專利名稱：抗菌肽噴霧成膜劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種皮膚用抗菌制劑，具體涉及一種創(chuàng)傷或燒傷用抗菌肽噴霧成膜劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
燒傷無論在和平時(shí)期和戰(zhàn)爭時(shí)期都是常見創(chuàng)傷，一般以熱力燒傷(包括熱液，如水、湯、油等、蒸氣、高溫氣體、火焰、熾熱金屬或塑料液體和固體，如鋼水、鋼錠或高溫塑料等)為主。隨著現(xiàn)代工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)的發(fā)展，化學(xué)和電子燒傷亦呈增多的趨勢。在森林火災(zāi)、易燃易爆物燃燒爆炸、公共場所失火及現(xiàn)代戰(zhàn)爭均可造成成批的傷員。
燒傷創(chuàng)面的感染會(huì)導(dǎo)致傷口難以愈合或者大面積植皮的失敗等。目前治療燒傷感染的常用藥品有殺菌效果不好，對耐藥性細(xì)菌作用不明顯，由于傷口不能保濕使得創(chuàng)面容易結(jié)痂清創(chuàng)比較痛苦、給藥不太方便等缺陷。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是提供一種抗菌肽噴霧成膜劑，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明需要解決的另一個(gè)問題是提供一種抗菌肽噴霧成膜劑的制備方法。
本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思是這樣的抗菌肽是生物體經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種具有生物活性的小分子多肽，一般由20-60個(gè)氨基酸組成，分子量在2000-7000D左右。隨著醫(yī)學(xué)免疫學(xué)和分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，抗菌肽的研究越來越成為生物技術(shù)與生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的熱門課題。至今為止，在許多動(dòng)物(尤其是昆蟲)、植物、微生物和人體上已發(fā)現(xiàn)了近1000種抗菌肽，這類短肽不僅對細(xì)菌、真菌有廣譜的殺菌作用，而且對病毒、原蟲及癌細(xì)胞也有攻擊作用。臨床試驗(yàn)也表明，在機(jī)體感染病菌或可能導(dǎo)致病菌感染的情況下，抗菌肽能快速殺滅已侵入的病菌，并且能阻止病菌的繼續(xù)侵染。由于抗菌肽是一種生物制品，在用量非常小的時(shí)候，也能產(chǎn)生很強(qiáng)的殺菌活性，特別是耐藥菌，能夠徹底的抑菌對人體的皮膚黏膜刺激和毒副作用，對環(huán)境也不會(huì)造成任何影響，故而是制備皮膚用抗菌產(chǎn)品的非常好的成分。
本發(fā)明以抗菌肽為核心成分，另加水溶性成膜水溶性成膜高分子材料和保濕劑制成抗菌肽噴霧成膜劑。將該制劑噴于患處后幾分鐘內(nèi)即形成一層薄膜，對患處不僅起到直接的保護(hù)作用，迅速殺死細(xì)菌，防止患處進(jìn)一步感染，而且該膜對皮膚具有良好的親和性和透氣性；該噴霧成膜劑含有保濕劑成分，可吸收患處滲出液及水分，起到較好的保濕作用，能對燒傷感染有很好的治療效果。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的本發(fā)明公開的抗菌肽噴霧成膜劑，組分和質(zhì)量濃度包括抗菌肽0.1-100ppm，水溶性成膜高分子材料0.1～40wt％，保濕劑0.5～50wt％，水余量。
所述及的水溶性成膜高分子材料是聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮中的一種或一種以上。
所述及的保濕劑是甘油或丙二醇。
抗菌肽成膜劑的配方優(yōu)選的是包括抗菌肽0.1-100ppm，聚乙烯醇0.1～10wt％，聚乙烯吡咯烷酮0.1～30wt％和甘油0.5～50wt％，水余量。
ppm為百萬分之一；所述及的抗菌肽是天然發(fā)現(xiàn)的抗菌肽或人工設(shè)計(jì)合成的抗菌肽。其中天然的抗菌肽是protegrin，nisin，cecropin，temporin，11-37，magainin或magainin2中的一種或一種以上。人工合成的的抗菌肽是序列表中SEQ.ID.NO1～SEQ.ID.NO12中的一條或一條以上。其序列分別如下GKV-1Lys Gly Ala Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Val Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly LysGKV-2Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly Arg
