專利名稱：一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥品領(lǐng)域，涉及一種以植物生藥金銀花、玄參、牛膝和石斛為原料的脈絡(luò)寧凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前市售的脈絡(luò)寧注射液是由金銀花、玄參、牛膝和石斛為原料，在古方“四妙勇安湯”基礎(chǔ)上進行有效部位提取后制備的水針劑，收載于1985年“江蘇省藥品標準”，雖然臨床上是療效確切、起效迅速的純中藥復方藥物，主要有改善微循環(huán)、抗血栓形成、降低血壓等作用，用于血管閉塞性脈管炎、腦血栓及下肢深靜脈血栓。但現(xiàn)有的脈絡(luò)寧注射液存在提取工藝不科學，有效部位提取不全，產(chǎn)品質(zhì)量控制難度大，制劑質(zhì)量標準低，使用了心血管類用藥不得加入的Tween類助溶劑，并且穩(wěn)定性差，運輸、儲存也均不方便等。例如中國專利CN 1078148A介紹了一種脈絡(luò)寧靜脈注射液的工藝方法，該制備方法為將金銀花、玄參、牛膝和石斛四者混合后，水煎煮提取，由于金銀花清熱解毒的有效部位主要集中在綠原酸，有文獻(王為民，不同配伍對金銀花中綠原酸煎出率的影響，時珍國藥研究，1996，7(3)151)報道金銀花同含以有機酸、生物堿成分為主的藥物配伍，有降低綠原酸煎出率的作用，而牛膝中富含齊墩果酸、阿魏酸，玄參中富含肉桂酸，石斛中富含石斛堿、鹽酸小檗堿，因此，將金銀花、玄參、牛膝和石斛四者混合后共同浸煮不科學；另外《中國藥典》2000版在石斛項下注明“入復方宜先煎”，也說明金銀花、玄參、牛膝和石斛四者共煎不合理。脈絡(luò)寧注射液僅對石斛的主要成分濱嵩內(nèi)酯進行定量，缺乏對金銀花、玄參和牛膝主要藥用部位的定量指標，顯然不夠全面；采用了高溫滅菌法(100℃)，導致水溶性黃酮苷類成分分解生成的苷元不溶于水；采用了副作用較大的吐溫-80作為增溶劑，增加了臨床用藥的不安全性；最后脈絡(luò)寧注射液的穩(wěn)定性也較差，長期儲存后，顏色會變深，并產(chǎn)生沉淀。另一篇中國專利CN 1435250A也介紹了“注射用脈絡(luò)寧及口服固體制劑的制備方法”，也是先將金銀花、玄參、牛膝和石斛四者混合，粉碎后加入甲醇、氯仿，超聲提取，顯然提取方法不夠科學合理；由于使用了甲醇等有毒溶劑，而減壓回收有機溶劑無法保證有機溶劑無殘留，增加了該藥的毒性；在其質(zhì)量標準中也僅對濱嵩內(nèi)酯、生物堿和總黃酮進行了含量測定，未對牛膝、玄參的主要藥用部位制定定量檢查標準，制劑質(zhì)量標準偏低且不完善。鑒于現(xiàn)有的脈絡(luò)寧制劑存在上述缺點，本發(fā)明對提取工藝等也進行了更深一步的研究和改進。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種提取工藝更先進、科學，有效部位提取更完全，提取工藝質(zhì)量可控，制劑質(zhì)量標準更高，并且穩(wěn)定性好，藥物濃度高，便于運輸、儲存和使用的脈絡(luò)寧凍干粉針劑及其制備方法。
本發(fā)明所述的脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制備方法是用植物生藥金銀花、玄參、牛膝和石斛的藥用部位加賦形劑經(jīng)冷凍干燥制成凍干粉針劑型；本發(fā)明脈絡(luò)寧凍干粉針劑的制作工藝具體如下藥材的前處理藥材玄參、牛膝和石斛經(jīng)揀選、洗凈、烘干、粉碎成片狀或細粒狀，金銀花經(jīng)揀選處理。
脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥金銀花、玄參、牛膝和石斛的有效部位精制液的制備方法如下1、金銀花采用20～40倍的40％～70％稀乙醇回流提取2～4次，每次2～4小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；2、玄參先采用20～40倍乙醇回流提取2～4次，每次2～4小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參用20～50倍的水煎煮2～4次，每次2～4小時，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C，供配液使用；3、牛膝先采用20～40倍的水浸泡過夜，再煎煮2～4次，每次1～3小時，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；
4、石斛先采用5～15倍的水浸泡過夜，再加15～30倍的水煎煮2～4次，每次1～3小時，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；5、將上述所得提取液A、C、D和E混勻，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位提取液，向有效部位提取液中按每毫升加入賦形劑0.05～0.5克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水適量，再調(diào)節(jié)PH值至4～9，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液；其中凍干所用植物生藥的有效部位混合液的最佳PH值為6.5。
冷凍干燥將上述脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液按每瓶10ml的規(guī)格分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內(nèi)，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-25℃～-50℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持1～6小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2～0.5Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持10～24小時，最后升溫至30℃～40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在1～5％，迅速封口即可。
冷凍干燥過程中可選擇的最佳物理條件是首先將擱板降溫至-30℃，維持3小時，然后使凍干箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，將擱板升溫并嚴格控制在-2℃，保持18小時，將擱板升溫至40℃放入無菌氣體后，控制制劑的含水量為2％。
本發(fā)明所述的脈絡(luò)寧凍干粉針劑每支10ml含相當于原生藥量金銀花10～100g、玄參20-200g、牛膝10-100g、石斛20-200g；每支脈絡(luò)寧凍干粉針劑含主要有效成份濱嵩內(nèi)酯不少于65μg，含肉桂酸不少于20mg，含綠原酸不少于2mg，含生物堿不少于20mg。
