，具有IgG4重鏈恒定區(qū)。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分是Fab片段。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分是單鏈Fv片段。
在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它具有輕鏈可變區(qū)(LCVR)或重鏈可變區(qū)(HCVR)，輕鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括選自下組的氨基酸序列SEQ IDNO3，SEQ ID NO11，SEQ ID NO12，SEQ ID NO13，SEQ ID NO14，SEQ ID NO15，SEQ ID NO16，SEQ ID NO17，SEQ ID NO18，SEQ ID NO19，SEQ ID NO20，SEQ ID NO21，SEQ ID NO22，SEQ IDNO23，SEQ ID NO24，SEQ ID NO25，SEQ ID NO26，重鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO4，SEQ ID NO27，SEQ ID NO28，SEQ ID NO29，SEQ ID NO30，SEQ IDNO31，SEQ ID NO32，SEQ ID NO33和SEQ ID NO34。在另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分能中和人TNFα，黑猩猩TNFα和選自下組的至少一種其他靈長類TNFα的活性狒狒TNFα，狨猴TNFα，獼猴TNFα和恒河猴TNFα。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它還能中和小鼠TNFα的活性。本發(fā)明的制劑還包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它能中和豬TNFα的活性。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了液體含水藥物制劑，它包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它能結(jié)合人TNFα，并且包括輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，它包括SEQ ID NO3的氨基酸序列，或通過在1，4，5，7或8號位置上進(jìn)行單丙氨酸取代或在1，3，4，6，7，8和/或9號位置上進(jìn)行1-5個保守性氨基酸取代對SEQ ID NO3進(jìn)行修飾的所得到的氨基酸序列，和重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO4的氨基酸序列，或通過在2，3，4，5，6，8，9，10或11號位置上進(jìn)行單丙氨酸取代或在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12號位置上進(jìn)行1-5個保守性氨基酸取代對SEQ IDNO4進(jìn)行修飾得到的序列。在一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體，該抗體能結(jié)合人TNFα，并且包括輕鏈可變區(qū)(LCVR)或重鏈可變區(qū)(HCVR)，輕鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO3，SEQ ID NO11，SEQ ID NO12，SEQ IDNO13，SEQ ID NO14，SEQ ID NO15，SEQ ID NO16，SEQ ID NO17，SEQ ID NO18，SEQ ID NO19，SEQ ID NO20，SEQ ID NO21，SEQ ID NO22，SEQ ID NO23，SEQ ID NO24，SEQ ID NO25，SEQ IDNO26，重鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO4，SEQ ID NO27，SEQ ID NO28，SEQ ID NO29，SEQ ID NO30，SEQ ID NO31，SEQ ID NO32，SEQ ID NO33和SEQID NO34。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分能結(jié)合人TNFα，并且是抗體D2E7或其抗原結(jié)合部分。
本發(fā)明還提供了含水的藥用組合物，它包括多元醇，表面活性劑，含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，pH為大約4-8，其用量足以配制用于治療目的的濃度超過大約45mg/ml的抗體。在一種實施方案中，所述多元醇是甘露糖醇，而所述表面活性劑是失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯。在另一種實施方案中，所述組合物包括5-20mg/ml的甘露糖醇，和0.1-10mg/ml的失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯。在另一種實施方案中，所述組合物包括抗體D2E7。
本發(fā)明還提供了液體含水藥物制劑，它由1-150mg/ml的抗體，5-20mg/ml的甘露糖醇，0.1-10mg/ml的吐溫-80，以及檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)組成，pH為4-8。在一種實施方案中，所述抗體針對hTNFα。在另一種實施方案中，所述制劑包括大約40mg的抗體。本發(fā)明還提供了液體含水藥物制劑，它包括大約50mg/ml的抗體，大約12mg/ml的甘露糖醇，大約1mg/ml的吐溫-80，以及含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，pH為大約4-大約8。在一種實施方案中，所述制劑的pH為大約4.5-大約6.0。在另一種實施方案中，pH為大約4.8-大約5.5。在另一種實施方案中，本發(fā)明的pH為大約5.0-大約5.2。
在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體含水藥物制劑還包括大約1.305mg/ml的檸檬酸，大約0.305mg/ml的檸檬酸鈉，大約1.53mg/ml的二水合磷酸氫二鈉，大約0.86mg/ml的二水合磷酸二氫鈉，和大約6.165mg/ml的氯化鈉。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體，它是針對hTNFα的。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體D2E7。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑給患有以下病癥的受試者施用其中TNFα活性是有害的，以便抑制所述受試者體內(nèi)的TNFα活性。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及pH為大約4-大約8的液體含水藥物制劑，它包括高蛋白濃度，包括大約1-大約150mg/ml的抗體濃度，并且具有增強了的穩(wěn)定性。本發(fā)明還涉及用于治療患有以有害的TNFα活性為特征的狀況的受試者的液體含水藥物制劑。本發(fā)明的制劑包括以下成分能以高親和力、低解離速度和高中和能力結(jié)合人TNFα的抗體；緩沖液，它包括檸檬酸，檸檬酸鈉，二水合磷酸氫二鈉，和二水合磷酸二氫鈉；滲透壓調(diào)節(jié)劑，它包括甘露糖醇和氯化鈉；去污劑，包括失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯；和用于調(diào)節(jié)pH的氫氧化鈉。
定義為了更便于理解本發(fā)明，首先對某些術(shù)語進(jìn)行定義。
術(shù)語″受試者″意在包括活的生物體，例如，真核生物和真核生物。受試者的例子包括哺乳動物，例如，人，犬，牛，馬，豬，綿羊，山羊，貓，小鼠，兔，大鼠，和轉(zhuǎn)基因非人動物。在本發(fā)明的具體實施方案中，所述受試者是人。
術(shù)語″藥物制劑″表示以下形式的制劑它的形式使得活性成分的生物學(xué)活性是明確有效的，并且它不包括對施用所述制劑的受試者明顯有毒的其它成分?！蹇梢运幱玫摹遒x形劑(載體，添加劑)能夠合理地施用于哺乳動物動物受試者，以便提供有效劑量的所采用的活性成分。
″穩(wěn)定的″制劑是這樣的制劑，其中，在保存時，其中的抗體基本上能保持它的物理穩(wěn)定性和/或化學(xué)穩(wěn)定性和/或生物學(xué)活性。在本領(lǐng)域中可以獲得用于測定蛋白穩(wěn)定性的各種分析技術(shù)，并且在以下文獻(xiàn)中作過綜述例如，Peptide and Protein Drug Delivery，247-301，Vincent LeeEd.，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.(1991)和Jones，A.Adv.Drug Delivery Rev.1029-90(1993)。可以在選定溫度下用選定時間測定穩(wěn)定性。優(yōu)選的是，所述制劑在室溫(大約30℃)或40℃下能穩(wěn)定至少1個月和/或在大約2-8℃下穩(wěn)定至少1年或2年。另外，所述制劑優(yōu)選在進(jìn)行冷凍(例如，冷凍至-70℃)或解凍，以下稱之為″凍/融循環(huán)″之后是穩(wěn)定的。
如果在通過對顏色和/或透明度進(jìn)行肉眼檢查，或通過UV光散射或通過大小排阻層析測定時基本沒有表現(xiàn)出明顯的聚集，沉淀和/或變性的跡象，則藥物制劑中的抗體″保持它的物理穩(wěn)定性″。
如果在特定時間化學(xué)穩(wěn)定性使得抗體被認(rèn)為仍然保留了下面所定義的生物學(xué)活性，則在藥物制劑中所述抗體″保持它的化學(xué)穩(wěn)定性″?？梢酝ㄟ^檢測和定量所述抗體的化學(xué)改變形式評估化學(xué)穩(wěn)定性?；瘜W(xué)改變可能涉及大小改變(例如，剪切)，例如，可以通過采用大小排阻層析，SDS-PAGE和/或矩陣輔助的激光解析離子化/飛行時間質(zhì)譜分析(MALDI/TOF MS)進(jìn)行評估。其他類型的化學(xué)改變包括電荷改變(例如，因為脫酰胺導(dǎo)致的改變)，例如，可以通過離子交換層析對它進(jìn)行評估。
