專利名稱：六味地黃復(fù)方制劑的膜技術(shù)分離精制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥六味地黃復(fù)方制劑的膜技術(shù)分離精制方法，即針對六味地黃復(fù)方制劑的水煎液，利用膜分離工藝提取活性成分，去除雜質(zhì)，減少服用量的提取精制方法。
背景技術(shù)：
六味地黃湯是宋錢乙在“小兒藥證直訣”中首創(chuàng)，系滋陰補(bǔ)腎之經(jīng)典名方，由熟地黃、山茱萸、山藥、牡丹皮、澤瀉、茯苓配伍組成，但見有潮熱盜汗、腰膝酸軟，失眠多夢，舌紅少苔，脈細(xì)數(shù)等肝腎陰虛之證者均可使用，適用于一切陰虛火旺之證。
六味地黃復(fù)方制劑的配方來源于六味地黃湯，方中熟地的化學(xué)成分主要有環(huán)烯醚萜甙類和多糖，還有氨基酸、有機(jī)酸及無機(jī)元素等；牡丹皮的化學(xué)成分主要有甙類(主要為芍藥甙)、丹皮酚，還有萜類、鞣質(zhì)及揮發(fā)油等；山茱萸的化學(xué)成分主要有糖甙類及甙元(山茱萸甙及馬錢素)，有機(jī)酸(熊果酸、齊墩果酸、沒食子酸)，還有鞣質(zhì)及微量元素等；山藥的化學(xué)成分主要有薯蕷皂甙、多糖，還有淀粉、蛋白質(zhì)、維生素類、無機(jī)元素及胡蘿卜素、碳水化合物等；茯苓的化學(xué)成分主要有多糖類、三萜類(茯苓酸、茯苓素)，還有蛋白質(zhì)、無機(jī)成分等；澤瀉的化學(xué)成分主要有三萜類(澤瀉醇)，還有生物堿、甙類、有機(jī)酸、氨基酸、多糖、揮發(fā)油等。方中的化學(xué)成分大多溶于水，采用水煎工藝能將方中的水溶性成分都提取出來，但提取物的量很大，如不進(jìn)行除雜精制，勢必導(dǎo)致服用劑量大，無法滿足患者的需求。
目前六味地黃制劑有合劑，口服液，顆粒劑，片劑，蜜丸，水丸，濃縮丸，膏滋，軟膠囊，硬膠囊等各種劑型，提取工藝大多采用了水提，水提醇沉或醇回流提取等技術(shù)制備而成，工藝過程較復(fù)雜，消耗大量的有機(jī)溶劑，而提取物中含大量雜質(zhì)成份，存在難服用或服用劑量較大(每次8粒)的不足；現(xiàn)有公開號為1449806的專利文獻(xiàn)“中藥六味地黃制劑的生產(chǎn)工藝”中公開了用多次超濾技術(shù)提取六味地黃方中的多糖，用大孔樹脂吸附方中的小分子有效成分，其工藝過程相當(dāng)復(fù)雜；非專利文獻(xiàn)如王厚廷等在《解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)》2001年第二期發(fā)表的“超濾法提取六味地黃湯活性多糖的工藝研究”一文中公開了用超濾技術(shù)提取多糖的方法，但方中其它小分子活性成份未能分離；又如郭立瑋等在《南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)》1999年第二期發(fā)表的文章“大孔樹脂吸附與超濾聯(lián)用對六味地黃丸中丹皮酚和馬錢素含量的影響”中，其提取工藝先采用大孔樹脂技術(shù)提取水煎液中的小分子活性成分，再用超濾技術(shù)提取其中的多糖，雖能有效地減小服用量，但其工藝過程較復(fù)雜，生產(chǎn)成本相對較高；因此，尋找一種能有效提取六味地黃復(fù)方制劑中的活性成分，進(jìn)一步分離精制，除去無效雜質(zhì)，工藝簡單，低成本的方法顯得尤為迫切。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是簡化產(chǎn)品的制備工藝，在保證產(chǎn)品療效的基礎(chǔ)上，減少服用量，采用膜技術(shù)提取六味地黃復(fù)方中的活性成分，除去蛋白質(zhì)、淀粉、鞣質(zhì)等雜質(zhì)，對其進(jìn)行精制。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)采用有機(jī)膜對方中熟地、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉六味中藥材的水煎液進(jìn)行超濾去除雜質(zhì)，再濃縮、干燥。
該有機(jī)膜選用聚砜膜或醋酸纖維素膜。
本發(fā)明優(yōu)選的方案可以是選用膜的截留分子量為5000～40000的聚砜膜或醋酸纖維素膜。
本發(fā)明更優(yōu)選的方案可以是選用膜的截留分子量為6000～20000的聚砜膜或醋酸纖維素膜。
本發(fā)明六味地黃復(fù)方制劑中六味中藥材混合后，采用常規(guī)水提工藝提取，經(jīng)膜分離精制后，濃縮、干燥，加入藥學(xué)上可接受的各種輔料，制成不同的劑型。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1.簡化了提取精制工藝，操作簡單，且生產(chǎn)易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化；2.膜技術(shù)分離精制過程是物理分離方法，不需消耗有機(jī)溶劑，降低了生產(chǎn)成本；3.在保證產(chǎn)品療效的基礎(chǔ)上，減少服用量。