GKV-3Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLysGKV-4Lys Gly Val Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Cys Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLysGKV-5Lys Gly Ala Arg Arg Gly Ala Lys Arg Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala Leu LysGKV-6Lys Gly Ala Arg Arg Leu Ala Lys Arg Ser Gly Lys Lys Val Ala Arg Lys Ala Gly ArgGKV-7Lys Phe Ala Arg Arg Leu Ala Lys Arg Leu Gly Lys Lys Val Ala Arg Lys Leu Gly ArgGKV-8Lys Phe Leu Arg Arg Leu Ile Lys Arg Leu Val Lys Lys Val Leu Arg Lys Leu Gly ArgGKV-9Lys Ala Ala Lys Lys Ala Ala Lys Arg Ala Ala Lys Lys Ala Thr ArgGKV-10Lys Ala Leu Lys Lys Ala Leu Lys Arg Ala Leu Lys Lys Ala Leu ArgGKV-11Lys Gly Leu Lys Lys Gly Leu Lys Arg Gly Leu Lys Lys Gly Leu ArgGKV-12Lys Ala Thr Lys Lys Ala Leu Lys Arg Ala Gly Lys Lys Ala Thr Arg本發(fā)明的抗菌肽噴霧成膜劑的制備方法，包括如下步驟(1)將水溶性成膜高分子材料溶解于熱水中；(2)加入保濕劑和已配置好的抗菌肽水溶液，混合均勻，灌裝于噴霧器內(nèi)。
本發(fā)明提供的抗菌肽噴霧成膜劑噴于患處后幾分鐘內(nèi)即形成一層薄膜，對患處不僅起到直接的保護(hù)作用，迅速殺死細(xì)菌，防止患處進(jìn)一步感染，而且該膜對皮膚具有良好的親和性和透氣性；該噴霧成膜劑含有保濕劑成分，可吸收患處滲出液及水分，起到較好的保濕作用。對燒傷感染有很好的治療效果。另外抗菌肽與其他抗菌外用藥相比，有突出的優(yōu)點(diǎn)首先是抑菌活性高，特別是耐藥菌，能夠徹底的抑菌。其次，抗菌肽是生物制品，對破損皮膚黏膜無任何刺激。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1抗菌肽噴霧成膜劑的制備配方及其配比抗菌肽10ppmGKV-1Lys Gly Ala Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Val Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly Lys水溶性成膜高分子材料聚乙烯醇2％、聚乙烯吡咯烷酮5％
保濕劑甘油10％制備方法(1)制備抗菌肽水溶液將抗菌肽加入到總體積量1/10的水中溶解，攪拌溶解得抗菌肽水溶液；(2)配置水溶性高分子溶液將的聚乙烯醇加入到余量的水中，攪拌溶解后加入聚乙烯吡咯烷酮，攪拌溶解即得高分子溶液；(3)制備抗菌肽噴霧成膜劑將抗菌肽水溶液和甘油加入到高分子溶液中，混合均勻，灌裝于噴霧器內(nèi)即得噴霧成膜劑。
實(shí)施例2抗菌肽噴霧成膜劑體外殺菌試驗(yàn)1、試驗(yàn)樣品的制備(1)抗菌肽噴霧成膜劑樣品按實(shí)施例1的方法制備，抗菌肽10ppmGKV-2Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys AlaLeu Lys Arg Ala Gly Arg水溶性成膜高分子材料聚乙烯醇2％、聚乙烯吡咯烷酮5％保濕劑丙二醇10％(2)對照樣品水溶性成膜高分子材料聚乙烯醇2％、聚乙烯吡咯烷酮5％保濕劑丙二醇10％
2、試驗(yàn)菌株金黃色葡萄球菌CMCC26003，枯草桿菌DB430，大腸桿菌ATCC8099，肺炎克雷伯氏菌CMCC46117，綠膿桿菌CMCC10104，白色念珠菌ATCC10231。(以上菌株來自于中國生物制品檢定所)。
3、試驗(yàn)步驟(1)將培養(yǎng)好的試驗(yàn)菌株用1％蛋白胨PBS洗下新鮮斜面，接種到新鮮培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)過夜(2)以1％的接種量轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)4小時(shí)(3)將細(xì)菌稀釋到適宜濃度，在107～108cfu/ml，并以4.5ml/管分裝到不同的試管中。
(4)取實(shí)驗(yàn)樣品和對照樣品各0.5ml，加入到菌液中，作用到預(yù)定時(shí)間后分別用5ml中和劑中和，充分振蕩混勻。
(5)取終液0.5ml進(jìn)行傾注平板，37℃恒溫倒置培養(yǎng)48小時(shí)。
(6)計(jì)算對照回收菌量及樣品回收菌量，得出殺滅率。
4、試驗(yàn)結(jié)果表1抗菌肽噴霧成膜劑體外殺菌試驗(yàn)殺滅率結(jié)果
實(shí)施例3動(dòng)物體內(nèi)急性毒性試驗(yàn)1、樣品抗菌肽溶液。使抗菌肽注射劑量達(dá)到1mg/kg其中序列分別為GKV-2Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly ArgGKV-3Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys2、試驗(yàn)動(dòng)物采用昆明小白鼠60只，雌雄各半，體重33.5±0.25g，由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。
3、試驗(yàn)方法每日一次連續(xù)7天經(jīng)肌注小白鼠，觀察動(dòng)物在最大劑量下毒性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，動(dòng)物經(jīng)肌注7天后，無異常反應(yīng)，活動(dòng)正常。經(jīng)7天觀察，60只小白鼠全部存活。證明無毒性作用。
實(shí)施例4抗菌肽噴霧成膜劑對試驗(yàn)動(dòng)物陰道黏膜刺激試驗(yàn)1、樣品制備按實(shí)施例1的方法制備。