脈絡(luò)寧凍干粉針劑臨床用于治療血管閉塞性脈管炎、腦血栓及下肢深靜脈血栓，動脈硬化性閉塞癥等疾病，療效更顯著，未引起不良反應。本發(fā)明所采用的提取工藝與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有植物生藥金銀花、玄參、牛膝和石斛的有效部位提取更科學合理，提取工藝質(zhì)量可控，制劑質(zhì)量標準更高，并且凍干粉針劑的穩(wěn)定性要比注射液好，脈絡(luò)寧凍干粉針劑藥物濃度高，便于運輸、儲存和使用。用本方法制備的脈絡(luò)寧凍干粉針劑處于現(xiàn)代中藥注射劑的先進水平。
以下實驗例用于進一步說明本發(fā)明實驗例1脈絡(luò)寧凍干粉針劑的工藝條件篩選研究1、金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取工藝的篩選文獻報道脈絡(luò)寧注射液中金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位的提取是先將金銀花、玄參、牛膝和石斛按比例配伍混合后，水浸煮，醇沉，乙酸乙酯萃取，水轉(zhuǎn)溶。這種提取工藝的不足之處是四者混合后提取，影響金銀花和石斛有效部位的提取，且成分過于復雜，中間體控制難度大；僅水煎醇沉，有效部位提取不全；以有機溶劑萃取，易殘留對人體有害的有機溶劑等。為此，本實驗對金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取最佳工藝條件進行了比較研究，現(xiàn)總結(jié)如下單提工藝樣品的制備(1)稀乙醇回流提取金銀花有效部位稱取金銀花2.5kg，用30倍50％乙醇回流提取3次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，加水至200ml，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用。
(2)乙醇回流結(jié)合水煎醇沉法提取玄參有效部位稱取玄參2.5kg，采用25倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參分別用40倍的水煎煮3次，每次2.0小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至250ml沉淀處理，過夜，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C。
(3)水煎醇沉法提取牛膝有效部位稱取牛膝2.5kg，采用20倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，每次2.5小時，濾過，濾液濃縮至200ml后，進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至200ml沉淀處理，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用。
(4)水煎醇沉法提取石斛有效部位稱取石斛2.5kg，先用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、1.5小時和1.0小時，濾過，濾液濃縮至100ml后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至200ml沉淀處理，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用。
(5)金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取混合液的制備將上述所得的金銀花、玄參、牛膝和石斛藥用部位提取液A、C、D和E混合均勻，然后加水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至6.5，濾過，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位提取液。
混提工藝樣品的制備將金銀花、玄參、牛膝和石斛各2.5kg充分混合后，加30倍的水浸煮3次，每次2小時，濾過，合并煎液，濃縮至半固體狀，加乙醇沉淀，使最終含醇量為75％，取上清液濃縮至原體積的三分之一，以醋酸乙酯萃取12次，減壓除盡醋酸乙酯，提取物加新鮮蒸餾水，攪拌，使溶于水的物質(zhì)可轉(zhuǎn)溶于水，冷藏，減壓濾過，加1％的吐溫-80增溶，加水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至6.5，濾過，即得。
每處理重復3次，實驗結(jié)果(見表1)表明以濱嵩內(nèi)酯和綠原酸計算，單獨提取工藝所得濱嵩內(nèi)酯和綠原酸的量均明顯高于混提工藝所得二者的量。
表1 提取工藝對濱嵩內(nèi)酯和綠原酸含量的影響

實驗例2脈絡(luò)寧凍干粉針劑的賦形劑選擇向上述單獨提取工藝所得的每毫升藥用部位提取液中加入不同種類的賦形劑，經(jīng)冷凍干燥制成凍干粉針劑的外觀結(jié)果，見表2。
表2 不同賦形劑的影響(g/ml)

每處理重復3次，表3表明選用甘露醇為最佳賦形劑。
另據(jù)文獻(高嵩玲等，脈絡(luò)寧與甘露醇聯(lián)合應用治療病毒性腦炎(附179例病例分析)，實用中西醫(yī)結(jié)合雜志，1995，8(7)425)報道脈絡(luò)寧與甘露醇兩藥合用.有明顯的減輕腦水腫，避免產(chǎn)生顱內(nèi)高壓的作用，本發(fā)明選用甘露醇，可兼有賦形劑與配伍兩方面作用。
實驗例3脈絡(luò)寧凍干粉針劑與注射液的質(zhì)量標準比較脈絡(luò)寧凍干粉針劑比脈絡(luò)寧注射液的質(zhì)量標準有提高，其“含量測定”項下對比如表3表3“含量測定”方法與指標的比較

實驗例4脈絡(luò)寧凍干粉針劑含量測定方法(1)綠原酸的含量測定方法色譜條件與系統(tǒng)試用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水-甲醇-冰醋酸(80∶20∶0.6)為流動相；檢測波長為330nm。理論板數(shù)按綠原酸計算，應不低于5000。
對照品溶液的制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的綠原酸對照品50mg，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得(每1ml中含綠原酸10μg)。
測定法 精密量取本品5ml，置100ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對照品溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。
本品每1ml含金銀花提取物以綠原酸(C18H18O9)計，應不少于0.2mg。
(2)肉桂酸的含量測定方法色譜條件與系統(tǒng)試用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.3％磷酸鹽緩沖液(60∶40)為流動相；檢測波長為278nm。理論板數(shù)按肉桂酸計算，應不低于5000。
