專利名稱：一種用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥有效成分組合物，可用于外感高熱和急慢性肝損傷等癥。
背景技術(shù)：
目前，市場上用于外感高熱和肝損傷等癥的中藥組方的中成藥眾多。由安宮牛黃丸方制成的制劑(如安宮牛黃片、膠囊、散劑、栓劑等)和在安宮牛黃丸的基礎(chǔ)上加減衍方的制劑(如新安宮牛黃丸、新安宮牛黃針、清開靈注射液、口服液、滴鼻液等)用于治療外感高熱和急慢性肝損傷有效；葛根芩連湯也是治療外感高熱的有效方劑，其降熱的有效中藥是葛根、黃芩；?；撬岷透鸶湮榭捎糜谕飧懈邿岷图甭愿螕p傷。但是中藥成分不明，質(zhì)量不能完全控制，作用機(jī)理不清，不但影響了藥效，而且制成注射液易產(chǎn)生副作用。如臨床上應(yīng)用較多的清開靈注射液，其主要成分為豬、牛、羊膽酸、水牛角、黃芩、珍珠母、梔子、板藍(lán)根、麝香、冰片、薄荷9味中藥(包括中藥單體成分2種)組成，由于制備工藝冗長，產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定，成品合格率低。清開靈注射液的不良反應(yīng)類型較多，統(tǒng)計(jì)文獻(xiàn)報(bào)道清開靈注射液不良反應(yīng)所分析的原因有1)藥材所含成分有蛋白質(zhì)、氯原酸、皂甙等，可作為抗原物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)刺激某些敏感抗體引起過敏，其中牛黃、水牛角可能含有異體蛋白質(zhì)。異體蛋白質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)后，可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，而引起不良反應(yīng)；2)作為復(fù)方制劑在分離過程中雜質(zhì)未能除盡而引起過敏；3)制劑中的助溶劑可作為抗原而致敏；4)與特異性體質(zhì)有關(guān)。
隨著臨床應(yīng)用日益增多，清開靈不良反應(yīng)也隨之增加。主要集中于變態(tài)反應(yīng)，表現(xiàn)為皮疹、丘疹、瘙癢、蕁麻疹樣藥疹，一般停藥后可自行消失，最嚴(yán)重不良反應(yīng)為過敏性休克。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種有效成分明確、質(zhì)量可控、使用安全有效的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物及其制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是它由以下重量份的中藥成分組成牛磺酸1～50重量份，黃芩苷1～50重量份，葛根素1～50重量份。
作為優(yōu)選的方案，它由以下重量份的中藥成分組成?；撬?0～40重量份，黃芩苷5～30重量份，葛根素2～20重量份。
作為最優(yōu)選的方案，它由?；撬?5重量份，黃芩苷10重量份，葛根素5重量份組成。
方中以牛黃的有效成分?；撬釣榫?。牛黃味苦性涼，氣香，善清心、肝大熱，功能清熱解毒、祛痰開竅、息風(fēng)止痙?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》謂其“主驚癇寒熱，熱盛狂痓”。其用有二一以涼肝息風(fēng)止痙，用于外感高熱、驚厥抽搐；一以祛痰開竅醒神，用于痰蒙清竅、神昏譫語。故乃治溫病熱陷心包所致熱盛火熾、熱極生風(fēng)之高熱、煩躁、神昏、譫語、痙攣抽搐等癥之要藥。配以黃芩為臣，其性苦寒，主歸肺經(jīng)，苦能燥濕，寒能清熱，故有清熱燥濕的功效，且《本草正》“枯芩清上焦之火，消痰利氣。”并能清熱瀉火解毒，尤善清中上焦?jié)駸幔瓤芍｜S清瀉心包之熱毒；又可祛閉郁心包之痰濁，與牛黃同用則清熱解毒之力更盛、化痰開竅之功益著。葛根辛、甘、涼，入脾、胃經(jīng)，功能解肌退熱，生津止渴，《本草疏經(jīng)》“葛根，解散陽明溫病熱邪之要藥也，故主消渴，身大熱，熱壅胸膈作嘔吐?！笔菫樽羲帲溆糜腥湟?，取其發(fā)散表邪之力，用治外感六淫之邪侵襲肌表，溫病初起之外感高熱；其二，取其解肌退熱之功，用于小兒高熱引起的肌肉抽搐者，以上皆為佐助用之；其三，本品尚能生津止渴，以制芩牛過于苦燥傷陰之性，又為佐制用之；綜觀全方，以清心涼肝解毒之品與豁痰開竅辟濁之品相配伍，意在清泄閉郁之痰熱；并佐以解肌退熱，發(fā)散表邪之品以助清解高熱，君臣有序，配伍嚴(yán)謹(jǐn)，諸藥合用，共奏清熱開竅，豁痰解毒，解肌退熱之功，使熱毒清，痰濁化，竅閉開，心神寧，諸癥皆除矣。本方由牛黃、黃芩、葛根三藥的有效成分?；撬?、黃芩苷、葛根素組成，與藥材組方的中醫(yī)藥理論相同。
本發(fā)明的制備工藝方法為以上三味，混合，加輔料適量，混勻，制成臨床上可接受的各種劑型。
上述藥物組合物可以加入輔料或賦形劑制成臨床可接受的劑型，如注射液、粉針、輸液、合劑、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、顆粒劑等注射給藥、口服給藥等制劑。
其中本發(fā)明的藥物注射液的制備方法是取以上三味，加水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至6.0-8.0，過濾，濾液灌封在安瓿中，滅菌，得到注射液；本發(fā)明藥物的粉針的制備方法是取以上三味，加水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至6.0-8.0，過濾，濾液滅菌后灌封在粉狀安瓿中，再次滅菌，得到粉針；本發(fā)明藥物的合劑的制備方法是取以上三味，加水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至6.0-8.0，過濾，加入矯味劑，灌封在口服液瓶中，得到合劑；本發(fā)明藥物的片劑的制備方法是取以上三味，加淀粉、羧甲基纖維素，制粒，壓片，得到片劑；本發(fā)明藥物的膠囊劑的制備方法是取以上三味，加淀粉、羧甲基纖維素，制粒，灌裝健膠囊，得到膠囊劑；
本發(fā)明藥物的軟膠囊劑的制備方法是取以上三味，加植物油，制粒，灌裝膠囊，得到軟膠囊劑；本發(fā)明藥物的丸劑的制備方法是取以上三味，加淀粉、煉蜜，泛丸，得到丸劑；本發(fā)明藥物的滴丸劑的制備方法是取以上三味，加聚乙二醇，得到滴丸劑；本發(fā)明藥物的顆粒劑的制備方法是取以上三味，加淀粉、羧甲基纖維素，制粒，得到顆粒劑。
本發(fā)明的藥物組合物由三種單體有效成分組成的中藥有效成分復(fù)方，無蛋白質(zhì)、氯原酸、皂甙等過敏原存在，組方明確，可控程度高，在制劑過程中最大限度去處未知雜質(zhì)，使本發(fā)明中藥成分組合物的可控物質(zhì)在95％以上；本發(fā)明由牛黃、黃芩、葛根三藥的有效成分?；撬?、黃芩苷、葛根素組成，?；撬帷ⅫS芩苷、葛根素均有法定注射用藥品標(biāo)準(zhǔn)收載，均有清熱解毒、解肌退熱的作用，同時(shí)又是水溶性良好的物質(zhì)，工藝簡單易控，易于制成注射液；藥物組方符合中醫(yī)藥理論，三藥相使配伍，對(duì)治療外感高熱和急慢性肝損傷具有較好的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是有效成分清楚、質(zhì)量可控程度高、藥理作用機(jī)理明確，安全性高。
本發(fā)明的藥物組合物具有以下藥理作用能顯著抑制酵母菌所致大鼠發(fā)熱體溫的升高；對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型有明顯抑制作用；對(duì)熱刺激所致小鼠疼痛均有明顯的鎮(zhèn)痛作用；對(duì)豚鼠離體回腸過敏性收縮有非常顯著的抑制作用；能顯著延長小鼠游泳時(shí)間；能顯著增強(qiáng)小鼠單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能。對(duì)刀豆蛋白(Con A)所致小鼠免疫性肝損傷有良好的保護(hù)作用，對(duì)CCl4和酒精所致小鼠急性肝損傷有良好的保護(hù)作用。本藥物組合物以上藥理作用為其臨床用于外感高熱和急慢性肝損傷提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