以下是六味地黃復(fù)方制劑不同提取工藝的藥效對比實(shí)驗(yàn)一.實(shí)驗(yàn)材料1.1試藥①六味地黃湯 1g生藥/ml，10ml/日/60kg(人)，置4℃冰箱備用。
樣品的制備按六味地黃方處方比例稱取各藥材共1500克，加水煎煮二次，時(shí)間為1小時(shí)，0.5小時(shí)，合并煎液，稱重，將煎液分成三等份，取其中一份作為六味地黃湯樣品(500克生藥)，將其減壓濃縮制成1g生藥/ml的濃縮液即得。
②精制工藝I樣品 1g生藥/ml，10ml/日/60kg(人)，置4℃冰箱備用樣品的制備取上述煎液一份(500克生藥)，高速離心后定容，離心液選用平均截留分子量為6千的超濾膜按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾，所得透析液進(jìn)行減壓濃縮制成1g生藥/ml的濃縮液即得③精制工藝II樣品 1g生藥/ml，10ml/日/60kg(人)，置4℃冰箱備用樣品的制備取上述煎液一份(500克生藥)，高速離心后定容，離心液選用平均截留分子量為2萬的超濾膜按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾，所得透析液進(jìn)行減壓濃縮制成1g生藥/ml的濃縮液即得④六味地黃膠囊(精提型)規(guī)格0.3克/粒，每次1粒，每日二次，批號20020902四川泰華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。
1.2藥品三碘甲狀腺原氨酸鈉批號20021207上海長城生化制藥廠1.3動(dòng)物昆明種小白鼠18-22克♂♀兼用均由江西省動(dòng)物中心提供。
2.各樣品劑量的配制2.1精制工藝I樣品高低劑量的配制取六味地黃片精制工藝I樣品6.75ml、3.90ml用NS分別稀釋至100ml，制成1.35ml/kg，0.78 ml/kg高低劑量的溶液。
2.2精制工藝II樣品高低劑量的配制取六味地黃片精制工藝II樣品6.75ml、3.90ml用NS分別稀釋至100ml，制成1.35ml/kg，0.78ml/kg高低劑量的溶液。
2.3六味地黃湯取六味地黃湯6.75ml用NS稀釋至100ml，制成1.35ml/kg的溶液。
2.4六味地黃膠囊取六味地黃膠囊0.39g用NS稀釋至100ml，制成0.078g/kg的溶液。
2.5造模藥液的配制取三碘甲狀腺原氨酸鈉4.5mg用注射用水稀釋至100ml，制成0.9mg/kg的溶液。
二.方法與結(jié)果3.1動(dòng)物分組取小鼠80只，♂♀兼用，隨機(jī)分8組。空白對照組、模型組、湯劑組、膠囊組、工藝I高劑組、工藝I低劑組，工藝II高劑組、工藝II低劑組3.2給藥各組均灌胃給藥3.3觀察指標(biāo)體重及耐缺氧時(shí)間3.4對小鼠體重影響實(shí)驗(yàn)以上各組小鼠，除空白對照組給每鼠灌服注射用水外，其余組每鼠每天上午灌服三碘甲狀腺原氨酸鈉0.9mg/kg(容積0.2ml/鼠)，連續(xù)5d，造成腎陰虛模型。
從第6d開始(每天下午)，各給藥組小鼠分別灌服上述各不同劑量藥液20ml/kg，空白對照組、模型組分別灌服等量的生理鹽水，連續(xù)6d。每天稱體重，計(jì)算給藥前一天體重與最后一次給藥體重差值，結(jié)果見表1。
3.5對小鼠耐缺氧能力實(shí)驗(yàn)取上述最后一次給藥稱重后的小鼠，分別將其投入盛有2g鈉石灰的密閉廣口瓶內(nèi)，每瓶一只。觀察和記錄每組各小鼠死亡時(shí)間(min)，結(jié)果下表表1六味地黃不同精制工藝樣品對三碘甲狀腺原氨酸所致腎陰虛小鼠體重及耐缺氧的影響

注X+SD與模型組比較*P＜0.05。
3.結(jié)論六味地黃湯，二種不同精制工藝樣品，四川泰華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的六味地黃膠囊(精提型)對三碘甲狀腺原氨酸所致腎陰虛模型小鼠體重影響及其耐缺氧能力的作用無顯著性差異。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1處方熟地黃320g 山茱萸160g牡丹皮120g茯苓120g 山藥160g 澤瀉120g取以上六味藥共1公斤，加水浸泡40分鐘后水煎提取2次，第一次加水量為藥材量的9倍，煎煮1小時(shí)，第二次加水量為藥材量的7倍；煎煮0.5小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至14升，取截留分子量為6000的材質(zhì)為聚砜的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液16升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物92克，加適量輔料混勻，制成片劑。