對照品溶液的制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的肉桂酸對照品30mg，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得(每1ml中含肉桂酸60μg)。
測定法 精密量取本品3ml，置100ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對照品溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。
本品每1ml含金銀花提取物以肉桂酸(C9H80O)計，應不少于2.0mg。
(3)生物堿的含量測定方法對照品溶液的制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的石斛堿對照品10mg，置100ml量瓶中，加氯仿使溶解并稀釋至刻度。
標準曲線的制備 精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分別置分液漏斗中，用氯仿準確稀釋至10.0ml，加入PH4.5緩沖液5.0ml和0.04％溴甲酚綠溶液1.0ml，劇烈振搖3min，靜置30min，氯仿層經(jīng)氯仿浸泡處理并干燥后的藥棉濾過，取續(xù)濾液6.0ml加0.01N氫氧化鈉無水乙醇液1.0ml，搖勻，即得(每1ml中含石斛堿2.0μg)。以氯仿為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在波長620nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定法 精密吸取樣品試液10.0ml，自“加入PH4.5緩沖液5.0ml”起，依法立即測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中相當于石斛堿的重量，計算，即得。
本品每1ml含生物堿以石斛堿(C27H30O16)計，應不少于2.0mg。
(4)濱嵩內(nèi)酯的含量測定方法對照品溶液的制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的濱嵩內(nèi)酯對照品30mg，置100ml量瓶中，加氯仿振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含濱嵩內(nèi)酯0.3mg)。
供試品溶液的制備 精密量取本品10ml，置分液漏斗中，用氯仿振搖提取4次，每次10ml，合并提取液，置水浴中濃縮至干，殘渣中精密加氯仿至1ml使溶解，即得。
測定法 照薄層掃描法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取，吸取對照品溶液3μl和6μl及供試品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-氯仿-濃氨溶液(1∶1∶1)的下層溶液為展開劑，展開，展距8cm，取出，吹干，再以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(2∶3∶3)為展開劑，展開，展距18cm，取出，晾干，在紫外光燈下定位，進行掃描，波長λ＝343±2nm，測量斑點的吸收度積分值，按二點法計算，即得。
本品每1ml含濱嵩內(nèi)酯(C11H10O4)應不少于6.5μg。
實驗例5脈絡(luò)寧凍干粉針劑與注射液穩(wěn)定性的比較將本發(fā)明所述脈絡(luò)寧凍干粉針劑和相應的脈絡(luò)寧注射液同置于37℃恒溫恒濕箱中存放。定時抽樣檢查(脈絡(luò)寧注射液每天檢查澄明度)，共3個月，檢查項目如下外觀檢查脈絡(luò)寧注射液一般觀察顏色是否變深脈絡(luò)寧凍干粉針劑是否變形萎縮，顏色是否變深澄明度檢查脈絡(luò)寧注射液燈檢是否有沉淀物析出脈絡(luò)寧凍干粉針劑取一瓶加10ml注射用水，觀察溶解時間，20秒內(nèi)為速溶，視為合格。燈檢是否有沉淀物析出。
藥液pH值檢查脈絡(luò)寧注射液用25型pH計測定藥液pH值脈絡(luò)寧凍干粉針劑取一瓶加10ml蒸餾水溶解后，用25型pH計測定藥液pH值。
主要成分濱嵩內(nèi)酯和綠原酸的含量測定按上述方法分別測定脈絡(luò)寧注射液和脈絡(luò)寧凍干粉針劑中的濱嵩內(nèi)酯和綠原酸的含量。
表4結(jié)果顯示脈絡(luò)寧注射液穩(wěn)定較差，加速試驗60天即發(fā)生沉淀，pH值及濱嵩內(nèi)酯和綠原酸的含量均明顯下降。
將脈絡(luò)寧凍干粉針劑置于37℃連續(xù)考察3個月，實驗結(jié)果見表5。本發(fā)明制劑的外觀、色澤、水溶性、pH值及濱嵩內(nèi)酯和綠原酸的含量均無明顯變化，質(zhì)量穩(wěn)定，另外每批含水量測定，均在2％以下。結(jié)果表示本發(fā)明制劑穩(wěn)定性良好，優(yōu)于脈絡(luò)寧注射液。
表4 脈絡(luò)寧注射液37℃加速試驗結(jié)果

表 5脈絡(luò)寧凍干粉針劑37℃加速試驗結(jié)果

實驗例6對全血比粘度的影響取家免30只，隨機分為5組；用烏拉坦腹腔麻醉，做股靜脈插管以備取血，給藥前和給藥0.5小時后各取1次；在硅化的離心管內(nèi)加入0.1％肝素0.1ml制成肝素抗凝管；取4ml全血以L-100型血液粘度計在25℃下分別于80s-1至20s-1等不同切變率下測定全血比粘度。結(jié)果(見表6)表明，脈絡(luò)寧凍干粉針劑在高切變率及低切變率下的血粘均比相同劑量的脈絡(luò)寧注射液有明顯降低。
表6 家兔全血比粘度降低效應的比較

實驗例7血漿比粘度和紅細胞比容分別在家免給藥前后各取3ml血，抗凝；1500r/min離心5min，取上層血漿。采用毛細管法用L-100型血液粘度計在25℃下測定血漿比粘度。另取1ml血于比容管內(nèi)3000r/min離心30min，測得紅細胞比容。結(jié)果(見表7)表明，脈絡(luò)寧凍干粉針劑比相同劑量的脈絡(luò)寧注射液能更顯著降低血漿比粘度和紅細胞比容。
表7 家兔血漿比粘度和紅細胞比容降低效應的比較

實驗例8對結(jié)扎大腦中動脈產(chǎn)生腦梗死范圍的影響參照文獻(Minoru Y，Akira T，Takaaki.et al.Behaviral changesafter focal cerebral ischemia by left middle cerebral artery occlusionin ratst.Brain Rcs，1988，452(2)323)方法并加以改進小鼠經(jīng)水合氯醛麻醉后，取側(cè)臥位固定；在左側(cè)耳眼連線上作0.6cm左右的切口，分離顳肌以暴露顳骨，并作一約2.0mm×2.0mm的骨窗，可見大腦中動脈(MCA)斜行向上，用加熱的細不銹鋼絲燙其根部，使其凝閉。給藥組在MCA阻斷前30 min經(jīng)尾靜脈給藥，動物縫合傷口后單獨飼養(yǎng)。24小時后斷頭取腦，去掉小腦、嗅球和低位腦干，行冠狀切片，切為5片，放入0.5％的紅四氮哩(TTC)磷酸鹽溶液，在37℃孵育15min。正常組織染成紅色，梗死組織為白色。分別準確稱重，計算梗死范圍以及梗死部分重量占整個大腦重量的百分比。
