專利名稱：一種用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于用于抗菌消炎的中藥注射劑領(lǐng)域，涉及一種注射用魚金凍干粉及其制備方法。
背景技術(shù)：
魚腥草是中藥常用藥材，為三白草科植物，在我國的南方各省有廣泛的分布，它作為食用和藥用植物在20世紀初就開始被研究，現(xiàn)代研究表明魚腥草含揮發(fā)油0.018-0.036％，其主要揮發(fā)油成分是魚腥草素、甲基壬酮、月掛烯、月桂醛、蔡酸等，魚腥草素具有較強的抗菌作用，我國有魚腥草注射液的開發(fā)，具有清熱，解毒，利濕之功效，用于肺膿瘍，痰熱咳嗽，白帶，尿路感染，癰癤。
金銀花載于《新修本草》，為忍冬科多年生半常綠纏繞性木質(zhì)藤本植物忍冬的花蕾，我國南北各地均有分布。本品具有廣譜抗菌作用，對金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌等致病菌有較強的抑制作用；有明顯抗炎及解熱作用；金銀花的水及酒浸液對肉瘤180及艾氏腹水瘤有明顯的細胞毒作用。現(xiàn)代研究表明金銀花的主要有效成分是綠原酸。主治癰腫疔毒初起，紅腫熱痛，外感風熱，溫病初起，熱毒血痢，暑熱煩渴，咽喉腫痛。
我國較早的利用魚腥草和金銀花在抗菌消炎方面的相似功效成功地開發(fā)出魚金注射液，廣泛應(yīng)用于臨床取得了很好的效果。但是該制劑因為開發(fā)較早，以及長期的使用發(fā)現(xiàn)存在著以下問題1)魚金注射液只是單純提取了魚腥草和金銀花的揮發(fā)油成分，而大量有抗菌消炎活性的其它成分棄去，例如金銀花中的活性成分綠原酸，顯然不盡合理；2)揮發(fā)油制成的注射液在臨床上不易和其他制劑混合使用造成了較大的不便；3)注射液不利保存、運輸、一些特殊條件下不宜使用(例如嚴寒地區(qū))等不可避免的缺點影響著魚金注射制劑的進一步推廣使用。雖然在專利申請?zhí)朇N200410080243.7專利申請《一種魚金凍干粉針劑及其制備方法》中敘述了魚腥草金銀花的凍干粉制劑，但是采取合并處理的方式不能根據(jù)每個藥材的特性有針對性的進行提取純化，而且其方法不能明確制劑中的指標物質(zhì)含量，增大了藥品的安全性和可控性風險。
因此進一步開發(fā)魚金的注射制劑，提供更為安全有效可控的注射用魚金凍干粉顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種注射用魚金凍干粉針，本發(fā)明的另一個目的是提供該凍干粉的制備方法。
為了解決魚金注射液的問題我們提供了一種用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉，是由魚腥草(2倍質(zhì)量)水蒸餾液的環(huán)糊精包合物、金銀花(1倍質(zhì)量)提取物和藥學上可接受的凍干輔料組成的，其中綠原酸占除輔料外的固形物的25％以上。
優(yōu)選綠原酸占除輔料外的固形物的80％以上。
本發(fā)明所述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉是按以下步驟完成的1)魚腥草藥材用蒸餾水濕潤后，加6～8倍量蒸餾水，經(jīng)水蒸汽蒸餾收集藥材質(zhì)量1-2倍的初餾液，再進行重蒸餾，收集蒸餾液得魚腥草水蒸餾液，魚腥草水蒸餾液用環(huán)糊精包合得魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液；2)金銀花藥材用水煎煮兩次，合并兩次水提取液減壓濃縮至相對密度1.15-1.20之間(50℃)，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至75％-80％，靜置24小時后取上層清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮至相對密度1.20-1.25(50℃)，加入5倍量蒸餾水充分攪拌，調(diào)節(jié)pH值至2-3，靜置36小時，過濾，續(xù)濾液上預(yù)處理好的弱堿性大孔吸附樹脂，洗脫液回收溶劑，干燥得金銀花提取物；3)將金銀花提取物充分溶解于注射用水中，加入魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液，冷藏過夜后過濾，加入凍干輔料，調(diào)解pH值至5-7，精濾，按該領(lǐng)域內(nèi)公知技術(shù)凍干即可。
