專利名稱：能促進(jìn)i型膠原蛋白和/或彈力蛋白產(chǎn)生的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種對(duì)人體皮膚真皮成纖維細(xì)胞(以下皆稱“皮膚成纖維細(xì)胞”)所產(chǎn)生的I型膠原蛋白和/或彈力蛋白有促進(jìn)效果的組合物。尤其本發(fā)明涉及可使真皮的張力及彈力提高，且具有預(yù)防、防止、改善因年齡增長及紫外線照射所引起的皺紋或松弛等皮膚老化作用的組合物。
背景技術(shù)：
對(duì)于皺紋或松弛等隨皮膚老化而起的變化，一般皆認(rèn)為和年歲增長及日光曝曬等環(huán)境壓力、精神壓力有關(guān)。因皮膚老化，構(gòu)成皮膚組織的表皮細(xì)胞、纖維芽細(xì)胞漸次減少的同時(shí)，供給這些細(xì)胞活動(dòng)所必須的物質(zhì)的血管亦隨之減少。還可看到具有保持皮膚構(gòu)造機(jī)能的細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular Matrix)的變化。顯著變化有真皮的I型膠原蛋白、III型膠原蛋白以及彈力蛋白，或聯(lián)系表皮層與真皮層間的基底膜IV型膠原蛋白或?qū)诱尺B蛋白(laminin)等的減少或發(fā)生變化，而表皮、真皮以及基底膜愈形偏平化(非專利文獻(xiàn)1)。尤其，為真皮主成份的I型膠原蛋白或彈力蛋白與皮膚的張力及彈性極為有關(guān)，這些蛋白質(zhì)的變性或減少，即為皺紋或松弛發(fā)生的主因。
由該防止皮膚老化的目的，開發(fā)出許多著眼于膠原蛋白與彈力蛋白產(chǎn)生的制劑。例如，開發(fā)出的膠原蛋白促進(jìn)劑有含有類視黃酸(retinoids)與殼斗科(fagacese)山毛櫸屬(fagus)植物的樹芽萃取物的組合物(專利文獻(xiàn)1)、含有Saussurea屬植物萃取物的組合物(專利文獻(xiàn)2)、含有葛根萃取物的組合物(專利文獻(xiàn)3)、含有白花丹(plumbago zeylanica)、香附子(cyperus rotundus)萃取物的組合物(專利文獻(xiàn)4)、含有蓮花胚芽萃取物的組合物(專利文獻(xiàn)5)、含有淫羊藿屬(epimedium)植物萃取物的組合物(專利文獻(xiàn)6)、含有月桃萃取物的組合物(專利文獻(xiàn)7)等。
再者，開發(fā)出的增加真皮彈力蛋白的組合物有配合彈力蛋白的化妝品(專利文獻(xiàn)8及9)、彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)劑(專利文獻(xiàn)10)以及作為彈力蛋白分解酵素的彈性蛋白脢(elastase)阻礙劑(專利文獻(xiàn)10及11)。由此可見，改善皮膚真皮組織細(xì)胞中的I型膠原蛋白及/或彈力蛋白的產(chǎn)生，將抑制皮膚的老化，亦可抑制或改善皺紋或松弛。
此外，能促進(jìn)I型膠原蛋白與彈力蛋白產(chǎn)生的成份有視黃酸或?yàn)槠湔T導(dǎo)體的視黃醇(retinol)(非專利文獻(xiàn)2及3)，但因其具有對(duì)皮膚的刺激性，于安全性上有問題(非專利文獻(xiàn)4)，并且因其穩(wěn)定性較差，一般而言并不將其付諸實(shí)用。
因此，雖開發(fā)出能增加真皮膠原蛋白及彈力蛋白數(shù)量的組合物，因須兼顧對(duì)皮膚的安全性，故仍無法達(dá)到充分的效用。
本發(fā)明針對(duì)與皮膚老化有關(guān)的皮膚纖維芽細(xì)胞，以水飛薊素的嶄新生理效果為基礎(chǔ)，成功了本發(fā)明。有關(guān)該水飛薊素先前的技術(shù)，以下非專利文獻(xiàn)5以及專利文獻(xiàn)12～17為其代表，而本發(fā)明與這些現(xiàn)有技術(shù)相異。
《非專利文獻(xiàn)1》化妝品的有用性，評(píng)價(jià)技術(shù)的進(jìn)步與未來展望，日本化妝品技術(shù)者會(huì)編，分論，第1章，第7節(jié)對(duì)應(yīng)皺紋的化妝品，162-177頁，2001年3月31日第1次印刷發(fā)行。
《非專利文獻(xiàn)2》Varani，J，et al.All-trans retinoic acid stimulates growth andextracellular matrix production in growth -inhibited cultured human skinfibroblasts.J.Invest.Dermatol.，Vol.94，No.5，p717-723，1990.
《非專利文獻(xiàn)3》Tajima，S.，et al.，Elastin expression is up-regulated byretinoic acid but not by retinol in chick embryonic skin fibroblasts，J.Dermatol.Sci.，Vol.15，p166-172，1997.
《非專利文獻(xiàn)4》Zouboulis，C.C.，RetinoidsIs there a New Approach？，IFSCC Magazine，Vol.3，No.3，2000《非專利文獻(xiàn)5》天然藥草事典，奧田拓男編，廣川書店，昭和61年3月3日發(fā)行。
《非專利文獻(xiàn)6》Wagner，H.，et al.，Arznein.Forsch，18，696，1968.
《非專利文獻(xiàn)7》Wagner，H.，et al.，Arznein.Forsch，24，466，1974.
《非專利文獻(xiàn)8》Tittel，G.，et al.，J.Chromatogr.，135，499，1977.
《非專利文獻(xiàn)9》Tittel，G.，et al.，J.Chromatogr.，153，227，1978.
《非專利文獻(xiàn)10》Quercia，V.，et al.，Chromatography in Biochemistry，Medicine and Enviromental Research，F(xiàn)rigerio A.(ED).，Elsevier ScientificPublishing Company，Amsterdam，1983，p1.
《非專利文獻(xiàn)11》Lowry，O.，et al.，J.Biol.Chem.，193，265，1951.
《非專利文獻(xiàn)12》M，J.Barttek，et.al.，J.Invest.Dermatol.，58，114，1972.
