專利名稱：肝素銀的制備及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，涉及肝素銀鹽的制備方法及使用肝素銀制備治療燒燙傷用途的藥物。
背景技術(shù)：
肝素來源于動物組織，是一類硫酸糖胺聚糖，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，其基本骨架是由糖醛酸和葡萄糖胺以糖苷鍵連接起來的重復(fù)二糖單位組成的多糖鏈，其中糖醛酸有艾杜糖醛酸和葡萄糖醛酸，各單糖殘基硫酸化和乙?；闆r變化較多，有N-硫酸基、N-乙?；筒煌恢玫腛-硫酸基(酯)。未分級肝素分子量3000～30000道爾頓，平均分子量12000～15000道爾頓，分子量為3000～8000道爾頓的產(chǎn)品稱為低分子肝素。抗凝血和抗血栓是肝素最主要的生理活性，同時(shí)有引起血小板減少和出血的副作用，低分子肝素由于抗凝血酶活性降低，在抗血栓形成的同時(shí)減少了出血的危險(xiǎn)，另外它還有生物利用度高，體內(nèi)半衰期長等優(yōu)點(diǎn)，成為目前肝素產(chǎn)品開發(fā)的熱點(diǎn)。目前上市的肝素產(chǎn)品為肝素鈉和肝素鈣，有注射液、乳膏和口含片等，其它的肝素鹽臨床還未見使用。肝素應(yīng)用于臨床已有近70年的歷史，主要用于抗凝血、防治血栓性疾病及改善局部微循環(huán)。動物實(shí)驗(yàn)證明，肝素應(yīng)用于燒傷治療可以緩解疼痛、抗凝、抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管再生、恢復(fù)局部供血，并能影響膠原的合成和降解，創(chuàng)面愈合后皮膚光滑、減少瘢痕和瘢痕攣縮，還能保護(hù)腸道屏障功能，保護(hù)及改善肺和腎的功能，提高肌體免疫力，預(yù)防感染。眾所周知，銀鹽應(yīng)用于皮膚創(chuàng)面具有收斂作用，可使創(chuàng)面干燥、結(jié)痂和促進(jìn)愈合。肝素銀應(yīng)用于燒燙傷創(chuàng)面，集肝素和銀鹽的作用于一體，可明顯加快愈合速度，減少感染和炎癥發(fā)生，改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量。肝素最主要的不良反應(yīng)是出血，有活動性出血及潰瘍、有肝素過敏史或血小板減少、有出血體質(zhì)等情況為肝素的禁忌癥。實(shí)驗(yàn)證明，大劑量肝素用于燒傷后早期(缺血、酸中毒期)，每天使用前測凝血時(shí)間15～30min為安全范圍，燒傷后早期采用局部用藥直到創(chuàng)面愈合，未發(fā)現(xiàn)明顯的抗凝陽性結(jié)果。目前，臨床皮膚使用的肝素為鈉鹽，主要用于淺表性靜脈炎、靜脈曲張性靜脈炎、靜脈曲張和硬化術(shù)后的輔助治療、血腫、挫傷、腫脹和水腫、血栓性靜脈炎，由靜脈輸液和注射引起的滲出、軟組織挫傷、凍瘡、皺裂、濕疹、抑制疤痕形成和軟化疤痕。然而，肝素銀鹽的制備方法和應(yīng)用，以及用于治療燒燙傷的肝素銀的制劑還未見資料公開報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種肝素銀鹽的制備方法，和使用該方法制得的肝素銀制備治療燒燙傷藥物的應(yīng)用。經(jīng)動物試驗(yàn)證明，該肝素銀用于燒燙傷的治療，具有明顯加快愈合速度、減少感染和炎癥發(fā)生、改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量等作用。
本發(fā)明中肝素銀的制備方法如下①將可溶性肝素鹽溶于去離子水中，制得肝素鹽溶液；②在步驟①得到的溶液中加入硝酸銀，攪拌溶解；③將步驟②得到的溶液進(jìn)行減壓濃縮，使肝素銀發(fā)生沉淀，過濾，收集沉淀；④將步驟③得到的沉淀溶解于去離子水中，采用透析或超濾的方法進(jìn)行純化；⑤將步驟④得到的溶液進(jìn)行減壓濃縮，制得肝素銀濃縮液；⑥將步驟⑤得到的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，或加入乙醇脫水，收集沉淀，常規(guī)減壓干燥制得成品。
上述肝素銀的制備方法中，可溶性肝素鹽可以使用肝素鈉、肝素鉀、肝素鈣或肝素鋅。
上述肝素銀的制備方法中，硝酸銀的加入量可以是溶液中可溶性肝素鹽重量的150％～600％。