所用的環(huán)糊精優(yōu)選β-環(huán)糊精或羥丙基β-環(huán)糊精。
使用的弱堿性大孔吸附樹脂可以是但不限于SA-1、SA-4或ADS-7苯乙烯骨架樹脂。更優(yōu)選ADS-7樹脂。
實驗中我們發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有的凍干輔料可以通過實驗確定其最佳濃度，然后凍干成型，但是并不是所有的凍干輔料都能達到外觀和復溶很好的效果，其中甘露醇做凍干輔料的成型效果是明顯的，并且我們驚奇的發(fā)現(xiàn)凍干前甘露醇的質(zhì)量百分比濃度為9-10％時有利于制劑的長期穩(wěn)定性。
我們制備了用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉針劑，魚腥草和金銀花分開處理更有針對性的對魚腥草和金銀花的有效成份進行了富集，環(huán)糊精包合技術(shù)使揮發(fā)油成分穩(wěn)定性增強，新型弱堿性大孔吸附樹脂的使用很好地解決了以往金銀花綠原酸純化轉(zhuǎn)移率低的問題，做到了去粗取精。確定了質(zhì)量標準，實驗表明該制劑工藝過程可操作性強，重現(xiàn)性高，質(zhì)量穩(wěn)定，可控。藥理實驗證明，本發(fā)明的注射用魚金凍干粉比魚金注射液藥理作用更強，無毒性，可開發(fā)為用于熱毒內(nèi)盛而致的上呼吸道感染、支氣管肺炎、病毒性肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術(shù)后發(fā)熱等癥狀的的制劑。
具體實施例實施例1注射用魚金凍干粉的制備取4kg魚腥草藥材用蒸餾水濕潤后，加32L蒸餾水，經(jīng)水蒸汽蒸餾收集4L初餾液，再進行重蒸餾，收集蒸餾液得魚腥草水蒸餾液500ml，魚腥草水蒸餾液逐滴加入20％羥丙基-β環(huán)糊精溶液2000ml中，加入過程中用高速剪切機剪切，包合8小時，得魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液。
取2kg金銀花藥材用水煎煮兩次，每次加入20L去離子水煎煮2小時，合并兩次水提取液減壓濃縮至相對密度1.15-1.20之間(50℃)(實測值1.18)，不斷攪拌下加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至80％，靜置24小時后取上層清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮至相對密度1.20-1.25(50℃)(實測值1.22)，加入5倍量蒸餾水充分攪拌，調(diào)節(jié)pH值至2.5，靜置36小時，過濾，續(xù)濾液上與處理好的ADS-7大孔吸附樹脂(天津市南開合成有限公司)，洗脫液回收溶劑，干燥得金銀花提取物；將金銀花提取物充分溶解于1500ml注射用水中，加入魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液，充分溶解混勻冷藏過夜后過濾，加入300g甘露醇，充分溶解，補充注射用水至3000ml，調(diào)解pH值至5-7(實測值6.5)，加入1.5g活性炭加熱脫碳，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，分裝，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得。批號yjdg-1實施例2注射用魚金凍干粉的制備取4kg魚腥草藥材用蒸餾水濕潤后，加28L蒸餾水，經(jīng)水蒸汽蒸餾收集4L初餾液，再進行重蒸餾，收集蒸餾液得魚腥草水蒸餾液500ml，魚腥草水蒸餾液逐滴加入20％羥丙基-β環(huán)糊精溶液2000ml中，加入過程中用高速剪切機剪切，包合10小時，得魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液。
