專(zhuān)利名稱(chēng)：尼莫司汀腦部緩釋植入劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型藥物劑型，尤其是一種治療惡性腦膠質(zhì)瘤的尼莫司汀腦部緩釋植入劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
惡性腦腫瘤是導(dǎo)致死亡的主要癌癥之一。原發(fā)性腦腫瘤的半數(shù)是膠質(zhì)瘤，它是腦腫瘤中最富挑戰(zhàn)性的腫瘤之一。近30年來(lái)，惡性膠質(zhì)瘤的治療效果未能得到明顯改善，由于其呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，與正常腦組織分界不清，手術(shù)不可能徹底切除，術(shù)后常有復(fù)發(fā)，根據(jù)美國(guó)腦瘤共同研究組的統(tǒng)計(jì)，惡性膠質(zhì)瘤的單純手術(shù)治療的中位生存期(MTS)僅為14周，而手術(shù)后輔以放療平均生存期不超過(guò)一年。因此，提高腦腫瘤特別是膠質(zhì)瘤的治療效果，仍然是擺在我們面前的艱巨任務(wù)。
惡性腦膠質(zhì)瘤綜合治療方法為手術(shù)十全身化療十放療。有報(bào)道根據(jù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)測(cè)算，認(rèn)為即使手術(shù)和放射治療殺死了99.9％的膠質(zhì)瘤細(xì)胞，殘余腫瘤也可以在78天恢復(fù)到原有腫瘤大小。因此，在腫瘤緩解期采用維持治療以鞏固療效是極為重要的。維持治療的方法，如化療、放療及免疫治療等有許多種，其中，化學(xué)藥物治療已成為惡性腦膠質(zhì)瘤綜合治療的重要環(huán)節(jié)。
盡管這些年來(lái)不斷開(kāi)發(fā)各種新藥，或嘗試采用多種藥物聯(lián)合應(yīng)用的各種方案，來(lái)應(yīng)用于惡性腦膠質(zhì)瘤的化學(xué)藥物治療，但亞硝脲類(lèi)藥物(如ACNU、BCNU)由于最易透過(guò)血腦屏障而一直居于主導(dǎo)地位。過(guò)去常用有卡氮芥(BCNU)，環(huán)己亞硝脲(CCNU)和甲基環(huán)己亞硝脲(MECCNU)。但這些藥物，都會(huì)產(chǎn)生骨髓抑制和對(duì)肝腎功能的毒害以及強(qiáng)烈的胃腸道反應(yīng)，而且彼此間還存在交叉耐藥性。為此我們選用這一新的亞硝基脲類(lèi)藥——尼莫司汀(Nimustine ACNU)。尼莫司汀又名鹽酸嘧啶亞硝脲，屬烷化劑的亞硝脲類(lèi)抗癌藥。主要作用是使細(xì)胞內(nèi)DNA烷化而使DNA低分子化，從而阻礙DNA的合成，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
血腦屏障的存在，使很多藥物不能進(jìn)入腦部，限制了腦部疾病的治療，為此研究了許多腦給藥系統(tǒng)的技術(shù)。20世紀(jì)90年代以來(lái)，藥物劑型和制劑研究已進(jìn)入藥物釋放系統(tǒng)時(shí)代，新型藥物釋放系統(tǒng)已成為藥學(xué)領(lǐng)域的重要發(fā)展方向。新型給藥系統(tǒng)中腦給藥的一些新方法也已形成，其中腦內(nèi)植入將全合成的、生物相容性好、可生物降解的高分子材料與藥物制成小丸，圓片，微球植入腦內(nèi)。使腦瘤局部控緩釋藥物間質(zhì)化療成為可能。
腦瘤局部控緩釋藥物間質(zhì)化療解決了傳統(tǒng)的全身化療藥物具有難以通過(guò)血腦屏障、藥物局部濃度低、全身反應(yīng)嚴(yán)重、作用腫瘤時(shí)間短而影響療效等缺點(diǎn)和不足，它避開(kāi)血腦屏障，直接增加局部藥物濃度，同時(shí)延長(zhǎng)了化療藥物的作用時(shí)間，亦減少了藥物的全身毒副作用，且這種給藥方法也符合腦膠質(zhì)瘤幾乎無(wú)轉(zhuǎn)移，局部復(fù)發(fā)多在原腫瘤2cm范圍內(nèi)的特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明在于提供一種治療惡性腦膠質(zhì)瘤的尼莫司汀腦部緩釋植入劑，它由尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)組成，通過(guò)病變部位局部植入，發(fā)揮長(zhǎng)期高效的腦膠質(zhì)瘤抑制作用。
本發(fā)明的另一目的在于提供該尼莫司汀腦部緩釋植入劑的制備方法。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種尼莫司汀腦部緩釋植入劑，由尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)組成，其特征在于尼莫司汀與聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)的重量比例為1∶100至40∶100，采用復(fù)乳化-溶劑揮發(fā)法制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，制成尼莫司汀腦部緩釋植入劑，用于治療惡性腦膠質(zhì)瘤及其他腦部腫瘤。
