專利名稱：燈心柳珊瑚皂苷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的甾體皂苷——燈心柳珊瑚皂苷。
背景技術(shù)：
柳珊瑚中富含二萜和甾醇，但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道到目前為止從Junceella屬的柳珊瑚中只分離到三個(gè)甾醇(參考文獻(xiàn)Anjaneyulu，A.S.R.；Rao，N.S.K.J.Chem.Soc.1997，Perkin Trans 1，959-962.)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從柳珊瑚中分離出新的具有藥用價(jià)值的甾體皂苷。
本發(fā)明利用色譜分離技術(shù)從柳珊瑚目鞭柳珊瑚科的燈芯柳珊瑚(Junceella juncea)中分離得到新的甾體皂苷(Steroidal Glycosides)——燈心柳珊瑚皂苷(Junceellosides)，且它們均有細(xì)胞毒性、抗炎、抗真菌及抗癌作用，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
本發(fā)明新的燈心柳珊瑚皂苷用下述通式(1)表示 其中R1＝R2＝H和R3＝CH3CO，或R1＝R3＝H和R2＝CH3CO，或R1＝CH3CO和R2＝R3＝H或R1＝R2＝R3＝H。
本發(fā)明燈心柳珊瑚皂苷是新的甾體皂苷。
上述通式(1)中R1＝R2＝H和R3＝CH3CO的化合物的分子式是C34H56O8，化學(xué)名稱是膽甾-5-烯-3β，19，25三醇-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷-4’-單乙酸酯(4’-O-acetyl-3-O-[β-D-arabino-pyranosyl-oxy]-cholest-5-ene-3β，19，25-triol)，外觀為白色粉末，下面簡(jiǎn)稱為化合物1；R1＝R3＝H和R2＝CH3CO的化合物的分子式是C34H56O8，化學(xué)名稱是膽甾-5-烯-3β，19，25-三醇-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷-3’-單乙酸酯(3’-O-acetyl-3-O-[β-D-arabino-pyranosyl-oxy]-cholest-5-ene-3β，19，25-triol)，外觀為白色粉末，下面簡(jiǎn)稱為化合物2；R1＝CH3CO和R2＝R3＝H的化合物的分子式是C34H56O8，化學(xué)名稱是膽甾-5-烯-3β，19，25-三醇-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷-25-單乙酸酯(25-O-acetyl-3-O-[β-D-arabino-pyranosyl-oxy]-cholest-5-ene-3β，19，25-triol)，外觀為白色粉末，下面簡(jiǎn)稱為化合物3；上述通式(1)中R1＝R2＝R3＝H的化合物的分子式為C32H54O7，化學(xué)名稱為膽甾-5-烯-3β，19，25-三醇-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖(3-O-[β-D-arabino-pyranosyl-oxy]-cholest-5-ene-3β，19，25-triol)，外觀為白色粉末，下面簡(jiǎn)稱為化合物4。
本發(fā)明通式(1)的燈心柳珊瑚皂苷制備方法是以燈心柳珊瑚為原料，切碎后用乙醇和二氯甲烷的混合有機(jī)溶劑提取，將提取液濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶于水，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，濃縮得乙酸乙酯層和正丁醇層；將乙酸乙酯層進(jìn)行常壓硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)從10∶1到0∶1梯度洗脫；將在TLC(GF254)上用CHCl3-MeOH(9∶1)溶劑系統(tǒng)展開時(shí)極性最小的點(diǎn)Rf值約為0.7的組分合并，經(jīng)凝膠Sephadex