如果一種藥物制劑中的抗體具有它預(yù)期用途的生物學(xué)活性，則所述抗體在藥物制劑中″保持它的生物學(xué)活性″。例如，如果所述藥物制劑中的抗體的生物學(xué)活性為在制備所述藥物制劑時所表現(xiàn)出的生物學(xué)活性的大約30％，大約20％，或大約10％(在測定的誤差范圍內(nèi))內(nèi)，就認(rèn)為保持了它的生物學(xué)活性(例如，通過抗原結(jié)合測定確定)。
″等滲″是本領(lǐng)域所公認(rèn)的術(shù)語。例如，等滲可以表示感興趣的制劑具有與入血液基本上相同的滲透壓。等滲制劑通常具有大約250-350mOsm的滲透壓。例如，等滲可以采用蒸汽壓力或冰凍型滲壓計測定?！鍧B透壓調(diào)節(jié)劑″是能使所述制劑等滲的化合物。
″多元醇″是具有多個羥基的物質(zhì)，并且包括糖(還原糖和非還原糖)，糖醇和糖酸。本發(fā)明的優(yōu)選的多元醇的分子量低于大約600kD(例如，在大約120-大約400kD范圍內(nèi))?！暹€原糖″是包括半縮醛基的糖，它能夠還原金屬離子或與蛋白中的賴氨酸和其他氨基共價反應(yīng)，而″非還原糖″是不具備還原糖的上述特征的糖。還原糖的例子包括果糖，甘露糖，麥芽糖，乳糖，阿拉伯糖，木糖，核糖，鼠李糖，半乳糖，和葡萄糖。非還原糖包括蔗糖，海藻糖，山梨糖，松三糖和棉子糖。糖醇的例子包括甘露糖醇，木糖醇，赤蘚糖醇，蘇糖醇，山梨糖醇和甘油。至于糖酸，包括L-葡糖酸和它的金屬鹽。如果需要所述制劑是凍-融穩(wěn)定的，所述多元醇優(yōu)選是在冷凍溫度(例如，-20℃)下不會結(jié)晶的，以便它使所述制劑中的抗體去穩(wěn)定化。所述多元醇還可以起著滲透壓調(diào)節(jié)劑的作用。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述制劑的一種成分是濃度為-20mg/ml的甘露糖醇。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，甘露糖醇的濃度為7.5-15mg/ml。在本發(fā)明的更優(yōu)選的實施方案中，甘露糖醇的濃度為10-14mg/ml。
在本文中，″緩沖液″表示緩沖溶液，它能通過它的酸堿共軛成分的作用抑制pH的改變。本發(fā)明緩沖液的pH為大約4-大約8；優(yōu)選大約4.5-大約7；最優(yōu)選的pH為大約5.0-大約6.5。能夠?qū)H控制在該范圍內(nèi)的緩沖液的例子包括乙酸鹽(例如，乙酸鈉)，琥珀酸鹽(如琥珀酸鈉)，葡糖酸鹽，組氨酸，檸檬酸和其他有機酸緩沖液。
在藥理學(xué)含義上，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，抗體的″治療有效量″或″有效量″表示在預(yù)防或治療疾病方面的有效量，對于所述疾病的治療來說，所述抗體是有效的。“病癥”是能夠用所述抗體治療獲益的任何狀況。其中包括慢性和急性病癥或疾病，包括傾向于使受試者出現(xiàn)相關(guān)病癥的病理學(xué)狀態(tài)。
″防腐劑″是可以添加在所述制劑中以便顯著其中的細(xì)菌作用，例如，因此促進(jìn)多用途制劑的生產(chǎn)的化合物。潛在的防腐劑的例子包括十八烷基二甲基芐基氯化銨，氯化己烷雙胺，殺藻胺(烷基芐基二甲基氯化銨的混合物，其中，所述烷基是長鏈化合物)，和氯化芐乙氧銨。其他類型的防腐劑包括芳香醇，如苯酚，丁醇和苯甲醇，烷基對羥基苯甲酸酯，如甲基或丙基對羥基苯甲酸酯，兒茶酚，間苯二酚，環(huán)己醇，3-戊醇，和間-甲酚。
″治療″表示治療性治療和預(yù)防性或防御性措施。需要治療的受試者包括業(yè)已患有有關(guān)病癥的受試者，以及需要預(yù)防有關(guān)疾病的受試者。
在本文中，短語″腸胃外施用″和″通過腸胃外施用″表示除了腸道和局部施用以外的施用模式，通常通過注射施用，并且包括，但不局限于靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，動脈內(nèi)，鞘內(nèi)，囊內(nèi)，眶內(nèi)，心臟內(nèi)，皮內(nèi)，腹膜內(nèi)，經(jīng)氣管，皮下，表皮下，關(guān)節(jié)內(nèi)，囊下，蛛網(wǎng)膜下，脊柱內(nèi)和膜內(nèi)注射和輸液。
本文所使用的短語″系統(tǒng)施用″，″系統(tǒng)性地施用″，″外周施用″和″通過外周施用″表示以除了直接用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)以外的方式施用化合物，藥物或其他材料，以便它進(jìn)入患者的系統(tǒng)，因此，會進(jìn)行代謝和其他類似過程，例如，皮下施用。
短語″可以藥用的載體″是本領(lǐng)域所公認(rèn)的術(shù)語，并且包括適合給哺乳動物施用的可以藥用的材料，組合物或媒介物。所述載體包括液體或固體填充物，稀釋劑，賦形劑，溶劑或膠囊化材料，涉及到將所述主題試劑從身體的一個器官或部分?jǐn)y帶或轉(zhuǎn)運到身體的另一個器官或部分。在與所述制劑的其他成分兼容并且不會對患者造成傷害的含義上，每一種載體必須是“可接受的”。
在本文中，術(shù)語″人TNFα″(本文簡稱為hTNFα，或簡單地表示為hTNF)，意在表示人細(xì)胞因子，它是以17kD的分泌形式和26kD膜締合形式存在的，它的生物學(xué)活性形式包括共價結(jié)合的17kD分子的三聚體。HTNFα的結(jié)構(gòu)進(jìn)一步披露于以下文獻(xiàn)中例如，Pennica，D.，等(1984)Nature 312724-729；Davis，J.M.，等(1987)Biochemistry 261322-1326；和Jones，E.Y.，等(1989)Nature 338225-228。術(shù)語人TNFα意在包括重組人人TNFα(rhTNFα)，它可以是通過標(biāo)準(zhǔn)重組表達(dá)方法制備的或通過商業(yè)渠道購買的(R & D Systems，Catalog No.210-TA，Minneapolis，MN)。
在本文中，術(shù)語″抗體″意在表示由四個多肽鏈組成的免疫球蛋白分子，其中兩個重(H)鏈和兩個輕(L)鏈，通過二硫鍵相互連接在一起。每一個重鏈由重鏈可變區(qū)(本文簡稱為HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)組成。所述重鏈恒定區(qū)由三個結(jié)構(gòu)域CH1，CH2和CH3組成。每一個輕鏈包括輕鏈可變區(qū)(本文簡稱為LCVR或VL)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)由一個結(jié)構(gòu)域CL組成。VH和VL區(qū)還可以進(jìn)一步細(xì)分成超變區(qū)，它被稱為互補性決定區(qū)(CDR)，其中間隔有更保守的，并稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的區(qū)域。每一個VH和VL由三個CDRs和四個FRs組成，從氨基末端到羧基末端按以下順序排列FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2，F(xiàn)R3，CDR3，F(xiàn)R4。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述制劑包括具有CDR1，CDR2和CDR3序列的抗體，正如在分別被收作本文參考的美國專利號6,090,382和6,258,562中所披露的。
在本文中，術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”(或簡稱為“抗體部分”)，表示保留了能特異性結(jié)合抗原(例如，hTNFα)的抗體的一個或多個片段。業(yè)已證實，抗體的抗原結(jié)合功能可以通過全長抗體的片段實現(xiàn)。包含在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”的含義內(nèi)的結(jié)合片段的例子包括(i)Fab片段，它是由VL，VH，CL和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；(ii)F(ab′)2片段，它是二價片段，包括通過二硫鍵在鉸鏈區(qū)連接在一起的兩個Fab片段；(iii)由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單個臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段，(v)dAb片段(Ward等，(1989)Nature341544-546)，它由VH結(jié)構(gòu)域組成，和(vi)分離的互補性決定區(qū)(CDR)。另外，盡管Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域VL和VH是由獨立的基因編碼的，可以通過重組方法用合成的接頭將它們連接在一起，使它們能夠以單個蛋白鏈的形式生產(chǎn)，其中，VL和VH區(qū)配對，以便形成一價分子(被稱為單鏈Fv(scFv)；例如，參見，Bird等(1988)Science 242423-426；和Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 855879-5883)。所述單鏈抗體也被認(rèn)為包括在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”的含義內(nèi)。還包括其他形式的單鏈抗體，如雙抗體。雙抗體是二價的，雙特異性抗體，其中，VH和VL結(jié)構(gòu)域是在單條多肽鏈上表達(dá)的，不過，使用的接頭太短，以至于不能使得同一條鏈上的這兩個結(jié)構(gòu)域配對，從而迫使所述結(jié)構(gòu)域與另一條鏈上的互補的結(jié)構(gòu)域配對，并且產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點(例如，參見，Holliger，P.，等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 906444-6448；Poljak，R.J.，等(1994)Structure 21121-1123)。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述制劑包括披露于分別被收作本文參考的美國專利號6,090,382和6,258,562中的抗原結(jié)合部分。