結(jié)果(見表8)表明，脈絡(luò)寧凍干粉針劑比相同劑量的脈絡(luò)寧注射液更顯著降低了梗死范圍。
表8 小鼠大腦中動脈阻斷24h后腦梗死范圍影響的比較(n＝10)

實驗例9急性不完全性腦缺血時腦含水量、腦指數(shù)及毛細血管通透性按藥理實驗方法學(第二版，主編，徐叔云等，1994；947～948)制備結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動脈形成急性實驗性不完全腦缺血模型，假手術(shù)組不結(jié)扎動脈血管。雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎3小時后，斷頭，開顱取腦，計算腦指數(shù)(腦指數(shù)＝腦重×100/體重)，然后在110℃烘箱中烘干至恒重，計算腦含水量率＝[(濕重-干重)/濕重]×100％。假手術(shù)組分離頸總動脈并穿線，但不結(jié)扎并由尾靜脈注射伊文思藍50mg/kg；缺血模型組及各藥物實驗組在結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈前5min，由尾靜脈注射伊文思藍50mg/kg。結(jié)扎3小時后斷頭取腦稱重，并浸泡于甲酰胺溶液中，在45℃恒溫水浴中恒溫72小時，使腦組織中色素全部浸出，取色素液用分光光度計于620nm進行比色測定，根據(jù)標準曲線計算出腦內(nèi)伊文恩藍含量(μg/g腦濕重)。結(jié)果(見表9)表明，脈絡(luò)寧凍干粉針劑比相同劑量的脈絡(luò)寧注射液更加降低了腦含水量、腦指數(shù)及腦內(nèi)伊文恩藍含量。
表9 結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈的大鼠腦含水量、腦指數(shù)及血管通透性(n＝10)

通過對軟腦膜毛細血管的觀察，結(jié)果(見表10)表明，脈絡(luò)寧凍干粉針劑比相同劑量的脈絡(luò)寧注射液更明顯增加軟腦膜毛細血管的開放條數(shù)。提示脈絡(luò)寧凍干粉針劑能更有效改善腦部微循環(huán)，增加血氧供應。
表10 大鼠軟腦膜毛細血管微循環(huán)(n＝10)

實驗例10對血壓的影響取雜種犬12只，隨機分為三組；用戊巴比妥鈉靜注麻醉，經(jīng)股動脈插管入腹主動脈，通過TP-200T型壓力換能器接于RM-6000多導生理記錄儀(Nihon Koden)。直接讀取腹主動脈收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)、平均動脈壓(MAP)和心率(HR)。分別從股靜脈滴注給藥，各參數(shù)變化情況(見表11)表明脈絡(luò)寧凍干粉針劑比相同劑量的脈絡(luò)寧注射液能更有效降低血壓，持續(xù)時間長。
表11 麻醉犬血壓影響的比較

實施例1處方組成金銀花 30kg玄參 40kg牛膝 30kg石斛 40kg甘露醇 1kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、金銀花經(jīng)揀選，稱取30kg，用30倍50％乙醇回流提取3次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，加水至2000ml，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；2、稱取玄參40kg，采用25倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參分別用40倍的水煎煮3次，每次2.0小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至2500ml沉淀處理，過夜，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C；
3、稱取牛膝30kg，采用20倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，每次2.5小時，濾過，濾液濃縮至2000ml后，進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；4、稱取石斛40kg，先用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、1.5小時和1.0小時，濾過，濾液濃縮至1000ml后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；5、金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取混合液的制備將上述所得的金銀花、玄參、牛膝和石斛藥用部位提取液A、C、D和E混合均勻，然后加入甘露醇1kg，攪拌，溶解，濾過，加水至10000ml，再調(diào)節(jié)PH值至6.5，濾過，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位混合液；將上述脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內(nèi)，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持2小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持12小時，最后升溫至40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例2處方組成金銀花 25kg玄參 60kg牛膝 40kg石斛 20kg甘露醇 0.5kg
葡萄糖 0.5kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、金銀花經(jīng)揀選，稱取25kg，用40倍60％乙醇回流提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，加水至2000ml，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；2、稱取玄參60kg，采用25倍乙醇回流提取2次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參分別用50倍的水煎煮3次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達70％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至2500ml沉淀處理，過夜，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