上述肝素銀的制備方法中，步驟⑥中可以用丙酮或甲醇代替乙醇對濃縮液進(jìn)行脫水。
肝素鹽的制備和提取一般使用乙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀、脫水和干燥，在本發(fā)明肝素銀的制備方法中，反應(yīng)原料采用溶解度較高的硝酸銀，在反應(yīng)液中可以提供足夠多的游離銀離子，有利于肝素銀的生成和沉淀，同時(shí)由于反應(yīng)液中存在大量的硝酸根離子，加入乙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑則生成易爆的雷酸， 因此不能直接使用它們進(jìn)行沉淀和脫水，本發(fā)明采用濃縮方法，使溶解度較小的肝素銀沉淀，過濾，濾液回收可以重復(fù)利用，所得沉淀再溶于去離子水中，使用透析或超濾的方法，除去沉淀中的雜質(zhì)(包括殘余的鈉離子、吸附的銀離子和硝酸根離子)之后，再次減壓濃縮，使用乙醇脫水或冷凍干燥。
采用本發(fā)明方法制備生產(chǎn)的肝素銀，產(chǎn)品純度高、雜質(zhì)含量少，其中銀離子含量25％～45％，鈉離子含量小于0.5％，硝酸根含量小于100ppm。
采用本發(fā)明制備的肝素銀經(jīng)粉碎、滅菌之后，可以直接用于燒燙傷創(chuàng)面，也可以與其它藥物和常用輔料組方，制成燒燙傷藥物制劑施用于燒燙傷創(chuàng)面，達(dá)到加快愈合速度、減少感染和炎癥發(fā)生、改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量等目的。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1將0.3公斤肝素鈉[平均分子量小于8000Da的重量為60～70％，按中國藥監(jiān)局試行標(biāo)準(zhǔn)WS-487(X-423)-2001規(guī)定的方法，照羊血漿法測定抗凝(FIIa)效價(jià)，照COATEST試劑盒法測定抗FXa效價(jià)，抗FXa活性為抗FIIa活性的2.3倍。]溶于10升去離子水中溶解，以下步驟在避光條件下操作加入1.2公斤硝酸銀，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，35℃～40℃減壓濃縮至反應(yīng)液體積約3升，用0.8微米的微孔濾膜過濾反應(yīng)液，濾液保留用于回收，沉淀物溶解于0.3升去離子水中，攪拌溶解，用截?cái)喾肿恿?000的透析膜，去離子水流水透析24小時(shí)以上，再減壓濃縮至溶液體積約0.2升，冷凍干燥后即得產(chǎn)物。將產(chǎn)物粉碎，過200目篩，用透氣紙包裝，環(huán)氧乙烷滅菌后，再用雙層塑料袋包裝，得成品。
實(shí)施例2將0.3公斤肝素鈉(平均分子量12000～15000Da，按中國藥典2000年版二部附錄XIID肝素生物檢定法測定，效價(jià)為156單位/毫克。)溶于10升去離子水中溶解，以下步驟在避光條件下操作加入1.1公斤硝酸銀，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，35℃～40℃減壓濃縮至反應(yīng)液體積約3升，用0.8微米的微孔濾膜過濾反應(yīng)液，濾液保留用于回收，沉淀物溶解于0.5升去離子水中，攪拌溶解，使用截?cái)喾肿恿?000的超濾膜進(jìn)行超濾，超濾過程中溶液體積減少至0.4升時(shí)，補(bǔ)加去離子水0.1升，補(bǔ)加3次后超濾至溶液體積約0.3升，再減壓濃縮至溶液體積約0.2升，3.5倍乙醇脫水，過濾，沉淀于35℃～40℃真空干燥，即得產(chǎn)物。將產(chǎn)物于無菌環(huán)境用雙層塑料袋包裝，得成品。
肝素銀應(yīng)用于燒燙傷治療的動物實(shí)驗(yàn)①增生性瘢痕動物模型在新西蘭白兔兔耳腹面手術(shù)切除2cm×5cm全層皮膚缺損創(chuàng)面，作長期瘢痕模型〔具體操作方法參考Morris(1997)Acute and chronic animal models for excessive dermalscarringquantitative studies〕。對照組創(chuàng)面用磺胺嘧啶銀散劑外敷包扎至痊愈，換藥1次/周，試驗(yàn)組創(chuàng)面用肝素銀散劑(本發(fā)明實(shí)施例1)外敷包扎至痊愈，亦換藥1次/周。術(shù)后12個(gè)月內(nèi)觀察創(chuàng)面愈合情況，愈合標(biāo)準(zhǔn)為痂殼小于創(chuàng)面的5％。取瘢痕組織作Masson染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并測定創(chuàng)面上皮化后的真皮厚度(Da)及鄰近正常組織中的真皮厚度(Db)，計(jì)算瘢痕指數(shù)＝(Da-Db)/Db。結(jié)果見下表。