《非專利文獻(xiàn)13》化妝品手冊(cè)，日光凱米克魯斯股份有限公司，日本薩發(fā)克坦特工業(yè)股份有限公司，東色普古敏特股份有限公司，10.經(jīng)皮膚吸收促進(jìn)，3.經(jīng)皮膚吸收的評(píng)價(jià)，607頁。
《專利文獻(xiàn)1》特開2001-278783號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)2》特開2001-316240號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)3》特開2001-348338號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)4》特開2002-29923號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)5》特開2002-29980號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)6》特開2002-53427號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)7》特開2001-316275號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)8》登錄3121957號(hào)《專利文獻(xiàn)9》特開2001-72571號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)10》特開2002-293747號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)11》特開2002-205950號(hào)公報(bào)
《專利文獻(xiàn)12》特開平5-286864號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)13》特許第2948818號(hào)《專利文獻(xiàn)14》特開2000-169328號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)15》特開2000-169332號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)16》特愿2002-255448號(hào)《專利文獻(xiàn)17》特開平5-9406號(hào)公報(bào)《專利文獻(xiàn)12》特公昭63-41396號(hào)發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供能促進(jìn)人體皮膚成纖維細(xì)胞的I型膠原蛋白和/或彈力蛋白產(chǎn)生的新穎組合物。再者，本發(fā)明提供一種防止皮膚老化用組合物，能提高皮膚張力以及彈性，充分預(yù)防、防止、改善皺紋或松弛，且對(duì)皮膚有極高安全性。
本案發(fā)明者進(jìn)行了對(duì)I型膠原蛋白及彈力蛋白產(chǎn)生有促進(jìn)作用的成份的研究。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)水飛薊素和/或乳薊等含水飛薊素的植物萃取物，或這些植物體對(duì)于有關(guān)I型膠原蛋白和/或彈力蛋白的產(chǎn)生具有優(yōu)異的促進(jìn)作用，進(jìn)而完成本發(fā)明。
亦即，本發(fā)明是指1、一種對(duì)I型膠原蛋白和/或彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的組合物，其特征是含有水飛薊素(silymarin)以促進(jìn)I型膠原蛋白(collagen)和/或彈力蛋白(elastin)的產(chǎn)生。
2、如前述1所述的組合物，水飛薊素是指從含有水飛薊素的植物萃取物和/或植物中所取得的物質(zhì)。
3、如前述1或2所述的組合物具有防止皮膚老化的作用。
4、如前述1～3任一項(xiàng)所述的組合物為皮膚外用。
5、如前述1～3任一項(xiàng)所述的組合物為食品。
6、前述4所述的組合物，含有水飛薊素有效成份0.7～2.0％重量。
7、前述1～3項(xiàng)的任一項(xiàng)所述的組合物為化妝品。


圖1表示本發(fā)明中水飛薊素對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞中I型膠原蛋白的產(chǎn)生有促進(jìn)作用的示意圖。
圖2表示本發(fā)明中水飛薊素對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞中彈力蛋白的產(chǎn)生有促進(jìn)作用的示意圖。
圖3表示本發(fā)明中水飛薊素對(duì)人體皮膚立體模型中I型膠原蛋白產(chǎn)生有促進(jìn)作用的示意圖。
圖4表示本發(fā)明中水飛薊素對(duì)人體皮膚立體模型中彈力蛋白產(chǎn)生有促進(jìn)作用的示意圖。
圖5表示本發(fā)明的水飛薊素對(duì)豬皮膚浸透性示意圖。
圖6表示本發(fā)明的皺紋深淺檢測結(jié)果示意圖。
圖7表示本發(fā)明的皺紋大小檢測結(jié)果示意圖。
圖8表示本發(fā)明的皮膚彈性試驗(yàn)測定結(jié)果示意圖。
圖9表示本發(fā)明的官能評(píng)價(jià)結(jié)果示意圖。
表1表示本發(fā)明對(duì)I型膠原蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的測定結(jié)果藉由畫像解析而數(shù)值化的圖表。
表2表示本發(fā)明對(duì)彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的測定結(jié)果藉由畫像解析而數(shù)值化的圖表。
表3表示本發(fā)明的各被驗(yàn)物質(zhì)對(duì)I型膠原蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的測定結(jié)果，以數(shù)值化的I型膠原蛋白所作的圖表。
表4表示本發(fā)明的各化合物對(duì)彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的測定結(jié)果，以數(shù)值化的彈力蛋白所作的圖表。
表5為本發(fā)明的制劑例A與比較例B的對(duì)比示意表。
具體實(shí)施例方式