尼莫司汀腦部緩釋植入劑的制備采用復(fù)乳化-溶劑揮發(fā)法，將尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)按1∶100至40∶100的重量比例，其最佳重量比例為5∶100至20∶100，在完全避光的條件下，將尼莫司汀溶解在一定濃度的明膠水溶液中，作為內(nèi)水相；PLGA用二氯甲烷完全溶解，作為油相；將油相加至內(nèi)水相中，渦旋混勻，超聲乳化得初乳；初乳快速冷卻后滴加到濃度為4％聚乙烯醇(PVA)水溶液中，高速攪拌得復(fù)乳；復(fù)乳加至0.1％PVA溶液中，低速攪拌揮干有機(jī)溶劑，離心收集微球，用蒸餾水洗滌；冷凍干燥后真空干燥制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，滅菌得成品尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
尼莫司汀腦部緩釋植入劑植入患者腦部腫瘤切除后的殘腔內(nèi)，發(fā)揮長(zhǎng)期高效抑制腦膠質(zhì)瘤的作用。


圖1.尼莫司汀腦部緩釋植入劑體內(nèi)釋放曲線圖2.荷瘤大鼠存活時(shí)間具體實(shí)施方式
以下通過(guò)試驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡明本發(fā)明所述藥物的有益效果。
試驗(yàn)例1.體內(nèi)藥物釋放測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雌雄各半，鼠齡4-6周，體重175-200g，數(shù)量36只，由第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
測(cè)定方法36只大鼠隨機(jī)分成6組，每組6只。戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，將大鼠頭部固定，碘酒、乙醇消毒，于矢狀縫左2mm、冠狀縫后3mm處切開(kāi)皮膚，鉆孔，將植入劑量為6mg的尼莫司汀腦部緩釋植入劑植于額葉腦皮質(zhì)下1mm處，骨蠟封閉骨孔，縫合皮膚。分別于術(shù)后1、7、14、21、28、35天6個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物，取大腦植入部位組織制成勻漿，測(cè)定其中尼莫司汀含量，結(jié)果見(jiàn)圖1。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，尼莫司汀腦部緩釋植入劑具有明顯的緩釋作用，體內(nèi)作用可達(dá)到一個(gè)月。
試驗(yàn)例2.荷瘤大鼠存活時(shí)間觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雌雄各半，鼠齡4-6周，體重175-200g，數(shù)量40只，由第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
實(shí)驗(yàn)方法1、選大鼠右側(cè)腦尾狀核為靶點(diǎn)，坐標(biāo)為前囪前1.0mm，矢狀縫右旁開(kāi)3.0-3.5mm，硬膜下6.0mm。2、接種方法大鼠經(jīng)2％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后固定，手術(shù)暴露顱骨標(biāo)志，按坐標(biāo)定位牙鉆鉆孔，孔徑1.2mm暴露硬膜。將微量注射器固定于立體定向儀，進(jìn)針深度為硬膜下6.0mm。將C6細(xì)胞懸液注入靶區(qū)，緩慢拔針后以骨蠟封閉骨孔縫合皮膚。一周后將大鼠分兩組，一組植入劑量為6mg的尼莫司汀腦部緩釋植入劑，另一組注射劑量為6mg的尼莫司汀注射劑。觀察大鼠存活時(shí)間，記錄如圖2所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，尼莫司汀腦部緩釋植入劑較尼莫司汀普通注射劑可明顯延長(zhǎng)大鼠存活時(shí)間。
試驗(yàn)例3.尼莫司汀腦部緩釋植入劑對(duì)C6細(xì)胞的抑制作用采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和凋亡，觀察尼莫司汀腦部緩釋植入劑及注射劑對(duì)C6細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1尼莫司汀腦部緩釋植入劑對(duì)C6細(xì)胞的抑制作用(n＝3)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，尼莫司汀腦部緩釋植入劑對(duì)C6細(xì)胞的抑制作用較普通注射劑更為明顯。