另外，抗體或其抗原結(jié)合部分可以是較大的免疫粘附分子的一部分，它是通過所述抗體或抗體部分與一種或多種其他蛋白或肽共價或非共價締合形成的。所述免疫粘附分子的例子包括利用抗生物素蛋白鏈菌素核心區(qū)制備四聚體scFv分子(Kipriyanov，S.M.，等(1995)HumanAntibodies and Hybridomas 693-101)，并且用半胱氨酸殘基，標(biāo)記肽和C-末端聚組氨酸標(biāo)記制備二價和生物素化的scFv分子(Kipriyanov，S.M.，等(1994)Mol.Immunol.311047-1058)?？贵w部分，如Fab和F(ab′)2片段可以利用常規(guī)技術(shù)用完整抗體制備，如分別用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化完整抗體制備。另外，可以通過采用本文所披露的標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)獲得抗體，抗體部分和免疫粘附分子。
在本文中，術(shù)語″人抗體″，意在包括具有來自人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可以包括不是由人種系免疫球蛋白序列編碼(例如，通過體外隨機或定點誘變導(dǎo)入的突變或通過體內(nèi)體細(xì)胞突變導(dǎo)入的突變)的氨基酸殘基，例如，在CDRs中，特別是CDR3中。不過，在本文中，術(shù)語″人抗體″不希望包括這樣的抗體，其中，源于諸如小鼠的另一種哺乳動物種系的CDR系列業(yè)已嫁接到人構(gòu)架序列上。
在本文中，術(shù)語″重組人抗體″，意在包括通過重組方法制備，表達(dá)，生產(chǎn)或分離的人抗體，如利用轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)載體表達(dá)的抗體(在下面的第II部分進(jìn)一步說明)，從重組的，組合的人抗體文庫中分離的抗體(在下面的第III部分進(jìn)一步說明)，從用人免疫球蛋白基因進(jìn)行轉(zhuǎn)基因的動物(例如，小鼠)中分離的抗體(例如，參見Taylor，L.D.，等(1992)Nucl.Acids Res.206287-6295)，或通過任何其他方法制備，表達(dá)，生產(chǎn)，或分離的抗體，所述方法包括將人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列上。所述重組人抗體具有源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。不過，在某些實施方案中，所述重組人抗體接受了體外誘變(或在使用用人Ig序列轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因動物時，進(jìn)行體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，因此所述重組抗體的VH和VL區(qū)的氨基酸序列盡管是源于人種系VH和VL序列或與所述序列相關(guān)，但是在體內(nèi)的人抗體種系所有組成成分中可能不是天然存在的。
在本文中，″分離的抗體″，意在表示基本上不含具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體(例如，能特異性結(jié)合hTNFα的分離的抗體基本上不含能特異性地結(jié)合除了hTNFα以外的抗原的抗體)。不過，能特異性地結(jié)合hTNFα的分離的抗體可能具有與其他抗原，如，來自其他物種的TNFα分子的交叉反應(yīng)性。另外，分離的抗體可能基本上不含其他分子材料和/或化學(xué)物質(zhì)。
在本文中，″中和抗體″(或″能中和hTNFα活性的抗體″)，意在表示它與hTNFα的結(jié)合導(dǎo)致了對hTNFα的生物學(xué)活性的抑制作用的抗體。對hTNFα的生物學(xué)活性的抑制可以通過測定hTNFα生物學(xué)活性的一種或多種指標(biāo)評估，如hTNFα--誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性(體外或體內(nèi))，hTNFα-誘導(dǎo)的細(xì)胞激活和hTNFα與hTNFα受體的結(jié)合。hTNFα生物學(xué)活性的上述指標(biāo)可以通過本領(lǐng)域所公知的一種或多種標(biāo)準(zhǔn)體外或體內(nèi)測定方法評估，并且，這些方法披露于被分別收作本文參考的美國專利號6,090,382和6,258,562中。優(yōu)選的是，抗體中和hTNFα活性的能力是通過抑制L929細(xì)胞中的hTNFα-誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性評估的。作為hTNFα活性的另一種或替代的參數(shù)，可以評估抗體抑制hTNFα誘導(dǎo)的ELAM-1在HUVEC上表達(dá)的能力，作為hTNFα-誘導(dǎo)的細(xì)胞激活的指標(biāo)。
在本文中，術(shù)語″表面等離子共振″，表示可以通過在生物傳感器基質(zhì)中檢測蛋白濃度改變分析實時生物特異性相互作用的光學(xué)現(xiàn)象，例如，使用BIAcore系統(tǒng)(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden andPiscataway，NJ)。有關(guān)進(jìn)一步的說明，參見Jnsson，U.，等(1993)Ann.Biol.Clin.5119-26；Jnsson，U.，等(1991)Biotechniques11620-627；Jhnsson，B.，等(1995)J.Mol.Recognit.8125-131；和Jhnnson，B.，等(1991)Anal.Biochem.198268-277。
在本文中，術(shù)語″Koff″意在表示抗體從抗體/抗原復(fù)合物解離的解離速度常數(shù)。
在本文中，術(shù)語″Kd″意在表示特定抗體-抗原相互作用的解離常數(shù)。
II.所述制劑的抗體本發(fā)明涉及液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，構(gòu)成了pH為大約4-大約8的制劑，并且具有較長的保質(zhì)期，優(yōu)選至少18個月。在另一種實施方案中，本發(fā)明的液體含水藥物制劑具有增強了的穩(wěn)定性。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述制劑不是光敏感的。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述要求保護(hù)的制劑在至少3次凍/融循環(huán)之后保持穩(wěn)定。在另一種實施方案中，本發(fā)明的藥物制劑適合單次皮下注射使用。
可用于所述制劑中的抗體包括多克隆抗體，單克隆抗體，重組抗體，單鏈抗體，雜合抗體，嵌含抗體，人源化抗體，或它們的片段。還可以使用包括一個或兩個用于結(jié)合抗原的結(jié)合位點和免疫球蛋白的Fc-部分的抗體樣分子?？贵w樣分子的例子是活性成分etanercept或infliximab。用于所述制劑中的優(yōu)選抗體是人抗體，它是從人細(xì)胞或從代表人抗體所有組成成分的基因文庫中克隆的。特別優(yōu)選的人抗體是針對抗原TNFα，包括人TNFα(或hTNFα)的抗體。
在一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體(兩種或兩種以上)的組合，或抗體的“雞尾酒”。例如，所述制劑可以包括抗體D2E7和一種或多種其他抗體。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，從人TNFα解離的Kd為1×10-8M或以下，并且Koff速度常數(shù)為1×10-3s-1或以下，兩種參數(shù)都是通過表面等離子共振測定的，并且在標(biāo)準(zhǔn)體外L929測定中能中和人TNFα細(xì)胞毒性，其IC50為1×10-7M或以下。在另一種優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，如在分別被收作本文參考的美國專利號6,090,382和6,258,562中所披露的。
在一個方面，本發(fā)明的制劑包括D2E7抗體和抗體部分，D2E7-相關(guān)抗體和抗體部分，以及與D2E7具有相同特性的其他人抗體和抗體部分，如與hTNFα結(jié)合的高親和力，低解離動力學(xué)和高中和能力。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑包括分離的人抗體或其抗原結(jié)合部分，從人TNFα解離的常數(shù)Kd為1×10-8M或以下，并且Koff速度常數(shù)為1×10-3s-1或以下，兩種參數(shù)都是通過表面等離子共振測定的，并且在標(biāo)準(zhǔn)體外L929測定中能中和人TNFα細(xì)胞毒性，其IC50為1×10-7M或以下。更優(yōu)選的是，所述分離的人抗體或其抗原結(jié)合部分，從人TNFα解離的Koff為5×10-4s-1或以下，更優(yōu)選，Koff為1×10-4s-1或以下。更優(yōu)選，所述分離的人抗體或其抗原結(jié)合部分，在標(biāo)準(zhǔn)的體外L929測定中，能中和人TNFα細(xì)胞毒性，其IC50為1×10-8M或以下，更優(yōu)選其IC50為1×10-9M或以下，更優(yōu)選其IC50為5×10-10M或以下。在優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括抗體，它是分離的人重組抗體或其抗原結(jié)合部分。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括抗體，它還能中和TNFα-誘導(dǎo)的細(xì)胞激活，是利用用于分析TNFα-誘導(dǎo)的ELAM-1在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)上表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)體外測定方法評估的。