水飛薊素(Silymarin；CAS No.65666-07-1)是指由菊科乳薊(學(xué)名Silibum marinum Gaertn，別名大薊、大翅薊、奶薊；Cas No.84604-20-6)提取出的黃酮木酯素類的總稱，分子式表示為C25H22O10，為含有水飛薊賓(Silybin；CAS No.22888-70-6)，水飛薊寧(Silydianin；CAS No.29782-68-1)，水飛薊亭(Silychristin；CAS No.33889-69-9)，異水飛薊賓(Isosilybin；CASNo.72581-71-6)等的組合物(非專利文獻(xiàn)5)。于本發(fā)明中，與以往的技術(shù)相同，將含有、具有乳薊萃取物中的這些黃酮木脂素類的組合物，皆稱為水飛薊素。水飛薊素如同前述，為黃酮木脂素類的混合物，水飛薊素在植物萃取物或植物中的含有量，以分光光度計(jì)為基礎(chǔ)的測定方法(非專利文獻(xiàn)6)、薄層色譜分析法(非專利文獻(xiàn)7)、高效液相層析技術(shù)(非專利文獻(xiàn)8～10)可測定。這些測定法中，為分光光度計(jì)法之一的2，4-二硝聯(lián)氨分析，于德國藥局(有關(guān)水飛薊Silybum marianum果實(shí)的專題論文)提出報(bào)告，且廣泛使用。于本發(fā)明中，為達(dá)上述成分的混合組合物的定量分析，是以2，4-二硝聯(lián)氨分析法紀(jì)錄水飛薊素所換算的重量％。
水飛薊素早期于歐洲是用于肝臟疾病的預(yù)防及治療。且可作為氧化防止劑廣為人知。再者，其對(duì)皮膚而言為有效的組合物，可為干癬、異位性皮膚炎的治療制劑(專利文獻(xiàn)12)，其為黃酮木脂素與磷脂質(zhì)的復(fù)合物作為活性成分，其對(duì)于紅斑、燒傷、皮膚或粘膜的萎縮癥狀態(tài)、皮膚炎等的治療、防止皮膚的老化以及放射線、風(fēng)、太陽等外部環(huán)境而來的刺激保護(hù)而言，為相當(dāng)有效的組合物(專利文獻(xiàn)13)，表皮透過屏障強(qiáng)化劑(專利文獻(xiàn)14)，皮脂分泌抑制劑(珠練文獻(xiàn)15)，預(yù)防、防止表皮扁平化、改善皮膚老化用的組合物(專利文獻(xiàn)16)，抗氧化機(jī)能的抗皮膚老化用化妝品(專利文獻(xiàn)17)等使用皆相當(dāng)廣泛。但其對(duì)人體皮膚成纖維細(xì)胞的效果并不為人所知。于本發(fā)明中，為了取得充分的于立體皮膚模型中的I型膠原蛋白與彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的水飛薊素有效量，以及充分地對(duì)豬只皮膚的真皮的浸透性的水飛薊素有效量，而進(jìn)行調(diào)查的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)0.7％重量以上的水飛薊素即有顯著的效果。因此，本發(fā)明的特征為，水飛薊素于皮膚外用的有效成份量為0.7％或更高。
為將水飛薊素由乳薊果實(shí)中高純度分離出的方法，有70～80％純度分離的方法或90～96％純度分離的方法(專利文獻(xiàn)18)。水飛薊素通常由乳薊的種子或果實(shí)中，借由乙醇、醋酸乙酯、丙酮等抽出，再借由加熱干燥法使其成為干燥粉末，進(jìn)而成為萃取物原料而販賣。于本發(fā)明中所使用的水飛薊素即以此方式調(diào)制，可直接使用市面上所售水飛薊素，亦可使用由乳薊而來的水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭、異水飛薊賓等水飛薊素的構(gòu)成成分濃縮而成的萃取物，以及將上述者單離、精制的化合物。
本發(fā)明中，含有水飛薊素的植物體是指，葉、莖、芽、花、木皮部位(樹皮)等地上部位、根、塊莖等地下部位、種子、樹脂等全部的部位皆可使用。
于本發(fā)明中的水飛薊素及含有其的植物體，可以其干燥后的干燥物，及借由各種溶媒將其溶解后的溶解物的形式使用之。例如，使用以水或乙醇、甲醇等醇類，丙二醇、1，3-丁二醇等多元醇，乙醚、丙酮、醋酸乙酯等有機(jī)溶媒將其溶解后所得的溶解物。
于本發(fā)明中的含有水飛薊素的植物體，可直接使用將其天然干燥、熱風(fēng)干燥、凍結(jié)干燥后，使其發(fā)酵所得者。且依照一般方式進(jìn)行植物萃取，經(jīng)抽出、濃縮、粉末化等處理后所得者亦可使用。
含有水飛薊素的本發(fā)明組合物，能促進(jìn)構(gòu)成真皮的細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular Matrix)的主要蛋白質(zhì)I型膠原蛋白及/或彈力蛋白的產(chǎn)生，提高皮膚的張力或彈性，預(yù)防、防止、改善因年齡增長和紫外線照射所引起的皺紋或松弛，而保持皮膚于年輕的狀態(tài)。
本發(fā)明中的含有水飛薊素、含水飛薊素的植物或植物萃取物的組合物，可作為化妝品等的皮膚外用劑、口服食品而制造。
對(duì)于化妝品而言，是指將水飛薊素、含水飛薊素的植物或植物萃取物直接添加于小麥胚芽油或橄欖油等，然后作為化妝品的成分，從而制造化妝品。
為食品者，是指將水飛薊素、含水飛薊素的植物或萃取物直接添加種種的營養(yǎng)成分，而成為可使食用的食品，亦可和所欲搭配的食品配合使用。例如，添加淀粉、乳糖、麥芽糖、植物油脂粉末、可可豆脂末、硬脂酸等適當(dāng)?shù)闹鷦┖?，使用一般的方式，使其成為可食用的型態(tài)，例如，使其成為顆粒狀、粉狀、錠劑、膠囊、軟膏等型態(tài)，而可為健康補(bǔ)助食品、保健機(jī)能食品等。亦可添加于種種的食品，例如，火腿、香腸等食肉加工食品、魚漿制品等水產(chǎn)加工食品、面包、糕點(diǎn)、奶油、奶粉、發(fā)酵乳制品等，亦可添加于水、果汁、牛乳、清涼飲料等飲料后使用。
水飛薊素、含水飛薊素的植物或植物萃取物的組合物有效配合量，是由水飛薊素、含水飛薊素的植物或植物萃取物的調(diào)制法、制劑的型態(tài)，進(jìn)而適當(dāng)?shù)剡x擇、決定，雖并無特別的限制，但為皮膚外用劑使用時(shí)，經(jīng)換算為水飛薊素，含有0.7～2.0％重量較佳。為錠劑或飲劑等食品的情形，使其含有0.001～20重量％者較佳。通常，將植物或植物萃取物干燥重量各自配制0.01～60重量％較佳。
本發(fā)明中含有水飛薊素、含水飛薊素的植物或植物萃取物的組合物的有效適用量，是由適用過程、適用日程、制劑型態(tài)等為依據(jù)而定。例如，將水飛薊素適宜地調(diào)節(jié)為一日0.01g～10g，一次或分?jǐn)?shù)次使用之。而含水飛薊素的植物或植物萃取物的組合物的情形，是適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)為一日0.1g～25g干燥物重量，一次或分?jǐn)?shù)次使用之。
