專利名稱：一種中藥提取物及其制備工藝和在制藥中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領域，特別是涉及一種中藥提取物及其制備工藝和在制藥中的應用。
背景技術：
目前治療和預防肝炎的藥物較多，但不少中成藥療效不確定，化學藥的毒副作用又較多，因此很難有較好的選擇。金銀花和菊花制備的粗制劑雖有報道，但其制備工藝簡單、純度較低、服用量大，副作用多，療效不夠穩(wěn)定，且作用多表現在抗菌、消炎及治療心血管疾病方面，在肝炎防治方面的作用鮮有報導。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種從金銀花和菊花中提取的純度較高的中藥提取物。
本發(fā)明的另一個目的是提供該提取物的制備工藝。
本發(fā)明還有一個目的是提供該提取物在制備抗肝炎藥中的應用。
本發(fā)明的技術方案主要依據祖國醫(yī)學的原理，根據肝炎急性期多為邪毒，慢性期多為氣滯血瘀或氣陰兩虛，特別是慢性肝炎以濕熱與疫毒蘊結貫穿始終的特點，對于肝炎急性發(fā)作的治療，宜清不宜補，宜疏不宜收；而在肝炎慢性期，則宜柔不宜剛。另蘇廷琬《藥義明辨》“金銀花，味甘微寒。凡肝家血虛有熱以為病者，或臟腑、經脈，或肉里，皆可用以撤其壅熱，散其聚毒，不但為諸瘡要藥而已?！薄?菊花)蓋由其秉金精而兼水化，金水相涵為益陰之上品，不獨平肝，而且能益肝之不足也。”趙其光《本草求原》“(菊花)能涵肺腎之陰以平肝火而生肝血?！睆埳嚼住侗静菡x》“凡花皆主宣揚疏泄，獨菊花則攝納下降，能平肝火熄內風，抑木氣之橫逆。”張秉成《本草便讀》“甘菊之用，可一言敝之，曰疏風而已。然雖系疏風之品，而性甘寒，與羌、麻等辛燥者不同，故補肝腎藥中可相需而用也?！惫时痉桨l(fā)揮中醫(yī)整體治療的優(yōu)勢，選用金銀花以清熱解毒、舒肝利膽，選用菊花以化濁開閉、養(yǎng)血柔肝，并采用現代制劑工藝提取有效成分，抑制感染病毒，增強免疫功能，修復病理損傷，減小毒副作用，為肝炎的治療或預防增加一個新選擇。
本發(fā)明的目的可以通過下列措施來實現一種中藥提取物，所用重量百分比的原料藥為金銀花1-99％、菊花1-99％，可通過下列步驟制備a.按原料藥配比取金銀花和菊花加8-12倍50-90％乙醇，回流提取2-4次，每次0.5-2小時，過濾，合并濾液，濃縮至60℃時相對密度為1.02-1.20，5000-20000rpm離心，得上清液；b.將上清液用大孔吸附樹脂進行純化處理，上柱過程中以黃酮類顯色劑檢測流出液，確定樹脂吸附是否飽和，靜置，先用2-4倍樹脂床體積的水洗脫，再用2-4倍樹脂床體積的梯度乙醇依次進行洗脫，流速均為每小時2-4倍樹脂床體積，收集濃度為20％以上乙醇的洗脫部分，回收乙醇，濃縮即得提取物。
本發(fā)明的目的還可以通過下列措施來實現所述的中藥提取物，制備時所用大孔樹脂為非極性或弱極性大孔樹脂。
所述的中藥提取物，制備時所用的大孔樹脂型號可以是D101、HPD100、HPD450、AB-8。
所述的中藥提取物可添加輔料制成任何一種藥劑學上允許的劑型。
所述的中藥提取物，其劑型可以是丸劑、片劑、散劑、栓劑、膜劑、顆粒劑、膠囊劑、微囊劑、滴丸劑、氣霧劑、膏劑、酒劑、口服液劑、注射劑。
一種中藥提取物的制備工藝，所用重量百分比的原料藥為金銀花1-99％、菊花1-99％，包含下列步驟a.按原料藥配比取金銀花和菊花加8-12倍50-90％乙醇，回流提取2-4次，每次0.5-2小時，過濾，合并濾液，濃縮至60℃時相對密度為1.02-1.20，5000-20000rpm離心，得上清液；b.將上清液用大孔吸附樹脂進行純化處理，上柱過程中以黃酮類顯色劑檢測流出液，確定樹脂吸附是否飽和，靜置，先用2-4倍樹脂床體積的水洗脫，再用2-4倍樹脂床體積的梯度乙醇依次進行洗脫，流速均為每小時2-4倍樹脂床體積，收集濃度為20％以上乙醇的洗脫部分，回收乙醇，濃縮即得。
所述的制備工藝中所用大孔樹脂為非極性或弱極性大孔樹脂。
所述的制備工藝中所用的大孔樹脂型號可以是D101、HPD100、HPD450、AB-8。
一種中藥提取物在制備治療或預防肝炎的藥物中的應用。