III.制劑的制備本發(fā)明涉及與本領(lǐng)域已知制劑相比具有改善了的特性的制劑(例如，蛋白制劑和/或抗體制劑)。例如，與本領(lǐng)域已知制劑相比，本發(fā)明的制劑具有改善了的保質(zhì)期和/或穩(wěn)定性。在優(yōu)選方面，本發(fā)明的制劑包括高蛋白濃度，例如，包括超過大約45mg/ml的蛋白濃度，超過大約50mg/ml的蛋白濃度，超過大約100mg/ml的蛋白濃度，或超過大約150mg/ml的蛋白濃度。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述蛋白是抗體。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述抗體是D2E7。本發(fā)明還提供了含水的藥用組合物，它包括多元醇，表面活性劑，和pH為大約4-8的包括檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，其用量足以制備用于治療目的的濃度超過例如大約45mg/ml的抗體。
感興趣的抗體的制備是按照本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行的。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，用于所述制劑中的抗體是在CHO細(xì)胞中表達(dá)的，并且通過一系列標(biāo)準(zhǔn)的層析步驟純化。在另一種實施方案中，所述抗體針對hTNFα，并且，是按照披露于分別被收作本文參考的美國專利號6,090,382和6,258,562中的方法制備的。
在制備感興趣的抗體之后，制備含有所述抗體的藥物制劑。例如，存在于所述制劑中的抗體的治療有效量是通過考慮需要的劑量體積和施用模式?jīng)Q定的。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述制劑中抗體的濃度為大約1-大約150mg抗體/每ml液體制劑。在優(yōu)選實施方案中，所述制劑中抗體的濃度為大約5-大約80mg/ml。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述制劑中抗體的濃度為大約25-大約50mg/ml。所述制劑特別適用于超過15mg/ml的大的抗體劑量。在優(yōu)選實施方案中，所述抗體的濃度為50mg/ml。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述制劑中抗體的濃度為大約1-150mg/ml，大約5-145mg/ml，大約10-140mg/ml，大約15-135mg/ml，大約20-130mg/ml，大約25-125mg/ml，大約30-120mg/ml，大約35-115mg/ml，大約40-110mg/ml，大約45-105mg/ml，大約50-100mg/ml，大約55-95mg/ml，大約60-90mg/ml，大約65-85mg/ml，大約70-80mg/ml，或大約75mg/ml。介于上述濃度之間的范圍，例如，大約6-144mg/ml也屬于本發(fā)明的部分。例如，本發(fā)明包括使用上述任意值的組合作為上限和/或下限的值的范圍。
在一種實施方案中，本發(fā)明提供了具有長的保質(zhì)期的制劑，包括活性成分，優(yōu)選抗體，與甘露糖醇，一水合檸檬酸，檸檬酸鈉，二水合磷酸氫二鈉，二水合磷酸二氫鈉，氯化鈉，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯，水，和氫氧化鈉組合。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑在液體狀態(tài)下具有至少18個月的長的保質(zhì)期。冷凍本發(fā)明的制劑還可以用于進(jìn)一步延長它的保質(zhì)期。
制備了含水制劑，包括存在于pH緩沖溶液中的所述抗體。本發(fā)明的緩沖液的pH為大約4-大約8，優(yōu)選大約4.5-大約6.0，更優(yōu)選大約4.8-大約5.5，最優(yōu)選的pH為大約5.0-大約5.2。介于上述pH之間的范圍也被認(rèn)為是本發(fā)明的一部分。例如，意在包括將上述任何值的組合作為上限和/或下限的值的范圍。能夠?qū)H控制在該范圍內(nèi)的緩沖液的例子包括乙酸鹽(例如乙酸鈉)，琥珀酸鹽(例如琥珀酸鈉)，葡糖酸鹽，組氨酸，檸檬酸鹽和其他有機酸緩沖液。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括緩沖系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括磷酸鹽和檸檬酸鹽，以便將pH保持在大約4-大約8。在另一種實施方案中，pH范圍為大約4.5-大約6.0，更優(yōu)選大約pH 4.8-大約5.5，最優(yōu)選的pH范圍為大約5.0-大約5.2。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述緩沖系統(tǒng)包括一水合檸檬酸，檸檬酸鈉，二水合磷酸氫二鈉，和/或二水合磷酸二氫鈉。在另一種實施方案中，所述緩沖系統(tǒng)包括大約1.3mg/ml的檸檬酸(例如，1.305mg/ml)，大約0.3mg/ml的檸檬酸鈉(例如，0.305mg/ml)，大約1.5mg/ml的二水合磷酸氫二鈉(例如1.53mg/ml)，大約0.9mg/ml的二水合磷酸二氫鈉(例如，0.86)，和大約6.2mg/ml的氯化鈉(例如，6.165mg/ml)。在其他優(yōu)選實施方案中，所述緩沖系統(tǒng)包括1-1.5mg/ml的檸檬酸，0.25-0.5mg/ml的檸檬酸鈉，1.25-1.75mg/ml的二水合磷酸氫二鈉，0.7-1.1mg/ml的二水合磷酸二氫鈉，和6.0-6.4mg/ml的氯化鈉。在另一種實施方案中，所述制劑的pH是用氫氧化鈉調(diào)節(jié)的。
在所述制劑中還包括可以作為滲透壓調(diào)節(jié)劑并且能夠穩(wěn)定所述抗體的多元醇。將所述多元醇添加到所述制劑中，其用量可以根據(jù)需要的所述制劑的等滲性而改變。所述含水的制劑優(yōu)選是等滲透的。所添加的多元醇的量還可以根據(jù)多元醇的分子量而改變。例如，與二糖(如海藻糖)相比，可以添加較少量的單糖(例如甘露糖醇)。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，被作為滲透壓調(diào)節(jié)劑用在所述制劑中的多元醇是甘露糖醇。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，甘露糖醇的濃度為大約5-20mg/ml。在本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方案中，甘露糖醇的濃度為大約7.5-15mg/ml。在本發(fā)明的制劑的更優(yōu)選的實施方案中，甘露糖醇的濃度為大約10-14mg/ml。在最優(yōu)選的實施方案中，甘露糖醇的濃度為大約12mg/ml。在本發(fā)明的另一種實施方案中，在所述制劑中含有多元醇山梨糖醇。
另外，將去污劑或表面活性劑添加到所述抗體制劑中。典型的去污劑包括非離子去污劑，如失水山梨醇聚氧乙烯醚脂肪酸酯(例如失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚月桂酸酯，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯等)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。所添加的去污劑的量是這樣的，它能減少所述制備的抗體的聚集和/或減少顆粒在所述制劑中的形成和/或減少吸附。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括聚山梨醇酯作為表面活性劑。在本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括去污劑失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯或吐溫80。吐溫80是用于表示聚氧乙烯(20)失水山梨醇一油酸酯的名詞(參見Fiedler，Lexikon derHifsstoffe，Editio Cantor Verlag Aulendorf，4th edi.，1996)。在一種優(yōu)選實施方案中，所述制劑包括大約0.1-大約10mg/ml的失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯，更優(yōu)選大約0.5-大約5mg/ml。在另一種優(yōu)選實施方案中，在本發(fā)明的制劑中存在大約0.1％失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑是裝在管形瓶瓶中的含有下面表1所示成分的0.8mL的溶液。
表1具有用于注射的0.8mL溶液1)的1個管形瓶包括
1)溶液的密度1.022g/mL2)以濃縮物形式使用3)作為1M溶液添加在一種實施方案中，所述制劑包括上面所鑒定的試劑(即抗體，緩沖液，多元醇和去污劑)，并且基本上不含一種或多種防腐劑，如苯甲醇，苯酚，間甲酚，氯丁醇和苯索氯銨。在另一種實施方案中，可以在所述制劑中添加防腐劑，特別是在所述制劑是多劑量制劑時需要添加。在所述制劑中可以添加一種或多種其他可以藥用的載體，賦形劑或穩(wěn)定劑，如在Remington′s Pharmaceutical Sciences 16th edition，Osol，A.Ed.(1980)中所披露的，只要它們不會對所述制劑的需要的特征造成顯著的負(fù)面影響就行?？梢越邮艿妮d體，賦形劑或穩(wěn)定劑在所使用和所包含的劑量和濃度下對受體是無毒的，并且包括其他緩沖劑；助溶劑；包括抗壞血酸和甲硫氨酸的抗氧化劑；諸如EDTA的螯合劑；金屬復(fù)合物(例如Zn-蛋白復(fù)合物)；諸如聚酯的生物可降解的聚合物；和/或諸如鈉的成鹽抗衡離子。