C；3、稱取牛膝40kg，采用40倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，每次1.5小時，濾過，濾液濃縮至2000ml后，進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；4、稱取石斛20kg，先用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、2.0小時和1.5小時，濾過，濾液濃縮至1000ml后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；5、金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取混合液的制備將上述所得的金銀花、玄參、牛膝和石斛藥用部位提取液A、C、D和E混合均勻，然后加入甘露醇和葡萄糖各0.5kg，攪拌，溶解，濾過，加水至10000ml，再調(diào)節(jié)PH值至7.0，濾過，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位混合液；將上述脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內(nèi)，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-35℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持4小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持14小時，最后升溫至35℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例3處方組成金銀花 30kg玄參 50kg牛膝 35kg石斛 40kg水解明膠 0.5kg葡萄糖 0.5kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、金銀花經(jīng)揀選，稱取30kg，用40倍70％乙醇回流提取2次，每次2.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，加水至2000ml，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；2、稱取玄參50kg，采用35倍乙醇回流提取3次，每次3小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參分別用40倍的水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至2500ml沉淀處理，過夜，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C；3、稱取牛膝35kg，采用30倍的水浸泡過夜，再煎煮2次，每次3小時，濾過，濾液濃縮至2000ml后，進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；4、稱取石斛40kg，先用10倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為3.0小時、2.0小時和1.5小時，濾過，濾液濃縮至1000ml后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達75％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；5、金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取混合液的制備將上述所得的金銀花、玄參、牛膝和石斛藥用部位提取液A、C、D和E混合均勻，然后加入水解明膠和葡萄糖各0.5kg，攪拌，溶解，濾過，加水至10000ml，再調(diào)節(jié)PH值至7.0，濾過，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位混合液；將上述脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內(nèi)，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持11小時，最后升溫至40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例4處方組成金銀花 40kg玄參30kg牛膝20kg石斛50kg右旋糖苷0.8kg蔗糖0.5kg
注射用水適量制成 10000ml制備方法1、金銀花經(jīng)揀選，稱取40kg，用30倍60％乙醇回流提取2次，每次4.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，加水至2000ml，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；2、稱取玄參30kg，采用25倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參分別用50倍的水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達70％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至2500ml沉淀處理，過夜，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C；3、稱取牛膝20kg，采用40倍的水浸泡過夜，再煎煮2次，每次3小時，濾過，濾液濃縮至2000ml后，進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；4、稱取石斛50kg，先用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、2.0小時和1.5小時，濾過，濾液濃縮至1000ml后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；5、金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取混合液的制備將上述所得的金銀花、玄參、牛膝和石斛藥用部位提取液A、C、D和E混合均勻，然后加入右旋糖苷0.8kg，蔗糖0.5kg，攪拌，溶解，濾過，加水至10000ml，再調(diào)節(jié)PH值至7.5，濾過，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位混合液；將上述脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內(nèi)，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持15小時，最后升溫至40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例5處方組成金銀花 25kg玄參 25kg牛膝 25kg石斛 25kg右旋糖苷 0.5kg甘露醇 0.5kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、金銀花經(jīng)揀選，稱取25kg，用40倍60％乙醇回流提取3次，每次4.