*與對照組比較，差異有顯著性(p＜0.05)。
②燒傷動物模型大鼠5％水合氯醛腹腔麻醉后背部脫毛，90℃水蒸氣燙10秒，造成20％面積的深二度燙傷〔具體操作方法參考陸樹良主編(2003)燒傷創(chuàng)面愈合機(jī)制與新技術(shù)〕，傷后1小時(shí)腹腔注射生理鹽水1mL補(bǔ)充血容量。對照組創(chuàng)面撒涂磺胺嘧啶銀散劑至痊愈，厚度0.5～1mm，換藥1次/日，試驗(yàn)組創(chuàng)面撒涂肝素銀散劑(本發(fā)明實(shí)施例1)至痊愈，厚度0.5～1mm，亦換藥1次/日。傷后間隔時(shí)間取樣，用重量法測定創(chuàng)面組織濕重(Ga)和經(jīng)80℃烘72小時(shí)的組織干重(Gb)，計(jì)算燒傷創(chuàng)面含水量W＝(Ga-Gb)/Ga×100％，W值表示水腫的程度；用氯胺T氧化法〔參考許志勤(1990)組織羥脯氨酸測定方法的改進(jìn)〕測定創(chuàng)面羥脯氨酸含量，羥脯氨酸含量反映創(chuàng)面膠原的含量。結(jié)果見下表。

#與對照組比較，差異有顯著性(p＜0.05)。
*與正常組比較，差異有顯著性(p＜0.01)。
權(quán)利要求
1.一種肝素銀鹽的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟①將可溶性肝素鹽溶于去離子水中，制得肝素鹽溶液；②在步驟①得到的溶液中加入硝酸銀，攪拌溶解；③將步驟②得到的溶液進(jìn)行減壓濃縮，使肝素銀發(fā)生沉淀，過濾，收集沉淀；④將步驟③得到的沉淀溶解于去離子水中，采用透析或超濾的方法進(jìn)行純化；⑤將步驟④得到的溶液進(jìn)行減壓濃縮，制得肝素銀濃縮液；⑥將步驟⑤得到的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，或加入乙醇脫水，收集沉淀，常規(guī)減壓干燥制得成品。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步驟①中，所述可溶性肝素鹽為肝素鈉、肝素鉀、肝素鈣或肝素鋅。
3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述的步驟②中加入硝酸銀的量為溶液中可溶性肝素鹽重量的150％～600％。
4.權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述步驟⑥中，用丙酮或甲醇代替乙醇對濃縮液進(jìn)行脫水。
5.權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在所述步驟⑥中，用丙酮或甲醇代替乙醇對濃縮液進(jìn)行脫水。
6.上述任一一項(xiàng)權(quán)利要所述制備方法制得的肝素銀。
7.權(quán)利要求6所述肝素銀在制備治療燒燙傷藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明包括一種肝素銀鹽的制備方法及使用肝素銀制備治療燒燙傷用途的藥物。肝素銀制備方法在水溶液使用硝酸銀對可溶性肝素鹽進(jìn)行離子置換，經(jīng)濃縮，過濾，純化，干燥等步驟得產(chǎn)品，其中銀離子含量25％～45％，鈉離子含量小于0.5％，硝酸根含量小于100ppm。應(yīng)用肝素銀制備治療燒燙傷的藥物，經(jīng)動物試驗(yàn)證明，其具有加快傷口愈合和減少瘢痕形成的作用。
文檔編號A61P17/02GK1673236SQ20051004325
公開日2005年9月28日 申請日期2005年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月20日
發(fā)明者凌沛學(xué), 賀艷麗, 陳建英, 汪敏, 龐曉陽, 王雷 申請人:凌沛學(xué)