實(shí)施例2處方熟地黃320g山茱萸160g牡丹皮120g茯苓120g 山藥160g 澤瀉120g取以上六味藥共1公斤，加水浸泡40分鐘后水煎提取2次，第一次加水量為藥材量的9倍，煎煮1小時(shí)，第二次加水量為藥材量的7倍；煎煮0.5小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至14升，取截留分子量為6000的材質(zhì)為醋酸纖維素的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液16升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物96克，加適量輔料混勻，制成片劑。
實(shí)施例3熟地黃160g山茱萸80g牡丹皮60g茯苓60g 山藥80g 澤瀉60g取以上六味藥共0.5公斤，加水浸泡40分鐘后水煎提取2次，第一次加水量為藥材量的9倍，煎煮1小時(shí)，第二次加水量為藥材量的7倍；煎煮0.5小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至6升，取截留分子量為5000的材質(zhì)為聚砜的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液8升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物46克，加適量輔料混勻，制成顆粒劑。
實(shí)施例4處方熟地黃160g山茱萸80g牡丹皮60g茯苓60g 山藥89g 澤瀉60g取以上六味藥共0.5公斤，加水浸泡40分鐘后水煎提取2次，第一次加水量為藥材量的9倍，煎煮1小時(shí)，第二次加水量為藥材量的7倍；煎煮0.5小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至6.5升，取截留分子量為5000的材質(zhì)為醋酸纖維素的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液8升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物40克，加適量輔料混勻，制成顆粒劑。
實(shí)施例5處方熟地黃176g山茱萸88g牡丹皮66g茯苓66g 山藥88g 澤瀉66g取以上六味藥，加水浸泡40分鐘后水煎提取3次，第一次加水量為藥材量的12倍，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材量的10倍；煎煮2小時(shí)，第三次加水量為藥材量的8倍；煎煮1小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至9升，取截留分子量為40000的材質(zhì)為聚砜的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液11升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物125克，加適量輔料混勻，制成膠囊劑。
實(shí)施例6處方熟地黃176g山茱萸88g牡丹皮66g茯苓66g 山藥88g 澤瀉66g取以上六味藥，加水浸泡40分鐘后水煎提取3次，第一次加水量為藥材量的12倍，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材量的10倍；煎煮2小時(shí)，第三次加水量為藥材量的8倍；煎煮1小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至9升，取截留分子量為40000的材質(zhì)為醋酸纖維素的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液11升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物135克，加適量輔料混勻，制成膠囊劑。
實(shí)施例7處方熟地黃160g山茱萸80g牡丹皮60g茯苓60g 山藥80g 澤瀉60g取以上六味藥，加水浸泡40分鐘后水煎提取3次，第一次加水量為藥材量的12倍，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材量的10倍；煎煮2小時(shí)，第三次加水量為藥材量的8倍；煎煮1小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至8升，取截留分子量為20000的材質(zhì)為聚砜的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液10升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物94克，加適量輔料混勻，制成膠囊劑。
