專利名稱：蛋白質(zhì)YaeT在制備免疫制劑及疫苗中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)YaeT的醫(yī)療用途，具體地說涉及該蛋白質(zhì)在制備免疫制劑及疫苗中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
痢疾是全世界范圍內(nèi)流行的腸道傳染病，在發(fā)達(dá)國家偶有爆發(fā)，而在發(fā)展中國家卻是造成腹瀉的主要原因。全世界每年痢疾的病例數(shù)約1.647億，年死亡人數(shù)超過110萬[Kotloff KL，Winickoff JP，Ivanoff B，et al.Global burden ofshigella infextionsimplications for vaccine development and implementation of controlstrategies.Bull World Health Organ 1999；77651]。我國流行的主要是福氏痢疾，所以對其進(jìn)行深入研究意義十分重大?？紤]到細(xì)菌感染與免疫的機(jī)制，尋找好的抗原以疫苗的形式進(jìn)行預(yù)防性免疫是公認(rèn)的一種理想的途徑。以前對于痢疾桿菌抗原的尋找主要集中在多糖方面，對蛋白質(zhì)則由于研究手段的局限而報道很少。
近些年來由于固相pH梯度雙向電泳以及生物質(zhì)譜的飛速發(fā)展，使得我們對于某一物種的蛋白質(zhì)進(jìn)行全面的研究成為可能，并由此帶動了蛋白質(zhì)組學(xué)的全面發(fā)展。我們在對福氏志賀氏桿菌2457T(志賀氏桿菌俗稱痢疾桿菌)建立了雙向電泳圖譜的基礎(chǔ)上[Liao X，Ying TY，Wang HL，et al.A two-dimensionalproteome map of Shigella flexneri.Electrophoresis 2003；242864-2882]，建立免疫蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法，從而對其抗原進(jìn)行較為全面的分析，為痢疾疫苗的研究工作打下基礎(chǔ)。
在大腸桿菌、沙門氏菌、痢疾桿菌以及霍亂弧菌等腸道菌中，YaeT編碼基因的核苷酸序列及其氨基酸序列幾乎完全一致，但是對該蛋白及其基因的研究極少，僅在2001年Robb CW等用差異顯示PCR方法對痢疾桿菌福氏5a的研究中發(fā)現(xiàn)oma90在小鼠體內(nèi)表達(dá)量大大增加。經(jīng)BLAST檢索表明，yaeT即為oma90。由于YaeT的理論分子量約為90Kd，并且經(jīng)分析表明很可能為外膜蛋白，故命名為Oma90。Oma90與流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)的D15和多殺巴斯德菌(Pasteurella multocida)的Oma87有很高的同源性，同源性分別達(dá)44％和47％。Robb CW等將它們稱為D15/Oma87蛋白家族，同屬這類家族的蛋白還有奈瑟氏球菌(Neisseria spp.)的Oma85，梅毒密螺旋體(Treponema pallidum)的Tp92，以及砂眼衣原體(Chlamydia trachomatis)的Oma85(YaeT)。Oma90與后三者的同源性不是很高。但總的來說，該蛋白家族的功能是未知的。據(jù)生物信息學(xué)分析表明，Oma90的理論分子量為90552Da，pI≈4.93，其N端為一20個氨基酸殘基的信號肽序列，C端有一10個氨基酸的準(zhǔn)確組裝進(jìn)外膜的細(xì)菌外膜蛋白特征性序列。Oma90有三個典型的跨膜區(qū)第一跨膜區(qū)為信號肽序列，第二和第三跨膜區(qū)分別位于第726位和第768位氨基酸殘基處。Oma90與D15和Oma87非常相似，尤其在胞外區(qū)和親水區(qū)。但對于該蛋白質(zhì)的血清學(xué)研究，該蛋白質(zhì)的免疫原性，是否可以作為一種中和抗原，用于制備免疫制劑或疫苗研制尚未見相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了YaeT蛋白質(zhì)的醫(yī)療用途，具體地說為蛋白質(zhì)YaeT或其功能片段在制備用于診斷或預(yù)防由腸道菌感染引起的疾病的藥物中的用途。
其中蛋白質(zhì)YaeT的氨基酸序列如序列表中序列2所示，其編碼該蛋白質(zhì)的核苷酸序列如序列表中序列1所示。蛋白質(zhì)YaeT的功能片段為具有該蛋白質(zhì)部分氨基酸序列，并與該蛋白質(zhì)具有相同或相似功能的蛋白質(zhì)。
本發(fā)明中所述的腸道菌為痢疾桿菌。
本發(fā)明中所述的藥物可以為疫苗，或診斷試劑，或免疫治療制劑。
本發(fā)明還公開了含有蛋白質(zhì)YaeT或其功能片段的一種疫苗制劑，其中的蛋白質(zhì)YaeT的氨基酸序列如序列表中序列2所示。
本發(fā)明還公開了含有蛋白質(zhì)YaeT或其相應(yīng)的抗體的一種診斷試劑，其中的蛋白質(zhì)YaeT的氨基酸序列如序列表中序列2所示。