根據(jù)要治療的特定適應(yīng)癥的需要，本發(fā)明的制劑還可以與一種或多種其他治療劑組合，優(yōu)選那些不會對所述制劑的抗體產(chǎn)生負(fù)面影響的具有互補活性的治療劑。所述治療劑適合以對預(yù)期的目的有效的量組合存在?？梢耘c本發(fā)明的制劑組合的其他治療劑進(jìn)一步披露于分別被收作本文參考的美國專利號6,090,382和6,258,562中。
被用于體內(nèi)施用的制劑必須是無菌的。在制備所述制劑之前或之后，通過用無菌過濾膜過濾，可以方便地實現(xiàn)這一目的。
IV.制劑的施用本發(fā)明的制劑可用于在分別被收作本文參考的美國專利號6,090,382和6,258,562中披露的類似適應(yīng)癥中，并且在下面進(jìn)一步詳細(xì)說明。
短語所述制劑的″有效量″是抑制TNFα活性所必需或足夠的用量，例如，抑制有害的TNFα活性相關(guān)狀態(tài)的各種形態(tài)學(xué)或身體癥狀。在另一種實施方案中，所述制劑的有效量是獲得需要的結(jié)果所必需的用量。在一種例子中，所述制劑的有效量是足以抑制有害的TNFα活性的用量。在另一種例子中，所述制劑的有效量為0.8mL的含有40mg抗體的所述制劑，如表1中所披露的。所述有效量可以根據(jù)以下因素而改變，如受試者的身材和體重，或疾病的類型。例如，TNFα活性-抑制制劑的選擇可能影響″有效量″的構(gòu)成。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠研究上述因素，并且可以在不進(jìn)行過多試驗的情況下，確定TNFα活性抑制制劑的有效量。
施用方案可能影響有效量的構(gòu)成。可以在有害的TNFα活性發(fā)作之前和之后給所述受試者施用TNFα活性-抑制制劑。另外，能夠每天或順序施用若干個分開的劑量，以及交錯的劑量，或者所述劑量可以是連續(xù)輸入的，或者可以是藥團注射。另外，TNFα活性-抑制制劑的劑量可以根據(jù)治療或預(yù)防情況的要求成比例地增加或減少。
術(shù)語″治療″包括與要治療的狀況，病癥或疾病相關(guān)或引起的至少一種癥狀的減輕或緩解。例如，治療可以是減輕病癥的一種或幾種癥狀或徹底根除病癥。
本發(fā)明藥物制劑中的活性成分(抗體)的實際劑量水平可以改變，以便獲得能有效實現(xiàn)對特定患者，組合物，和施用模式，而又對所述患者無毒的所需治療反應(yīng)的活性成分的用量。
選擇的劑量水平取決于多種因素，包括存在于所述制劑中的抗體的活性，施用途徑，施用時間，所采用的特定化合物的排泄速度，治療的持續(xù)時間，其他藥物，用于與所采用的特定化合物組合的其他藥物，化合物和/或物質(zhì)，要治療患者的年齡，性別，體重，狀態(tài)，一般健康狀況和以前的醫(yī)療史，以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域所熟知的類似因素。
具有本領(lǐng)域普通技能的醫(yī)生或獸醫(yī)能夠方便地確定并且開出所需要的本發(fā)明藥用組合物的有效量。例如，醫(yī)生或獸醫(yī)開始時可以將低于需要水平的劑量的本發(fā)明的化合物用于所述藥物制劑中，以便獲得需要的治療作用，并逐漸加大所述劑量，直到獲得所述需要的效果。
一般，本發(fā)明制劑的合適的每日劑量是所述制劑能有效產(chǎn)生治療作用的最低劑量。所述有效劑量一般取決于上文所述因素。本發(fā)明制劑的有效量是能抑制患有TNFα活性是有害的病癥的受試者體內(nèi)的TNFα活性的用量。在優(yōu)選實施方案中，所述制劑每次注射活性成分抗體，能提供40mg的有效劑量。在另一種實施方案中，所述制劑提供了在大約1-150mg抗體范圍內(nèi)的有效劑量。如果需要的話，所述藥物制劑的有效的每日劑量可以在一天中以合適的間隔分開二個，三個，四個，五個，六個或更多個亞劑量分別施用，任選以單位劑型施用。
在本發(fā)明的一種實施方案中，所述制劑中的抗體劑量為大約5-大約80mg。在另一種實施方案中，所述制劑中的抗體劑量為大約25-大約50mg。所述制劑特別適用于超過15mg的大的抗體劑量。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述制劑提供了劑量為大約40mg的抗體。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述抗體針對TNFα。在最優(yōu)選的實施方案中，所述抗體是D2E7。
在本發(fā)明的一種實施方案中，所述制劑中的抗體劑量為大約1-150mg，大約5-145mg，大約10-140mg，大約15-135mg，大約20-130mg，大約25-125mg，大約30-120mg，大約35-115mg，大約40-110mg，大約45-105mg，大約50-100mg，大約55-95mg，大約60-90mg，大約65-85mg，大約70-80mg，或大約75mg。在優(yōu)選實施方案中，所述抗體的劑量為40mg。在另一種實施方案中，抗體針對TNFα。在最優(yōu)選的實施方案中，所述抗體是D2E7。介于上述劑量之間的范圍，例如，大約2-149mg也屬于本發(fā)明的一部分。例如，使用上述任意值的組合作為上限和/或下限的值的范圍也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
應(yīng)當(dāng)指出的是，劑量值可以根據(jù)要緩解的狀況的嚴(yán)重程度而改變。還應(yīng)當(dāng)理解的是，對于任何特定受試者來說，具體的劑量方案應(yīng)當(dāng)根據(jù)個體的需要的和管理或監(jiān)督所述組合物施用的人員的專業(yè)判斷隨時調(diào)整，并且，本文所提供的劑量范圍僅僅是代表性的，并非要限定要求保護(hù)的組合物的范圍或操作。
本發(fā)明提供了具有長的保質(zhì)期的藥物制劑，在一種實施方案中，該制劑被用于在患有TNFα活性是有害的病癥的受試者體內(nèi)抑制TNFα活性，包括給所述受試者施用本發(fā)明的抗體或抗體部分，以便抑制所述受試者體內(nèi)的TNFα活性。優(yōu)選的是，所述TNFα是人TNFα，并且所述受試者是人類受試者。另外，所述受試者可以是表達(dá)與本發(fā)明的抗體交叉反應(yīng)的TNFα的哺乳動物。另外，所述受試者可以是業(yè)已導(dǎo)入了hTNFα的哺乳動物(例如，通過施用hTNFα或通過表達(dá)hTNFα轉(zhuǎn)基因)。本發(fā)明的制劑可以出于治療目的給人類受試者施用(在下面進(jìn)一步討論)。在本發(fā)明的一種實施方案中，所述液體藥物制劑是便于施用的，它包括，例如，由患者自己施用的制劑。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的制劑是通過皮下注射施用的，優(yōu)選單次使用。另外，本發(fā)明的制劑可以給非人哺乳動物施用，所述哺乳動物能表達(dá)與抗體交叉反應(yīng)的TNFα(例如，靈長類，豬或小鼠)，用于獸醫(yī)目的，或作為人類疾病的動物模型。就后一種情況而言，所述動物模型可用于評估本發(fā)明抗體的療效(例如，測試施用的劑量和時程)。
在本文中，術(shù)語″其中TNFα活性是有害的病癥″意在包括這樣的疾病和其他病癥其中，TNFα在患有所述疾病的受試者體內(nèi)的存在，業(yè)已被證實或被懷疑造成了所述疾病的病理生理學(xué)或者是導(dǎo)致所述病癥惡化的因素。因此，其中TNFα活性是有害的病癥是這樣的病癥其中，抑制TNFα活性，預(yù)計能緩解所述病癥的癥狀和/或進(jìn)展。所述病癥可能表現(xiàn)為，例如，在患有所述病癥的受試者的生物學(xué)流體中TNFα濃度的增加(例如，在受試者的血清，血漿，滑液等中TNFα濃度的增加)，例如，這種增加可以使用上文所述的抗TNFα抗體檢測。
存在多種其中的TNFα活性是有害的病癥的例子。其中TNFα活性是有害的病癥的例子披露于被收作本文參考的美國申請?zhí)?0/397275中。其中TNFα活性是有害的病癥的例子還披露于分別被收作本文參考的美國專利號6,015,557，6,177,077，6,379,666，6,419,934，6,419,944，6,423,321和6,428,787；美國專利申請?zhí)朥S2001/0016195，US2001/0004456，和US2001/026801；WO 00/50079和WO 01/49321。
下面進(jìn)一步討論本發(fā)明的抗體和抗體部分在治療具體病癥方面的應(yīng)用A.膿毒癥業(yè)已確定了腫瘤壞死因子在膿毒癥的病理生理學(xué)中的作用，具有包括低血壓，心肌抑制，血管滲露綜合征，器官壞死，刺激有毒的二級介質(zhì)釋放和激活凝血級聯(lián)反應(yīng)的生物學(xué)作用(例如，參見，Tracey，K.J.和Cerami，A.(1994)Annu.Rev.Med.45491-503；Russell，D和Thompson，R.C.(1993)Curr.Opin.Biotech.4714-721)。因此，本發(fā)明的制劑可用于治療任何臨床狀況的膿毒癥，包括膿毒性休克，內(nèi)毒素性休克，革蘭氏陰性菌膿毒癥和中毒性休克綜合征。
另外，為了治療膿毒癥，本發(fā)明的制劑可以與能夠進(jìn)一步緩解膿毒癥的一種或多種其他治療劑共同施用，如白介素-1抑制劑(如在PCT公開號WO92/16221和WO 92/17583中所披露的)，細(xì)胞因子白介素-6(例如，參見PCT公開號WO 93/11793)或血小板活化因子的拮抗劑(例如，參見歐洲專利申請公開號EP 374 510)。
另外，在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的制劑是給膿毒癥患者亞類中的人類患者施用的，這些患者在治療時的IL-6的血清或血漿濃度超過500pg/ml，更優(yōu)選1000pg/m(參見Daum，L.等的PCT公開號WO95/20978)。