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，加水至2000ml，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；2、稱取玄參25kg，采用30倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參分別用50倍的水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達70％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至2500ml沉淀處理，過夜，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C；3、稱取牛膝25kg，采用40倍的水浸泡過夜，再煎煮2次，每次3小時，濾過，濾液濃縮至2000ml后，進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；4、稱取石斛25kg，先用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、2.0小時和1.5小時，濾過，濾液濃縮至1000ml后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；5、金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取混合液的制備將上述所得的金銀花、玄參、牛膝和石斛藥用部位提取液A、C、D和E混合均勻，然后加入右旋糖苷0.5kg，甘露醇0.5kg，攪拌，溶解，濾過，加水至10000ml，再調(diào)節(jié)PH值至7.5，濾過，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位混合液；將上述脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內(nèi)，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持13小時，最后升溫至35℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例6處方組成金銀花 25kg玄參25kg牛膝25kg石斛25kg甘露醇 1.0kg注射用水適量制成10000ml
制備方法1、金銀花經(jīng)揀選，稱取25kg，用40倍60％乙醇回流提取3次，每次4.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，加水至2000ml，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；2、稱取玄參25kg，采用30倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參分別用50倍的水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達70％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至2500ml沉淀處理，過夜，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C；3、稱取牛膝25kg，采用40倍的水浸泡過夜，再煎煮2次，每次3小時，濾過，濾液濃縮至2000ml后，進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；4、稱取石斛25kg，先用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、2.0小時和1.5小時，濾過，濾液濃縮至1000ml后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；5、金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取混合液的制備將上述所得的金銀花、玄參、牛膝和石斛藥用部位提取液A、C、D和E混合均勻，然后加入甘露醇1.0kg，攪拌，溶解，濾過，加水至10000ml，再調(diào)節(jié)PH值至7.5，濾過，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位混合液；將上述脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內(nèi)，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持13小時，最后升溫至35℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
實施例7處方組成金銀花 30kg玄參 30kg牛膝 30kg石斛 30kg甘露醇 1.0kg注射用水適量制成 10000ml制備方法1、金銀花經(jīng)揀選，稱取30kg，用35倍60％乙醇回流提取2次，每次4.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，加水至2000ml，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；2、稱取玄參30kg，采用25倍乙醇回流提取2次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參分別用50倍的水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達70％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮至稠膏狀后，加水至2500ml沉淀處理，過夜，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C；3、稱取牛膝30kg，采用30倍的水浸泡過夜，再煎煮2次，每次3小時，濾過，濾液濃縮至2000ml后，進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，每次醇沉后均冷藏放置，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；4、稱取石斛30kg，先用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