本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)，用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)YaeT具有極強(qiáng)的血清學(xué)反應(yīng)，因其位于外膜，很有可能是中和性抗原，可用作制備免疫制劑或疫苗研制的保護(hù)性抗原。其中所述的免疫制劑為預(yù)防制劑或免疫檢測診斷制劑。上述制劑可以用于腸道菌感染，其中包括痢疾桿菌感染的檢測診斷或治療。蛋白質(zhì)YaeT也可用于疫苗的研制，作為保護(hù)性抗原，用于痢疾感染的預(yù)防。
本發(fā)明是通過如下試驗(yàn)進(jìn)行的。
1.制備腸道菌的免疫血清將腸道菌例如志賀氏桿菌在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)接至新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)至穩(wěn)定期早期。將培養(yǎng)的活菌作免疫原免疫實(shí)驗(yàn)動物，免疫數(shù)次后采血測定凝集效價收集血清。不同腸道菌的培養(yǎng)可以依不同方式進(jìn)行。
2.腸道菌外膜蛋白的樣品制備及雙向電泳將腸道菌，例如志賀氏桿菌培養(yǎng)過夜，離心收集菌體，洗滌后菌體重懸，進(jìn)行超聲破碎，離心去除沉淀，上清用預(yù)冷Na2CO3溶解，冰浴后超離，洗滌沉淀離心，沉淀溶解于雙向電泳的上樣緩沖液中。使用2-D Quant Kit(Amersham Biosciences，USA)測定蛋白質(zhì)濃度。取蛋白樣品上樣至固相pH梯度干膠條。進(jìn)行第一向等電聚焦電泳，在完成等電聚焦電泳后，進(jìn)行第二向的SDS-PAGE。
3.Western Blotting將凝膠通過半干轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜，經(jīng)過麗春紅染色，水洗脫色并迅速用針頭在膜上刺孔來定位蛋白點(diǎn)，掃描后進(jìn)行Western Blotting。將考馬斯亮藍(lán)染色膠、麗春紅染色以及Western Blottlng顯色的膜圖形進(jìn)行比對以確定免疫反應(yīng)蛋白點(diǎn)。
4.膠內(nèi)酶切及MALDI-TOF質(zhì)譜檢測從考馬斯亮藍(lán)染色膠上切取相應(yīng)蛋白點(diǎn)，膠內(nèi)酶切進(jìn)行質(zhì)譜檢測。
5.數(shù)據(jù)庫查詢使用Mascot在相應(yīng)數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行肽質(zhì)量指紋圖譜檢索，使用2457T株基因組本地運(yùn)行Mascot檢索。
6.結(jié)果顯示從相應(yīng)的考馬斯亮藍(lán)染色膠上取點(diǎn)經(jīng)膠內(nèi)酶切后使用MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定了多個免疫反應(yīng)蛋白點(diǎn)，對應(yīng)于不同的蛋白質(zhì)。其中有4個免疫反應(yīng)蛋白點(diǎn)對應(yīng)于YaeT蛋白質(zhì)(因?yàn)闈舛雀哌B成了線，只能標(biāo)出兩個點(diǎn))見附圖2。
通過本發(fā)明的方法，OmpA和DnaK等高豐度且免疫原性強(qiáng)的蛋白都被鑒定出來，這與一些實(shí)驗(yàn)室對其它病原微生物的免疫蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果吻合[1.Haas G，Karaali G，Ebermayer K，et al.Immunoproteomics of Helicobacter pylori infectionand relation to gastric disease.Proteomics 2002；2313-324；2.Nilsson I，Utt M，Nilsson HO，etal.Two-dimensional electrophoretic and immunoblot analysis of cell surface proteins ofspiral-shaped and coccoid forms of Helicobacter pylori.Electrophoresis 2000；212670-2677]。上述結(jié)果也從另一方面驗(yàn)證了所鑒定出的YaeT蛋白質(zhì)具有較強(qiáng)免疫原性的結(jié)果。Yang等研究表明D15的第93-209位氨基酸殘基處(親水區(qū))為一免疫保護(hù)性表位(Yang Y，Thomas WR，Chong P，Loosmore SM，Klein MH.A 20-kilodalton N-terminalfragment of the D 15protein contains a protective epitope(s)against Haemophilus influenzaetype a and type b.Infect Immun，1998，663349-3354.)。而Oma90的相關(guān)部分在氨基酸序列、跨膜和疏水性等特性上與D15同源性很高，因此推測在Oma90上存在同樣的免疫保護(hù)性表位。本發(fā)明用免疫蛋白質(zhì)組方法首次驗(yàn)證了Oma90有極強(qiáng)的免疫原性，認(rèn)為其可以成為理想的保護(hù)性抗原。其氨基酸序列以及編碼氨基酸的核苷酸序列見序列表中序列2和1。