取2kg金銀花藥材用水煎煮兩次，每次加入20L去離子水煎煮2小時，合并兩次水提取液減壓濃縮至相對密度1.15-1.20之間(50℃)(實測值1.15)，不斷攪拌下加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至80％，靜置24小時后取上層清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮至相對密度1.20-1.25(50℃)(實測值1.24)，加入5倍量蒸餾水充分攪拌，調(diào)節(jié)pH值至2.2，靜置36小時，過濾，續(xù)濾液上與處理好的SA-1大孔吸附樹脂(天津市歐瑞生物科技有限公司)，洗脫液回收溶劑，干燥得金銀花提取物；將金銀花提取物充分溶解于1500ml注射用水中，加入魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液，充分溶解混勻冷藏過夜后過濾，加入270g甘露醇，充分溶解，補充注射用水至3000ml，調(diào)解pH值至5-7(實測值6.8)，加入1.8g活性炭加熱脫碳，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，分裝，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得。批號yjdg-2實施例3注射用魚金凍干粉的制備取4kg魚腥草藥材用蒸餾水濕潤后，加24L蒸餾水，經(jīng)水蒸汽蒸餾收集4L初餾液，再進行重蒸餾，收集蒸餾液得魚腥草水蒸餾液500ml，魚腥草水蒸餾液逐滴加入20％羥丙基-β環(huán)糊精溶液2000ml中，加入過程中用高速剪切機剪切，包合6小時，得魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液。
取2kg金銀花藥材用水煎煮兩次，每次加入20L去離子水煎煮2小時，合并兩次水提取液減壓濃縮至相對密度1.15-1.20之間(50℃)(實測值1.16)，不斷攪拌下加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至80％，靜置24小時后取上層清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮至相對密度1.20-1.25(50℃)(實測值1.25)，加入5倍量蒸餾水充分攪拌，調(diào)節(jié)pH值至2.8，靜置36小時，過濾，續(xù)濾液上與處理好的SA-4大孔吸附樹脂(天津市南開合成有限公司)，洗脫液回收溶劑，干燥得金銀花提取物；將金銀花提取物充分溶解于1500ml注射用水中，加入魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液，充分溶解混勻冷藏過夜后過濾，加入300g甘露醇，充分溶解，補充注射用水至3000ml，調(diào)解pH值至5-7(實測值6.0)，加入1.5g活性炭加熱脫碳，精濾，分裝于7ml西林瓶中每支3ml，分裝，加塞，凍干，壓蓋，加鋁蓋即得。批號yjdg-3實施例4注射用魚金凍干粉對常見呼吸道病毒的直接抑制作用實驗藥物注射用魚金凍干粉yjdg-1。
生理鹽水病毒腺病毒3，7型(AdV 3，AdV7)、仙臺病毒(副流感病毒SPV)、呼吸道合胞病毒(RSV)。
實驗方法測定注射用魚金凍干粉對細胞的最大無毒濃度將人胚肺細胞(30萬/ml)接種在96孔培養(yǎng)板上，每孔0.1ml，放入5％CO2培養(yǎng)箱，36℃培養(yǎng)24-36h，待細胞長成單層后加入不同濃度的魚金注射液(凍干粉復溶后調(diào)整至4000mg生藥/ml，用細胞維持液按倍比稀釋為12個濃度梯度)，每孔0.1ml，每個濃度設(shè)2個孔，并設(shè)細胞對照。放入5％CO2；培養(yǎng)箱36℃培養(yǎng)逐日觀察細胞病變，連續(xù)觀察3d。求出藥液對細胞的無毒界限(即不出現(xiàn)細胞病變的最大濃度)，并以此濃度作為清肺口服液的最大無毒濃度。將注射用魚金凍干粉配成6個濃度梯度(濃度均少于最大無毒濃度)，用維持液稀釋(濃度分別為200mg生藥/ml，100mg生藥/ml，50mg生藥/ml，25mg生藥/ml，12.5mg生藥/ml，6.25mg生藥/ml)分別與100TCID50的腺病毒3，7型(AdV3，AdV7)、仙臺病毒(副流感病毒SPV)、呼吸道合胞病毒(RSV)混勻，放入4℃冰箱24h取出后，每個濃度藥液與病毒的混合液分別取0.1ml，加入長成單層的人胚肺纖維細胞96孔培養(yǎng)板上，每個稀釋度各種2個孔，同時設(shè)病毒對照孔和細胞對照孔，逐日觀察細胞病變至病毒對照孔出現(xiàn)100％細胞病變?yōu)橹梗?25％細胞發(fā)生病變?yōu)?，50％細胞發(fā)生病變?yōu)?+，75％細胞發(fā)生病變?yōu)?++，100％細胞發(fā)生病變?yōu)?+++)。病毒抑制率(％)＝100％-細胞病變率。結(jié)果見表1。
