專利名稱：替羅非班粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種替羅非班的新制劑，特別是替羅非班粉針劑。
背景技術(shù)：
冠狀動(dòng)脈內(nèi)粥樣硬化斑塊破裂以及隨后血小板黏附、聚集、血栓形成是造成冠心病事件中的最主要原因。血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受體存在于血小板膜表面，在血小板激活時(shí)大量表達(dá)，是引起血小板聚集的最后通路。血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受體拮抗劑通過阻斷血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受體與凝血因子的結(jié)合，從而產(chǎn)生抗血栓作用。替羅非班是一個(gè)強(qiáng)有力的血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受體拮抗劑，它通過選擇性的與血小板上糖蛋白GPIIb/IIIa受體結(jié)合，占據(jù)了其上的結(jié)合位點(diǎn)，使血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受體不能與凝血因子結(jié)合，從而抑制血小板聚集。
替羅非班最早由Peerlinck K等人于Circulation 1993oct88(4pt1)1512-7報(bào)道。MorrowDA等人于Am J Cardiol 2004sep 1594(6)774-776報(bào)道了替羅非班的臨床應(yīng)用。
替羅非班用于不穩(wěn)定型心絞痛、非Q波心肌梗死和經(jīng)皮冠脈成形術(shù)的病人，該產(chǎn)品的水溶液注射劑目前已上市。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，替羅非班的水溶液注射劑具有物理穩(wěn)定性差、pH值不穩(wěn)定、澄明度不易保持等缺點(diǎn)。而且溶液型注射劑在運(yùn)輸、儲(chǔ)藏和使用方面，特別是在寒冷的地區(qū)和季節(jié)，并不方便。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，提供一種替羅非班粉針劑，以克服上述溶液型注射劑存在的不足。
本發(fā)明提供的替羅非班注射用粉針劑，由活性成分替羅非班、凍干支持劑和pH緩沖劑組成。
上述的活性成分是藥學(xué)有效量的替羅非班鹽酸鹽(Tirofiban Hydrochloride，C22H36N2O5S·HCl·H2O，F(xiàn)w＝495.08，化學(xué)名為2-S-(正丁基磺酰氨基)-3-[4-(4-哌啶-4-基)丁氧基苯基]丙酸鹽酸鹽—水合物)。
替羅非班鹽酸鹽的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
上述的凍干支持劑可以是甘露醇、山梨醇、乳糖、環(huán)糊精、可溶性淀粉、氯化鈉、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖醇、右旋糖酐、水解明膠中的一種或多種，優(yōu)選甘露醇。
上述的pH緩沖劑可以是磷酸鹽、硼酸鹽或醋酸鹽，優(yōu)選磷酸鹽。
本發(fā)明的磷酸鹽緩沖劑配方提供穩(wěn)定的pH值，本粉針劑在凍干前的溶液的pH值在5.8-6.2，優(yōu)選5-7。為提供穩(wěn)定的pH值，可使用適量的磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉。
本發(fā)明的粉針劑在使用前需用注射用溶媒(以下簡稱復(fù)溶溶媒)復(fù)溶。復(fù)溶溶媒可選用注射用水、0.9％氯化鈉注射液、5％的葡萄糖注射液、10％葡萄糖注射液、復(fù)方葡萄糖氯化鈉注射液、木糖醇注射液、右旋糖酐注射液、甘露醇注射液。復(fù)溶溶媒用量為50ml-500ml。
本發(fā)明的粉針劑用以下方法制備按照文獻(xiàn)Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公開的技術(shù)方案，以酪氨酸、丁磺酰氯為原料合成替羅非班。
稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、凍干支持劑，加注射用水使溶解，加入適量的針用活性炭，攪拌，過濾，加入處方量的鹽酸替羅非班，加水至1000ml，將此藥液按無菌操作法除菌過濾，濾液送樣進(jìn)行半成品含量檢查，然后分裝，凍干，封口，加鋁蓋，即得本發(fā)明的粉針劑。