實(shí)施例8處方熟地黃160g山茱萸80g牡丹皮60g茯苓60g 山藥80g 澤瀉60g取以上六味藥，加水浸泡40分鐘后水煎提取3次，第一次加水量為藥材量的12倍，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材量的10倍；煎煮2小時(shí)，第三次加水量為藥材量的8倍；煎煮1小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至8升，取截留分子量為20000的材質(zhì)為醋酸纖維素的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液10升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物99克，加適量輔料混勻，制成膠囊劑。
實(shí)施例9處方熟地黃160g山茱萸80g牡丹皮60g茯苓60g 山藥80g 澤瀉60g取以上六味藥，加水浸泡40分鐘后水煎提取3次，第一次加水量為藥材量的12倍，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材量的10倍；煎煮2小時(shí)，第三次加水量為藥材量的8倍；煎煮1小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至8升，取截留分子量為19000的材質(zhì)為聚砜的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液10升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物92克，加適量輔料混勻，制成膠囊劑。
實(shí)施例10處方熟地黃160g山茱萸80g牡丹皮60g茯苓60g 山藥80g 澤瀉60g取以上六味藥，加水浸泡40分鐘后水煎提取3次，第一次加水量為藥材量的12倍，煎煮2小時(shí)，第二次加水量為藥材量的10倍；煎煮2小時(shí)，第三次加水量為藥材量的8倍；煎煮1小時(shí)，合并水煎液，經(jīng)高速離心(2萬轉(zhuǎn)/分鐘)，濾液定容至8升，取截留分子量為19000的材質(zhì)為醋酸纖維素的平板式超濾膜0.04平方米按“全過濾”操作方法進(jìn)行超濾(料液溫度20～45℃，進(jìn)壓4～6bar，出壓0.5～1.5bar)，收集超濾液10升，超濾液進(jìn)行減壓濃縮，減壓干燥，得提取物95克，加適量輔料混勻，制成膠囊劑。
權(quán)利要求
1.一種由中藥材熟地、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉組成的六味地黃復(fù)方制劑的膜技術(shù)分離精制方法，在常規(guī)水提工藝中，采用膜技術(shù)進(jìn)一步分離精制，再濃縮、干燥；其特征在于分離精制采用聚砜或醋酸纖維素有機(jī)膜進(jìn)行超濾去除雜質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的六味地黃復(fù)方制劑膜技術(shù)分離精制方法，其特征在于聚砜膜或醋酸纖維素膜的截留分子量為5000～40000。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的六味地黃復(fù)方制劑膜技術(shù)分離精制方法，其特征在于聚砜膜或醋酸纖維素膜的截留分子量為6000～20000。
全文摘要
本發(fā)明涉及由中藥材熟地、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉組成的中藥六味地黃復(fù)方制劑的膜技術(shù)分離精制方法，在常規(guī)水提工藝中，采用膜的截留分子量為5000～40000的聚砜或醋酸纖維素有機(jī)膜進(jìn)行超濾去除雜質(zhì)進(jìn)一步分離精制，提取活性成分，再濃縮、干燥；該方法簡化了提取精制工藝，不需消耗有機(jī)溶劑，操作簡單，降低了成本，且生產(chǎn)易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化；在保證產(chǎn)品療效的基礎(chǔ)上，減少服用量。
文檔編號A61P25/20GK1682956SQ20051005395
公開日2005年10月19日 申請日期2005年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月15日
發(fā)明者季巧遇, 于長華 申請人:江中藥業(yè)股份有限公司