LH-20柱層析，用CHCl3-MeOH(1∶1)沖洗，再經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH(11∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗，純化得化合物2；將在TLC(GF254)板上用CHCl3-MeOH(9∶1)溶劑系統(tǒng)展開時(shí)極性最小的點(diǎn)Rf值約為0.6的組分合并，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH溶劑系統(tǒng)從12∶1到8∶2按梯度加大極性洗脫，其中用CHCl3-MeOH(11∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣經(jīng)進(jìn)一步硅膠柱層析，純化得化合物1，用CHCl3-MeOH(10∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣再經(jīng)硅膠柱層析，純化得化合物3，用CHCl3-MeOH(9∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣再經(jīng)凝膠Sephadex LH-20柱層析，用CHCl3-MeOH(1∶1)沖洗，純化得化合物4。
通過細(xì)胞毒性和其它活性篩選試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述的燈心柳珊瑚皂苷均有細(xì)胞毒性、抗炎、抗真菌及抗癌作用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1通式(1)中R1＝R2＝H和R3＝CH3CO的化合物1的制備以燈心柳珊瑚濕重12公斤為原料，切碎后用乙醇和二氯甲烷的混合有機(jī)溶劑提取3次，將提取液合并減壓濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶于水，依次用乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，分別合并減壓濃縮得乙酸乙酯層85克和正丁醇層56克；將乙酸乙酯層進(jìn)行常壓硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)從10∶1到0∶1梯度洗脫，薄層層析TLC(GF254)追蹤合并得12個(gè)組分；將在TLC(GF254)板上用CHCl3-MeOH(9∶1)溶劑系統(tǒng)展開時(shí)極性最小的點(diǎn)Rf值約為0.6的組分合并，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH溶劑系統(tǒng)從12∶1到8∶2按梯度加大極性洗脫，其中用CHCl3-MeOH(11∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣經(jīng)進(jìn)一步硅膠柱層析，純化得白色粉末化合物1為41mg。
該化合物的ESIMS譜在m/z 591[M-H]-處顯示準(zhǔn)分子離子峰，結(jié)合高分辨HRESIMS和13C(DEPT)NMR譜，推出其分子式為C34H56O8。紅外光譜中出現(xiàn)典型的糖吸收峰(3350cm-1和1067cm-1)；通過二維1H-1H COSY、HMQC及HMBC實(shí)驗(yàn)，化合物1的13C-和1H-NMR譜中所有信號(hào)得到歸屬(見表1和2)。其13C NMR(DEPT)譜顯示34個(gè)信號(hào)，包括27個(gè)基本骨架碳(4個(gè)甲基，12個(gè)亞甲基，7個(gè)次甲基和4個(gè)季碳)、一個(gè)五碳糖及一個(gè)乙?；?。1H NMR譜顯示5個(gè)甲基[δH0.73(3H，s)，0.93(3H，d，J＝6.4Hz)，1.12(6H，s)and 2.17(acetatemethyl)]、一個(gè)烯氫[δH5.75(d，J＝4.6Hz)]、一個(gè)氧化的亞甲基[δH3.61，3.82(each 1H，d，J＝11.5Hz)]和6個(gè)糖質(zhì)子，這些數(shù)據(jù)表明化合物1是一個(gè)膽甾醇類型的甾體皂苷；通過和cholest-5-ene-3β，7β，19-triol及2-deoxy-5β，20-dihydroxyecdysone的1H NMR譜數(shù)據(jù)相比較，可以歸屬化合物1中Me-18(δH0.73，s)、Me-21(δH0.93，d，J＝6.4Hz)、Me-26/27(δH1.12，s)及H-19(δH3.61，3.82，each d，J＝11.5Hz)，而且這暗示C-19(δC62.8，t)和C-25(δC71.1，s)都被羥基化。這個(gè)推測(cè)得到HMBC譜的論證。其13C和1H NMR譜顯示一個(gè)三取代雙鍵[δC134.9(s)，127.8(d)，δH5.75(1H，d，J＝4.6Hz)]，HMBC譜顯示δH5.75(d，J＝4.6Hz)與C-10(δC41.7，s)、C-8(δC33.4，d)相關(guān)，這表明有一個(gè)雙鍵位于C-5和C-6之間。