B.自身免疫性疾病腫瘤壞死因子業(yè)已被證實在多種自身免疫性疾病的病理生理學(xué)中發(fā)揮作用。例如，業(yè)已證實在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中TNFα參與了激活組織炎癥并且導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞(例如，參見Tracey和Cerami，同上；Arend，W.P.和Dayer，J-M.(1995)Arth.Rheum.38151-160；Fava，R.A.等(1993)Clin.Exp.Immunel.94261-266)。另外，業(yè)已證實了TNFα能促進(jìn)胰島細(xì)胞死亡，并且介導(dǎo)糖尿病中的胰島素抗性(例如，參見Tracey和Cerami，同上；PCT公開號WO 94/08609)。另外，業(yè)已證實了TNFα參與介導(dǎo)對少突細(xì)胞的細(xì)胞毒性，并且誘導(dǎo)了多發(fā)性硬化中的炎性斑(例如，參見Tracey和Cerami，同上)。業(yè)已對嵌合的和人源化的鼠抗-hTNFα抗體進(jìn)行了治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床試驗(例如，參見，Elliott，M.J.，等(1994)Lancet 3441125-1127；Elliot，M.J.，等(1994)Lancet3441105-1110；Rankin，E.C.，等(1995)Br.J.Rheumatol.34334-342)。
本發(fā)明的制劑可用于治療自身免疫性疾病，特別是與炎癥相關(guān)的那些，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性脊柱炎，骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，過敏，多發(fā)性硬化，自身免疫性糖尿病，自身免疫性眼色素層炎和腎病綜合征。通常，所述制劑是系統(tǒng)性施用的，不過，對于某些病癥來說，將所述抗體或抗體部分局部施用于炎癥部位可能是有利的(例如，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)中的局部施用或在糖尿病性潰瘍上的局部施用，單獨施用，或者與環(huán)己烷-ylidene衍生物組合施用，正如在PCT公開號WO93/19751中所披露的)。
C.傳染病業(yè)已證實了腫瘤壞死因子參與了在多種傳染病中發(fā)現(xiàn)的介導(dǎo)性生物學(xué)作用。例如，業(yè)已證實了TNFα參與介導(dǎo)腦炎癥和瘧疾中的毛細(xì)管栓塞和梗塞(例如，參見Tracey和Cerami，同上)。另外，業(yè)已證實了TNFα參與了介導(dǎo)腦炎癥，并且在腦膜炎中誘導(dǎo)血腦屏障的降解，誘導(dǎo)膿毒性休克綜合征，激活了靜脈梗塞(例如，參見Tracey和Cerami，同上)。另外，業(yè)已證實TNFα參與了在獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)中刺激病毒繁殖并且介導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷(例如，參見Tracey和Cerami，同上)。因此，本發(fā)明的抗體和抗體部分可用于治療傳染病，包括細(xì)菌性腦膜炎(例如，參見歐洲專利申請公開號EP 585 705)，腦型瘧疾，AIDS和AIDS-相關(guān)的并發(fā)癥(ARC)(例如，參見歐洲專利申請公開號EP 230574)，以及在移植之后的巨細(xì)胞病毒感染(例如，參見Fietze，E.，等(1994)Transplantation 58675-680)。本發(fā)明的制劑還可用于緩解與傳染病相關(guān)的癥狀，包括由于感染(如流感)導(dǎo)致的發(fā)熱和肌痛，和繼發(fā)于感染的惡病質(zhì)(例如，在AIDS或ARC之后)。
D.移植業(yè)已證實腫瘤壞死因子是同種異體移植物的排斥和移植物抗宿主疾病(GVHD)的關(guān)鍵介質(zhì)，并且介導(dǎo)了在將抗T細(xì)胞受體CD3復(fù)合物的大鼠抗體OKT3用于腎臟移植排斥時出現(xiàn)的負(fù)面反應(yīng)(例如，參見Tracey和Cerami，同上；Eason，J.D.，等(1995)Transplantation 59300-305；Suthanthiran，M.和Strom，T.B.(1994)New Engl.J.Med.331365-375)。因此，本發(fā)明的制劑可用于移植移植物排斥，包括同種異體移植物的排斥和異種移植物的排斥，并且抑制GVHD。盡管所述抗體或抗體部分可以單獨使用，更優(yōu)選的是，它是與能抑制針對同種異體移植物的免疫反應(yīng)或抑制GVHD的一種或多種其他試劑組合使用。例如，在一種實施方案中，本發(fā)明的制劑與OKT3組合用于抑制OKT3-誘導(dǎo)的反應(yīng)。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑是與針對調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中的其他目標(biāo)，如細(xì)胞表面分子CD25(白介素-2受體-α)，CD11a(LFA-1)，CD54(ICAM-1)，CD4，CD45，CD28/CTLA4，CD80(B7-1)和/或CD86(B7-2)的一種或多種抗體組合使用的。在另一種實施方案中，本發(fā)明的制劑是與一種或多種普通免疫抑制劑，如環(huán)孢菌素A或FK506組合使用的。
E.惡性腫瘤業(yè)已證實腫瘤壞死因子參與誘導(dǎo)惡病質(zhì)，刺激腫瘤生長，促進(jìn)轉(zhuǎn)移潛力并且在惡性腫瘤中介導(dǎo)細(xì)胞毒性(例如，參見Tracey和Cerami，同上)。因此，本發(fā)明的制劑可用于治療惡性腫瘤，抑制腫瘤生長或轉(zhuǎn)移和/或緩解繼發(fā)于惡性腫瘤的惡病質(zhì)。所述制劑可以系統(tǒng)性施用或局部用于腫瘤部位。
F.肺病業(yè)已證實腫瘤壞死因子與成人呼吸窘迫綜合征的病理生理學(xué)相關(guān)，包括刺激白細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞活化，指導(dǎo)對肺細(xì)胞的細(xì)胞毒性，并且誘導(dǎo)血管滲露綜合征(例如，參見Tracey和Cerami，同上)。因此，本發(fā)明的制劑可用于治療各種肺病，包括成人呼吸窘迫綜合征(例如，參見PCT公開號WO 91/04054)，休克肺，慢性肺炎性疾病，肺肉樣瘤病，肺纖維化和矽肺。所述制劑可以系統(tǒng)性施用或局部用于肺表面，例如，作為氣溶膠使用。
G.腸道疾病業(yè)已證實腫瘤壞死因子與炎性腸病的病理生理學(xué)相關(guān)(例如，參見Tracy，K.J.，等(1986)Science 234470-474；Sun，X-M.，等(1988)J.Clin.Invest.811328-1331；MacDonald，T.T.等(1990)Clin.Exp.Immunol.81301-305)。嵌合的鼠抗-hTNFα抗體業(yè)已進(jìn)行了用于治療克隆氏病的臨床試驗(van Dullemen，H.M.等，(1995)Jastroenterology109129-135)。本發(fā)明的制劑還可用于治療腸道疾病，如特發(fā)性炎性腸病，它包括兩種綜合征，克隆氏病和潰瘍性大腸炎。
H.心臟病本發(fā)明的制劑還可用于治療各種心臟疾病，包括心臟局部缺血(例如，參見歐洲專利申請公開號EP453898)和心功能不全(心肌衰弱)(例如，參見PCT公開號WO94/20139)。
I.其他疾病本發(fā)明的藥物制劑還可用于治療其中TNFα活性是有害的各種其他病癥。其中業(yè)已證實TNFα活性與病理生理學(xué)相關(guān)的其他疾病和病癥的例子包括炎性骨骼疾病，和骨再吸收疾病(例如，參見Bertolini D.R.等(1986)Nature319516-518；Konig，A.等(1988)J.Bone Miner.Res.3621-627；Lerner，U.H.和Ohlin，A.(1993)J.Bone Miner.Res.8147-155；和Shankar，G.和Stern，P.H.(1993)Bone 14871-876)，肝炎，包括酒精性肝炎(例如，參見McClain，C.J.和Cohen，D.A.(1989)Hepatology 9349-351；Felver，M.E.，等(1990)Alcohol.Clin.Exp.Res.14255-259；和Hansen，J.等(1994)Hepatology 20461-474)和病毒性肝炎(Sheron，N.等(1991)J.Hepatol.12241-245；和Hussain，M.J.等(1994)J.Clin.Pathol.471112-1115)，凝血障礙(例如，參見van der Poll，T.等(1990)N.Bngl.J.Med.3221622-1627；和van der Poll，T.等(1991)Prog.Clin.Biol.Res.36755-60)，燒傷(例如，參見Giroir，B.P.，等(1994)Am.J.Physiol.267H118-124；和Liu，X.S.等(1994)Burns 2040-44)，再灌注損傷(例如，參見Scales，W.E.等(1994)Am.J.Physio.267G1122-1127；Serrick，C.，等(1994)Transplantation 581158-1162；和Yao，Y.M.等(1995)Resuscitation 29157-168)，瘢痕疙瘩(例如，參見McCauley，R.L.，等(1992)J.Clin.Immunol.12300-308)，疤痕組織形成；發(fā)熱；牙周疾??；肥胖和輻射毒性。