替羅非班粉針劑用注射用溶媒復(fù)溶后，經(jīng)靜脈以恒定速率輸液給藥，優(yōu)選的輸液速率為約0.01-0.25mmg/kg/min，如0.15mmg/kg/min，用于不穩(wěn)定型心絞痛、非Q波心肌梗死和經(jīng)皮冠脈成形術(shù)的病人。
本發(fā)明的粉針劑性質(zhì)穩(wěn)定，開拓了替羅非班的新劑型，解決了該品種水針劑在使用和運(yùn)輸中的缺點(diǎn)，復(fù)溶性好，復(fù)溶溶媒選擇范圍廣，擴(kuò)大了臨床用藥場合。
以下為本發(fā)明替羅非班粉針劑的長期穩(wěn)定性和安全性實(shí)驗(yàn)資料一、替羅非班粉針劑的長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)資料考察條件與項(xiàng)目藥物按實(shí)施例1的方法制備，在溫度25℃條件下放置，觀察0個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月.的外觀、pH值、澄明度、無菌、熱源、含量。
外觀、pH值、澄明度、無菌、熱源按中國藥典2000版要求檢測。含量用HPLC法檢測，用十八烷基硅鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水-0.2mol/L醋酸鈉(30∶70∶5)為流動(dòng)相，檢測波長為226nm。

結(jié)論替羅非班粉針劑穩(wěn)定性好?？梢允覝亻L期保存。
二、替羅非班粉針劑的安全性試驗(yàn)資料1、試驗(yàn)?zāi)康挠^察替羅非班粉針劑多次給藥對(duì)家兔的刺激性，豚鼠的過敏性，以及對(duì)家兔血的溶血性反應(yīng)情況，為臨床提供安全性依據(jù)。
2、試劑和儀器生理鹽水(武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限公司)，5％葡萄糖(武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限公司)，卵清蛋白(武漢中健科技發(fā)展有限公司)，10％甲醛；組織切片儀，恒溫培養(yǎng)箱，注射器、離心機(jī)。
3、受試動(dòng)物大耳白兔，4只，體重2.0-2.5kg。華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物試驗(yàn)中心提供。合格證號(hào)TJLA-2004-253。豚鼠，雄性，體重250-300g，由同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心提供。合格證號(hào)TJLA-2004-254。飼養(yǎng)條件保持室溫23±2℃，相對(duì)濕度60％～65％，自然光照，自由進(jìn)水。
4、試驗(yàn)方法(1)、血管刺激性試驗(yàn)取大耳白兔4只，體重2.0-2.5kg，第一只未用任何藥物，作空白平行對(duì)照觀察。另3只采用自身同體異位對(duì)照試驗(yàn)。將藥物以5％葡萄糖注射液稀釋為0.01％(0.1mg/ml)，對(duì)家兔靜脈滴注給藥，給藥組將配成后的替羅非班粉針劑用一次性滅菌輸液裝置經(jīng)左耳緣靜脈以2ml/kg(由人50ml/60kg體表面積折算而來)，注射速度為0.5ml/分；對(duì)照組經(jīng)右側(cè)耳緣靜脈滴注2ml/kg的等量5％葡萄糖注射液。每天一次，連續(xù)五天，給藥期間每日觀察血管注射部位及整個(gè)外耳殼有無變化，并與對(duì)照組進(jìn)行比較。在末次給藥后24小時(shí)處死動(dòng)物，取給藥處血管及周圍組織，以10％甲醛液固定，經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋、H·E染色。切片部位為進(jìn)針部位向心端距進(jìn)針部位1-5cm，分0-1cm及4-5cm兩段取材。
(2)、溶血性試驗(yàn)替羅非班粉針劑，以5％葡萄糖注射液稀釋為0.01％(0.1mg/ml)。取家兔1只，心臟取血20ml，置于量筒中，用波棒攪動(dòng)，除去纖維蛋白，靜置，取出血液，加等量生理鹽水，離心，制備2％紅細(xì)胞混懸液備用。再取試管7支，按表1加入各種注射液，其中第6、7管分別為生理鹽水注射液對(duì)照管和溶血的陽性對(duì)照管。將各管搖勻，37℃水浴內(nèi)溫育3小時(shí)，按表1進(jìn)行體外溶血試驗(yàn)觀察。