本發(fā)明的皮膚外用組合物根據(jù)其所適用的型態(tài)，可含有如植物油等油脂類、石臘等碳?xì)浠衔镱悺⒏呒?jí)脂肪酸、高級(jí)醇、硅酮、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、兩性表面活性劑、非離子表面活性劑、防腐劑、糖類、金屬離子封鎖劑、水溶性高分子等高分子、增粘劑、粉體成分、紫外線吸收劑、紫外線隔絕劑、透明質(zhì)酸(hyaluronic)等保濕劑、香料、pH調(diào)節(jié)劑等。亦可含有維他命類、皮膚賦活劑、血液循環(huán)促進(jìn)劑、常生菌控制劑、活性氧消去劑、抗炎劑、美白劑、殺菌劑等其它藥效成分、生理活性成分。
所述油脂類，例如包括山茶油、月見草油、夏威夷果油、橄欖油、菜籽油、玉米油、芝麻油、荷荷葩油、胚芽油、小麥胚芽油、三聚甲醛丙三醇等液體油脂，可可豆脂、椰子油、硬化椰子油、棕櫚油、棕櫚核油、木蠟油、木蠟核油、硬化油、硬化蓖麻油等固體油脂，蜂蠟油、堪地里蠟、棉蠟、米糠蠟、羊毛脂、醋酸羊毛脂、液狀羊毛脂、甘蔗蠟等蠟類。
所述碳?xì)浠衔镱?，例如包括流?dòng)石蠟、深海角鯊烯(SQUALENE)、角鯊?fù)?Squalane)、微晶蠟(Micro crystalline wax)等。
所述高級(jí)脂肪酸，例如包括月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)等。
所述高級(jí)乙醇，例如包括十二烷基醇、硬脂醇、十六醇、十六醇和十八醇混合物等直鏈醇、硬脂酸甘油醚(monostearin glycerolether)、羊毛脂醇、膽固醇、植物甾醇(phytosterols)、辛基十二烷醇o(jì)ctyldodekanol等支鏈醇。
所述硅酮，例如包括二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷等鏈狀聚硅氧烷，十甲基環(huán)戊硅氧烷等環(huán)狀聚硅氧烷等。
所述陰離子表面活性劑，例如包括月桂酸鈉等脂肪酸鹽，月桂基硫酸鈉等高級(jí)烷基硫酸鹽，POE月桂基硫酸三乙醇胺等烷基醚硫酸鹽、N-酰基肌氨酸酯(N-Acylsarcosinate)、琥珀酸酯、N-?；被?N-acylamino acid)等。
所述陽離子表面活性劑，例如包括硬脂酸三甲酯氯化銨等烷基三甲酯銨鹽、氯化苯二甲羥銨(benzalkonium chloride)、苯索氯銨(benzethonium chloride)等。
所述兩性表面活性劑，例如包括烷基甜菜堿、酰胺甜菜堿等甜菜堿系表面活性劑等。
所述非離子表面活性劑，例如包括山梨聚糖單油酸酯{(sorbitanmonooleate)乳化劑Span 80}等山梨聚糖脂肪酸酯(Sorbitan Fatty AcidEsters)、硬化蓖麻油衍生物(Derivatives of Hardened Castor Oil)等。
所述防腐劑，例如包括對(duì)羥基苯甲酸甲酯(Methyl Paraben)、對(duì)羥基苯甲酸乙脂(Ethyl paraben)等。
所述金屬離子封鎖劑(Metal-Ion Blockers)，例如包括乙烯二胺四醋酸二鈉(Disodium Ethylenediaminetereaacetate)、乙二胺四乙酸(Edetic Acid)、乙二胺四乙酸鈉鹽(Sodium Edetate)等。
所述高分子，例如包括阿拉伯膠、黃耆膠(Gum tragacanth)、半乳聚醣(galactan)、瓜耳豆膠(guar gum)、紅藻膠(Carrageenan)、果膠(pectin)、瓊脂(Agar-Agar)、Queen Seed、葡聚糖(dextran)、活性酵母(Pullulan)、羧甲基淀粉、膠原蛋白、酪蛋白膠、明膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉(CMC)、海藻酸鈉、羧基乙烯聚合物(CarboxyvinylPolymer)(CARBOPOL等)等乙烯系高分子。
所述增粘劑，例如包括紅藻膠、黃耆膠、Queen Seed、酪蛋白膠、葡聚糖、明膠、羧甲基纖維素鈉、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧基乙烯聚合物、瓜耳豆膠、玉米糖膠、膨潤土等。
所述粉末成分，例如包括滑石、高嶺土、云母、硅砂、硅藻土、聚乙烯粉末、聚苯乙烯粉末、纖維素粉末、無機(jī)白色顏料、無機(jī)紅色顏料、氧化鈦涂布云母、氧化鈦涂布滑石、著色氧化鈦涂布云母等珍珠色顏料、紅色201號(hào)、紅色202號(hào)等有機(jī)顏料。
所述紫外線吸收劑，例如包括對(duì)氨基苯甲酸、苯基水楊酸鹽(PhenylSalicylate)、桂皮酸異丙醇酯(Isopropyl Paramethoxy)、辛基甲氧基肉桂酸、2，4-二羥二苯基酮等。
所述紫外線隔絕劑，例如包括二氧化鈦、滑石、洋紅、膨潤土、高嶺土、二氧化鉛等。
所述保濕劑，例如包括聚乙烯醇、丙烯醇、雙丙甘醇(Dipropylene Glycol)、1，3丁二醇、1，2戊硫醇、丙三醇、二甘油、聚甘油、木糖醇、多醇、麥芽糖、山梨糖醇、葡萄糖、果糖、軟骨素硫酸鈉、透明質(zhì)酸鈉、乳酸鈉、吡咯烷酮羧酸(Pyrrolidone Carboxylic Acid)、環(huán)糊精等。
所述藥效成分，例如包括維他命A油、視黃醇等維他命A類、核黃素等維他命B2類、維生素B6鹽酸鹽、L-抗壞血酸、L-抗壞血酸磷酸脂(L-Ascorbic Acid Phosphate Easter)、L-甘油酯抗壞血酸單軟脂酸酯(L-Ascorbic Acid Monopalmitic Acid Ester)、L-棕櫚酸抗壞血酸酯(L-AscorbicAcid Dipalmitic Acid Ester)、L-抗壞血酸-2-糖精等維他命C類、泛酸鈣等泛酸類、維他命D2、膽鈣化醇等維他命D類；α-生育酚(α-Tocophero)、醋酸生育酚、尼古丁酸DL-α-生育酚(DL-α-Tocopherol Nicotinate)等維他命E類。胎盤素萃取物、谷胱甘肽、虎耳草萃取物等美白劑、蜂王漿、山毛櫸萃取物等皮膚蘇活劑、辣椒素、姜酮、斑蝥滴酊、魚石脂、咖啡因、丹寧酸、谷維素等血液循環(huán)促進(jìn)劑、甘草甜味素酸誘導(dǎo)體、甘草酸誘導(dǎo)體、甘菊環(huán)(Azulene)等消炎劑、精氨酸、絲氨酸、白氨酸、色氨酸等氨酸類、常生菌控制劑的麥芽糖縮合物、氯化溶菌脢(Lysozyme Chloride)等。再者，可以是洋甘菊萃取物、洋芹萃取物、山毛櫸萃取物、酒酵母萃取物、葡萄柚萃取物、金銀花萃取物、米萃取物、葡萄萃取物、蛇麻草萃取物、米糠萃取物、枇杷萃取物、黃蘗萃取物、薏仁萃取物、胡黃連萃取物、黃香草木樨萃取物、棕櫚萃取物、甘草萃取物、芍藥萃取物、肥皂草萃取物、絲瓜萃取物、辣椒萃取物、檸檬萃取物、龍膽萃取物、紫蘇萃取物、蘆薈萃取物、迷迭香萃取物、鼠尾草萃取物、百里香萃取物、茶萃取物、海藻萃取物、青瓜萃取物、丁香萃取物、胡蘿卜萃取物、七葉樹萃取物、金縷梅萃取物、桑萃取物等各種萃取物。