本發(fā)明首次通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了YaeT蛋白質(zhì)具有極強(qiáng)的免疫原性，可以根據(jù)該性質(zhì)制備免疫制劑，用于痢疾桿菌感染的檢測診斷或進(jìn)行免疫治療，或用于預(yù)防痢疾桿菌感染的疫苗的研制，具有良好的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式
通過下面的實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行具體描述，但并不對本發(fā)明有任何限制。
實(shí)施例一 免疫血清的制備1材料與方法福氏志賀氏桿菌2a 2457T，為國際標(biāo)準(zhǔn)菌株，市購；LB培養(yǎng)基按照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》配制；大耳白兔購白軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物中心，動物等級1級。
1.1菌株與培養(yǎng)條件在LB培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)過夜，按1∶100轉(zhuǎn)接至新鮮培養(yǎng)基中，37℃250rpm培養(yǎng)至穩(wěn)定期早期，OD600為3.3時中止培養(yǎng)。
1.2血清的制備細(xì)菌培養(yǎng)條件同上。實(shí)驗(yàn)用大耳白家兔，耳緣靜脈注射活菌免疫原，間隔5天，免疫6次，第1次5億，第2次7.5億，第3次10億，第4次15億，第5次20億，第6次20億。末次免疫后8天開始采血測定凝集效價，至1∶5120時收集血清。
2.結(jié)果獲得目的免疫血清，血清效價達(dá)到1∶5120。
實(shí)施例二 福氏志賀氏桿菌的外膜蛋白的雙向電泳及Western Blotting1材料與方法1.1所用試劑為Amrsco公司產(chǎn)品，分析純。電泳儀為安馬西亞公司產(chǎn)品，其余同實(shí)施例1。
1.2制備福氏志賀氏桿菌的外膜蛋白將福氏志賀氏桿菌2a 2457T 37℃震蕩培養(yǎng)過夜，2000g離心15min收集菌體，用PBS洗滌三次，菌體重懸于50mmol/L的Tris-HCl(pH7.5)溶液中，超聲破碎，6000g離心10min去除沉淀，上清用10倍體積的預(yù)冷0.1mmol/LNa2CO3(pH11)溶解，冰浴1h，100000g超離1h，沉淀用50mmol/L的Tris-HCl(pH7.5)洗滌一次，100000g離心1h，沉淀即為福氏志賀氏桿菌的外膜蛋白。
1.3福氏志賀氏桿菌的外膜蛋白的雙向電泳將上面獲得沉淀溶解于雙向電泳的上樣緩沖液(5mol/L尿素，2mol/L硫脲，2％SB 3-10，2％CHAPS，50mmol/L DTT)中。使用2-D Quant Kit(AmershamBiosciences，USA)測定蛋白質(zhì)濃度。取1mg總蛋白樣品上樣至18cm固相pH梯度干膠條。等電聚焦條件為重泡脹6h，30V 6h，500V 1h，1000V 1h，8000V至50000伏小時，第二向SDS-PAGE膠濃度為12.5％。
1.3Western Blotting將凝膠通過半干轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜，麗春紅染色10分鐘[Ausubel FM，Brent R，Kingston RE等.精編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南，北京科學(xué)出版社，1998369]，水洗脫色并迅速用針頭在膜上刺孔來定位蛋白點(diǎn)，掃描后進(jìn)行Western Blotting，實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)[Wu M，Stockley PG，Martin ll WJ.An improved Western blotting techniqueeffectively reduces background.Electrophoresis 2002；232373-2376]。將考馬斯亮藍(lán)染色膠、麗春紅染色以及Western Blotting顯色的膜圖形進(jìn)行比對以確定免疫反應(yīng)蛋白點(diǎn)。
2.結(jié)果如附

圖1，附圖2所示。
實(shí)施例三 膠內(nèi)酶切及MALDI-TOF質(zhì)譜檢測1材料方法1.1質(zhì)譜儀為德國Bruker的Reflex.III MALDI-TOF-MS，其余材料同上。
1.2從考馬斯亮藍(lán)染色膠上切取相應(yīng)蛋白點(diǎn)，膠內(nèi)酶切的方法參見文獻(xiàn)[廖翔，應(yīng)天翼，王恒樑等.考馬斯亮藍(lán)染色雙向電泳凝膠膠內(nèi)酶切方法的改進(jìn).生物技術(shù)通訊2003；14509-511]。質(zhì)譜檢測在國家生物醫(yī)學(xué)分析中心完成，使用Reflex.IIIMALDI-TOF-MS(Bruker，German)質(zhì)譜儀。