表1體外溶血試驗(yàn)加樣表 (3)、過敏性試驗(yàn)替羅非班粉針劑，以5％葡萄糖注射液稀釋為0.01％(0.1mg/ml)，取健康無傷豚鼠18只，體重250-300kg，隨機(jī)均分成3組。按無菌操作，給藥組、生理鹽水注射液組、陽性致敏組分別隔日腹腔注射替羅非班粉針劑、生理鹽水注射液、5％卵清蛋白各0.5ml/只，共3次。首次注射后的第14日，每組分別取3只豚鼠，分別由前肢靜脈注射替羅非班粉針劑、生理鹽水注射液、5％卵清蛋白各1ml/只進(jìn)行攻擊。每組余下3只動(dòng)物于首次注射后的第21日按以上方法進(jìn)行第二次攻擊，觀察過敏反應(yīng)。
5、數(shù)據(jù)處理(1)、血管刺激性試驗(yàn)病理切片觀察生理鹽水注射部位與替羅非班粉針劑注射部位血管結(jié)構(gòu)，比較藥物注射部位的血管組織是否有病理改變。
(2)、溶血性試驗(yàn)按表2標(biāo)準(zhǔn)判斷各管在0.5-3小時(shí)內(nèi)是否出現(xiàn)溶血或凝聚現(xiàn)象。
表2體外溶血結(jié)果判斷

(3)、過敏性試驗(yàn)按表3的過敏反應(yīng)分級(jí)來判斷動(dòng)物是否有過敏反應(yīng)。
表3豚鼠過敏反應(yīng)分級(jí)

反應(yīng)級(jí)數(shù)2級(jí)以上(包括2級(jí))時(shí)，可認(rèn)為過敏試驗(yàn)不合格。
6、試驗(yàn)結(jié)果(1)、血管刺激性試驗(yàn)肉眼觀察結(jié)果表明給藥組未見血管充血、出血，組織水腫、壞死。生理鹽水注射液對(duì)照組血管也未見血管充血、出血，組織水腫、壞死等異常病理改變。
病理組織檢查結(jié)果表明給藥組、生理鹽水注射液對(duì)照組動(dòng)物耳緣靜脈血管結(jié)構(gòu)正常，血管內(nèi)皮細(xì)胞無損傷，周圍組織未見水腫或壞死等異常改變。表明替羅非班粉針劑對(duì)家兔靜脈血管無明顯刺激作用。
(2)、溶血性試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果表明替羅非班粉針劑各濃度在0.5～3小時(shí)內(nèi)對(duì)家兔紅細(xì)胞均無溶血或凝集反應(yīng)。見表4表4替羅非班粉針劑體外溶血試驗(yàn)結(jié)果 (3)、過敏性試驗(yàn)如表5所示重復(fù)使用替羅非班粉針劑，未引起受試動(dòng)物出現(xiàn)明顯過敏反應(yīng)。5％卵清蛋白組受試動(dòng)物給藥后15分鐘內(nèi)全部抽搐死亡。
表5替羅非班粉針劑過敏試驗(yàn)結(jié)果 7、結(jié)論本發(fā)明提供的替羅非班粉針劑無血管刺激性、溶血性、過敏性反應(yīng)，安全可靠，可用于靜脈注射。
根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局《藥品注冊(cè)管理辦法》(試行)的規(guī)定，本發(fā)明產(chǎn)品屬于新藥注冊(cè)中的5類，即屬于“注冊(cè)分類5、改變國內(nèi)已上市銷售藥品的劑型，但不改變給藥途徑的制劑?！?，根據(jù)該局的相關(guān)規(guī)定，本品的藥效學(xué)與原有劑型相當(dāng)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備替羅非班粉針劑1.按照文獻(xiàn)Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公開的技術(shù)方案，以酪氨酸、丁磺酰氯為原料合成替羅非班。
2.按下表準(zhǔn)備原料成分量鹽酸替羅非班5.6g磷酸二氫鈉 8.0g磷酸氫二鈉 20.4g甘露醇 50g注射用水1000ml3.制備工藝稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、甘露醇，加注射用水800ml使溶解，加入適量的針用活性炭，攪拌，過濾，加入處方量的鹽酸替羅非班，用0.1mol/LHCl和0.1mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH值5.0-7.0加注射用水至1000ml。將此藥液按無菌操作法除菌，用0.22μ微孔濾膜過濾，濾液送樣進(jìn)行半成品含量檢查，然后按等量分裝1000支，置-40℃預(yù)凍2小時(shí)，抽真空至真空度為10Kpa，加溫干燥，30小時(shí)升溫至30℃，保持真空2小時(shí)，然后，于凍干箱內(nèi)全自動(dòng)加塞封口，加鋁蓋，即得本發(fā)明產(chǎn)品替羅非班粉針劑。
實(shí)施例2制備替羅非班粉針劑1.按照文獻(xiàn)Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公開的技術(shù)方案，以酪氨酸、丁磺酰氯為原料合成替羅非班。