HMBC譜同時(shí)也顯示以下相關(guān)點(diǎn)δH2.21(1H，t，J＝11.5Hz)、2.46(1H，dd，J＝2.4，13.0Hz)與C-10、C-5(δC134.9，s)、C-6(δC127.8，d)相關(guān)，故將δH2.21(1H，t，J＝11.5Hz)、2.46(1H，dd，J＝2.4，13.0Hz)歸屬為H-4。在1H-1H COSY譜中，H-4和H-3[δH3.52(1H，m)]相關(guān)，推測(cè)C-3被氧化。在NOESY譜中，H-3與H-4α相關(guān)，H-19與H-4β相關(guān)，這表明C-3位上的羥基為β-取代?；谝陨系臄?shù)據(jù)分析，推斷化合物1中皂元部分為膽甾-5-烯-3β，19，25-三醇；另外，通過將化合物1的1H NMR譜與化合物3-O-[β-D-arabino-pyranosyl-oxy]-24(S)-campesta-5-ene-3βol、3-O-[β-D-arabino-pyranosyl-oxy]-24-methylcholest-5-ene-3β，25-diol的氫譜數(shù)據(jù)相比較，推測(cè)化合物1中也存在一個(gè)β-D-吡喃阿拉伯糖[δH5.05(d，J＝3.8Hz，H-1’)，3.79(dd，J＝3.8，10.0Hz，H-2’)，3.92(dd，J＝3.5，10.6Hz，H-3’)，5.15(brs，H-4’)，3.70(dd，J＝2.0，12.8Hz，H-5’a)and 3.88(d，J＝12.1Hz，H-5’b)]。這個(gè)推測(cè)得到HMBC和1H-1H COSY譜的論證。在HMBC譜中，H-3、H-2’、H-5’與C-1’(δC97.2，d)相關(guān)，這說明β-D-吡喃阿拉伯糖和皂元上的C-3相連；另外，H-4’、δH2.17(3H，s)與δC171.0(s)相關(guān)，推測(cè)有一個(gè)乙?；挥贑-4’上?；谝陨蠑?shù)據(jù)分析，故推斷化合物1的結(jié)構(gòu)如通式(1)，其中R1＝R2＝H，R3＝CH3CO，稱為膽甾-5-烯-3β，19，25-三醇-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷-4’-單乙酸酯。
實(shí)施例2上述通式(1)中R1＝R3＝H和R2＝CH3CO的化合物2的制備如實(shí)施例1的方法中由薄層層析TLC(GF254)追蹤合并得12個(gè)組分后，將在TLC(GF254)上用CHCl3-MeOH(9∶1)溶劑系統(tǒng)展開時(shí)極性最小的點(diǎn)Rf值約為0.7的組分合并，經(jīng)凝膠Sephadex LH-20柱層析，用CHCl3-MeOH(1∶1)沖洗，再經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH(11∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗，純化得白色粉末化合物2為18mg。
該化合物的ESIMS譜在m/z 591[M-H]-處顯示準(zhǔn)分子離子峰，結(jié)合高分辨ESIMS和13C(DEPT)NMR譜，推出它的分子式為C34H56O8。除了乙?；娜〈恢貌煌?，化合物2的1H及13C NMR譜都與化合物1相似，這表明化合物2化合物1均有相同的基本骨架。和化合物1中C-3’[δC69.3(d)]相比，在化合物2的13C NMR譜中，C-3’出現(xiàn)在較低場(chǎng)δC74.6(d)，且HMBC譜顯示δH5.72(dd，J＝3.1，10.2Hz，H-3’)、1.93(3H，s)與δC170.8(s)相關(guān)；因此，推測(cè)化合物2中有一個(gè)乙?；挥贑-3’上?；谝痪S和二維核磁實(shí)驗(yàn)，包括HMQC、HMBC、1H-1H COSY及NOESY實(shí)驗(yàn)，推斷化合物2的結(jié)構(gòu)為通式(1)，其中R1＝R3＝H，R2＝CH3CO；稱為膽甾-5-烯-3β，19，25-三醇-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷-3’-單乙酸酯。
實(shí)施例3通式(1)中R1＝CH3CO和R2＝R3＝H的化合物3的制備如實(shí)施例1方法中將在TLC(GF254)板上用CHCl3-MeOH(9∶1)溶劑系統(tǒng)展開時(shí)極性最小的點(diǎn)Rf值約為0.6的組分合并，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH溶劑系統(tǒng)從12∶1到8∶2按梯度加大極性洗脫，其中用CHCl3-MeOH(10∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣再經(jīng)硅膠柱層析，純化得白色粉末化合物3為46mg。