1.3數(shù)據(jù)庫查詢使用Mascot(http://www.matrixscience.com)在相應(yīng)數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行肽質(zhì)量指紋圖譜檢索。同時在國家生物醫(yī)學(xué)分析中心使用2457T株基因組本地運(yùn)行Mascot檢索。
2結(jié)果如附圖1，附圖2所示。
圖1為pH4-pH7的外膜蛋白在進(jìn)行雙向電泳后進(jìn)行Western Blotting分析的結(jié)果。從相應(yīng)的考馬斯亮藍(lán)染色膠上取點(diǎn)經(jīng)膠內(nèi)酶切后使用MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定了22個免疫反應(yīng)蛋白點(diǎn)，對應(yīng)于9種蛋白質(zhì)。其中有4個免疫反應(yīng)蛋白點(diǎn)對應(yīng)于YaeT蛋白質(zhì)(見圖2)。鑒定出的蛋白點(diǎn)編號標(biāo)注在圖中，其它信息列于表1。
表1.具免疫原性的外膜蛋白


序列表<110>中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所<120>蛋白質(zhì)YaeT在制備免疫制劑及疫苗中的用途<130>
<160>2<170>PatentIn version 3.3<210>1<211>2430<212>DNA<213>
<400>1atggcgatga aaaagttgct catagcgtcg ctgctgttta gcagcgccac cgtatacggt60gctgaagggt tcgtagtgaa agatattcat ttcgaaggcc ttcagcgtgt cgccgttggt 120gcggccctcc tcagtatgcc ggtgcgtaca ggcgacacgg ttaatgatga agatatcagt 180aataccattc gcgctctgtt tgctaccggc aactttgagg atgttcgcgt ccttcgtgat 240ggtgataccc ttctggttca ggtaaaagaa cgtccgacca ttgccagcat tactttctcc 300ggtaacaaat cggtgaaaga tgacatgctg aagcaaaacc tcgaggcttc tggtgtgcgt 360gtgggcgaat ccctcgatcg caccaccatt gccgatatcg agaaaggtct ggaagacttc 420tactacagcg tcggtaaata tagcgccagc gttaaagctg tcgtgacccc gctgccgcgc 480aaccgtgttg acctaaaact ggtgttccag gaaggtgtgt cagctgaaat ccagcaaatt 540aacattgttg gtaaccatgc tttcaccacc gacgaactga tctctcattt ccaactgcgt 600gacgaagtgc cgtggtggaa tgtggtaggc gatcgtaaat accagaaaca gaaactggcg 660ggcgatcttg aaaccctgcg cagctactat ctggaccgcg gttatgcccg tttcaacatc 720gactctaccc aggtcagtct gacgccagat aaaaaaggta tttacgtcac ggtgaacatc 780accgaaggcg atcagtacaa gctttctggc gttgaagtga gcggcaacct tgccgggcac 840tccgctgaaa ttgagcaact gactaagatc gagccgggcg agctgtataa cggcactaaa 900gtgaccaaaa tggaagatga cattaaaaag cttctcggtc gctatggtta tgcctatccg 960cgcgtacagt cgatgcctga aattaacgat gccgacaaaa ccgttaaatt acgcgtgaac 1020gttgatgcgg gtaaccgttt ctacgtgcgt aagatccgtt ttgaaggtaa cgatacctcg 1080aaagatgccg tcctgcgtcg cgaaatgcgt cagatggaag gtgcatggtt ggggagcgat 1140ctggtcgatc agggtaagga gcgtctgaat cgtctgggct tctttgaaac tgtcgatacc 1200gatacccaac gtgttccggg tagcccggac caggttgatg tagtctacaa ggtgaaagaa 1260cgtaacactg gtagcttcaa cttcgggatt ggttacggta ctgaaagtgg cgtgagcttc 1320caggctggcg tgcaacagga taactggtta ggtacaggtt atgctgttgg tatcaacggg 1380accaaaaacg attaccagac ctatgctgaa ctgtcggtaa ccaacccgta cttcaccgta 1440gatggcgtaa gcctcggtgg tcgtctcttc tataatgact tccaggcaga tgacgccgac 1500
