專利名稱：抗腫瘤化合物nobilisideA單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液及其制法的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領域，是一種具有抗腫瘤活性的nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液及其制備方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體是一種新的藥物劑型，它把藥物包裹在脂質(zhì)雙分子膜中，以改善藥物水溶性及不良反應。藥物脂質(zhì)體經(jīng)靜脈注射后不直接釋放至血液中，而是通過脂質(zhì)雙分子膜與細胞膜結(jié)構(gòu)相似可透過血管進入組織，改善藥物的靶向性和吸收度，從而減少藥物用量，達到治療效果。同時脂質(zhì)體對藥物存在緩控釋作用，使藥物作用更加穩(wěn)定(陸彬主編，藥物新劑型與新技術(shù)，人民衛(wèi)生出版社，1998，107；崔福德主編，藥劑學，人民衛(wèi)生出版社，2003，386)。
脂質(zhì)體靜脈注射液的主要組成成分為藥物、膜材、膽固醇、穩(wěn)定劑、注射用水。

發(fā)明內(nèi)容
nobiliside A單乙?；锸且环N新的抗腫瘤化合物。體外抗腫瘤試驗表明，nobiliside A單乙?；飳-388小鼠淋巴瘤和A-549人肺癌等多種腫瘤細胞株有明顯的抑制作用。因此可用于制備抗腫瘤藥物。
本發(fā)明是將nobiliside A單乙?；镏苽涑芍|(zhì)體靜脈注射液。
nobiliside A單乙?；锏幕瘜W結(jié)構(gòu)式如下
nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液的制備方法為(1)將處方量nobiliside A單乙酰化物、膜材、膽固醇、穩(wěn)定劑加入乙醇中，加熱，混溶，置60～80℃水浴中旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)2～3小時，使乙醇全部揮出，形成脂質(zhì)體薄膜；所說的膜材選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、神經(jīng)酰胺。所說的穩(wěn)定劑選自泊洛沙姆、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、芐澤類非離子型表面活性劑。
(2)向脂質(zhì)體薄膜中加入甘油及水，置超聲振蕩器中超聲振蕩，直至薄膜溶解，形成初級藥物脂質(zhì)體液；(3)將初級藥物脂質(zhì)體液用超聲乳化器冰浴超聲2～3分鐘，加入注射用水，得nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液。
本發(fā)明將nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液對小鼠H22肝癌、小鼠S-180肉瘤以及人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤進行試驗，結(jié)果表明nobiliside A單乙酰化物脂質(zhì)體靜脈注射液具有顯著的抑制腫瘤生長的作用(各試驗用瘤種由中國科學院上海藥物研究所提供)。
試驗1nobiliside A單乙酰化物脂質(zhì)體靜脈注射液對小鼠H22肝癌的治療作用陽性對照藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)，上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號020301 250mg/10ml/支，使用時用生理鹽水稀釋(下同)。
劑量設置nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液的劑量為6mg/kg、3mg/kg、1.5mg/kg；5-FU的劑量為50mg/kg。
動物昆明種小鼠，雌性，42±2日齡，體重20±1g，由中國科學院上海實驗動物中心提供。合格證編號SCXK(滬)(2003-0003)。每組動物數(shù)陰性對照組20只，給藥組10只(下同)。
移植瘤小鼠H22肝癌，由昆明種小鼠腹水傳代保存。
取生長良好的7～11天的H22肝癌瘤種，將瘤組織制成1～2×107/ml細胞懸液，小鼠右側(cè)腋部皮下接種0.2ml/只。接種后隨機分籠，24小時后靜脈注射給以不同濃度nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液，連續(xù)給藥7天。陽性藥5-FU于腫瘤接種后1、4天靜脈給藥共2次。
停藥后24小時處死動物，稱體重、瘤重，計算各組平均瘤重，按下列公式求出腫瘤抑制率并進行t檢驗。
療效評價標準腫瘤抑制率＜40％為無效；腫瘤抑制率≥40，并經(jīng)統(tǒng)計學處理p＜0.05為有效。
nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液對小鼠H22肝癌的治療結(jié)果見表1。
表1.nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液對小鼠H22肝癌的治療作用

5-FU給藥2次(腫瘤接種后第1天、第4天)。
試驗結(jié)果表明nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液6mg/kg、3mg/kg于腫瘤接種后次日起連續(xù)靜脈給藥7天，能顯著抑制H22肝癌生長，抑瘤率與陽性對照組接近，尤其是6mg/kg組。
試驗2nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液對小鼠S-180肉瘤的治療作用陽性對照藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)。
劑量設置nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液的劑量為3mg/kg、1.5mg/kg；5-FU的劑量為50mg/kg。
動物昆明種小鼠。
移植瘤小鼠S-180肉瘤，由昆明種小鼠腹水傳代保存。
取生長良好的7～11天的S-180肉瘤瘤種，將瘤組織制成1～2×107/ml細胞懸液，小鼠右側(cè)腋部皮下接種0.2ml/只。接種24小時后隨機分籠，24小時后靜脈注射給以不同濃度nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液，連續(xù)給藥7天。陽性藥5-FU于腫瘤接種后1、5天靜脈給藥共2次。計算方法和療效評價同前。
nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液對小鼠S-180肉瘤的治療結(jié)果見表2。
表2.nobiliside A單乙酰化物脂質(zhì)體靜脈注射液對小鼠S-180肉瘤的治療作用