下面結(jié)合一些試驗(yàn)進(jìn)一步來說明本發(fā)明的效果實(shí)驗(yàn)一、治療外感高熱和急慢性肝損傷的藥效學(xué)試驗(yàn)1、酵母菌所致大鼠發(fā)熱實(shí)驗(yàn)摘要給大鼠注射致熱源(酵母菌)，使動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生和釋放內(nèi)熱源，引起體溫升高，然后分別給予大鼠生理鹽水、三種不同劑量的本發(fā)明注射液、清開靈注射液，用溫度計(jì)測量給藥后2、3、4、5、6、7h大鼠體溫的變化情況，記錄結(jié)果，以不同時(shí)間測量體溫與基礎(chǔ)體溫差值為體溫變化的指標(biāo)，將結(jié)果填入以時(shí)間為橫坐標(biāo)，溫度差為縱坐標(biāo)的圖內(nèi)，以體溫升高曲線的變化情況判斷各藥物的解熱作用。
1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液解熱的效果1.2實(shí)驗(yàn)材料
受試藥本發(fā)明注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供陽性對(duì)照藥清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠提供，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z11020269，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
拆方對(duì)照藥葛根素注射液、黃芩苷注射液、牛磺酸注射液，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供。
材料及試劑馬利牌干酵母，用氯化鈉注射液配成20％溶液。歐姆龍MC-107BW電子體溫計(jì)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
1.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果將160～200g大鼠，雌性未孕，100只，隨機(jī)分成八組空白組，清開靈注射液陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液低、中、高劑量組(按體重計(jì)算相當(dāng)于臨床劑量的5、10、20倍，中劑量組的給藥量與清開靈注射液相同)，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M，每組12只。正常飼養(yǎng)三天后開始實(shí)驗(yàn)。每天上下午測量大鼠體溫一次，連續(xù)測量2天，棄去體溫變動(dòng)過大(≥1℃)的大鼠。實(shí)驗(yàn)時(shí)，每組動(dòng)物腹腔皮下注射20％干酵母溶液10ml/kg，3個(gè)小時(shí)后分別肌肉注射生理鹽水、本發(fā)明注射液、清開靈注射液、葛根素注射液組、黃芩苷注射液組、?；撬嶙⑸湟?，給藥劑量見表1。用溫度計(jì)測量給藥后2、3、4、5、6、7h大鼠體溫的變化情況，記錄結(jié)果，以不同時(shí)間測量體溫與基礎(chǔ)體溫差值為體溫變化的指標(biāo)，將結(jié)果填入以時(shí)間為橫坐標(biāo)，溫度差為縱坐標(biāo)的圖內(nèi)，以體溫升高曲線的變化情況判斷各藥物的解熱作用。結(jié)果如下表1。
表1 本發(fā)明注射液對(duì)酵母菌致熱大鼠體溫升高的影響(x±s)

注與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與清開靈注射液組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與本發(fā)明注射液中劑量比較$P＜0.05，$$P＜0.01。
表1結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，本發(fā)明注射液各劑量組，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組均能一定程度上抑制酵母菌致熱大鼠體溫升高，本發(fā)明注射液高劑量組對(duì)酵母菌致熱大鼠體溫升高在3h、4h有抑制作用(P＜0.05)；本發(fā)明注射液中劑量組在3h有抑制作用(P＜0.05)；本發(fā)明注射液低劑量組在各時(shí)間點(diǎn)抑制作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；清開靈注射液組在3h有抑制作用(P＜0.05)；葛根素注射液組對(duì)酵母菌致熱大鼠體溫升高在3h、4h有抑制作用(P＜0.05)；黃芩苷注射液組對(duì)酵母菌致熱大鼠體溫升高在4h有抑制作用(P＜0.05)；?；撬嶙⑸湟涸诟鲿r(shí)間點(diǎn)均無明顯抑制作用(P＞0.05)。與清開靈注射液組比較，本發(fā)明注射液低、中、高劑量組在各時(shí)間點(diǎn)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均＞0.05)。拆方研究表明，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，都顯示了一定的解熱作用，但?；撬嶙⑸湟航M無解熱作用；與本發(fā)明注射液中劑量組比較，葛根素注射液組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)無差異(P＞0.05)，黃芩苷注射液組在2h有顯著差異(P值均＜0.05)，?；撬嶙⑸湟航M在2h、3h、5h有顯著差異(P值均＜0.05)，本發(fā)明注射液效果優(yōu)于拆方黃芩苷、葛根素、?；撬峤o藥組，提示三藥配伍應(yīng)用有一定協(xié)同增效作用。
1.4討論①從致熱大鼠單位時(shí)間體溫升高的幅度分析，本發(fā)明注射液高劑量組升高幅度基本小于中劑量組，中劑量組基本小于低劑量組，可見本發(fā)明注射液的解熱作用呈一定量效關(guān)系趨勢。②從拆方配伍角度分析，黃芩苷注射液、葛根素注射液具有一定的解熱作用，?；撬嶙⑸湟何匆娪忻黠@解熱作用，三者配伍能延長對(duì)致熱大鼠的解熱作用，顯示出具有一定的配伍增效作用。③本發(fā)明注射液注射液中劑量組給藥劑量與清開靈注射液組一致，兩者的解熱作用結(jié)果未有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示本發(fā)明注射液的解熱效果與清開靈相似。
2、二甲苯所致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)摘要利用二甲苯刺激小鼠一側(cè)耳廓皮膚粘膜，使其耳廓腫脹，水腫后耳重量增加，此時(shí)切取雙耳稱重并計(jì)算兩耳重量差異，比較空白對(duì)照組、給藥組小鼠的耳腫脹程度，從而判斷注射液的抗炎效果。
2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液抗炎的效果2.2實(shí)驗(yàn)材料受試藥本發(fā)明注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供陽性對(duì)照藥醋酸潑尼松，5mg/片，廣東華南藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050301；清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠提供，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
拆方對(duì)照藥葛根素注射液、黃芩苷注射液、?；撬嶙⑸湟?，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供。
材料及試劑二甲苯化學(xué)純，廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)0203428；BS110S電子天平Sartorius公司產(chǎn)品。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