該化合物的ESIMS譜也在m/z 591[M-H]-處顯示準(zhǔn)分子離子峰，結(jié)合高分辨ESIMS和13CNMR(DEPT)譜，推出它的分子式為C34H56O8；除了乙酰基的取代位置不同外，它的1H及13C NMR譜都與化合物1相似，這表明它與化合物1均有相同的基本骨架。和化合物1中C-3’[δC69.3(d)]相比，化合物3的13C NMR譜中，C-25出現(xiàn)在較低場(chǎng)δC82.9，且HMBC譜顯示δC170.9(s)只與δH1.97(3H，s)相關(guān)，這表明有一個(gè)乙酰基位于C-25上?；谝痪S和二維核磁實(shí)驗(yàn)，包括HMQC、HMBC、1H-1H COSY及NOESY實(shí)驗(yàn)，推斷化合物3的結(jié)構(gòu)為通式(1)，其中R1＝CH3CO，R2＝R3＝H；稱為膽甾-5-烯-3β，19，25-三醇-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷-25-單乙酸酯。
實(shí)施例4通式(1)中R1＝R2＝R3＝H的化合物的制備如實(shí)施例1方法中將在TLC(GF254)板上用CHCl3-MeOH(9∶1)溶劑系統(tǒng)展開時(shí)極性最小的點(diǎn)Rf值約為0.6的組分合并，經(jīng)硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH溶劑系統(tǒng)從12∶1到8∶2按梯度加大極性洗脫，其中CHCl3-MeOH(9∶1)溶劑系統(tǒng)沖洗得的粗樣再經(jīng)凝膠SephadexLH-20柱層析，用CHCl3-MeOH(1∶1)沖洗，純化得白色粉末化合物4為29mg。
該化合物的ESIMS譜顯示一個(gè)與分子式C32H54O7相對(duì)應(yīng)的準(zhǔn)分子離子峰m/z 549[M-H]-，13CNMR譜中出現(xiàn)32個(gè)碳原子信號(hào)。通過比較發(fā)現(xiàn)化合物4的1H NMR和13C NMR譜與化合物1很相似，只是化合物4中少了一個(gè)乙?；?見表1和2)。根據(jù)一維和二維核磁實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，將化合物4的結(jié)構(gòu)推斷為通式(1)，其中R1＝R2＝R3＝H，稱為膽甾-5-烯-3β，19，25-三醇-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷。
表1 化合物1～4四個(gè)燈心柳珊瑚皂苷的碳譜數(shù)據(jù)*

*化合物1～4的碳譜都是以四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)在125MHz的核磁共振儀上測(cè)定，其中化合物1溶于氘代氯仿，化合物3溶于氘代氯仿和3滴氘代甲醇，化合物2和4溶于氘代吡啶，化學(xué)位移以ppm為單位。
表2 化合物1～4四個(gè)燈心柳珊瑚皂苷的氫譜數(shù)據(jù)*

*化合物1～4的氫譜都是以四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)在500MHz的核磁共振儀上測(cè)定，其中化合物1溶于氘代氯仿，化合物3溶于氘代氯仿和3滴氘代甲醇，化合物2和4溶于氘代吡啶，化學(xué)位移以ppm為單位，偶合常數(shù)J以Hz為單位。
權(quán)利要求
1.下述通式(1)化合物 其中R1＝R2＝H和R3＝CH3CO，或R1＝R3＝H和R2＝CH3CO，或R1＝CH3CO和R2＝R3＝H或R1＝R2＝R3＝H。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1＝R2＝H和R3＝CH3CO。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1＝R3＝H和R2＝CH3CO。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1＝CH3CO和R2＝R3＝H。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1＝R2＝R3＝H。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的通式(1)甾體皂苷——燈心柳珊瑚皂苷，其中R
文檔編號(hào)A61P35/00GK1715290SQ200410027588
公開日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2004年6月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月14日
發(fā)明者漆淑華, 張偲 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所