專利名稱：一種應(yīng)用膜分離技術(shù)精制羊胎活性成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是采用膜分離技術(shù)提取分離羊胎活性物質(zhì)的一種方法，尤其是用微濾膜和納濾膜精制提取羊胎活性物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
胎盤是胎兒與母體進(jìn)行物質(zhì)交換的器官，是供給胎兒全營(yíng)養(yǎng)素的生理性產(chǎn)物，蛋白質(zhì)含量達(dá)70％以上，氨基酸含量豐富，種類齊全，配比合理，脂肪含量15％左右，其中含有豐富的磷脂、脂多糖，并含有多種維生素和人體必需常量、微量元素，以及多種免疫球蛋白、多種抗體，還有與免疫功能密切相關(guān)的干擾素和與機(jī)體功能正常運(yùn)轉(zhuǎn)有關(guān)的活性多肽。尤其是羊胚胎不同臟器中的生長(zhǎng)因子和生長(zhǎng)促進(jìn)因子，這些哺乳動(dòng)物出生后因?yàn)槠鞴倩蚪M織退化而不再分泌的“神奇因子”，對(duì)機(jī)體的作用可同造化等同。它們可使損傷的中樞神經(jīng)修復(fù)再生，可使病變的臟器組織重建功能；可使骨髓造血、表皮更生?？纱偈剐韵俜置?，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌平衡，可補(bǔ)充胸腺素等抗衰防老的因子，以促進(jìn)機(jī)體的新陳代謝，恢復(fù)內(nèi)分泌平衡，增強(qiáng)各臟器的功能，煥發(fā)生命活力。其中的活性多肽類成分可以通過腸道全部吸收利用，直接經(jīng)過血液循環(huán)轉(zhuǎn)運(yùn)至全身不同的器官和組織而發(fā)揮生物活性功能，但蛋白質(zhì)成分則不能直接被吸收利用，必須通過降解成多肽或氨基酸才能被吸收利用，而小分子多肽比氨基酸具有更高的生物活性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，目前從羊胎中提取的細(xì)胞活性物質(zhì)，還沒有一個(gè)明確的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)大多采用多肽作為含量測(cè)定的監(jiān)控指標(biāo)。
目前現(xiàn)有公開技術(shù)中國(guó)專利公開號(hào)為CN1193515A的《一種制作凍干羊胎素的方法》專利文獻(xiàn)采用羊胎原料低溫粉碎直接凍干，并在液氮降溫保護(hù)下進(jìn)行二次粉碎的方法；公開號(hào)為CN1203794A的《羊胎素凍干粉及其生產(chǎn)方法》專利文獻(xiàn)采用羊胚胎速凍，低溫打漿，往復(fù)凍結(jié)，冷凍干燥的方法。上述兩種方法雖保留了生物的大部分活性，但成品中還存在很多無效雜質(zhì)成分，提取純度不高。公開號(hào)為CN1307871A的《羊胎素注射劑及制備工藝》專利文獻(xiàn)采用羊胎破碎，勻漿，凍融，離心后的上清液超濾，收集小于30000分子量濾過液的方法，其中利用凍融工藝提取的活性成分遠(yuǎn)不及酶解工藝產(chǎn)出的活性物質(zhì)多，利用酶法生產(chǎn)羊胎活性物質(zhì)具有含量高、生產(chǎn)能力強(qiáng)等特點(diǎn)，是一種最直接、經(jīng)濟(jì)的生產(chǎn)方法。公開號(hào)為CN1238207A的《黑羊胎素補(bǔ)液及其生產(chǎn)方法》專利文獻(xiàn)采用羊胎原料粉碎成糊狀后調(diào)節(jié)PH值，加酶水解，經(jīng)過粗濾，精濾，得到提取物的方法；公開號(hào)為CN12730％A的《羊胎素提取工藝》專利文獻(xiàn)采用羊胎和胎盤打漿，酶解，超濾膜過濾的方法；公開號(hào)為CN1432388A的《羊胎肽口服液及其制備方法》專利文獻(xiàn)采用羊胎和胎盤勻漿，超微破碎，蛋白水解，離心超濾，收集分子量10000以下超濾液的方法；中國(guó)生化藥物雜志，劉士山等，2002年第23卷第5期發(fā)表的《羊胚胎盤肽功能測(cè)試》非專利文獻(xiàn)中采用羊胚胎盤絞碎，勻漿，凍融，經(jīng)微濾，超濾，納濾，凍干后制得成品的方法。