2.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取NIH小鼠22～25g90只，雌雄各半，隨機(jī)分成9個(gè)組空白組，醋酸潑尼松陽性對(duì)照組，清開靈注射液陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液低、中、高劑量(按重量算相當(dāng)于臨床劑量的10、20、40倍，中劑量組黃芩苷的給藥量與清開靈注射液相同)組，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M除醋酸潑尼松灌胃給藥外，其余各組均采用肌肉注射給藥。給藥劑量見表1。給藥后30min，每組小鼠一耳廓滴二甲苯0.03ml；15min后各組動(dòng)物再按上述劑量給藥一次，45min處死各鼠，用直徑0.6cm打孔器將小鼠雙耳同部位等面積切下，精密稱重兩耳重量，求出重量差，t檢驗(yàn)比較各組動(dòng)物的耳重量差異有無顯著性。結(jié)果見表2。
表2 本發(fā)明注射液對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(x±s)

注與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與清開靈注射液比較#p＜0.05，##p＜0.01；與醋酸潑尼松比較$p＜0.05，$$p＜0.01；與本發(fā)明注射液中劑量比較，&p＜0.05&&p＜0.01表2結(jié)果顯示；與空白組比較，本發(fā)明注射液低、中、高劑量能顯著減輕二甲苯致炎小鼠的耳腫脹度(P＜0.01)，中藥陽性藥清開靈注射液、西藥陽性藥醋酸潑尼松亦能顯著減輕小鼠的耳腫脹度(P＜0.01)。黃芩苷、葛根素、?；撬岣鹘o藥組小鼠耳廓滴二甲苯后腫脹程度與空白組比較有差異(P＜0.01或P＜0.05)，與兩種陽性對(duì)照藥比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明各藥物抗急性炎癥效果顯著。拆方黃芩苷、葛根素、?；撬岣鹘o藥組中，以黃芩苷注射液的結(jié)果最佳，葛根素注射液次之，?；撬嶙⑸湟簽楹?；與本發(fā)明注射液中劑量結(jié)果雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.10)，但本發(fā)明注射液效果優(yōu)于拆方黃芩苷、葛根素、?；撬峤o藥組，顯示三種成分合用有一定的協(xié)同增效作用。
2.4討論①本發(fā)明注射液的抗炎作用未見呈量效關(guān)系，可能給藥劑量過大有關(guān)。②從拆方配伍角度分析，黃芩苷的抗炎作用最強(qiáng)，葛根素次之，?；撬釣楹?；三者劑量與本發(fā)明注射液中劑量相同，因此可以推斷本發(fā)明注射液各成分在抗炎作用上有一定的協(xié)同增效作用。③從以上本發(fā)明注射液抗二甲苯致小鼠耳腫脹作用的結(jié)果看，其對(duì)小鼠急性炎癥具有明顯緩解作用；清開靈注射液給藥劑量與本發(fā)明注射液中劑量相同，兩者效果相近，而本發(fā)明注射液低劑量的效果則優(yōu)于清開靈注射液，劑量小而作用顯著。
3、本發(fā)明注射液的鎮(zhèn)靜作用摘要研究藥物對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響，分別給予小鼠生理鹽水、三種不同劑量的本發(fā)明注射液、清開靈注射液、戊巴比妥鈉，使用小鼠自主活動(dòng)測定儀觀察記錄小鼠活動(dòng)次數(shù)，比較空白對(duì)照組、給藥組小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)，從而判斷注射液的鎮(zhèn)靜效果。
3.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液鎮(zhèn)靜的效果3.2實(shí)驗(yàn)材料受試藥本發(fā)明注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供陽性對(duì)照藥烏來糖(氨基甲酸乙酯)，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠提供，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z11020269，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
拆方對(duì)照藥葛根素注射液、黃芩苷注射液、?；撬嶙⑸湟?，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供。
材料及試劑XZC-4型小動(dòng)物自主活動(dòng)測定儀。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
3.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取NIH小鼠22～25g，118只，雌雄各半，隨機(jī)分成9個(gè)組空白組，烏來糖陽性對(duì)照組，清開靈注射液陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液低、中、高劑量組(按體重計(jì)算相當(dāng)于臨床劑量的10、20、40倍，中劑量組的給藥量與清開靈注射液相同)，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M。各組均采用肌肉注射給藥。給藥劑量見表1。分別于給藥后30min、60min后將小鼠置于XZC-4型小動(dòng)物自主活動(dòng)測定儀內(nèi)，記錄5min內(nèi)小鼠活動(dòng)次數(shù)。每次測定前先使小鼠適應(yīng)5min后再記錄活動(dòng)次數(shù)。用t檢驗(yàn)比較各組動(dòng)物的活動(dòng)次數(shù)有無顯著性。結(jié)果見表3。
表3 本發(fā)明注射液對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響(x±s)

注與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與烏來糖組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與清開靈注射液組比較ψP＜0.05，ψψP＜0.01；與本發(fā)明注射液中劑量比較&P＜0.05，&&P＜0.01。
表3結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，西藥陽性藥烏來糖組給藥后30mm、60min對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)均有明顯抑制作用(P＜0.01)；中藥陽性藥清開靈注射液組在藥后30min有抑制作用(P＜0.05)；本發(fā)明注射液高劑量組對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)在藥后60min有抑制作用(P＜0.05)；本發(fā)明注射液中劑量組在藥后30min、60min均有抑制作用(P＜0.05)；本發(fā)明注射液低劑量組在藥后30min、60min抑制作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；但拆方葛根素注射液組、黃芩苷注射液組、?；撬嶙⑸湟涸谒幒?0min、60min均無明顯抑制作用(P＞0.01)。與西藥陽性藥烏來糖組比較，本發(fā)明注射液低、中、高劑量組均在給藥后30min均有顯著差異(P＜0.05)，作用強(qiáng)度低于西藥陽性藥烏來糖組；本發(fā)明注射液低、中、高劑量組在給藥后60min無顯著差異(P＞0.05)，作用強(qiáng)度與西藥陽性藥烏來糖組相近。與清開靈注射液組比較，本發(fā)明注射液低、中、高劑量組在各時(shí)間點(diǎn)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均＞0.05)，作用強(qiáng)度與中藥陽性藥清開靈注射液組相近。拆方研究表明，與空白組相比，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M均無顯著鎮(zhèn)靜作用(P＞0.05)，但同劑量制成的本發(fā)明注射液中劑量組卻有顯著鎮(zhèn)靜作用(P＜0.05)，提示三藥配伍應(yīng)用，產(chǎn)生新的藥效，提示本方三種成分配伍有協(xié)同、增效作用。