其中抗菌肽序列為GKV-2Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys Arg Ala Gly ArgGKV-3Lys Gly Gly Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Leu Ala Arg Lys Ala LeuLys2、試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，雌性，普通級，18只，體重230克-250克，隨機(jī)分三組，殺菌噴霧成膜劑組、賦形劑組和空白對照組，每組6只，由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。
3、試驗(yàn)方法參照消毒技術(shù)規(guī)范(第三版)1999.11中的3.8條。將殺菌噴霧成膜劑噴入動(dòng)物陰道內(nèi)，與陰道黏膜接觸4小時(shí)。賦形劑組用棉條0.01克浸以滅菌生理鹽水作同樣的試驗(yàn)?？瞻讓φ战M不做任何處理。于24小時(shí)處死動(dòng)物，取出局部陰道組織，觀察有無充血、水腫現(xiàn)象。參照消毒技術(shù)規(guī)范(第三版)1999.11中皮膚刺激反應(yīng)強(qiáng)度的評分標(biāo)準(zhǔn)評分及皮膚刺激強(qiáng)度分級，進(jìn)行對陰道黏膜刺激強(qiáng)度的評定。
4、試驗(yàn)結(jié)果表2抗菌肽噴霧成膜劑對試驗(yàn)動(dòng)物陰道黏膜刺激試驗(yàn)
抗菌肽噴霧成膜劑對大鼠陰道黏膜刺激反應(yīng)最高總積分均值為0，屬無刺激性。
序列表<110>上海高科聯(lián)合生物技術(shù)研發(fā)有限公司<120>抗菌肽噴霧成膜劑及其制備方法<130>
<160>12<170>Patent In Version2.1<210>1<211>25<212>PRT<213>人工序列<220>
<221>CHAIN<400>1Lys Gly Ala Arg Lys Gly Ala Lys Arg Gln Gly Gly Lys Lys Val5 10 15Ala Arg Lys Ala Leu Lys Arg Ala Gly Lys20 25<210>2<211>25<212>PRT<213>人工序列<220>
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<221>CHAIN<400>12Lys Ala Thr Lys Lys Ala Leu Lys Arg Ala Gly Lys Lys Ala Thr5 10 15Arg
權(quán)利要求
1.一種抗菌肽噴霧成膜劑，其特征在于，包括抗菌肽0.1-100ppm，水溶性成膜高分子材料0.1～40wt％，保濕劑0.5～50wt％，水余量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌肽噴霧成膜劑，其特征在于，所述的水溶性成膜高分子材料是聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮中的一種或一種以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗菌肽噴霧成膜劑，其特征在于，所述及的保濕劑是甘油或丙二醇。
4.按權(quán)利要求3任一所述的抗菌肽噴霧成膜劑，其特征在于，所述及的抗菌肽噴霧成膜劑包括抗菌肽0.1-100ppm，聚乙烯醇0.1～10wt％，聚乙烯吡咯烷酮0.1～30wt％和甘油0.5～50wt％，水余量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一所述的抗菌肽噴霧成膜劑，其特征在于，所述及的抗菌肽是天然發(fā)現(xiàn)的抗菌肽或人工設(shè)計(jì)合成的抗菌肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗菌肽噴霧成膜劑，其特征在于，所述及的抗菌肽是protegrin，nisin，cecropin，temporin，11-37，magainin或magainin2中的一種或一種以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗菌肽噴霧成膜劑，其特征在于，所述及的抗菌肽是序列表中SEQ.ID.NO1～SEQ.ID.NO12中的一條或一條以上。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一所述的抗菌肽噴霧成膜劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將水溶性成膜高分子材料溶解于水中；(2)加入保濕劑和已配置好的抗菌肽水溶液，混合均勻，灌裝于噴霧器內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種皮膚用抗菌制劑，具體涉及一種抗菌肽噴霧成膜劑及其制備方法。本發(fā)明采用抗菌肽為殺菌活性成分，噴霧劑的輔料成分包括水溶性成膜高分子材料和保濕劑。本發(fā)明還公開了該抗菌肽噴霧成膜劑的制備方法，先將水溶性高分子材料溶解于熱水中，加入保濕劑和抗菌肽，混合均勻，灌裝于噴霧器內(nèi)。本發(fā)明公開的抗菌肽噴霧成膜劑噴于患處后幾分鐘內(nèi)即形成一層薄膜，對患處不僅起到直接的保護(hù)作用，迅速殺死細(xì)菌，防止患處進(jìn)一步感染，而且該膜對皮膚具有良好的親和性和透氣性；該噴霧成膜劑含有保濕劑成分，可吸收患處滲出液及水分，起到較好的保濕作用，能對燒傷感染有很好的治療效果。
文檔編號A61K9/70GK1899600SQ20051002803
公開日2007年1月24日 申請日期2005年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月22日
發(fā)明者黃青山, 李國棟 申請人:上海高科聯(lián)合生物技術(shù)研發(fā)有限公司