5-FU給藥2次(腫瘤接種后第1天、第4天)。
試驗結(jié)果表明nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液3mg/kg、1.5mg/kg組于腫瘤接種后連續(xù)靜脈給藥7天，能顯著抑制S-180肉瘤生長，抑瘤率與陽性對照組接近，尤其是3mg/kg組。
試驗3nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液對人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤的治療作用陽性對照藥物絲裂霉素(MMC)，協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會社，批號020301，2mg/瓶，使用時用生理鹽水稀釋。
劑量設置nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液劑量設為1mg/kg、0.5mg/kg及0.25mg/kg；MMC的劑量為5mg/kg。
動物BALB/cA裸小鼠，雌性，40-45日齡，體重18±2g，由中國科學院上海藥物研究所提供。合格證編號滬動合證字122號。每組動物數(shù)陰性對照組12只，給藥組6只。
移植瘤人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤，由MGC803細胞株接種于裸小鼠皮下而建立。細胞接種量為5×106/只，接種形成移植瘤后，在裸小鼠體內(nèi)傳3代后使用。
取生長旺盛期的瘤組織剪切成1.5mm3左右，在無菌條件下，接種于裸小鼠右側(cè)腋窩皮下。裸小鼠移植瘤用游標卡尺測量移植瘤直徑，待腫瘤生長至100～200mm3后將動物隨機分組。各實驗組靜脈注射給藥，每周兩次，連續(xù)給藥3周。陽性對照藥絲裂霉素于第1、第6天靜脈給藥。對照組給等量生理鹽水。每周2次測量腫瘤直徑，同時稱小鼠體重。腫瘤體積(tumor volume，TV)的計算公式為TV＝1/2×a×b2其中a、b分別表示長、寬。根據(jù)測量的結(jié)果計算出相對腫瘤體積(relative tumor volume，RTV)，計算公式為RTV＝Vt/V0。其中V0為分籠給藥時(即d0)測量所得腫瘤體積，Vt為每一次測量時的腫瘤體積?？鼓[瘤活性的評價指標為相對腫瘤增殖率T/C(％)，計算公式如下T/C(％)＝(TRTV/CRTV)×100TRTV治療組RTV；CRTV陰性對照組RTV。
療效評價標準T/C(％)＞60％為無效，T/C(％)＜＝60，并經(jīng)統(tǒng)計學處理p＜0.05為有效。
nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液對人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤的治療結(jié)果見表3。
表3.nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液對人胃癌MGC-803裸小鼠移植瘤的治療作用

試驗結(jié)果表明，nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液1mg/kg、0.5mg/kg及0.25mg/kg，每周兩次靜脈注射、連續(xù)三周后，對人胃癌MGC-803裸小鼠移植瘤有顯著生長抑制作用。
具體實施例方式實施例1nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液的制備組分及配比nobiliside A單乙酰化物 200mg大豆卵磷脂 1200mg膽固醇 396mg泊洛沙姆F68375mg甘油 2200mg注射用水 加至100ml步驟為(1)將nobiliside A單乙?；?、大豆卵磷脂、膽固醇、泊洛沙姆F68加入10ml乙醇中，加熱，混溶，置80℃水浴中旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)2小時，使乙醇全部揮出，形成脂質(zhì)體薄膜；(2)向脂質(zhì)體薄膜中加入甘油及少于全量的水，置超聲振蕩器中超聲振蕩，直至薄膜溶解，形成初級藥物脂質(zhì)體液；(3)將初級藥物脂質(zhì)體液用超聲乳化器冰浴超聲3分鐘，加注射用水至100ml，得nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液。
本發(fā)明nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液制備方法簡單，能有效抑制腫瘤生長。
權(quán)利要求
1.一種抗腫瘤化合物nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液的制備方法，其特征在于所說的nobiliside A單乙酰化物的化學結(jié)構(gòu)式為 具體步驟如下(1)將處方量nobiliside A單乙?；铩⒛げ?、膽固醇、穩(wěn)定劑加入乙醇中，加熱，混溶，置60～80℃水浴中旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)2～3小時，使乙醇全部揮出，形成脂質(zhì)體薄膜；所說的膜材選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、神經(jīng)酰胺；所說的穩(wěn)定劑選自泊洛沙姆、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、芐澤類非離子型表面活性劑；(2)向脂質(zhì)體薄膜中加入甘油及水，置超聲振蕩器中超聲振蕩，直至薄膜溶解，形成初級藥物脂質(zhì)體液；(3)將初級藥物脂質(zhì)體液用超聲乳化器冰浴超聲2～3分鐘，加入注射用水，得nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液。
2.按權(quán)利要求1所述的nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液制備方法，其特征在于組分和配比如下nobiliside A單乙?；?200mg大豆卵磷脂 1200mg膽固醇 396mg泊洛沙姆F68375mg甘油 2200mg注射用水 加至100ml。
3.權(quán)利要求1或2所述方法制得nobiliside A單乙?；镏|(zhì)體靜脈注射液。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領域，是將一種新的抗腫瘤化合物nobiliside A單乙酰化物制備成脂質(zhì)體靜脈注射液。nobiliside A單乙?；锏幕瘜W結(jié)構(gòu)式見右圖，藥理試驗結(jié)果顯示nobiliside A單乙酰化物脂質(zhì)體靜脈注射液對小鼠H
文檔編號A61P35/00GK1739543SQ20051002958
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月13日
發(fā)明者易楊華, 丁健, 李玲, 陳建明, 章雄文, 陳奕, 田芳, 劉寶姝 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學