本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明克服了中藥傳統(tǒng)工藝的不足，利用大孔樹脂純化、除雜，制備的提取物有效物質純度較高，提取物中有效部位總黃酮的含量可達到55％以上，同時本發(fā)明還具有抗肝炎的作用，且療效高，質量穩(wěn)定，服用量少，副作用小。
本發(fā)明的藥效學實驗實驗中的本發(fā)明均按實施例1制備。
實驗1、本發(fā)明對四氯化碳(CCl4)引起家兔實驗性肝損傷的影響家兔分為6組，即正常對照組，CCl4模型對照組(給予CCl40.1ml/kg)，CCl4+聯(lián)苯雙酯(60mg/kg)組，CCl4+本發(fā)明低、中、高劑量(分別按1、10、20g生藥/kg給藥)組。除正常對照組外，其余各組均腹腔注射CCl4。正常對照組和模型對照組均灌胃給予等容積的生理鹽水，其余各組動物均灌胃給藥，每日一次，共連續(xù)給藥5次，最后一次給藥后1小時處死動物，取血測定SGPT值，并立即解剖，取肝臟進行組織化學及病理檢查。
結果表明1、本發(fā)明大中劑量能明顯降低SGPT水平(見表1)；2、病理檢查示本發(fā)明大中劑量組肝組織中LDH含量較模型對照組有明顯增加，肝小葉中央帶LDH含量有所增加，肝糖原分布均勻，肝小葉中央帶及周圍帶糖原比模型對照組有所增加；3、本發(fā)明大中劑量對肝細胞漿疏松、脂肪樣變、嗜酸性變及壞死均有明顯保護作用。
實驗2、本發(fā)明對D-氨基半乳糖(D-Gal)所致大鼠急性肝損傷的影響大鼠分為6組，即正常對照組，D-Gal模型對照組(給予D-Gal 800mg/kg)，D-Gal+聯(lián)苯雙酯組(100mg/kg)，D-Gal+本發(fā)明低、中、高劑量(分別按1、2.5、5g生藥/kg給藥)組。各組動物于12小時內連續(xù)灌胃給藥三次(正常對照組和模型對照組給予等容積的生理鹽水)，于第一次給藥的同時除正常對照組外，其余各組均腹腔注射D-Gal，最后一次給藥后12小時，動物斷頭取血，測量SGPT，并立即取肝臟進行大體和鏡下病理檢查。SGPT測定值結果見表1。
結果表明本發(fā)明三個劑量均可降低SGPT水平，與聯(lián)苯雙酯作用相似，并對大鼠肝損傷的形態(tài)學改變有明顯的保護作用。
實驗3、本發(fā)明對小鼠硫代乙酰胺(TAA)中毒的保護作用小鼠分為6組，即正常對照組，TAA模型對照組(給予TAA50ml/kg)，TAA+聯(lián)苯雙酯(200mg/kg)組，TAA+本發(fā)明低、中、高劑量(分別按1、10、20g生藥/kg給藥)組。各組動物每日上午8時灌胃給藥一次(正常對照組和模型對照組給予等容積的生理鹽水)，于第二次給藥后下午2時除正常對照組外，其余各組均腹腔注射TAA，禁食，第三日給藥后1小時斷頭取血，測SGPT，取肝臟作病理學檢查。SGPT測定值結果見表1。
結果表明1、本發(fā)明大中劑量均有抑制SGPT水平上升的作用；2、病理學檢查示本發(fā)明三個劑量組肝細胞濁腫、胞漿疏松、嗜酸性變等均較模型對照組為輕，且隨劑量的增加而保肝作用加強。
表1 本發(fā)明灌胃給藥對SGPT的影響(n＝10，x±SD)

注與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，▲P＞0.05。
實驗4、本發(fā)明對大鼠實驗性肝硬化的影響大鼠分為6組，即正常對照組，CCl4模型對照組，CCl4+聯(lián)苯雙酯(50mg/kg)組，CCl4+本發(fā)明低、中、高劑量(分別按1、5、10g生藥/kg給藥)組。動物每日灌胃給藥一次(正常對照組和模型對照組均灌胃給予等容積的生理鹽水)，共六周，每隔三日除正常對照組外，其余各組動物均皮下注射CCl40.3ml/100g(40％豆油溶液)，首次劑量0.5ml/100g。于末次給藥24小時后，斷頭處死動物，取肝組織測羥脯氨酸含量，以香草醛比色法測肝總脂含量，并做肝組織病理切片，染色后顯微鏡觀察。結果見表2。
表2本發(fā)明對大鼠肝臟羥脯氨酸及肝總脂含量的影響 (n＝10，x±SD)


注與模型對照組比較，*P＜0.05，▲P＞0.05。
結果表明本發(fā)明大中劑量及聯(lián)苯雙酯均能顯著降低肝臟羥脯氨酸含量，并均能使肝總脂含量顯著減少；病理檢查示聯(lián)苯雙酯及本發(fā)明大中劑量組肝組織纖維增生明顯減輕，未見重度纖維化產生。