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<400>2Met Ala Met Lys Lys Leu Leu Ile Ala Ser Leu Leu Phe Ser Ser Ala1 5 10 15Thr Val Tyr Gly Ala Glu Gly Phe Val Val Lys Asp Ile His Phe Glu20 25 30Gly Leu Gln Arg Val Ala Val Gly Ala Ala Leu Leu Ser Met Pro Val35 40 45Arg Thr Gly Asp Thr Val Asn Asp Glu Asp Ile Ser Asn Thr Ile Arg50 55 60Ala Leu Phe Ala Thr Gly Asn Phe Glu Asp Val Arg Val Leu Arg Asp65 70 75 80Gly Asp Thr Leu Leu Val Gln Val Lys Glu Arg Pro Thr Ile Ala Ser85 90 95Ile Thr Phe Ser Gly Asn Lys Ser Val Lys Asp Asp Met Leu Lys Gln100 105 110
Asn Leu Glu Ala Ser Gly Val Arg Val Gly Glu Ser Leu Asp Arg Thr115 120 125Thr Ile Ala Asp Ile Glu Lys Gly Leu Glu Asp Phe Tyr Tyr Ser Val130 135 140Gly Lys Tyr Ser Ala Ser Val Lys Ala Val Val Thr Pro Leu Pro Arg145 150 155 160Asn Arg Val Asp Leu Lys Leu Val Phe Gln Glu Gly Val Ser Ala Glu165 170 175Ile Gln Gln Ile Asn Ile Val Gly Asn His Ala Phe Thr Thr Asp Glu180 185 190Leu Ile Ser His Phe Gln Leu Arg Asp Glu Val Pro Trp Trp Asn Val195 200 205Val Gly Asp Arg Lys Tyr Gln Lys Gln Lys Leu Ala Gly Asp Leu Glu210 215 220Thr Leu Arg Ser Tyr Tyr Leu Asp Arg Gly Tyr Ala Arg Phe Asn Ile225 230 235 240Asp Ser Thr Gln Val Ser Leu Thr Pro Asp Lys Lys Gly Ile Tyr Val245 250 255Thr Val Asn Ile Thr Glu Gly Asp Gln Tyr Lys Leu Ser Gly Val Glu260 265 270Val Ser Gly Asn Leu Ala Gly His Ser Ala Glu Ile Glu Gln Leu Thr275 280 285Lys Ile Glu Pro Gly Glu Leu Tyr Asn Gly Thr Lys Val Thr Lys Met290 295 300Glu Asp Asp Ile Lys Lys Leu Leu Gly Arg Tyr Gly Tyr Ala Tyr Pro305 310 315 320Arg Val Gln Ser Met Pro Glu Ile Asn Asp Ala Asp Lys Thr Val Lys325 330 335Leu Arg Val Asn Val Asp Ala Gly Asn Arg Phe Tyr Val Arg Lys Ile340 345 350Arg Phe Glu Gly Asn Asp Thr Ser Lys Asp Ala Val Leu Arg Arg Glu355 360 365Met Arg Gln Met Glu Gly Ala Trp Leu Gly Ser Asp Leu Val Asp Gln
370 375 380Gly Lys Glu Arg Leu Asn Arg Leu Gly Phe Phe Glu Thr Val Asp Thr385 390 395 400Asp Thr Gln Arg Val Pro Gly Ser Pro Asp Gln Val Asp Val Val Tyr405 410 415Lys Val Lys Glu Arg Asn Thr Gly Ser Phe Asn Phe Gly Ile Gly Tyr420 425 430Gly Thr Glu Ser Gly Val Ser Phe Gln Ala Gly Val Gln Gln Asp Asn435 440 445Trp Leu Gly Thr Gly Tyr Ala Val Gly Ile Asn Gly Thr Lys Asn Asp450 455 460Tyr Gln Thr Tyr Ala Glu Leu Ser Val Thr Asn Pro Tyr Phe Thr Val465 470 475 480Asp Gly Val Ser Leu Gly Gly Arg Leu Phe Tyr Asn Asp Phe Gln Ala485 490 495Asp Asp Ala Asp Leu Ser Asp Tyr