表1注射用魚金凍干粉對常見呼吸道病毒的抑制作用


實施例5注射用魚金凍干粉對內(nèi)毒素致兔發(fā)熱體溫的影響實驗藥物注射用魚金凍干粉。
頭孢唑啉鈉針生理鹽水內(nèi)毒素內(nèi)毒素液配制，用細菌內(nèi)毒素檢查用水將內(nèi)毒素溶解成40EU/ml內(nèi)毒素液。
實驗動物新西蘭兔25只，體重1.5-2.0kg。
實驗方法新西蘭兔，實驗前3d置實驗室飼養(yǎng)，每日測肛溫兩次，實驗操作前14h禁食不禁水，操作時，間隔0.5h再測肛溫兩次，記錄體溫，選擇基礎(chǔ)體溫在38.5-39.6℃之間，且兩次溫差＜0.5℃兔25只，稱體重后隨機分為5組，每組5只。分為為空白對照組(生理鹽水2ml/kg)，魚金注射液高(g/kg)，低劑量組(g/kg)和陽性藥物組頭孢唑啉鈉(120mg/kg)，發(fā)熱模型組(生理鹽水2ml/kg)。陰性對照組自耳緣注射生理鹽水后不注射內(nèi)毒素，其余各組均分別自耳緣靜脈緩慢注入藥液15min后，同法自耳緣注入內(nèi)毒素液1ml/kg，各兔于注射內(nèi)毒素液后0.5h開始每間隔0.5h測肛溫，共4h。每只兔以4h內(nèi)最高升溫與基礎(chǔ)肛溫之差為該兔最大升溫，求各組平均最大體溫差(ΔTmax)；以及梯形法計算4h內(nèi)溫度對時間曲線下面積，得體溫反應(yīng)指數(shù)(TRI)。結(jié)果見表2。
表2注射用魚金凍干粉對內(nèi)毒素致兔發(fā)熱體溫的影響

注與模型組對照**P＜0.01實施例6注射用魚金凍干粉體外抗菌作用試驗實驗藥物注射用魚金凍干粉。
生理鹽水菌種金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、綠膿桿菌、流感桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎球菌。
實驗方法配制固體和液體培養(yǎng)基，調(diào)pH7.6，105℃消毒1h備用。藥液稀釋，采用連續(xù)倍比稀釋法，取潔凈試管10支，分別加入液體培養(yǎng)基1.0ml，第1管加100mg生藥/ml濃度的魚金注射液溶液1.0ml，混勻后取出1.0ml加入第2管，依次稀釋至第9管，取出1.0ml棄去，第10管加液體培養(yǎng)基1.0ml作對照。各管加塞置消毒鍋105℃消毒1h。菌液制備，將貯藏菌各取少許分別接種于固體斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h使菌種活化。將活化菌種各取一接種環(huán)分別接種于1.0ml液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)8h，隨后再取菌液0.1ml，加入液體培養(yǎng)基至100ml稀釋1000倍。將稀釋1000倍的菌液各取0.1ml分別加入各藥液稀釋管中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察各管的變化。如試管出現(xiàn)混濁，表明有菌生長，藥液無抑菌作用；如試管澄清，則表明無菌生長，藥液有抑菌作用。最低抑菌濃度(MIC)即為抑制細菌生長的藥液最大稀釋倍數(shù)。觀察澄清、無菌生長的各藥液管繼續(xù)置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，仍澄清無菌生長的藥液最大稀釋倍數(shù)，即為最低殺菌濃度MBC。結(jié)果見表3。
表3 注射用魚金凍干粉的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)

注-試管澄清，無菌生長；+試管混濁，有菌生；(+)繼續(xù)培養(yǎng)48h，試管混濁，有菌生長.
