專利名稱:一種戈舍瑞林多肽的純化生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明屬于多肽純化技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及ー種戈舍瑞林多肽的純化生產(chǎn)方法。
背景技術(shù):
戈舍瑞林(goserelin)的化學(xué)名為pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bu)-Leu-Arg-PiO-Azgly-NH2,其分子式為C59H84N18O14,分子量為1269. 42,上市產(chǎn)品以醋酸鹽形式存
在。戈舍瑞林的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示
權(quán)利要求
1.ー種戈舍瑞林的純化方法,包括以下步驟 (1)、將戈舍瑞林粗肽先經(jīng)SourceRPC柱進(jìn)行梯度洗脫純化,流動(dòng)相以O(shè). 01-0. 5%三氟こ酸水溶液為A相,色譜純こ腈為B相,洗脫梯度為10% -60%,收集目的峰值的肽溶液; (2)、將步驟⑴純化所得的目標(biāo)肽溶液經(jīng)反相高效液相色譜柱進(jìn)行梯度洗脫純化,流動(dòng)相以O(shè). 01-0. 5 %三氟こ酸水溶液為A相,色譜純こ腈為B相,洗脫梯度為B % 20 % -50 %,收集目標(biāo)峰值的肽溶液; (3)、將目標(biāo)峰肽溶液經(jīng)陰離子交換樹脂進(jìn)行離子交換,流動(dòng)相為O.01-0. 5%醋酸水溶液,收集目標(biāo)峰,經(jīng)冷凍干燥得到戈舍瑞林醋酸鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述步驟⑴和/或⑵中三氟こ酸水溶液的濃度為O. 05-0. I %。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述步驟(I)中的洗脫梯度為20% -45% ο
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述步驟(2)中的洗脫梯度為25% -45% ο
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述步驟中洗脫流速可根據(jù)純化柱子的大小做相應(yīng)調(diào)整。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的純化方法,其特征在于,所述步驟(I)或步驟(2)中克級(jí)水平的純化洗脫流速為50-100ml/min,10克級(jí)以上的純化洗脫流速為400_500ml/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述步驟中柱溫為20-55°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述步驟(I)中SourceRPC柱為Source 15RPC 或 Source 30RPC。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述步驟(2)中反相高效液相色譜柱為 C4、C8 或 C18。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的純化方法,其特征在于,所述步驟(3)中的陰離子交換樹脂為 Amberlite IRA-400。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種戈舍瑞林的純化方法,經(jīng)Source柱和反相色譜柱進(jìn)行梯度洗脫純化,得到較高純度的戈舍瑞林三氟乙酸鹽,然后采用陰離子交換轉(zhuǎn)鹽法轉(zhuǎn)成醋酸鹽。本發(fā)明通過(guò)組合純化方法純化戈舍瑞林,純度高且收率好,提供了一條適于規(guī)模化純化戈舍瑞林的工藝方法,達(dá)到產(chǎn)業(yè)化要求。
文檔編號(hào)C07K1/20GK102690329SQ20111007325
公開日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2011年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月25日
發(fā)明者周勝軍, 楊鶴, 沈玲, 王同映, 翁文锃, 馬國(guó)昌 申請(qǐng)人:杭州九源基因工程有限公司