本發(fā)明的皮膚外用組合物，例如是水溶液、油劑、乳液、懸濁液等液劑、凝膠、乳霜等半固體劑、粉末、顆粒、膠囊、微膠囊、固體等固體劑型態(tài)皆可適用。可以已知的方式調(diào)制這些型態(tài)，化妝水、乳劑、凝膠劑、乳霜、軟膏、硬膏、外敷膏、噴霧劑、栓劑、注射劑、粉末劑、顆粒劑、錠劑、丸劑、漿劑、片劑等各種劑型皆可。這些可適用于涂布、貼附、噴霧、飲用等方式。尤其于這些劑型中，化妝水、乳劑、乳霜?jiǎng)?、軟膏劑、硬膏劑、外敷膏劑、噴霧劑等類型尤其適用。
所述化妝品，包括化妝水、乳液、乳霜、外敷軟膏等皮膚化妝品、打底化妝水、打底乳霜、乳液狀或乳霜狀或軟膏型的粉底等打底化妝品、雪花膏、腳用乳霜、身體用乳霜等化妝品、入浴劑等。
以下則舉試驗(yàn)例、實(shí)施例以進(jìn)一步說明本發(fā)明，而本發(fā)明的效果并不限于這些試驗(yàn)例、實(shí)施例。
試驗(yàn)例試驗(yàn)用化合物溶液的配制使用生物化學(xué)用試藥級(jí)別的二甲基亞砜(DMSO；和光純藥)、確認(rèn)I型膠原蛋白產(chǎn)生促進(jìn)效果陽性對(duì)照的視黃酸(全反式-視黃酸；和光純藥)以及陰性對(duì)照的大豆磷脂(和光純藥)。各化合物借由DMSO使溶解的溶液成為儲(chǔ)備溶液，添加適當(dāng)?shù)牧坑谂囵B(yǎng)液，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。且同樣地，將水飛薊素(silymarin group；希格馬奧崔其)以上述DMSO溶解的溶液作為儲(chǔ)備溶液，添加適當(dāng)?shù)牧坑谂囵B(yǎng)液，確認(rèn)其添加效果。
正常人體皮膚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)正常人體皮膚成纖維細(xì)胞(以下稱NFB)；以CCD1059(由大日本制藥購入)為皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基；以FGM(三光純藥)于37℃、5％ CO2的保溫箱中培養(yǎng)。FGM是于成纖維細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加人體皮膚成纖維細(xì)胞增殖因子(1μg/ml)、胰島素(5mg/ml)、正泰霉素(50μg/ml)、兩性霉素Amphotericin-B(50μg/ml)配成。本試驗(yàn)中，使用經(jīng)3～7代傳代的細(xì)胞。
水飛薊素促進(jìn)I型膠原蛋白產(chǎn)生的評(píng)價(jià)將NFB以FGM調(diào)整為5×104/ml之懸濁液狀態(tài)，于φ90mm培養(yǎng)皿中各播種10ml，培養(yǎng)至70％合流(Confluent)狀態(tài)。將各化合物于各濃度所添加之FGM，取10ml置于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)24小時(shí)?；厥张囵B(yǎng)上清液，以150G、5分鐘內(nèi)離心除去浮游細(xì)胞后，12000G、30分鐘間離心除去細(xì)胞片。為達(dá)80％飽和，添加硫酸銨后使溫度維持4℃狀態(tài)下攪拌一晚。15000G、30分內(nèi)離心沉降蛋白質(zhì)，除去上清后，溶解于20Mm Tris-HCl(pH7.5)。在20Mm Tris-HCl(pH7.5)中，使溫度維持4℃狀態(tài)下透析一晚后，加入20Mm Tris-HCl(pH7.5)使其濃縮20倍，進(jìn)而成為western印跡(-plotting)用樣本使用。
將樣本中的蛋白質(zhì)以SDS-PAGE分離后，轉(zhuǎn)漬至硝化纖維膜。將轉(zhuǎn)漬后的硝化纖維膜浸于阻斷溶液(脫脂乳以5％的濃度于含有0.1％的聚氧化乙烯(20)山梨醇酐單棕櫚酸酯的PBS中溶解的溶液)，維持4℃下進(jìn)行阻斷(Blocking)一夜。以洗凈液{含有0.1％的聚氧化乙烯(20)山梨醇酐單棕櫚酸酯的PBS}洗凈后，浸于一次抗體(Primary Antibody){以洗凈液調(diào)制500ng/ml的對(duì)I型膠原蛋白的多株抗體(Rockland)}，于室溫下作用1小時(shí)。
洗凈后，將其浸于二次抗體(于洗凈液250ng/ml中調(diào)制的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記化抗免疫球蛋白G(IgG))，于室溫下作用一小時(shí)。洗凈后，使用ECL pluswestern印跡試藥(阿瑪夏生化科技公司)檢出。檢出的條帶以影像分析系統(tǒng)(阿瑪夏生化科技公司)取得后，借由imagemaster軟件解析并數(shù)值化。
由western印跡法所測定的各化合物對(duì)I型膠質(zhì)蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的結(jié)果示于圖1。而有關(guān)完全長的I型膠原蛋白(圖1中表示為I型膠原蛋白的頻帶(band))畫像解析的數(shù)值化結(jié)果表示于表1。

表1
將水飛薊素以5μg/ml及10μg/ml處理時(shí)，與無處理樣品對(duì)照，則知其I型膠原蛋白的產(chǎn)生各自促進(jìn)了1.8倍及3.4倍。作為陽性對(duì)照，將視黃酸于250nM以及500nM處理，與無處理樣品對(duì)照，則知I型膠原蛋白的產(chǎn)生促進(jìn)為2.0倍以及1.4倍。另一方面，作為陰性對(duì)照，將大豆磷脂以10μg/ml處理，與無處理樣品對(duì)照則為相同程度。由此可知，水飛薊素對(duì)促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞的I型膠原蛋白產(chǎn)生有顯著的功效。
水飛薊素促進(jìn)彈力蛋白產(chǎn)生的評(píng)價(jià)將NFB以FGB懸濁調(diào)整為5×104/ml，于φ90mm培養(yǎng)皿中各播種10ml，培養(yǎng)至70％合流狀態(tài)。將各化合物于各濃度以添加的FGM于10ml/皿中處理，培養(yǎng)24小時(shí)。回收培養(yǎng)上清液，以150G、5分鐘內(nèi)離心除去浮游細(xì)胞后，12000G、30分鐘間離心除去細(xì)胞片。為達(dá)80％飽和，添加硫酸銨于4℃攪拌一晚。15000G、30分內(nèi)離心沉降蛋白質(zhì)，除去上清后，溶解于20Mm Tris-HCl(pH7.5)。在20Mm Tris-HCl(pH7.5)中，以4℃透析一晚后，加入20MmTris-HCl(pH7.5)使其為20倍濃縮，進(jìn)而成為西方墨點(diǎn)用樣本而使用之。