3.4討論以上結(jié)果顯示各藥物均對(duì)正常小鼠有不同程度的鎮(zhèn)靜作用，其中快速起效的藥物有本發(fā)明注射液、清開靈注射液、烏拉糖，其中本發(fā)明注射液高劑量起效稍緩，中劑量效果維持時(shí)間較低劑量、清開靈注射液長并快速起效。拆方對(duì)照組中葛根素注射液起效較本發(fā)明注射液中劑量慢，黃芩苷注射液及?；撬嶙⑸湟河幸欢ㄦ?zhèn)靜作用，但與空白組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。藥后同一時(shí)間各拆方對(duì)照組的鎮(zhèn)靜效果均小于本發(fā)明注射液中劑量，提示本發(fā)明注射液各配伍成分在鎮(zhèn)靜作用上具有明顯的協(xié)同增效作用。本實(shí)驗(yàn)高劑量組藥后30min鎮(zhèn)靜效果不明顯，而藥后1h效果明顯，提示此劑量用于鎮(zhèn)靜小鼠，劑量過大。
4、本發(fā)明注射液的鎮(zhèn)痛作用摘要利用醋酸小鼠腹腔注射，刺激其疼痛而出現(xiàn)扭體現(xiàn)象。通過比較不同給藥組小鼠腹腔注射醋酸后扭體活動(dòng)次數(shù)的差值，從而判斷本發(fā)明注射液的鎮(zhèn)痛效果。
4.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液鎮(zhèn)痛的效果4.2實(shí)驗(yàn)材料受試藥本發(fā)明注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供陽性對(duì)照藥消炎痛，山東省濰坊制藥二廠，批號(hào)050403；清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠提供，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z11020269，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
拆方對(duì)照藥葛根素注射液、黃芩苷注射液、?；撬嶙⑸湟?，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供。
材料及試劑冰醋酸，化學(xué)純，廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)0203428；秒表實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
4.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取NIH小鼠22～25g90只，雌雄各半，隨機(jī)分成9個(gè)組空白組，消炎痛陽性對(duì)照組，清開靈注射液陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液低、中、高劑量(按重量算相當(dāng)于臨床劑量的10、20、40倍，中劑量組黃芩苷的含藥量與清開靈注射液相同)組，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，牛磺酸注射液組除消炎痛灌胃給藥外，其余各組均采用肌肉注射給藥。給藥劑量見表1。連續(xù)給藥7d，末次給藥后30min，每組每只小鼠腹腔注射0.5％的冰醋酸溶液，計(jì)出注射冰醋酸后10min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，并記錄首次出現(xiàn)扭體現(xiàn)象的時(shí)間。t檢驗(yàn)比較各組動(dòng)物的扭體次數(shù)及首次出現(xiàn)扭體時(shí)間快慢差異有無顯著性。結(jié)果見表4。
表4 本發(fā)明注射液對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(x±s)


注與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與清開靈注射液比較#p＜0.05，##p＜0.01；與消炎痛比較$p＜0.05，$$p＜0.01；與本發(fā)明注射液中劑量，&p＜0.05，&&p＜0.01表4結(jié)果顯示與空白組比較，西藥陽性藥消炎痛組扭體次數(shù)和首次出現(xiàn)扭體時(shí)間有顯著差異(P＜0.01)，而中藥陽性藥清開靈注射液組扭體次數(shù)和首次出現(xiàn)扭體時(shí)間則無顯著差異(P＞0.05)，但有減少扭體次數(shù)和延長首次出現(xiàn)扭體時(shí)間趨勢；本發(fā)明注射液低、中、高劑量能減少小鼠疼痛引起的扭體反應(yīng)的次數(shù)(P＜0.05)，其中低、中劑量組作用顯著，首次出現(xiàn)扭體的時(shí)間以中、高劑量組有差異(P＜0.05)，能延緩小鼠疼痛引起的扭體反應(yīng)的發(fā)生；拆方研究，與空白組比較，黃芩苷注射液、?；撬嶙⑸湟航M出現(xiàn)的扭體次數(shù)均有差異(P＜0.05)，葛根素注射液有極顯著差異(P＜0.01)，黃芩苷注射液、葛根素注射液、牛磺酸注射液組在首次出現(xiàn)扭體時(shí)間上亦有差異(P＜0.05)，說明三種成分均是鎮(zhèn)痛的有效成分。與消炎痛比較，除本發(fā)明注射液高劑量在扭體次數(shù)上有差異外，其他本發(fā)明注射液中、低劑量給藥組無論是在扭體次數(shù)或首次扭體時(shí)間上均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，提示本發(fā)明注射液的鎮(zhèn)痛作用在較低劑量時(shí)強(qiáng)度與西藥陽性藥消炎痛組相當(dāng)。與中藥陽性對(duì)照藥比較，本發(fā)明注射液低劑量組的扭體次數(shù)比清開靈注射液少，作用強(qiáng)度大(P＜0.05)，本發(fā)明注射液中、高劑量組無論是在扭體次數(shù)抑或首次扭體時(shí)間上均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，提示本發(fā)明注射液的作用強(qiáng)度與清開靈注射液相當(dāng)，在低劑量時(shí)甚至優(yōu)于清開靈注射液；與本發(fā)明注射液比較，拆方各組在扭體次數(shù)及首次出現(xiàn)扭體時(shí)間上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，其中以葛根素注射液的效果最佳，三藥配伍有協(xié)同作用。
4.4討論以上結(jié)果提示①本發(fā)明注射液具有良好的鎮(zhèn)痛效果，從10min內(nèi)扭體的次數(shù)分析未見成一定量效關(guān)系，但從首次扭體時(shí)間上分析，本發(fā)明注射液劑量越高推遲扭體出現(xiàn)的時(shí)間越長。②從拆方對(duì)照角度分析，葛根素鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)，黃芩苷次之，?；撬釣楹?；三者劑量與本發(fā)明注射液中劑量相同，因此可以推斷本發(fā)明注射液各成分在鎮(zhèn)痛作用上有一定的協(xié)同增效作用。
5、本發(fā)明注射液的體外抗過敏作用摘要參照1994年版《新藥藥理毒理學(xué)研究指導(dǎo)原則》“致敏豚鼠離體回腸肌的過敏性收縮反應(yīng)”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，比較藥物對(duì)卵蛋白致致敏豚鼠離體回腸肌過敏性收縮反應(yīng)的抑制程度，從而推測本發(fā)明注射液的抗過敏效果。
5.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液抗過敏的效果5.2實(shí)驗(yàn)材料受試藥本發(fā)明注射液，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供。