2.按下表準(zhǔn)備所需原料成分量鹽酸替羅非班14.0g磷酸二氫鈉 8.0g磷酸氫二鈉 20.4g甘露醇 50g注射用水1000ml3.制備工藝制備方法除加入的鹽酸替羅非班的量不同外，其他同實(shí)施例1。
實(shí)施例3制備替羅非班粉針劑1.按照文獻(xiàn)Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公開的技術(shù)方案，以酪氨酸、丁磺酰氯為原料合成替羅非班。
2.按下表準(zhǔn)備原料成分量鹽酸替羅非班5.6g磷酸二氫鈉 8.0g磷酸氫二鈉 20.4g山梨醇 50g注射用水1000ml3.制備工藝制備方法除加入的輔料不同外，其他同實(shí)施例1。
實(shí)施例4制備替羅非班粉針劑1.按照文獻(xiàn)Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公開的技術(shù)方案，以酪氨酸、丁磺酰氯為原料合成替羅非班。
2.按下表準(zhǔn)備原料成分量鹽酸替羅非班14.0g磷酸二氫鈉 8.0g磷酸氫二鈉 20.4g山梨醇 50g注射用水1000ml3.制備工藝制備方法除加入的鹽酸替羅非班的量不同外，其他同實(shí)施例3。
實(shí)施例5制備替羅非班粉針劑
1.按照文獻(xiàn)Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公開的技術(shù)方案，以酪氨酸、丁磺酰氯為原料合成替羅非班。
2.按下表準(zhǔn)備原料成分量鹽酸替羅非班5.6g磷酸二氫鈉 8.0g磷酸氫二鈉 20.4g乳糖50g注射用水1000ml3..制備工藝制備方法除加入的輔料不同外，其他同實(shí)施例1。
實(shí)施例6制備替羅非班粉針劑1.按照文獻(xiàn)Tetrahedron(1993)49(26)5767-76公開的技術(shù)方案，以酪氨酸、丁磺酰氯為原料合成替羅非班。
2.按下表準(zhǔn)備原料成分量鹽酸替羅非班14.0g磷酸二氫鈉 8.0g磷酸氫二鈉 20.4g乳糖50g注射用水1000ml3.制備工藝制備方法除加入的鹽酸替羅非班的量不同外，其他同實(shí)施例5。
權(quán)利要求
1.替羅非班粉針劑，其特征在于，該粉針劑的組分為替羅非班、凍干支持劑和pH緩沖劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粉針劑，其特征在于，所述的凍干支持劑為下列物質(zhì)中的一種或數(shù)種甘露醇、山梨醇、乳糖、環(huán)糊精、可溶性淀粉、氯化鈉、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖醇、右旋糖酐和水解明膠。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粉針劑，其特征在于，所述的替羅非班為鹽酸替羅非班。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粉針劑，其特征在于，所述的pH緩沖劑為磷酸鹽、硼酸鹽或醋酸鹽。
5.替羅非班粉針劑的制備方法，其特征在于，稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、甘露醇，加注射用水800ml使溶解，加入適量的針用活性炭，攪拌，過濾，加入處方量的鹽酸替羅非班，用0.1mol/L HCl和0.1mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH值5.0-7.0加水至1000ml。將此藥液按無菌操作法除菌，用0.22μ微孔濾膜過濾，濾液送樣進(jìn)行半成品含量檢查，然后按等量分裝1000支，置-40℃預(yù)凍2小時(shí)，抽真空至真空度為10Kpa，加溫干燥，30小時(shí)升溫至30℃，保持真空2小時(shí)，然后，于凍干箱內(nèi)全自動(dòng)加塞封口，加鋁蓋，即得本發(fā)明產(chǎn)品替羅非班粉針劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抗血小板藥替羅非班的新制劑，特別是注射用粉針劑及其制備方法，該粉針劑由活性成分替羅非班、凍干支持劑和pH緩沖劑組成。本發(fā)明的替羅非班粉針劑擴(kuò)大了替羅非班的用藥場合，提高了替羅非班的臨床用藥水平。
文檔編號(hào)A61K9/14GK1820751SQ20051001828
公開日2006年8月23日 申請(qǐng)日期2005年2月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月18日
發(fā)明者項(xiàng)光亞, 胡婕 申請(qǐng)人:華中科技大學(xué)