將樣本中的蛋白質(zhì)以SDS-PAGE分離后，轉(zhuǎn)漬至硝化纖維膜。將轉(zhuǎn)漬后的硝化纖維膜浸于阻斷溶液(使脫脂乳于5％的濃度于，含有0.1％的聚氧化乙烯(20)山梨醇酐單棕櫚酸酯的PBS中溶解的溶液)，4℃阻斷一夜。以洗凈液{含有0.1％的聚氧化乙烯(20)山梨醇酐單棕櫚酸酯的PBS}洗凈后，浸于一次抗體{以洗凈液調(diào)制500ng/ml的對(duì)I型膠原蛋白的多株抗體(Rockland)}，于室溫下作用1小時(shí)。洗凈后，將其浸于二次抗體(于洗凈液250ng/ml中調(diào)制的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記化抗免疫球蛋白G(IgG))，于室溫下作用一小時(shí)。洗凈后，使用ECL plus西方墨點(diǎn)試藥(阿瑪夏生化科技公司)檢出。且，檢出的頻帶(band)以影像分析系統(tǒng)(阿瑪夏生化科技公司)取得后，借由imagemaster該軟件解析并數(shù)值化。
由western印跡法所測定的各化合物的彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的結(jié)果示于圖2。而有關(guān)完全長的彈力蛋白(圖2中表示為彈力蛋白的頻帶(band))畫像解析的數(shù)值化結(jié)果表示于表2。

表2將水飛薊素以10μg/ml處理時(shí)，與無處理樣品對(duì)照，則知其彈力蛋白的產(chǎn)生促進(jìn)了4.7倍。做為陽性對(duì)照，將視黃酸于250nM以及500nM處理，與無處理樣品對(duì)照，則知I型膠原蛋白的產(chǎn)生促進(jìn)為2.8倍以及1.4倍。另一方面，作為陰性對(duì)照，將大豆磷脂以10μg/ml處理，與無處理樣品對(duì)照，則為相同程度。由此可知，水飛薊素對(duì)促進(jìn)產(chǎn)生皮膚成纖維細(xì)胞的彈力蛋白有顯著的功效。
于人體皮膚立體模型中I型膠原蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)人體皮膚立體模型為人體皮膚的擬真模型，因其安全與有效性而被廣為使用。人體皮膚立體模型使用TESTKIN(LSE-high)(東洋紡積)，按照附件所記載之協(xié)議(Protocol)進(jìn)行培養(yǎng)。于一縮二丙二醇(Dipropylene Glycol)中添加含有70％水飛薊素的乳薊萃取物(印地那公司)、大豆磷脂(和光純藥)、視黃酸(all-trans-視黃酸；和光純藥)于各濃度溶解。含有70％水飛薊素的乳薊，換算為有效成分的水飛薊素溶解于一縮二丙二醇。將含有70％水飛薊素的乳薊以及大豆磷脂加熱處理，溶解于一縮二丙二醇，視黃酸于室溫?cái)嚢枞芙?。無處理對(duì)照者則只用一縮二丙二醇。
將各被驗(yàn)物質(zhì)于分析環(huán)的組織上添加60μl，培養(yǎng)24小時(shí)。之后，交換培養(yǎng)液的同時(shí)，將分析環(huán)于培養(yǎng)基洗凈后，添加新樣本，再培養(yǎng)24小時(shí)。回收組織，添加組織用溶液{50Mm Tris-HCl(pH7.5)、0.5％(Octylphenoxy)聚乙氧基乙醇(Sigma-Aldrich)}，于聚四氟乙烯纖維均質(zhì)器中均化。10000G、30分鐘間離心除去組織片，在蒸餾水中，于4℃溫度下透析一晚，借由凍結(jié)干燥去除其水分。加入20Mm Tris-HCl(pH7.5)使其濃縮20倍，進(jìn)而成為western印跡用樣本。樣本中的蛋白質(zhì)的質(zhì)量使用DC蛋白質(zhì)分析套組(DC ProteinAssay KitBio-Rad實(shí)驗(yàn)室制造)，使用Lowry法(非專利文獻(xiàn)11)以將蛋白質(zhì)定量，添加20Mm Tris-HCl(pH7.5)調(diào)整為2μg/μl。于樣本中等量添加含有5％ 2-巰基乙醇的2倍濃縮Laemmli樣本，于加熱塊(Heat Block)中以100℃、處理5分鐘，還原樣本中的蛋白質(zhì)。
使用這些樣本，以western印跡法評(píng)價(jià)I型膠原蛋白的產(chǎn)生促進(jìn)作用。使用等同1lane的10μg的蛋白質(zhì)，以SDS-PAGE使其分離后，轉(zhuǎn)漬于硝化纖維膜。將轉(zhuǎn)漬后的硝化纖維膜浸于阻斷溶液(脫脂乳以5％的濃度于含有0.1％的聚氧化乙烯(20)山梨醇酐單棕櫚酸酯的PBS中溶解的溶液)，4℃阻斷一晝夜。以洗凈液{含有0.1％的聚氧化乙烯(20)山梨醇酐單棕櫚酸酯的PBS}洗凈后，浸于一次抗體{以洗凈液調(diào)制500ng/ml的對(duì)I型膠原蛋白的多株抗體(Rockland)}，于室溫下作用一小時(shí)。洗凈后，將其浸于二次抗體(于洗凈液250ng/ml中調(diào)制的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記化抗免疫球蛋白G(IgG))，于室溫下作用一小時(shí)。洗凈后，使用ECL plus western印跡試藥(阿瑪夏生化科技公司)檢出。檢出的頻帶(band)以影像分析系統(tǒng)(阿瑪夏生化科技公司)取得后，再借由影像分析系統(tǒng)(阿瑪夏生化科技公司)該軟件解析并數(shù)值化。
由western印跡法測定各被驗(yàn)物質(zhì)的I型膠原蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用結(jié)果示于圖3。完全長度(Full-Length)的I型膠原蛋白(圖3中，標(biāo)記為膠原蛋白的頻帶(band))的數(shù)值化結(jié)果示于表3。

表3水飛薊素以0.5％處理時(shí)，與無處理樣品對(duì)照雖相同，但以0.7％處理時(shí)為2.7倍、1.0％處理時(shí)則為3.3倍、1.5％處理時(shí)則為2.4倍、2.0％處理時(shí)則促進(jìn)2.2倍。作為陽性對(duì)照，以視黃酸于0.05％處理，與無處理樣品對(duì)照則知，其促進(jìn)2.0倍。另一方面，作為陰性對(duì)照者，以大豆磷脂以1.0％處理，與無處理樣品對(duì)照則為相同程度。由此可知，將水飛薊素以0.7％以上處理時(shí)，對(duì)促進(jìn)產(chǎn)生皮膚立體模型的I型膠原蛋白有2.0倍以上顯著的功效。
人體皮膚立體模型中彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)以下，使用上述人體皮膚立體模型中I型膠原蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)方式，來對(duì)人體皮膚立體模型中彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。