陽性對(duì)照藥清開靈注射液，北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)511208A。鹽酸賽庚啶，2mg/片，常州四藥制藥有限公司提供，批號(hào)KD9290材料及試劑卵蛋白(sigma公司提供)；K-H液(自配)；BL-410生物信號(hào)采集系統(tǒng)，成都泰盟電子有限公司生產(chǎn)；拆方對(duì)照藥葛根素注射液，黃芩苷注射液，牛磺酸注射液，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物豚鼠，普通級(jí)，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。
5.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取豚鼠10只，體重200～250g。每只豚鼠兩后腿各肌注5％卵蛋白生理鹽水液0.4ml，同時(shí)腹腔注射該溶液1.0m以致敏，3周后將豚鼠放血處死，剖腹取回腸，剪成1cm左右腸段，置入盛有K-H液20ml的浴槽中，一端固定于浴槽底部的固定鉤上，另一端與拉力換能器相連，記錄收縮張力(g)。前負(fù)荷1～1.5g，恒溫37±1℃，平衡15min后開始實(shí)驗(yàn)。分別往浴槽加入以下試藥生理鹽水(模型組)、鹽酸賽庚啶生理鹽水溶液(陽性對(duì)照組)、清開靈注射液(陽性對(duì)照組)、本發(fā)明注射液(受試藥組)、葛根素注射液(拆方對(duì)照組)、黃芩苷注射液(拆方對(duì)照組)、?；撬嶙⑸湟?拆方對(duì)照組)，各藥物終濃度見表1。待藥物與標(biāo)本接觸5min后，向浴槽內(nèi)加入5mg/ml卵蛋白K-H溶液0.1ml進(jìn)行抗原攻擊，比較各組回腸收縮張力的差值，用t檢驗(yàn)比較各組差異有無顯著性。結(jié)果見表5。
表5 本發(fā)明注射液體外抗過敏作用(x±s)

注與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與清開靈注射液比較#p＜0.05，##p＜0.01；與鹽酸賽庚啶比較$p＜0.05，$$p＜0.01；與本發(fā)明注射液中劑量，&p＜0.05，&&p＜0.01從表5可以看出與空白組比較，西藥陽性藥鹽酸賽庚啶、中藥陽性藥清開靈注射液、本發(fā)明注射液中、高劑量組均有極顯著抑制腸段收縮的作用(p＜0.01)；本發(fā)明注射液低劑量組、葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟壕酗@著抑制作用(p＜0.05)。與西藥陽性藥鹽酸賽庚啶比較，本發(fā)明注射液中、高劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，本發(fā)明注射液低劑量組有差異(p＜0.05)，提示本發(fā)明注射液中、高劑量組作用強(qiáng)度與西藥陽性藥鹽酸賽庚啶相近。與中藥陽性藥清開靈注射液比較，本發(fā)明注射液各劑量組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，提示本發(fā)明注射液各劑量組作用強(qiáng)度與中藥陽性藥清開靈注射液相近。拆方組中葛根素注射液、牛磺酸注射液，與中藥陽性藥清開靈注射液、西藥陽性藥鹽酸賽庚啶比較有差異(p＜0.05或p＜0.01)；與本發(fā)明注射液比較，葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟阂种七^敏性收縮的效果有差異(p＜0.05或p＜0.01)，黃芩苷注射液則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，提示黃芩苷是本發(fā)明注射液抗過敏作用的主要有效成分。
5.4討論以上結(jié)果提示生理鹽水空白對(duì)照組用抗原攻擊致敏豚鼠離體回腸后可產(chǎn)生明顯收縮反應(yīng)，清開靈注射液、鹽酸賽庚啶、本發(fā)明注射液均有顯著抑制其過敏性收縮反應(yīng)，本發(fā)明注射液呈一定量效關(guān)系。注射液各成分的抑制作用以黃芩苷最強(qiáng)，并有出現(xiàn)部分標(biāo)本未出現(xiàn)收縮反應(yīng)；?；撬帷⒏鸶匾种菩Ч伙@著，提示本發(fā)明注射液所含成分對(duì)抗過敏具有一定的協(xié)同作用。本發(fā)明注射液與清開靈注射液、鹽酸賽庚啶一樣具有快速抑制卵蛋白所致的腸段過敏性收縮，臨床上有望用于緩解支氣管哮喘、過敏性腸炎、蕁麻疹等I型超敏反應(yīng)。
6、本發(fā)明注射液對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響摘要通過測定給藥小鼠游泳時(shí)間的長短，比較各給藥組組間的游泳時(shí)間差異，從而判斷本發(fā)明注射液對(duì)小鼠抗應(yīng)激能力大小的影響。
6.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液對(duì)增進(jìn)抗應(yīng)激能力的影響。
6.2實(shí)驗(yàn)材料陽性對(duì)照藥青春寶，0.3g/粒，正大青春寶藥業(yè)有限公司(批號(hào)0403016)，清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠提供，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z11020269，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
拆方對(duì)照藥本發(fā)明注射液、葛根素注射液、黃芩苷注射液、牛磺酸注射液均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供。BS110S電子天平Sartorius公司產(chǎn)品。
器材50*30*25cm3的玻璃缸，負(fù)重物(1.8～2.8g)、溫度計(jì)，秒表。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
6.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
取小鼠90只，體重為18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分成9組空白組，青春寶陽性對(duì)照組，清開靈注射液陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液低、中、高劑量(按體重計(jì)算為臨床劑量的10、20、40倍，中劑量組黃芩苷的含藥量與清開靈注射液相同)組，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M。除青春寶灌胃給藥外，其余各組均采用肌肉注射給藥。給藥劑量見表1。動(dòng)物連續(xù)給藥7d，每天1次。末次給藥后1h，在小鼠尾部束一個(gè)小鼠體重10％的重物，分別將小鼠放入水深20cm、水溫保持20±0.5℃的玻璃缸中，立即計(jì)時(shí)，以小鼠頭部沉入水中10s不能浮出水面者即為體力耗竭時(shí)停止計(jì)時(shí)，所計(jì)時(shí)間為小鼠的游泳時(shí)間，結(jié)果見表6，用t檢驗(yàn)比較各組游泳時(shí)間有無差異性。
表6 本發(fā)明注射液對(duì)免疫器官重量的影響(x±s)

注與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與清開靈注射液比較#p＜0.05，##p＜0.01；與青春寶比較$p＜0.05，$$p＜0.01；與本發(fā)明注射液中劑量，&p＜0.05，&&p＜0.01表6結(jié)果表明與空白組比較，中藥陽性藥青春寶組有顯著差異(p＜0.01)，但清開靈注射液則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)；本發(fā)明注射液中、高劑量有差異(p＜0.05)；拆方組中?；撬嶙⑸湟阂嘤胁町?p＜0.05)，其余各組均與空白組均無統(tǒng)計(jì)差異；提示，陽性藥青春寶、本發(fā)明注射液中、高劑量、?；撬嶙⑸湟壕裳娱L小鼠游泳時(shí)間，提高小鼠抗應(yīng)激能力；清開靈注射液未表現(xiàn)延長小鼠游泳時(shí)間作用。與陽性藥青春寶組比較，本發(fā)明注射液中、高劑量無顯著性差異，提示本發(fā)明注射液中、高劑量組作用強(qiáng)度與陽性藥青春寶相近。與清開靈注射液比較，本發(fā)明注射液低、中、高劑量組作用強(qiáng)度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)，但本發(fā)明注射液中、高劑量組作用強(qiáng)度均強(qiáng)于清開靈注射液。拆方組中黃芩苷注射液與陽性藥青春寶組比較有差異(p＜0.05)；與本發(fā)明注射液比較，葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟阂种七^敏性收縮的效果無差異(p＞0.05)，但?；撬嶙⑸湟涸鲞M(jìn)動(dòng)物抗應(yīng)激能力的效果強(qiáng)于本發(fā)明注射液，提示?；撬嶙⑸湟菏潜景l(fā)明注射液增進(jìn)動(dòng)物抗應(yīng)激能力的主要有效成分，黃芩苷、葛根素在本發(fā)明注射液中增進(jìn)動(dòng)物抗應(yīng)激能力的有協(xié)同作用。