上述這些方法在用酶解或凍融工藝得到的提取液中，除含有肽類活性成分、蛋白質(zhì)分子、氨基酸、核酸等外，還有不溶性蛋白質(zhì)分子、羊胎筋膜碎片、降解酶的殘留物等多種雜質(zhì)成分，而用超濾膜截留小于3萬(wàn)或1萬(wàn)分子量的物質(zhì)來達(dá)到提取純化的目的，會(huì)丟失一些活性蛋白，提取的收率降低；雖然已有文獻(xiàn)報(bào)道采用了膜分離技術(shù)，但未指明所用膜材質(zhì)及截留分子量。因此在操作工藝和提取純度方面，以上方法均存在缺陷。故尋找一種收率較高，純度較好，肽類活性成分含量較多的提取方法對(duì)促進(jìn)羊胎活性物質(zhì)的提取實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提高產(chǎn)品的得率、純度和活性成分肽的含量，提供一種操作簡(jiǎn)單，污染小，易保存，適于大生產(chǎn)的精制分離方法，采用無機(jī)陶瓷膜或有機(jī)膜微濾和復(fù)合膜納濾技術(shù)進(jìn)行分離純化提取羊胎活性物質(zhì)。
現(xiàn)有羊胎活性成份的提取方法為將羊胚胎和胎盤進(jìn)行清洗凈選，破碎，加水低溫勻漿，經(jīng)酶解后，得到酶解液，利用超濾截留一定分子量的活性成份。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為在酶解液中，利用無機(jī)陶瓷膜或有機(jī)膜微濾除去酶解液中10萬(wàn)以上分子量的雜蛋白、筋膜的碎片和降解酶的殘留物，得到澄清羊胎提取液，再經(jīng)有機(jī)復(fù)合膜納濾去除游離氨基酸、大部分水份進(jìn)行純化、濃縮，冷凍干燥得到羊胎凍干粉。
本發(fā)明所涉及的膜材料可以是無機(jī)陶瓷膜材質(zhì)為氧化鋁、氧化鋯或氧化銻等氧化物；有機(jī)膜材質(zhì)為聚砜、醋酸纖維、聚四氟乙烯或聚丙烯類等有機(jī)高分子材料；有機(jī)復(fù)合膜材質(zhì)為芳香聚酰胺類、聚哌嗪酰胺類或聚醚砜類。所涉及的微濾截留粒子范圍為0.05～1um，納濾截留分子量范圍為150～1000。
本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案為所述的無機(jī)陶瓷膜材質(zhì)為氧化鋯，截留粒子范圍為0.08～0.2um。
所述的有機(jī)膜為聚砜膜，截留粒子范圍為0.08～0.2um。
所述的有機(jī)復(fù)合膜為芳香聚酰胺類或聚醚砜類，其分子量為150-1000。
所述的納濾膜，分離濃縮的流程都是在常溫下進(jìn)行。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下特點(diǎn)1.該提取工藝采用酶解-膜分離聯(lián)合，操作簡(jiǎn)單，提取得率高，產(chǎn)品保留的活性成分更多，去除了大部分無效雜質(zhì)。
2.以水作提取溶劑，在膜分離純化的過程中，反應(yīng)溫和，避免了活性成分的丟失，且經(jīng)納濾濃縮后的透過水可反復(fù)利用。
3.采用無機(jī)陶瓷膜分離效率高，抗污染性強(qiáng)，易于再生清洗。
4.采用納濾膜過濾濃縮，減少了原體積3-4倍的量，縮短了濃縮干燥的時(shí)間，節(jié)省了能源，提取成本大為降低。