其中TNFα活性是有害的其他疾病包括，但不局限于成人Still′s病，阿耳茨海默氏病，強直性脊柱炎，哮喘，癌和惡病質(zhì)，動脈粥樣硬化，慢性動脈粥樣硬化，慢性疲勞綜合征，肝功能衰竭，慢性肝功能衰竭，阻塞性肺病，慢性阻塞性肺病，充血性心力衰竭，皮膚多肌炎，糖尿病大血管病，子宮內(nèi)膜異位，家族性周期熱，纖維化，血液透析，Jarisch-Herxheimer反應(yīng)，新生兒RA，川崎綜合征，骨髓發(fā)育異常綜合征，心肌梗死，panciaticular vulgaris，牙周疾病，周圍神經(jīng)病，多關(guān)節(jié)的，多肌炎，漸進(jìn)性腎衰竭，牛皮癬，牛皮癬關(guān)節(jié)炎，賴特爾綜合征，肉樣瘤病，硬皮病，脊柱關(guān)節(jié)病，Still′s病，中風(fēng)，與治療相關(guān)的綜合征，治療誘導(dǎo)的炎性綜合征，在使用IL-2之后的炎性綜合征，胸腹主動脈動脈瘤修復(fù)(TAAA)，Vasulo-Behcet′s病，黃熱病免疫，1型糖尿病，2型糖尿病，神經(jīng)病性疼痛，坐骨神經(jīng)痛，腦水腫，在脊髓中和/或周圍的水腫，脈管炎，韋格內(nèi)氏肉芽腫，顳動脈炎，風(fēng)濕性多肌痛，Takayasu′s動脈炎，結(jié)節(jié)性多動脈炎，顯微性多血管炎，Churg-Strauss綜合征，F(xiàn)elty′s綜合征，Sjogren′s綜合征，混合性結(jié)締組織病，復(fù)發(fā)性多軟骨炎，假痛鳳，假體松弛，自身免疫性肝炎，硬化性膽管炎，急性胰腺炎，慢性胰腺炎，腎小球腎炎，鏈球菌感染后腎小球腎炎或IgA腎病，風(fēng)濕性心臟病，心肌病，睪丸炎，膿皮病，多發(fā)性骨髓瘤，TNF受體相關(guān)的周期性綜合征[TRAPS]，動脈粥樣硬化，類固醇依賴型巨細(xì)胞動脈炎肌炎，眼色素層炎，和藥物反應(yīng)。
在下面的實施例中對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，這些實施例不應(yīng)當(dāng)被理解成進(jìn)一步的限定。在本申請中所引用的所有文獻(xiàn)，待批專利申請和公開的專利的內(nèi)容被專門收作本文參考。
實施例實施例1制劑的制備本發(fā)明的藥物制劑是按照以下方法制備的。
用于所述制劑中的材料包括甘露糖醇，一水合檸檬酸(檸檬酸)，檸檬酸鈉，二水合磷酸氫二鈉，二水合磷酸二氫鈉，氯化鈉，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯，注射用水，氫氧化鈉，它是以1M溶液形式提供的，以便調(diào)整pH，和蛋白濃縮物(例如，抗體濃縮物)。
制備20L緩沖液(相當(dāng)于20.180kg-溶液的密度1.009g/ml)稱量出以下重量的成分240.0g甘露糖醇，26.1g一水合檸檬酸，6.1g檸檬酸鈉，30.6g二水合磷酸氫二鈉，17.2g二水合磷酸二氫鈉，123.3g氯化鈉，20.0g失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯，和19，715.7-19，716.1g的水。
通過將40.0g的氫氧化鈉與1000.8g的注射用水混合制備氫氧化鈉溶液。
然后，通過將以下預(yù)先稱量好的成分(如上文所述)溶解在大約90％的注射用水中制備緩沖液甘露糖醇，一水合檸檬酸，檸檬酸鈉，二水合磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，氯化鈉，和失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯。業(yè)已證實，添加緩沖液成分的順序并不重要，因此可以隨意選擇。
在添加上述所有緩沖液成分之后，用按上述方法制備的1M氫氧化鈉調(diào)節(jié)該溶液的pH。在添加氫氧化鈉之后，添加最終重量的水。然后通過過濾膜(親水性聚偏二氟乙烯，0.22μm孔徑)將緩沖溶液過濾到無菌容器中。所使用的過濾介質(zhì)是過濾消毒的氮氣。
制備40L制劑(相當(dāng)于40.88kg)然后將過濾的緩沖溶液添加到按以下方法制備的解凍的并且合并的抗體濃縮物(所述藥物制劑的活性成分)中。在制備所述藥物制劑之前在水浴中對所述抗體(濃縮物)進(jìn)行解凍。使用34.207g抗體濃縮物，它相當(dāng)于2.0kg的蛋白，濃度為60mg蛋白/mL蛋白濃縮物。所述濃縮物的密度為1.0262g/mL?？梢允褂?5.655-37.316范圍內(nèi)的任何蛋白濃縮物，它相當(dāng)于蛋白濃縮物中蛋白的濃度為55-80mg/mL。在攪拌狀態(tài)下添加所述緩沖液，直到達(dá)到總?cè)芤旱淖罱K重量。
然后按照上述方法，通過過濾對包含它的所有成分的制劑進(jìn)行過濾，所不同的是所述制劑是通過兩層無菌0.22μm的膜過濾器過濾的。在消毒之后，對所述制劑進(jìn)行包裝，以便在管形瓶或預(yù)先填充的注射器中使用。
技術(shù)人員還可以理解的是，本文所提到的重量和/或重量與體積比可以利用所述成分的公知的分子量換算成摩爾和/或摩爾濃度。本文所列舉的重量(例如，g或kg)是用于所述體積的(例如，緩沖液或藥物制劑)。技術(shù)人員可以理解的是，在需要不同的制劑體積時，可以成比例地調(diào)整所述重量。例如，32L，20L，10L，5L或1L制劑分別包括80％，50％，25％，12.5％或2.5％的所列舉的重量。
實施例2凍/融研究在選擇D2E7抗體的所述制劑緩沖液之后，將藥物物質(zhì)配制到相同的基質(zhì)中，作為最終的產(chǎn)品。
通過將藥物物質(zhì)從冷凍狀態(tài)轉(zhuǎn)變成液體狀態(tài)循環(huán)3次，評估蛋白濃度為63mg/mL的D2E7抗體藥物的凍融表現(xiàn)。表N表示在有和沒有0.1％失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯的條件下，分別從-80℃或-30℃開始評估3次快速和慢速凍/融循環(huán)的效果的實驗的結(jié)果。
表2表示D2E7抗體藥物物質(zhì)可以解凍/冷凍至少3次，而對化學(xué)(陽離子交換HPLC，大小排阻HPLC，顏色，pH)，物理化學(xué)特性(在顯微鏡下才能看到的顆粒，透明性)或生物學(xué)活性(體外TNF中和測定)不產(chǎn)生任何有害的作用。表2還表明了添加失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯，改善了D2E7抗體藥物物質(zhì)的物理化學(xué)特性，表現(xiàn)為無論是慢速或快速凍/融循環(huán)，都具有較少數(shù)量的只有在顯微鏡下才能看到的顆粒(參見表2中的陰影區(qū))。
表2在有/沒有失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯的條件下，凍融對D2E7抗體藥物物質(zhì)的影響
1)+＝具有0.1％失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯的制劑；-＝?jīng)]有0.1％失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯的制劑實施例3微生物研究進(jìn)行了試驗，以便確定所述制劑是否能支持微生物生長。來自這些試驗的結(jié)果表明，如果在20-25℃下保存14天，所述制劑不支持微生物生長。該結(jié)果是通過用微生物(例如，金黃色葡萄球菌，ATCC-No.6538P，白色念珠菌，ATCC-No.10231，黑曲霉，ATCCC-No.16404，綠膿假單胞菌，ATCC-No.9027，環(huán)境分離物)在低水平(NMT 100cfu/mL)下直接接種所述無菌制劑確定的。然后檢查接種過的制劑的總體微生物生長，例如，濁度的改變。濁度的缺乏是沒有總體生長的指標(biāo)，并且在14天之后在接種的容器中檢測。另外，從這些容器中不能重新分離到微生物。因此，所得到的結(jié)論是，在上述條件下，所述制劑不支持微生物生長。
對參考文獻(xiàn)的引用在本文中所引用的所有文獻(xiàn)和專利的內(nèi)容被以它們的整體形式收作本文參考。
等同方案本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，或者能夠不超過常規(guī)實驗的方式確定本文所披露的本發(fā)明具體實施方案的很多等同方案。這些等同方案被認(rèn)為包括在以下權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
序列表<110>Krause，Hans JuergenBaust，LisaDickes，Michael<120>用于治療TNF-α相關(guān)病癥的人抗體的制劑<130>BBC-166<140>10/222140<141>2002-08-16<160>34<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>108<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>突變的人抗體<400>1Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val1 5 10 15Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu35 40 45Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln65 70 75 80Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro85 90 95Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105<210>2<211>122<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>突變的人抗體<400>2Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly1 5 10 15Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp20 25 30Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp35 40 45Val Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser50 55 60Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu65 70 75 80Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr85 90 95Cys Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp100 105 110Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120<210>3<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>突變的人抗體<220>