6.4討論從以上結(jié)果可以看出清開靈注射液對(duì)增進(jìn)動(dòng)物抗應(yīng)激能力的效果不明顯，而青春寶則效果顯著；本發(fā)明注射液呈一定量效關(guān)系，本發(fā)明注射液的中、高劑量組效果亦明顯，雖與清開靈注射液比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但對(duì)增進(jìn)動(dòng)物抗應(yīng)激能力的作用強(qiáng)于清開靈注射液；拆方對(duì)照組中只有?；撬嶙⑸湟旱男Ч黠@，提示本發(fā)明注射液中各成分在增強(qiáng)動(dòng)物抗應(yīng)激能力上具有一定的協(xié)同作用。
7、本發(fā)明注射液對(duì)單核吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響摘要免疫抑制劑可降低單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能，免疫增強(qiáng)劑則效果反之。本實(shí)驗(yàn)通過研究藥物對(duì)小鼠單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能的影響，從而判斷牛黃注射液對(duì)免疫功能的影響。
7.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液對(duì)免疫功能的影響。
7.2實(shí)驗(yàn)材料受試藥本發(fā)明注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供。
陽性對(duì)照藥醋酸潑尼松，5mg/片，廣東華南藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050301；清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
拆方對(duì)照藥黃芩苷注射液、葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟?，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供。
器材10S電子天平Sartorius公司產(chǎn)品；722光柵分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；中華墨汁實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
7.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取小鼠90只，體重為18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分成9組空白組，醋酸潑尼松陽性對(duì)照組，清開靈注射液陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液低、中、高劑量(按體重及算為臨床劑量的10、20、40倍，中劑量組黃芩苷的含藥量與清開靈注射液相同)組，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M。除醋酸潑尼松灌胃給藥外，其余各組均采用肌肉注射給藥。給藥劑量見表2。，動(dòng)物連續(xù)給藥7天，每天1次。末次給藥后0.5小時(shí)，尾靜脈注射中華墨汁(用生理鹽水液稀釋2倍)0.1ml/10g，于注入墨汁后2min及12min，用特制吸管從小鼠眼眶后靜脈叢取血20μl，立刻吹入0.1％Na2CO3溶液3ml中，吸管于該液中吸入吹出數(shù)次充分洗出吸管壁附著之血液，以0.025ml正常小鼠血容于10ml0.1％Na2CO3溶液校零，于675nm處測定吸收度(D)值，計(jì)算吞噬指數(shù)K。
K=logOD1-logOD2t2-t1]]>結(jié)果見表7。
表7 本發(fā)明注射液對(duì)單核吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響(x±s)

注與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與清開靈注射液比較#p＜0.05，##p＜0.01；與醋酸潑尼松比較$p＜0.05，$$p＜0.01；與本發(fā)明注射液中劑量，&p＜0.05，&&p＜0.01表7結(jié)果顯示與空白組比較，西藥陽性藥醋酸潑尼松組降低小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能(p＜0.01)，但中藥陽性藥清開靈注射液則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)；本發(fā)明注射液低、中、高劑量能增強(qiáng)小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，其中高劑量有極顯著差異(P＜0.01)，中劑量亦有顯著差異(p＜0.05)；拆方組葛根素注射液有差異(p＜0.05)；提示，醋酸潑尼松可抑制小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，降低免疫系統(tǒng)功能；本發(fā)明注射液中、高劑量、葛根素注射液均可增強(qiáng)小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，提高免疫系統(tǒng)功能；清開靈注射液未表現(xiàn)對(duì)免疫系統(tǒng)功能影響作用。拆方組中，黃芩苷注射液和?；撬嶙⑸湟号c空白組比較沒有對(duì)小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能影響作用(P＞0.05)，葛根素注射液可顯著增強(qiáng)小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，提高免疫系統(tǒng)功能；提示葛根素是本發(fā)明注射液提高小鼠免疫系統(tǒng)功能作用的主要有效成分。
7.4討論從以上結(jié)果可以看出①本發(fā)明注射液具有促進(jìn)小鼠單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能，提示其具有提高免疫功能的作用，并呈一定的量效關(guān)系。②從拆方配伍角度分析，葛根素增強(qiáng)免疫功能作用最強(qiáng)，黃芩苷次之，牛磺酸為后，三者結(jié)合具有一定協(xié)同作用；③同等劑量的本發(fā)明注射液對(duì)促進(jìn)小鼠單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能作用明顯優(yōu)于清開靈注射液。
8、本發(fā)明注射液對(duì)免疫性肝損傷的保護(hù)作用摘要利用刀豆蛋白靜脈注射致小鼠急性免疫性肝損傷，觀察藥物對(duì)小鼠肝損傷的保護(hù)作用；通過計(jì)算肝臟、脾臟、胸腺的臟器系數(shù)，檢測AST、ALT、SOD、MDA的含量，判斷藥物對(duì)小鼠急性免疫性肝損傷的保護(hù)作用。
8.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液對(duì)急性免疫性肝損傷的保護(hù)作用。