由western印跡法測定各化合物對(duì)彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用結(jié)果示于圖4。完全長的彈力蛋白(圖4中，標(biāo)記為彈力蛋白的頻帶(band))的數(shù)值化結(jié)果示于表4。


表4水飛薊素以0.5％濃度處理時(shí)，與無處理樣品對(duì)照雖相同，但以0.7％處理為2.5倍、1.0％處理則為4.3倍、1.5％處理則為3.3倍、2.0％處理則促進(jìn)2.0倍。做為陽性對(duì)照，以視黃酸于0.05％處理，與無處理樣品對(duì)照則知，其促進(jìn)3.3倍。另一方面，作為陰性對(duì)照，用大豆磷脂以1.0％處理時(shí)，與無處理樣品對(duì)照則為相同程度。由此可知，將水飛薊素以0.7％以上處理時(shí)，對(duì)促進(jìn)產(chǎn)生皮膚立體模型的彈力蛋白有2.0倍以上顯著的功效。
豬只皮膚的水飛薊素經(jīng)皮吸收性的評(píng)價(jià)使用被指為與人體皮膚吸收相近的豬只皮膚，對(duì)水飛薊素的經(jīng)皮吸收性作評(píng)價(jià)(非專利文獻(xiàn)12)。評(píng)價(jià)是以Franz所創(chuàng)的擴(kuò)散池法為之(非專利文獻(xiàn)13)。將取下后以-80℃保存的尤卡坦(yucatan)迷你豬的皮膚(五個(gè)月的雌豬；日本查爾斯河品種)于室溫下放置20分鐘，使其為半解凍的狀態(tài)。以手術(shù)用的兩鈍直剪刀除去其脂肪。于Franz擴(kuò)散池下層的受體細(xì)胞加入含有0.05％卡那霉素硫酸鹽(和光純藥)的磷酸緩沖生理食鹽水(pH7.4)，安裝豬皮膚，設(shè)置上層給體細(xì)胞(Donor Cell)。將擴(kuò)散池設(shè)置于37℃的保溫箱內(nèi)，以攪拌器攪拌受體細(xì)胞液。于一縮二丙二醇將含有70％水飛薊素的乳薊萃取物于各不同水飛薊素濃度溶解的樣本添加100μl于捐贈(zèng)細(xì)胞內(nèi)，再以石蠟薄膜密封。
由各水飛薊素的濃度，使用兩個(gè)豬只皮膚以評(píng)價(jià)之。24小時(shí)后，除去豬只皮膚上殘留的樣本，用剪刀將適于作樣本的皮膚取出。以80℃的水浴器預(yù)先溫?zé)岬墓紊讑A住皮膚加熱20秒鐘，用鑷子將表皮與真皮剝離。以剪刀細(xì)劃真皮后，放入15ml的離心管(Centrifugation Tube)。添加2ml的99.8％甲醇(和光純藥)，以物理均質(zhì)機(jī)使其破碎。10000×G、30分鐘內(nèi)離心除去組織片后，以0.45μm的薄膜過濾器濾過，即為成分分析用的樣本。
于一縮二丙二醇將含有70％水飛薊素的乳薊萃取物各不同水飛薊素濃度溶解的樣本為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將浸透于豬只皮膚的水飛薊素以高效液相層析技術(shù)測定之。高效液相層析技術(shù)的條件為以下所示。以下列條件分析，可見水飛薊亭、水飛薊賓、水飛薊賓A(silybin A)、水飛薊賓B(silybin B)、異水飛薊賓(isosilybin A)、異水飛薊賓B(isosilybin B)的特征峰。
(高效液相層析技術(shù)的條件)管柱；C18 UG120 4.6mm-250mm(資生堂)移動(dòng)相；水∶甲醇∶醋酸＝65∶35∶5管柱溫度；40℃測定波長；288nm流速；1.0ml/min算出各成分峰面積的合計(jì)值，則為水飛薊素的濃度值，將雙丙烯二醇中含有70％水飛薊素的乳薊萃取物，在各水飛薊素濃度下所溶解的樣本中，設(shè)水飛薊素量為100％，則浸透豬只真皮的水飛薊素量則以％表示之。結(jié)果，浸透兩個(gè)豬只皮膚的真皮的水飛薊素濃度平均值以圖表示于圖5。水飛薊素濃度介於0.5％～0.7％者與介於0.7％～2.0％者相較，後者反應(yīng)較為緩和，由圖中可見于0.7％對(duì)真皮的浸透性急速升高。
對(duì)于皮膚立體模型中水飛薊素對(duì)I型膠原蛋白以及彈力蛋白產(chǎn)生促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)，由水飛薊素對(duì)豬只皮膚的真皮的浸透性觀之，欲使水飛薊素對(duì)人體皮膚產(chǎn)生I型膠原蛋白以及彈力蛋白促進(jìn)作用，必須有0.7％以上濃度的水飛薊素。因此，以下所示的人體試驗(yàn)中，以使用配合0.7的水飛薊素的化妝品進(jìn)而對(duì)其評(píng)價(jià)。
1％乳薊萃取物溶液的安全性評(píng)價(jià)乳薊于歐洲自古以來即被使用為食品或藥物，其安全性亦廣為人知。而現(xiàn)在，將對(duì)有關(guān)乳薊對(duì)皮膚的刺激性做試驗(yàn)。
有關(guān)含有1％水飛薊素的乳薊萃取物溶液對(duì)皮膚的刺激性，將使用貼膚試驗(yàn)以評(píng)價(jià)之。被驗(yàn)者的上腕內(nèi)側(cè)部位于24小時(shí)內(nèi)閉塞貼上1％水飛薊素溶液的貼布。貼布除去3以及24小時(shí)后，觀察所貼部位，由日本接觸皮膚炎學(xué)會(huì)的本國基準(zhǔn)判定之。由被驗(yàn)者20人評(píng)價(jià)的結(jié)果為全員陰性可知，其對(duì)皮膚的安全性相當(dāng)高。
人體試驗(yàn)皺紋的目視評(píng)價(jià)(人體試驗(yàn)1)以有皺紋現(xiàn)象的男性一名、女性十名為受驗(yàn)者進(jìn)行以下的試驗(yàn)。將實(shí)施例A(請(qǐng)參照表5)的美容液涂于任半邊臉上，于12個(gè)星期內(nèi)一天兩次(早、晚)各自約涂布0.2g。另一邊臉上亦同樣涂布比較例B。由專門人員以目視判定皺紋改善的效果。表5所示者為實(shí)施例A與比較例B。

(注1)SEPPIC公司制造(注2)印地那公司制造表5目視的結(jié)果，11人中有7人實(shí)施例化妝品涂布的半邊臉可認(rèn)定有皺紋改善效果。
皺紋深度的測定(人體試驗(yàn)2)以上述的方法進(jìn)行試驗(yàn)，于試驗(yàn)開始前以及試驗(yàn)完成后，在外眼角使用山田妝業(yè)制造二劑混合型復(fù)制劑skin cast采取復(fù)制，由復(fù)制畫像解析判定表面縐紋的深淺。復(fù)制劑的畫像解析是于非接觸式光學(xué)3D測定裝置(PRIMOSGFM)取得其畫像，進(jìn)而計(jì)算測量復(fù)制表面的縐紋深淺。
于畫像解析中，使用實(shí)施例A化妝品的半邊，與使用前相較，使用后皺紋變的較淺(有效標(biāo)準(zhǔn)未達(dá)5％)。圖6所示者為皺紋深淺的測定結(jié)果，圖7所示者為皺紋大小的測定結(jié)果。
皮膚彈性試驗(yàn)(人體試驗(yàn)3)外眼角的吸引彈性(Suction Resilienceelasticity)是以Cutemeter(C+Kelectronic公司制造)測定之。皮膚彈性試驗(yàn)測定結(jié)果示于圖8。