、2.0小時和1.5小時，濾過，濾液濃縮至1000ml后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后，加水至2000ml沉淀處理，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；5、金銀花、玄參、牛膝和石斛有效部位提取混合液的制備將上述所得的金銀花、玄參、牛膝和石斛藥用部位提取液A、C、D和E混合均勻，然后加入甘露醇1.0kg，攪拌，溶解，濾過，加水至10000ml，再調(diào)節(jié)PH值至7.5，濾過，即得脈絡(luò)寧凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位混合液；將上述脈絡(luò)寧凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液按每瓶10ml分裝后，未封口放入與凍干箱尺寸相應的金屬盤內(nèi)，對凍干箱進行滅菌處理，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持15小時，最后升溫至30℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
權(quán)利要求
1.一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針劑，其特征在于每支10毫升裝的凍干粉針劑含相當于原生藥量金銀花10-100g、玄參20-200g、牛膝10-100g、石斛20-200g。
2.一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針劑的制備方法，其特征在于該凍干粉針是由藥用組分為植物生藥金銀花、玄參、牛膝和石斛的藥用部位加賦形劑經(jīng)冷凍干燥獲得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法中賦形劑采用甘露醇、乳糖、右旋糖酐、水解明膠、葡萄糖、蔗糖或它們的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法為金銀花采用20～40倍的40％～70％稀乙醇回流提取2～4次，每次2～4小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；玄參先采用20～40倍乙醇回流提取2～4次，每次2～4小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參用20～50倍的水煎煮2～4次，每次2～4小時，濾過，濾液濃縮后進行2～3次醇沉，每次使含醇量達50％～75％，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C，供配液使用；牛膝先采用20～40倍的水浸泡過夜，再煎煮2～4次，每次1～3小時，濾過，濾液濃縮后進行2～3次醇沉，每次使含醇量達50％～75％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；石斛先采用5～15倍的水浸泡過夜，再加15～30倍的水煎煮2～4次，每次1～3小時，濾過，濾液濃縮后進行2～3次醇沉，每次使含醇量達60％～80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；將上述所得提取液A、C、D和E混勻，即得凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位提取液，向有效部位提取液中按每毫升加入賦形劑0.05～0.5克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水適量，再調(diào)節(jié)PH值至4～9，即得該凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液，冷凍干燥制成凍干粉針。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法為金銀花采用30倍的50％稀乙醇回流提取3次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；玄參先采用25倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參用40倍的水煎煮3次，每次2小時，濾過，濾液濃縮后進行2次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C，供配液使用；牛膝先采用20倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，每次2.5小時，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；石斛先采用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、1.5小時和1.0小時，濾過，濾液濃縮后進行2次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；將上述所得提取液A、C、D和E混勻，即得凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位提取液，向有效部位提取液中按每毫升加入賦形劑甘露醇0.1克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水適量，再調(diào)節(jié)PH值至6.5，即得該凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液，冷凍干燥制成凍干粉針。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法為金銀花采用40倍的60％稀乙醇回流提取2次，每次3.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；玄參先采用25倍乙醇回流提取2次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參用50倍的水煎煮3次，每次2小時，濾過，濾液濃縮后進行2次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C，供配液使用；牛膝先采用40倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，每次1.5小時，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；石斛先采用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、2.0小時和1.5小時，濾過，濾液濃縮后進行2次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；將上述所得提取液A、C、D和E混勻，即得凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位提取液，向有效部位提取液中按每毫升加入賦形劑甘露醇和葡萄糖共0.1克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水適量，再調(diào)節(jié)PH值至7.0，即得該凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液，冷凍干燥制成凍干粉針。