5.操作簡(jiǎn)單，效率高，節(jié)約能源，適于工業(yè)化大生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1將新鮮的或冷凍的經(jīng)檢疫合格的羊胚胎及胎盤，絞碎成肉醬，低溫打漿，稱取上述提取漿液2000克投入酶解罐中，啟動(dòng)攪拌器進(jìn)行攪拌，升溫到50℃，稱取3克中性蛋白酶，水解40分鐘，在75℃進(jìn)行酶滅活5分鐘，立即用截留量為0.1um的氧化鋯陶瓷膜將上述提取液進(jìn)行微濾，濾過壓力為0.1Mpa，收集透過液再進(jìn)行納濾濃縮，納濾器采用聚醚砜類復(fù)合膜，截留分子量范圍為150-180，濾過壓力為0.1-0.2Mpa，去除大部分水分得到羊胎濃縮液500毫升，再進(jìn)行冷凍干燥，羊胎提取物的收率為6.5％，所測(cè)肽含量為33.8％。
實(shí)施例2羊胚胎和胎盤預(yù)處理、低溫勻漿、酶解工藝同實(shí)施例1，立即離心過濾，轉(zhuǎn)速4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘，時(shí)間為20分鐘，用截留量為0.1um的聚砜膜將上述離心上清液進(jìn)行微濾，濾過壓力為0.1Mpa，收集透過液再進(jìn)行納濾濃縮，納濾器采用聚醚砜類復(fù)合膜，截留分子量范圍為150-180，濾過壓力為0.1-0.2Mpa，去除大部分水分得到羊胎濃縮液520毫升，再進(jìn)行冷凍干燥，羊胎提取物的收率為6.1％，所測(cè)肽含量為32.4％。
實(shí)施例3羊胚胎和胎盤預(yù)處理、勻漿、酶解工藝同實(shí)施例1，立即離心過濾，轉(zhuǎn)速4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘，時(shí)間為20分鐘，用截留量為0.08um的聚砜膜將上述離心上清液進(jìn)行微濾，濾過壓力為0.1Mpa，收集透過液再進(jìn)行納濾濃縮，納濾器采用聚酰胺類復(fù)合膜，截留分子量范圍為300-1000，濾過壓力為0.1-0.4Mpa，去除大部分水分得到羊胎濃縮液700毫升，進(jìn)行冷凍干燥，羊胎提取物的收率為5.9％，所測(cè)肽含量為30.8％。
實(shí)施例4羊胚胎和胎盤預(yù)處理、勻漿、酶解工藝同實(shí)施例1，用截留量為0.08um的氧化鋯陶瓷膜將上述酶解液進(jìn)行微濾，濾過壓力為0.1Mpa，收集透過液再進(jìn)行納濾濃縮，納濾器采用聚酰胺類復(fù)合膜，截留分子量范圍為300-1000，濾過壓力為0.1-0.4Mpa，去除大部分水分得到羊胎濃縮液650毫升，進(jìn)行冷凍干燥，羊胎提取物的收率為5.9％，所測(cè)肽含量為32.5％。
實(shí)施例5羊胚胎和胎盤預(yù)處理、低溫勻漿、酶解工藝同實(shí)施例1，立即離心過濾，轉(zhuǎn)速4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘，時(shí)間為20分鐘，用截留量為0.2um的聚砜膜將上述離心上清液進(jìn)行微濾，濾過壓力為0.1Mpa，收集透過液再進(jìn)行納濾濃縮，納濾器采用聚醚砜類復(fù)合膜，截留分子量范圍為150-180，濾過壓力為0.1-0.2Mpa，去除大部分水分得到羊胎濃縮液660毫升，再進(jìn)行冷凍干燥，羊胎提取物的收率為6.1％，所測(cè)肽含量為31.6％。
實(shí)施例6羊胚胎和胎盤預(yù)處理、低溫勻漿、酶解工藝同實(shí)施例1，用截留量為0.2um的氧化鋁陶瓷膜將上述酶解液液進(jìn)行微濾，濾過壓力為0.1Mpa，收集透過液再進(jìn)行納濾濃縮，納濾器采用聚醚砜類復(fù)合膜，截留分子量范圍為150-180，濾過壓力為0.1-0.2Mpa，去除大部分水分得到羊胎濃縮液640毫升，再進(jìn)行冷凍干燥，羊胎提取物的收率為6.7％，所測(cè)肽含量為33.4％。
實(shí)施例7羊胚胎和胎盤預(yù)處理、低溫勻漿、酶解工藝同實(shí)施例1，用截留量為0.1um的氧化鋯陶瓷膜將酶解液進(jìn)行微濾，濾過壓力為0.1Mpa，收集透過液再進(jìn)行納濾濃縮，納濾器采用聚酰胺類復(fù)合膜，截留分子量范圍為300-1000，濾過壓力為0.1-0.4Mpa，去除大部分水分得到羊胎濃縮液590毫升，再進(jìn)行冷凍干燥，羊胎提取物的收率為6.4％，所測(cè)肽含量為32.9％。