試驗(yàn)例4.尼莫司汀腦部緩釋植入劑及注射劑對(duì)腦膠質(zhì)瘤的抑制作用比較尼莫司汀腦部緩釋植入劑及注射劑對(duì)腦膠質(zhì)瘤的抑制作用，將荷瘤大鼠分為兩組，一組植入尼莫司汀腦部緩釋植入劑，另一組注射注射劑，一定時(shí)間后處死大鼠，獲取腦腫瘤標(biāo)本，稱(chēng)重，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2尼莫司汀腦部緩釋植入劑對(duì)腦膠質(zhì)瘤的抑制作用(n＝3)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，尼莫司汀腦部緩釋植入劑對(duì)腦腦膠質(zhì)瘤的抑制作用較普通注射劑更為明顯。
通過(guò)上述試驗(yàn)可得如下結(jié)論尼莫司汀腦部緩釋植入劑能夠有效釋放達(dá)一個(gè)月，直接延長(zhǎng)了藥物的作用時(shí)間，使荷瘤大鼠存活時(shí)間得以有效延長(zhǎng)，表現(xiàn)了更好的對(duì)C6細(xì)胞及腦膠質(zhì)瘤的抑制作用，具有廣闊的治療前景。
下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
采用復(fù)乳化-溶劑揮發(fā)法，在完全避光的條件下，將尼莫司汀溶解在明膠水溶液中，作為內(nèi)水相；PLGA用二氯甲烷完全溶解，作為油相；將油相加至內(nèi)水相中，渦旋混勻，超聲乳化得初乳；初乳快速冷卻后滴加到濃度為4％聚乙烯醇水溶液中，高速攪拌得復(fù)乳；復(fù)乳加至0.1％PVA溶液中，低速攪拌3小時(shí)揮干有機(jī)溶劑，離心收集微球，用蒸餾水洗滌；冷凍干燥后真空干燥制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，滅菌得成品尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明尼莫司汀腦部緩釋植入劑制備作詳細(xì)描述。
實(shí)施例1.
尼莫司汀與PLGA重量比為20∶100。
緩釋聚合物采用濃度為60％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。
制備步驟采用W/O/W復(fù)乳化-溶劑揮發(fā)法(1)精密稱(chēng)取20mg尼莫司汀置1.5ml塑料離心管中，加入20μl濃度為16％的明膠水溶液，60℃水浴加熱，使藥物溶解完全，作為內(nèi)水相。
(2)精密稱(chēng)取PLGA0.1g置1.5ml塑料離心管中，加入167μl二氯甲烷，使PLGA溶解完全，作為油相。
(3)用移液槍將油相加至內(nèi)水相中，旋渦混勻，60℃水浴加熱，超聲乳化得初乳。
(4)初乳至冰水浴中冷卻至18℃，然后加至40ml 4％聚乙烯醇1788水溶液中，8000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌2分鐘得復(fù)乳。
(5)復(fù)乳加至80ml 0.1％PVA水溶液中，200轉(zhuǎn)/分鐘攪拌3小時(shí)，揮干有機(jī)溶劑，2500轉(zhuǎn)/分鐘離心收集微球，蒸餾水洗滌3次，加水混懸為2ml，冷凍干燥得微球。
(6)取微球100mg壓片得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實(shí)施例2.
尼莫司汀與PLGA重量比為2∶100，緩釋聚合物采用濃度為5％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實(shí)施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實(shí)施例3.
尼莫司汀與PLGA重量比為5∶100，緩釋聚合物采用濃度為10％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實(shí)施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實(shí)施例4.
尼莫司汀與PLGA重量比為10∶100，緩釋聚合物采用濃度為20％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實(shí)施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實(shí)施例5.
尼莫司汀與PLGA重量比為15∶100，緩釋聚合物采用濃度為40％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實(shí)施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實(shí)施例6.
尼莫司汀與PLGA重量比為25∶100，緩釋聚合物采用濃度為40％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實(shí)施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實(shí)施例7.