權(quán)利要求
1.一種用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉，由魚腥草(2倍質(zhì)量)水蒸餾液的環(huán)糊精包合物、金銀花(1倍質(zhì)量)提取物和藥學上可接受的凍干輔料組成，其中綠原酸占除輔料外的固形物的25％以上。
2.如權(quán)力要求1所述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉，其特征是綠原酸占除輔料外的固形物的80％以上。
3.如權(quán)力要求1所述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉，其特征是按以下步驟完成的1)魚腥草藥材用蒸餾水濕潤后，加6～8倍量蒸餾水，經(jīng)水蒸汽蒸餾收集藥材質(zhì)量1-2倍的初餾液，再進行重蒸餾，收集蒸餾液得魚腥草水蒸餾液，魚腥草水蒸餾液用環(huán)糊精包合得魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液；2)金銀花藥材用水煎煮兩次，合并兩次水提取液減壓濃縮至相對密度1.15-1.20之間(50℃)，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至75％-80％，靜置24小時后取上層清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮至相對密度1.20-1.25(50℃)，加入5倍量蒸餾水充分攪拌，調(diào)節(jié)pH值至2-3，靜置36小時，過濾，續(xù)濾液上預(yù)處理好的弱堿性大孔吸附樹脂，洗脫液回收溶劑，干燥得金銀花提取物；3)將金銀花提取物充分溶解于注射用水中，加入魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液，冷藏過夜后過濾，加入凍干輔料，調(diào)解pH值至5-7，精濾，按該領(lǐng)域內(nèi)公知技術(shù)凍干即可。
4.如權(quán)力要求3所述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉，其特征是所用的環(huán)糊精為β-環(huán)糊精或羥丙基β-環(huán)糊精。
5.如權(quán)力要求4或5所述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉，其特征是使用的弱堿性大孔吸附樹脂可以是SA-1、SA-4或ADS-7苯乙烯骨架樹脂。
6.如權(quán)力要求5所述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉，其特征是凍干輔料選用甘露醇，且凍干前甘露醇的質(zhì)量百分比濃度為8-10％。
7.一種用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉的制備方法，是按以下步驟完成的1)魚腥草藥材用蒸餾水濕潤后，加6～8倍量蒸餾水，經(jīng)水蒸汽蒸餾收集藥材質(zhì)量1-2倍的初餾液，再進行重蒸餾，收集蒸餾液得魚腥草水蒸餾液，魚腥草水蒸餾液用環(huán)糊精包合得魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液；2)金銀花藥材用水煎煮兩次，合并兩次水提取液減壓濃縮至相對密度1.15-1.20之間(50℃)，加入95％藥用乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度至75％-80％，靜置24小時后取上層清液回收乙醇并繼續(xù)濃縮至相對密度1.20-1.25(50℃)，加入5倍量蒸餾水充分攪拌，調(diào)節(jié)pH值至2-3，靜置36小時，過濾，續(xù)濾液上預(yù)處理好的弱堿性大孔吸附樹脂，洗脫液回收溶劑，干燥得金銀花提取物；3)將金銀花提取物充分溶解于注射用水中，加入魚腥草水蒸餾液的環(huán)糊精包合溶液，冷藏過夜后過濾，加入凍干輔料，調(diào)解pH值至5-7，精濾，按該領(lǐng)域內(nèi)公知技術(shù)凍干即可。
8.如權(quán)力要求7所述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉的制備方法，其特征是所用的環(huán)糊精為β-環(huán)糊精或羥丙基β-環(huán)糊精。
9.如權(quán)力要求7或8所述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉的制備方法，其特征是使用的弱堿性大孔吸附樹脂可以是SA-1、SA-4或ADS-7苯乙烯骨架樹脂。
10.如權(quán)力要求7、8或9說述的用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉的制備方法，其特征是凍干輔料選用甘露醇，且凍干前甘露醇的質(zhì)量百分比濃度為9-10％。
全文摘要
一種用于抗菌消炎的注射用魚金凍干粉，由魚腥草(2倍質(zhì)量)水蒸餾液的環(huán)糊精包合物、金銀花(1倍質(zhì)量)提取物和藥學上可接受的凍干輔料組成，其中綠原酸占除輔料外的固形物的25％以上。魚腥草和金銀花分開處理更有針對性的對魚腥草和金銀花的有效成分進行了富集，環(huán)糊精包合技術(shù)使揮發(fā)油成分穩(wěn)定性增強，新型弱堿性大孔吸附樹脂的使用很好地解決了以往金銀花綠原酸純化轉(zhuǎn)移率低的問題，做到了去粗取精。確定了質(zhì)量標準，實驗表明該制劑工藝過程可操作性強，重現(xiàn)性高，質(zhì)量穩(wěn)定，可控。藥理實驗證明，本發(fā)明的注射用魚金凍干粉比魚金注射液藥理作用更強，無毒性，可開發(fā)為用于熱毒內(nèi)盛而致的上呼吸道感染、支氣管肺炎、病毒性肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術(shù)后發(fā)熱等癥狀的制劑。
文檔編號A61P11/04GK1814012SQ20051010184
公開日2006年8月9日 申請日期2005年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月6日
發(fā)明者王偉 申請人:廣東大光藥業(yè)有限公司