8.2實(shí)驗(yàn)材料受試藥本發(fā)明注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供陽性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯滴丸北京協(xié)和藥廠產(chǎn)品，批號(hào)04060107材料及試劑AST、ALT、SOD、MDA試劑盒購于南京建成生物研究所，批號(hào)20050707；LDZ5型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；722光柵分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
8.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取NIH小鼠18～22g48只，雌雄各半，隨機(jī)分成4個(gè)組空白組，模型組，聯(lián)苯雙酯陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液中劑量(按重量算相當(dāng)于臨床劑量的20倍)組，本發(fā)明注射液肌肉注射給藥，聯(lián)苯雙酯灌胃給藥，給藥劑量見表1。連續(xù)給藥3d，第四天早上除空白組外每只小鼠尾靜脈注射刀豆蛋白16mg/kg，，于造模后及當(dāng)天下午、第二天下午繼續(xù)給藥。末次給藥后4h，模型組和給藥組各鼠一次性尾靜脈注射刀豆蛋白16mg/kg。12h后小鼠摘眼球取血，分離血清，用于檢測AST、ALT，解剖取肝、脾、胸腺稱重，計(jì)算臟器系數(shù)，取部分肝組織勻漿檢測SOD、MDA。t檢驗(yàn)比較各組動(dòng)物肝臟、脾臟、胸腺的臟器系數(shù)、AST、ALT、SOD、MDA的含量差異有無顯著性。結(jié)果見表8、9。
表8 本發(fā)明注射液對(duì)小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用(x±s)

表9


注與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與模型組比較#p＜0.05，##p＜0.01；與聯(lián)苯雙酯比較，$p＜0.05，$$p＜0.01表8、9結(jié)果顯示與空白組比較，模型組各項(xiàng)指標(biāo)基本與空白組有差異，提示本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型造摸成功；與模型組比較，陽性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯和本發(fā)明注射液組各項(xiàng)指標(biāo)除脾臟系數(shù)外均有差異(p＜0.05)；而與陽性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯比較，本發(fā)明注射液各項(xiàng)指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)；除SOD、MDA指標(biāo)外，其它給藥組檢測指標(biāo)(肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)、AST、ALT)基本與空白組有差異(p＜0.05)；提示本發(fā)明注射液對(duì)刀豆蛋白靜脈注射致小鼠急性免疫性肝損傷有一定的保護(hù)作用，作用強(qiáng)度與陽性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯相同，免疫性肝損傷小鼠的SOD、MDA指標(biāo)可以恢復(fù)到空白組水平。
8.4討論從以上結(jié)果可以看出模型組的各項(xiàng)檢測指標(biāo)基本與空白組有差異，肝、脾腫大，血清轉(zhuǎn)胺酶濃度升高，組織過氧化產(chǎn)物增多，表明此造模方法成功，能造成小鼠急性肝損傷；肝損傷小鼠給予聯(lián)苯雙酯及本發(fā)明注射液后，能減少肝、脾等的腫大程度，降低血清中AST、ALT含量，組織中SOD比模型組高、MDA比模型組低，表明藥物具有保肝、抗過氧化作用；同時(shí)，本發(fā)明注射液各項(xiàng)檢測指標(biāo)結(jié)果與聯(lián)苯雙酯無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明本發(fā)明注射液具有良好的保肝降酶效果。
9、復(fù)方牛黃注射液對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)的影響摘要研究藥物對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)的影響。利用二硝基氯苯(DSCB)涂抹小鼠皮膚使其致敏，分別給予致敏小鼠生理鹽水、三種不同劑量的復(fù)方牛黃注射液、清開靈注射液、鹽酸賽庚啶；10d后再以DSCB攻擊小鼠一側(cè)耳廓，使其耳廓產(chǎn)生遲發(fā)型皮膚過敏反應(yīng)。通過精密測定抗原攻擊后兩耳的重量差異，比較模型組、給藥組小鼠的過敏反應(yīng)程度，從而判斷注射液對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)的影響。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯繌?fù)方牛黃注射液對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)的影響。
9.1實(shí)驗(yàn)材料受試藥復(fù)方牛黃注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供陽性對(duì)照藥鹽酸賽庚啶，2mg/片，常州四藥制藥有限公司，批號(hào)KD9290。
清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠提供，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z11020269，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
拆方對(duì)照藥葛根素注射液、黃芩苷注射液、牛磺酸注射液，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供。
試劑二硝基氯苯(DSCB)，上海南翔試劑有限公司生產(chǎn)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
9.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取NIH小鼠22～25g，118只，雌雄各半，隨機(jī)分成9個(gè)組模型組，鹽酸賽庚啶陽性對(duì)照組，清開靈注射液陽性對(duì)照組，復(fù)方牛黃注射液低、中、高劑量組(按體重計(jì)算相當(dāng)于臨床劑量的10、20、40倍，中劑量組的給藥量與清開靈注射液相同)，葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M。用5％的2、4-二硝基氯苯乙醇液涂布于小鼠腹部皮膚(去毛)致敏，致敏前一天給藥，除鹽酸賽庚啶灌胃給藥外，其余均采用肌肉注射，給藥劑量見表1，每天一次，連續(xù)9天。致敏后第7天用1％的2、4二硝基氯苯涂右耳，24h后處死小鼠，剪取耳片稱重，以左右兩耳片重量差值作為遲發(fā)型超敏反應(yīng)值，結(jié)果見表10。
表10 復(fù)方牛黃注射液對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)的影響(x±s)

注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與鹽酸賽庚啶組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與清開靈注射液組比較ψP＜0.05，ψψP＜0.01；與復(fù)方牛黃注射液中劑量比較&P＜0.05，&&P＜0.01。