實驗5、本發(fā)明對小鼠肝臟排泄磺溴酞鈉(BSP)功能的影響小鼠分為5組，即正常對照組，聯(lián)苯雙酯(200mg/kg)組，本發(fā)明低、中、高劑量(分別按1、10、20g生藥/kg給藥)組。灌胃給藥，每日一次，共三次，正常對照組灌胃給予等容積的生理鹽水，末次給藥1小時后，動物尾靜脈注射BSP 100mg/kg，15分鐘后斷頭取血，測血清BSP滯留量。結果見表3。
表3本發(fā)明對小鼠肝臟排泄BSP功能的影響 (n＝10，x±SD)

注與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，▲P＞0.05。
結果表明本發(fā)明三個劑量均有促進肝臟排泄的作用，BSP滯留值均較正常對照組低，尤以大劑量作用明顯。
實驗6、本發(fā)明對小鼠網狀內皮系統(tǒng)吞噬功能的影響動物分為5組，即正常對照組，聯(lián)苯雙酯(200mg/kg)組，本發(fā)明低、中、高劑量(分別按1、10、20 g生藥/kg給藥)組。動物灌胃給藥，每日一次，共5次，正常對照組灌胃給予等容積的生理鹽水，末次給藥1小時后，動物尾靜脈注入碳素墨水，2、10分鐘后分別從眼底取血20μl，處理后測量OD值。按下列公式計算碳粒廓清指數K值，結果見表4。
K=lgOD2OD10t10-t2=18lgOD2OD10]]>(K＝廓清指數；OD2、OD102及10分鐘時的OD值)表4本發(fā)明對小鼠網狀內皮系統(tǒng)吞噬功能的影響 (n＝10，x±SD)

注與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
結果表明本發(fā)明三個劑量組碳粒廓清指數均有明顯提高，此作用較聯(lián)苯雙酯強，提示本發(fā)明對小鼠免疫功能有顯著促進作用。
具體實施例方式
以下通過實施例對本發(fā)明作進一步的介紹。
實施例1取金銀花500g、菊花500g，加10L 70％乙醇，沸水浴回流提取3次，每次1小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至60℃時相對密度為1.10，10000rpm離心，得上清液；將上清液通過D101大孔樹脂柱，以黃酮類顯色劑檢測流出液，確定樹脂吸附是否飽和，靜置，先以3倍樹脂床體積的水洗脫后再用3倍樹脂床體積的30％、70％乙醇依次洗脫，流速均為每小時2倍樹脂床體積，收集70％乙醇的洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，得提取物(510nm處測定結果示提取物中總黃酮含量為65％)。
實施例2取金銀花100g、菊花900g，加12L 60％乙醇，沸水浴回流提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至60℃時相對密度為1.15，5000rpm離心，得上清液；將上清液通過HPD450大孔樹脂柱，以黃酮類顯色劑檢測流出液，確定樹脂吸附是否飽和，靜置，先以2倍樹脂床體積的水洗脫后再用4倍樹脂床體積的20％、60％乙醇依次洗脫，流速均為每小時2倍樹脂床體積，收集60％乙醇的洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，打成細粉(510nm處測定結果示提取物中總黃酮含量為55％)，加入羧甲基淀粉鈉適量，混勻，常規(guī)方法制粒，干燥，整粒，分裝、包裝即成顆粒劑。
實施例3取金銀花900g、菊花100g，加8L 50％乙醇，80℃水浴回流提取3次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至60℃時相對密度為1.20，20000rpm離心，得上清液；將上清液通過HPD100大孔樹脂柱，以黃酮類顯色劑檢測流出液，確定樹脂吸附是否飽和，靜置，先以3倍樹脂床體積的水洗脫后再用2倍樹脂床體積的25％、75％乙醇依次洗脫，流速均為每小時3倍樹脂床體積，收集75％乙醇的洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，打成細粉(510nm處測定結果示提取物中總黃酮含量為60％)，加入羧甲基淀粉鈉適量，混勻，常規(guī)方法壓片、包裝即成片劑。