尼莫司汀與PLGA重量比為30∶100，緩釋聚合物采用濃度為60％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實(shí)施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實(shí)施例8.
尼莫司汀與PLGA重量比為38∶100，緩釋聚合物采用濃度為60％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實(shí)施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
臨床有效的抗癌藥必須在腫瘤內(nèi)達(dá)到足夠的藥物濃度而對(duì)身體其它系統(tǒng)無(wú)或僅有可以耐受的毒性作用。系統(tǒng)給藥化療使全身所有組織器官都暴露于抗癌藥，特別是治療腦腫瘤，往往需要加大劑量才能在中樞神經(jīng)系統(tǒng)達(dá)到有效藥物濃度。因此，使得治療劑量接近甚至超過(guò)病人的最大耐受劑量，有些病人因嚴(yán)重全身毒副作用而無(wú)法接受化療。局部給藥可以用較小的劑量達(dá)到最大治療濃度，而身體其它部位的抗癌藥物濃度極低，可以明顯提高局部藥物濃度而減少全身毒副作用。直接作用于腫瘤部位，避開(kāi)了血腦屏障，大大增加了腦瘤化療藥物選擇范圍。膠質(zhì)瘤幾乎沒(méi)有轉(zhuǎn)移，向顱外的遠(yuǎn)方轉(zhuǎn)移更是罕見(jiàn)。膠質(zhì)瘤常為局部復(fù)發(fā)，且80％均在原發(fā)腫瘤的2cm范圍內(nèi)，這就使尼莫司汀腦部緩釋植入劑非常適合進(jìn)行局部緩釋化療。
權(quán)利要求
1.一種尼莫司汀腦部緩釋植入劑，由尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)組成，其特征在于尼莫司汀與聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)的重量比例為1∶100至40∶100，采用復(fù)乳化-溶劑揮發(fā)法制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，制成尼莫司汀腦部緩釋植入劑，用于治療惡性腦膠質(zhì)瘤及其他腦部腫瘤，通過(guò)病變部位局部植入，發(fā)揮長(zhǎng)期高效抑制腦膠質(zhì)瘤的作用。
2.一種按照權(quán)利要求1所述的尼莫司汀腦部緩釋植入劑的制備方法，其特征在于采用復(fù)乳化-溶劑揮發(fā)法，將尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)按1∶100至40∶100的重量比例，在完全避光的條件下，將尼莫司汀溶解在一定濃度的明膠水溶液中，作為內(nèi)水相；PLGA用一定量的二氯甲烷完全溶解，作為油相；將油相加至內(nèi)水相中，渦旋混勻，超聲乳化得初乳；初乳快速冷卻后滴加到濃度為4％聚乙烯醇水溶液中，高速攪拌得復(fù)乳；復(fù)乳加至0.1％PVA溶液中，低速攪拌揮干有機(jī)溶劑，離心收集微球，用蒸餾水洗滌；冷凍干燥后真空干燥制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，滅菌得成品尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
3.一種按照權(quán)利要求1或2所述的尼莫司汀腦部緩釋植入劑，其特征在于尼莫司汀與聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)的最佳重量比例為5∶100至20∶100。
全文摘要
一種尼莫司汀腦部緩釋植入劑，由尼莫司汀和聚乳酸－羥基乙酸共聚物(PLGA)組成，尼莫司汀與PLGA的重量比例為1∶100至40∶100，采用復(fù)乳化－溶劑揮發(fā)法，制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，滅菌得尼莫司汀腦部緩釋植入劑，通過(guò)病變部位局部植入，發(fā)揮長(zhǎng)期高效的腦膠質(zhì)瘤抑制作用，解決了傳統(tǒng)的全身化療藥物具有難以通過(guò)血腦屏障、藥物局部濃度低、全身反應(yīng)嚴(yán)重、作用腫瘤時(shí)間短而影響療效等缺點(diǎn)和不足，它避開(kāi)血腦屏障，直接增加局部藥物濃度，同時(shí)延長(zhǎng)了化療藥物的作用時(shí)間，亦減少了藥物的全身毒副作用，用于惡性腦膠質(zhì)瘤及其他腦部腫瘤的治療。
文檔編號(hào)A61K31/506GK1686134SQ20051002495
公開(kāi)日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2005年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月7日
發(fā)明者張翮, 高申, 陳建明, 鄒豪, 管斐, 李國(guó)棟, 丁雪鷹, 俞媛 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)