實(shí)施例8羊胚胎和胎盤預(yù)處理、低溫勻漿、酶解工藝同實(shí)施例1，用截留量為0.08um的氧化鋁陶瓷膜將酶解液進(jìn)行微濾，濾過壓力為0.1Mpa，收集透過液再進(jìn)行納濾濃縮，納濾器采用聚酰胺類復(fù)合膜，截留分子量范圍為300-1000，濾過壓力為0.1-0.4Mpa，去除大部分水分得到羊胎濃縮液720毫升，再進(jìn)行冷凍干燥，羊胎提取物的收率為6.3％，所測(cè)肽含量為31.6％。
權(quán)利要求
1.一種羊胎活性成分的膜技術(shù)分離精制方法，包括原料采集、清冼分選、打漿、破碎、酶解、用膜技術(shù)分離純化、冷凍干燥，其特征在于在酶解液中，利用無機(jī)陶瓷膜或有機(jī)膜微濾除去雜蛋白、筋膜的碎片、降解酶的殘留物，再經(jīng)有機(jī)復(fù)合膜納濾去除游離氨基酸、大部分水份，濃縮，冷凍干燥得到羊胎凍干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊胎活性成分的膜技術(shù)分離精制方法，其特征在于無機(jī)陶瓷膜材質(zhì)為氧化鋁、氧化鋯或氧化銻，截留粒子范圍為0.05～1um。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羊胎活性成分的膜技術(shù)分離精制方法，其特征在于無機(jī)陶瓷膜材質(zhì)為氧化鋯，截留粒子范圍為0.08～0.2um。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊胎活性成分的膜技術(shù)分離精制方法，其特征在于有機(jī)膜材質(zhì)為聚砜、醋酸纖維、聚四氟乙烯或聚丙烯類，截留粒子范圍為0.05～1um。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的羊胎活性成分的膜技術(shù)分離精制方法，其特征在于有機(jī)膜為聚砜膜，截留粒子范圍為0.08～0.2um。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羊胎活性成分的膜技術(shù)分離精制方法，其特征在于有機(jī)復(fù)合膜材質(zhì)為芳香聚酰胺類、聚哌嗪酰胺類或聚醚砜類，納濾截留分子量范圍為150～1000。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的羊胎活性成分的膜技術(shù)分離精制方法，其特征在于有機(jī)復(fù)合膜材質(zhì)為芳香聚酰胺類或聚醚砜類，納濾截留分子量范圍為150～1000。
全文摘要
本發(fā)明涉及羊胎活性物質(zhì)的膜分離技術(shù)提取分離方法，尤其是用微濾膜和納濾膜精制提取羊胎活性物質(zhì)的方法；通過常規(guī)的原料采集、清冼分選、打漿、破碎、酶解、用膜技術(shù)分離純化、冷凍干燥步驟，在酶解液中，采用氧化鋁、氧化鋯或氧化銻無機(jī)陶瓷膜，截留粒子范圍為0.05～1um或聚砜、醋酸纖維、聚四氟乙烯或聚丙烯類有機(jī)膜，截留粒子范圍為0.05～1um微濾除去雜蛋白、筋膜的碎片、降解酶的殘留物，再經(jīng)芳香聚酰胺類、聚哌嗪酰胺類或聚醚砜類，納濾截留分子量范圍為150～1000的有機(jī)復(fù)合膜納濾去除游離氨基酸、大部分水份，濃縮，冷凍干燥得到羊胎凍干粉。
文檔編號(hào)A61K35/48GK1682765SQ200510053958
公開日2005年10月19日 申請(qǐng)日期2005年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月15日
發(fā)明者徐國(guó)良, 張俐偉, 粱艷琴, 宋琳, 田穎剛, 付玉梅, 鄒胡斌 申請(qǐng)人:江中藥業(yè)股份有限公司