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<223>突變的人抗體<220>
<221>變體<222>13<223>Xaa＝Tyr或Asn<400>4Pro Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa1 5 10<210>5<211>8<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>突變的人抗體
<400>27Pro Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn1 5 10<210>28<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>突變的人抗體<400>29Pro Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr1 5 10<210>30<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>突變的人抗體<400>30Pro Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp1 5 10<210>31<211>13<212>PRT
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<223>突變的人抗體<400>31Pro Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr1 5 10<210>32<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>突變的人抗體<400>32Pro Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr1 5 10<210>33<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>突變的人抗體<400>33Pro Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr1 5 10<210>34<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>突變的人抗體<400>34Pro Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr1 5 10
權(quán)利要求
1.一種選自下組的藥物制劑(a)液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，該制劑的pH為大約4-8，并且保質(zhì)期至少為18個月；(b)含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，該制劑的pH為大約4-8，并且在液體狀態(tài)下的保質(zhì)期至少為18個月；(c)液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，該制劑的pH為大約4-8，所述制劑能在至少3次凍/融循環(huán)之后保持穩(wěn)定性；和(d)液體含水藥物制劑，包括存在于緩沖液中的治療有效量的抗體，該制劑的pH為4-8，并且在2-8℃的溫度下具有至少12個月的增強的穩(wěn)定性。
2.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體針對TNFα。
3.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體的濃度大約為1-150mg/ml。
4.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體的濃度大約為50mg/ml。
5.如權(quán)利要求1的制劑，它還適合進(jìn)行單次皮下注射。
6.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體是抗體或其抗原結(jié)合部分，從人TNFα解離的Kd為1×10-8M或以下，并且Koff速度常數(shù)為1×10-3s-1或以下，兩種參數(shù)都是通過表面等離子共振測定的，并且，在標(biāo)準(zhǔn)體外L929測定中，能中和人TNFα細(xì)胞毒性，其IC50為1×10-7M或以下。
7.如權(quán)利要求6的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，是重組抗體或其抗原結(jié)合部分。
8.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體是抗體或其抗原結(jié)合部分，它a)從人TNFα解離的Koff速度常數(shù)為1×10-3s-1或以下，該參數(shù)是通過表面等離子共振測定的；b)具有輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO3的氨基酸序列，或通過在1，4，5，7或8號位置上進(jìn)行單丙氨酸取代或在1，3，4，6，7，8和/或9號位置上進(jìn)行1-5個保守性氨基酸取代對SEQ ID NO3進(jìn)行修飾得到的氨基酸序列；c)具有重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO4的氨基酸序列，或通過在2，3，4，5，6，8，9，10或11號位置上進(jìn)行單丙氨酸取代或在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12號位置上進(jìn)行1-5個保守性氨基酸取代對SEQ ID NO4進(jìn)行修飾得到的氨基酸序列。
9.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，具有包括SEQ ID NO1的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和包括SEQ IDNO2的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
10.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，能中和人TNFα，黑猩猩TNFα和選自下組的至少一種其他靈長類動物TNFα的活性狒狒TNFα，狨猴TNFα，獼猴TNFα和恒河猴TNFα。
11.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，還能中和小鼠TNFα和/或豬TNFα的活性。
12.如權(quán)利要求1的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，它能結(jié)合人TNFα，并且是抗體D2E7或其抗原結(jié)合部分。
13.含水的藥用組合物，包括多元醇，表面活性劑，含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，pH為大約4-8，其用量足以配制用于治療目的的濃度超過大約45mg/ml的抗體。
14.如權(quán)利要求13的藥用組合物，其中，所述多元醇是甘露糖醇，而所述表面活性劑是失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯。
15.如權(quán)利要求14的藥用組合物，它包括5-20mg/ml的甘露糖醇和0.1-10mg/ml的失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯。
16.如權(quán)利要求13的制劑，它包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它結(jié)合人TNFα，并且是抗體D2E7或其抗原結(jié)合部分。
17.液體含水藥物制劑，包括(a)1-150mg/ml的抗體，(b)5-20mg/ml的甘露糖醇，(c)0.1-10mg/ml的吐溫-80，和(d)含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，pH為4-8。
18.如權(quán)利要求17的制劑，其中，所述pH選自下組大約4.5-大約6.0，大約4.8-大約5.5，和大約5.0-大約5.2。
19.如權(quán)利要求17的液體含水藥物制劑，它包括(a)大約50mg/ml的抗體，(b)大約12mg/ml的甘露糖醇，(c)大約1mg/ml的吐溫-80，和(d)含檸檬酸鹽和/或磷酸鹽的緩沖系統(tǒng)，pH為大約4-大約8。
20.如權(quán)利要求17的制劑，其中，所述緩沖系統(tǒng)包括(a)大約1.3mg/ml的檸檬酸，(b)大約0.3mg/ml的檸檬酸鈉，(c)大約1.5mg/ml的二水合磷酸氫二鈉，(d)大約0.9mg/ml的二水合磷酸二氫鈉，和(e)大約6.2mg/ml的氯化鈉。
21.如權(quán)利要求19的制劑，其中，所述抗體針對TNFα。
22.如權(quán)利要求19的制劑，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，能結(jié)合人TNFα，并且是抗體D2E7或其抗原結(jié)合部分。
23.如權(quán)利要求22的制劑，將它施用于患有其中TNFα活性是有害的病癥的受試者，使得所述受試者體內(nèi)TNFα活性受到抑制。
全文摘要
描述了一種液體含水藥物制劑，它具有高蛋白濃度，pH為大約4－8，并且具有增強的穩(wěn)定性。
文檔編號A61K9/19GK1688339SQ03824272
公開日2005年10月26日 申請日期2003年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月16日
發(fā)明者H·-J·克勞澤, L·鮑斯特, M·迪克斯 申請人:艾博特生物技術(shù)有限公司