吸引彈性是肌肉彈性指針的一種測定標(biāo)準(zhǔn)，皮膚彈性會(huì)隨年齡增長。但使用實(shí)施例A化妝品者，則可明顯看出有吸引彈性增加的傾向。
膠原蛋白量的測定(人體試驗(yàn)4)膠原蛋白量的測定是以SKINSKAN(光纖維熒光分光測定裝置)(JobinYvon spec.公司制造)測定之。其指針為，胃蛋白脢分解膠原蛋白與膠原脢分解膠原蛋白的峰面積。
觀其結(jié)果，胃蛋白酶分解膠原蛋白與膠原脢分解膠原蛋白原本各自因自然老化、光老化而增加，但該試驗(yàn)得到抑制該兩者的結(jié)果。
官能試驗(yàn)(人體試驗(yàn)5)對(duì)被驗(yàn)者12個(gè)星期涂布后的肌狀態(tài)，肌肉的張力、彈性的改善度由自我評(píng)價(jià)來實(shí)施官能試驗(yàn)。圖9所示者為該官能試驗(yàn)的結(jié)果。
觀其結(jié)果，認(rèn)為實(shí)施例化妝品涂布側(cè)有改善者在被驗(yàn)者11人中有5人。由以上的評(píng)價(jià)，配合水飛薊素的化妝品，對(duì)于皺紋的改善、肌肉彈力的回復(fù)、胃蛋白脢以及膠原蛋白分解膠原脢的抑制效果、由自我評(píng)價(jià)等亦可知其對(duì)肌狀態(tài)的改善相當(dāng)有效。
實(shí)施例以下所示者為本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明并不僅限于此。
<實(shí)施例1>乳霜按下列處方(單位重量％)制造乳霜。
(1)硬脂醇(Stearyl Alcohol)6.0(2)硬脂酸(Stearic Acid) 2.0(3)氫化羊毛脂(Hydrogenated Lanolin) 4.0(4)三十碳六烯(Squalane) 9.0(5)辛基十二烷醇 (Octyl Dodecanol)10.0(6)POE(25)十六烷醇醚 (POE(25)Cetyl Alcohol Ether) 3.0(7)甘油硬脂酸酯 (Glycerin Monostearate) 2.0(8)水飛薊素 (Silymarin) 0.1(9)防腐劑(Preservative) 適量(10)香料 (Armoatics) 適量(11)1、3丁二醇 (1，3-Butylene Glycol) 6.0(12)PEGl500 4.0(13)精制水 (DI Water) 余量制造方法將上述成分(1)～(10)加熱溶解至80℃使其成為油相。成分(11)～(13)加熱溶解至70℃使其成為水相。于油相慢慢地將水相加入使其乳化，一邊攪拌至40℃冷卻，再攪拌冷卻至30℃便得乳霜。
<實(shí)施例2>錠劑按下列處方(單位重量％)制造錠劑。
(1)水飛薊素20.0(2)乳糖65.0(3)豆粉14.0(4)瓜爾豆膠1.0<實(shí)施例3>乳液按下列處方(單位重量％)制造乳液。
(1)雙丙烯甘醇Dipropylene Glycol9.000(2)含有70％水飛薊素的乳薊 1.000(3)(羥乙基丙烯酸/丙烯二甲基?；撬?Na)共聚物 Hydroxyethyl Acrylate 0.188Acryldimethyl Taurin Na(4)角鯊?fù)镾qualane 0.127(5)聚山梨醇脂肪酸酯60Polysorbat 60 0.028(6)月桂基谷胺酸酯(植物固醇/OCTYLDODECYL) Phytosteryl/octyldodecyl 1.000lauroyl glutamate(7)甘油5.000(8)二甲基硅氧烷 Dimethicone 3.000(9)精制水 74.742(10)卡波姆 Carbomer 0.200(11)田菜堿 2.000(12)乙醇 3.000(13)氫氧化鉀 Potassium Hydroxide 0.065(14)精制水 DI water 0.650(制造方法)將上述成分(1)加入(2)并于80℃加熱溶解。加入成分(3)～(8)，于80℃加熱溶解為油相。將成分(9)～(11)于70℃加熱溶解為水相。于油相中慢慢地加入水相使其乳化，一邊攪拌至30℃冷卻；后再加上以成分(12)、(13)加入(14)攪拌溶解所得者，攪拌冷卻后即得乳液。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明涉及含有水飛薊、含水飛薊植物或植物抽取物的組合物，能促進(jìn)人體真皮的I型膠原蛋白/或彈力蛋白的產(chǎn)生。其結(jié)果能提高皮膚的張力或彈性，可維持無皺紋、無松弛的年輕細(xì)致肌膚狀態(tài)。
權(quán)利要求
1.一種能促進(jìn)I型膠原蛋白/或彈力蛋白產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含有水飛薊素。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，水飛薊素是指從含有水飛薊素的植物萃取物和/或植物中所取得的物質(zhì)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，具有防止皮膚老化的作用。
4.如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的組合物，為皮膚外用。
5.如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的組合物，為食品。
6.如權(quán)利要求4所述的組合物，含有水飛薊素有效成份0.7～2.0％重量。
7.如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的組合物，為化妝品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)人體皮膚成纖維細(xì)胞中的I型膠原蛋白以及/或彈力蛋白的產(chǎn)生、以防止皮膚老化用的組合物。該組合物可提高皮膚的張力或彈性，對(duì)于預(yù)防、防止、改善皺紋或松弛十分有效，且對(duì)于皮膚的安全性亦很高。本發(fā)明涉及含有水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭、異水飛薊賓等黃酮木酯素類總稱的水飛薊素，和具有促進(jìn)I型膠原蛋白以和/或彈力蛋白產(chǎn)生的組合物，其中所含的水飛薊素是從含有水飛薊素的植物和/或植物萃取液而來。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1761662SQ20048000702
公開日2006年4月19日 申請(qǐng)日期2004年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月25日
發(fā)明者宮田智, 繁田葉子, 櫻井哲人 申請(qǐng)人:株式會(huì)社芳柯