Thr Asn Lys Ser Tyr Gly Thr Asp500 505 510Val Thr Leu Gly Phe Pro Ile Asn Glu Tyr Asn Ser Leu Arg Ala Gly515 520 525Leu Gly Tyr Val His Asn Ser Leu Ser Asn Met Gln Pro Gln Val Ala530 535 540Met Trp Arg Tyr Leu Tyr Ser Met Gly Glu His Pro Ser Thr Ser Asp545 550 555 560Gln Asp Asn Ser Phe Lys Thr Asp Asp Phe Thr Phe Asn Tyr Gly Trp565 570 575Thr Tyr Asn Lys Leu Asp Arg Gly Tyr Phe Pro Thr Asp Gly Ser Arg580 585 590Val Asn Leu Thr Gly Lys Val Thr Ile Pro Gly Ser Asp Asn Glu Tyr595 600 605Tyr Lys Val Thr Leu Asp Thr Ala Thr Tyr Val Pro Ile Asp Asp Asp610 615 620His Lys Trp Val Val Leu Gly Arg Thr Arg Trp Gly Tyr Gly Asp Gly625 630 635 640
Leu Gly Gly Lys Glu Met Pro Phe Tyr Glu Asn Phe Tyr Ala Gly Gly645 650 655Ser Ser Thr Val Arg Gly Phe Gln Ser Asn Thr Ile Gly Pro Lys Ala660 665 670Val Tyr Phe Pro His Gln Ala Ser Asn Tyr Asp Pro Asp Tyr Asp Tyr675 680 685Glu Cys Ala Thr Gln Asp Gly Ala Lys Asp Leu Cys Lys Ser Asp Asp690 695 700Ala Val Gly Gly Asn Ala Met Ala Val Ala Ser Leu Glu Phe Ile Thr705 710 715 720Pro Thr Pro Phe Ile Ser Asp Lys Tyr Ala Asn Ser Val Arg Thr Ser725 730 735Phe Phe Trp Asp Met Gly Thr Val Trp Asp Thr Asn Trp Asp Ser Ser740 745 750Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Asp Tyr Ser Asp Pro Ser Asn Ile Arg Met755 760 765Ser Ala Gly Ile Ala Leu Gln Trp Met Ser Pro Leu Gly Pro Leu Val770 775 780Phe Ser Tyr Ala Gln Pro Phe Lys Lys Tyr Asp Gly Asp Lys Ala Glu785 790 795 800Gln Phe Gln Phe Asn Tle Gly Lys Thr Trn805 810
權(quán)利要求
1.蛋白質(zhì)YaeT或其功能片段在制備用于診斷或預(yù)防由腸道菌感染引起的疾病的藥物中的用途，所述蛋白質(zhì)YaeT的氨基酸序列如序列表中序列2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述腸道菌為痢疾桿菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物為疫苗。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物為診斷試劑。
5.一種疫苗制劑，含有蛋白質(zhì)YaeT或其功能片段，所述蛋白質(zhì)YaeT的氨基酸序列如序列表中序列2所示。
6.一種診斷試劑，含有蛋白質(zhì)YaeT或其相應(yīng)的抗體，所述蛋白質(zhì)YaeT的氨基酸序列如序列表中序列2所示。
全文摘要
本發(fā)明公開了YaeT蛋白質(zhì)的醫(yī)療用途，具體地說為該蛋白質(zhì)在制備免疫制劑及疫苗中的應(yīng)用。本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)，用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)YaeT具有極強(qiáng)的免疫原性，很可能是中和性抗原，可用作痢疾感染的檢測診斷制劑或可用作保護(hù)性抗原進(jìn)行疫苗研制，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號A61P31/04GK1876179SQ20051007690
公開日2006年12月13日 申請日期2005年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月9日
發(fā)明者王恒樑, 黃留玉, 應(yīng)天翼, 馮爾玲, 蘇國富 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所