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法為金銀花采用40倍的60％稀乙醇回流提取3次，每次4.0小時，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，再取上清液濾過，即得金銀花有效部位提取液A，供配液使用；玄參先采用30倍乙醇回流提取3次，每次2.5小時，得玄參有效部位提取液B；再將乙醇回流提取過的玄參用50倍的水煎煮3次，每次2.0小時，濾過，濾液濃縮后進行2次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達70％，然后取上清液濾過，濾液與上述提取液B合并，冷藏，取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得玄參藥用部位提取液C，供配液使用；牛膝先采用40倍的水浸泡過夜，再煎煮2次，每次3.0小時，濾過，濾液濃縮后進行兩次醇沉，第一次使含醇量達50％，第二次使含醇量達75％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得牛膝藥用部位提取液D，供配液使用；石斛先采用15倍的水浸泡過夜，再煎煮3次，時間分別為2.0小時、2.0小時和1.5小時，濾過，濾液濃縮后進行2次醇沉，第一次使含醇量達60％，第二次使含醇量達80％，冷藏，然后取上清液濾過，濾液濃縮后水沉，取上清液濾過，即得石斛藥用部位提取液E，供配液使用；將上述所得提取液A、C、D和E混勻，即得凍干粉針劑所用植物生藥的有效部位提取液，向有效部位提取液中按每毫升加入賦形劑甘露醇和右旋糖苷各0.1克，攪拌，溶解，濾過，并加注射用水適量，再調(diào)節(jié)PH值至7.5，即得該凍干粉針劑凍干所用植物生藥的有效部位混合液，冷凍干燥制成凍干粉針。
8.根據(jù)權(quán)利要求4、5、6或7所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法中所述的冷凍干燥方法為將凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶定量分裝后，未封口放入凍干箱的金屬盤內(nèi)，并將其擱板的溫度降低至-25℃-50℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持1-6小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2-0.5Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持10-24小時，最后升溫至30℃～40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在1-5％，迅速封口即可。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法中所述的冷凍干燥方法為將凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶定量分裝后，未封口放入凍干箱的金屬盤內(nèi)，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持2小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.3Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持12小時，最后升溫至40℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法中所述的冷凍干燥方法為將凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶定量分裝后，未封口放入凍干箱的金屬盤內(nèi)，并將其擱板的溫度降低至-35℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持4小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持14小時，最后升溫至35℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法中所述的冷凍干燥方法為將凍干所用植物生藥的有效成分混合液按每瓶定量分裝后，未封口放入凍干箱的金屬盤內(nèi)，并將其擱板的溫度降低至-30℃，迅速將裝有制劑的金屬盤放入凍干箱內(nèi)，維持3小時，然后對凍干箱進行真空處理，使箱內(nèi)的真空度為0.2Pa，再將擱板升溫，并嚴格控制在共熔點-2℃以下，保持13小時，最后升溫至35℃，并保持一定時間，使制劑溫度與擱板溫度重合，放入無菌的過濾氣體，控制制劑的含水量在2％，迅速封口即可。
12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種治療血管閉塞性脈管炎的凍干粉針的制備方法，其特征在于該方法中所述的冷凍干燥過程可選擇的最佳物理條件是首先將擱板降溫至-30℃，維持3小時，然后使凍干箱內(nèi)的真空度0.2Pa，將擱板升溫并嚴格控制在-2℃，保持18小時，將擱板升溫至40℃放入無菌氣體后，控制制劑的含水量為2％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脈絡(luò)寧凍干粉針劑型及其制備方法，脈絡(luò)寧凍干粉針是用植物生藥金銀花、玄參、牛膝和石斛的藥用部位加賦形劑制備成凍干粉針劑，其中金鋃花的藥用部位采用稀乙醇回流提?。恍⒌乃幱貌课徊捎靡掖蓟亓鹘Y(jié)合水煎醇沉法提?。慌Ｏサ乃幱貌课徊捎盟宕汲练ㄌ崛。皇乃幱貌课徊捎盟宕汲练ㄌ崛?。與現(xiàn)有的同類脈絡(luò)寧制劑相比，脈絡(luò)寧凍干粉針劑具有藥用部位提取更科學合理，穩(wěn)定性好，質(zhì)量標準更高，藥效更好，毒性更低，并且運輸、存放和使用更方便的優(yōu)點。
文檔編號A61P9/14GK1654062SQ20041003943
公開日2005年8月17日 申請日期2004年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月12日
發(fā)明者李亞平, 任武賢, 李亞政, 馮偉, 隋紅, 衛(wèi)銀波 申請人:山西亞寶藥業(yè)集團股份有限公司, 中國科學院上海藥物研究所