實施例4取金銀花300g、菊花700g，加10L 80％乙醇，90℃水浴回流提取4次，每次0.5小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至60℃時相對密度為1.05，8000rpm離心，得上清液；將上清液通過AB-8大孔樹脂柱，以黃酮類顯色劑檢測流出液，確定樹脂吸附是否飽和，靜置，先以4倍樹脂床體積的水洗脫后再用4倍樹脂床體積的35％、80％乙醇依次洗脫，流速均為每小時3倍樹脂床體積，收集80％乙醇的洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮至60℃時相對密度為1.10，得提取物(提取物經干燥后在510nm處測定示總黃酮含量為67％)，加入適量矯味劑，滅菌，分裝即得口服液。
權利要求
1.一種中藥提取物，所用重量百分比的原料藥為金銀花1-99％、菊花1-99％，其特征在于可通過下列步驟制備a.按原料藥配比取金銀花和菊花加8-12倍50-90％乙醇，回流提取2-4次，每次0.5-2小時，過濾，合并濾液，濃縮至60℃時相對密度為1.02-1.20，5000-20000rpm離心，得上清液；b.將上清液用大孔吸附樹脂進行純化處理，上柱過程中以黃酮類顯色劑檢測流出液，確定樹脂吸附是否飽和，靜置，先用2-4倍樹脂床體積的水洗脫，再用2-4倍樹脂床體積的梯度乙醇依次進行洗脫，流速均為每小時2-4倍樹脂床體積，收集濃度為20％以上乙醇的洗脫部分，回收乙醇，濃縮即得提取物。
2.根據權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于制備時所用大孔樹脂為非極性或弱極性大孔樹脂。
3.根據權利要求2所述的中藥提取物，其特征在于制備時所用的大孔樹脂型號可以是D101、HPD100、HPD450、AB-8。
4.根據權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于可添加輔料制成任何一種藥劑學上允許的劑型。
5.根據權利要求4所述的中藥提取物，其特征在于其劑型可以是丸劑、片劑、散劑、栓劑、膜劑、顆粒劑、膠囊劑、微囊劑、滴丸劑、氣霧劑、膏劑、酒劑、口服液劑、注射劑。
6.一種中藥提取物的制備工藝，所用重量百分比的原料藥為金銀花1-99％、菊花1-99％，其特征在于包含下列步驟a.按原料藥配比取金銀花和菊花加8-12倍50-90％乙醇，回流提取2-4次，每次0.5-2小時，過濾，合并濾液，濃縮至60℃時相對密度為1.02-1.20，5000-20000rpm離心，得上清液；b.將上清液用大孔吸附樹脂進行純化處理，上柱過程中以黃酮類顯色劑檢測流出液，確定樹脂吸附是否飽和，靜置，先用2-4倍樹脂床體積的水洗脫，再用2-4倍樹脂床體積的梯度乙醇依次進行洗脫，流速均為每小時2-4倍樹脂床體積，收集濃度為20％以上乙醇的洗脫部分，回收乙醇，濃縮即得。
7.根據權利要求6所述的制備工藝，其特征在于所用大孔樹脂為非極性或弱極性大孔樹脂。
8.根據權利要求7所述的制備工藝，其特征在于所用的大孔樹脂型號可以是D101、HPD100、HPD450、AB-8。
9.一種中藥提取物在制備治療或預防肝炎的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥提取物及其制備工藝和在制藥中的應用。該提取物由金銀花和菊花經醇提、過濾、濃縮、離心后通過大孔樹脂吸附、再用水和梯度乙醇洗脫，收集乙醇洗脫部分，收醇，濃縮制備而成。用本發(fā)明提供的制備工藝制備的提取物有效物質純度較高，提取物中有效部位總黃酮的含量可達到55％以上，同時本發(fā)明還具有抗肝炎的作用，且療效高，質量穩(wěn)定，服用量少，副作用小。
文檔編號A61P1/00GK1546114SQ20031011263
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月15日 優(yōu)先權日2003年12月15日
發(fā)明者王興旺, 徐向陽, 楊俊 , 田麗娟, 張曉靜, 萬輝, 王偉, 孫曄, 陳鐘, 陳希, 張蕙, 張慶曉, 張 杰, 張春來, 范廷校, 夏云, 倪潔, 謝俊, 蔡瑩 申請人:金陵藥業(yè)股份有限公司