表10結(jié)果顯示，與模型組比較，西藥陽性藥鹽酸賽庚啶對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)有明顯抑制作用(P＜0.01)；復(fù)方牛黃注射液高、中劑量組對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)有抑制作用(P＜0.01，P＜0.05)。與鹽酸賽庚啶組比較，復(fù)方牛黃注射液高、中劑量組無顯著差異(P＞0.05)；中藥陽性藥清開靈注射液組、復(fù)方牛黃注射液低劑量組、葛根素注射液組，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M在對(duì)小鼠皮膚產(chǎn)生遲發(fā)型過敏反應(yīng)的抑制作用上均有差異(P＜0.05)；提示復(fù)方牛黃注射液高、中劑量組在作用強(qiáng)度上與西藥陽性藥鹽酸賽庚啶相似，其他給藥組作用強(qiáng)度低于鹽酸賽庚啶。與清開靈注射液組比較，復(fù)方牛黃注射液低、中、高劑量組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，但作用強(qiáng)度強(qiáng)于清開靈注射液組。拆方研究表明，葛根素注射液組對(duì)小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)有抑制作用(P＜0.05)，黃芩苷注射液組，?；撬嶙⑸湟航M均無顯著作用(P＞0.05)，但亦可一定程度上抑制小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)；與復(fù)方牛黃注射液中劑量組比較，葛根素注射液組、黃芩苷注射液組、?；撬嶙⑸湟航M均無顯著差異(P值均＞0.05)，但葛根素注射液組作用強(qiáng)度強(qiáng)于中劑量組，提示葛根素為抑制小鼠皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)的主要有效成分。
9.4討論以上結(jié)果顯示各藥物具有抑制小鼠皮膚產(chǎn)生遲發(fā)型過敏反應(yīng)的作用，其中有顯著抑制作用的為鹽酸賽庚啶組及復(fù)方牛黃注射液高劑量組，清開靈注射液、復(fù)方牛黃注射液中劑量組、葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟弘m與模型組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但具有不同程度的抑制作用。從拆方對(duì)照組的抑制作用看，10、對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用摘要探討本發(fā)明注射液對(duì)四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。用CCl4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型，將實(shí)驗(yàn)小鼠分為空白對(duì)照組(即正常對(duì)照組)、CCl4模型組、西藥聯(lián)苯雙酯對(duì)照組、中藥清開靈對(duì)照組、本發(fā)明注射液(低、中、高劑量)組、拆方對(duì)照組(黃芩苷注射液、葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟?。通過檢測各組小鼠血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量，觀察肝、脾、胸腺系數(shù)變化，從而判斷本發(fā)明注射液對(duì)四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。
10.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液對(duì)四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。
10.2實(shí)驗(yàn)材料受試藥本發(fā)明注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供陽性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯滴丸北京協(xié)和藥廠產(chǎn)品，批號(hào)04060107。清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
材料及試劑AST、ALT、SOD、MDA試劑盒購于南京建成生物研究所，批號(hào)20050707；LDZ5型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；722光柵分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司；四氯化碳，廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；食用花生油，東莞威威食品有限公司生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
10.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取NIH雄性小鼠22～25g100只，隨機(jī)分成10個(gè)組空白組，模型組，聯(lián)苯雙酯陽性對(duì)照組，清開靈陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液低、中、高劑量組，黃芩苷注射液組，葛根素注射液組、?；撬嶙⑸湟航M。除聯(lián)苯雙酯灌胃給藥，其它各組均肌肉注射給藥，空白組及模型組給予等容積的生理鹽水。給藥劑量見表1，連續(xù)給藥7d，第七天動(dòng)物禁食不禁水，并于最末1次給藥后2h，除空白對(duì)照組灌服花生油10mL/kg外，其余各組均灌服0.10％CCl4花生油溶液20mL/kg，禁食過夜。24h后眼眶靜脈叢采血，分離血清檢測ALT、AST的值；剖腹取出肝臟、脾臟、胸腺，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精確稱重肝臟、脾臟、胸腺的重量。t檢驗(yàn)比較各組動(dòng)物肝臟、脾臟、胸腺的臟器系數(shù)、AST、ALT的含量差異有無顯著性。結(jié)果見表11。
表11 本發(fā)明注射液對(duì)四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用(x±s)

注與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與模型組比較△p＜0.05，△△p＜0.01；與聯(lián)苯雙酯比較，#p＜0.05，##p＜0.01；與清開靈注射液比較，$p＜0.05，$$p＜0.01與本發(fā)明注射液中劑量比較，&p＜0.05，&&p＜0.01.
表11結(jié)果顯示與空白組比較，模型組小鼠肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值各項(xiàng)指標(biāo)均與空白組有差異(p＜0.05)，提示造模成功。與模型組比較，西藥陽性藥聯(lián)苯雙酯、中藥陽性藥清開靈注射液組小鼠肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值指標(biāo)均有差異(p＜0.05)，說明聯(lián)苯雙酯及清開靈注射液均可降低CCl4所致急性肝損傷小鼠肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值各項(xiàng)指標(biāo)，對(duì)CCl4所致急性肝損傷小鼠有一定保護(hù)作用；本發(fā)明注射液各劑量組肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值指標(biāo)均有差異(p＜0.05)，提示本發(fā)明注射液對(duì)CCl4所致急性肝損傷小鼠也有一定保護(hù)作用，并在肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值三個(gè)指標(biāo)具有明顯的量效關(guān)系。與空白組比較，西藥陽性藥聯(lián)苯雙酯組小鼠血清AST值指標(biāo)無差異(p＞0.05)，提示聯(lián)苯雙酯可降低CCl4所致劑型肝損傷小鼠AST值指標(biāo)至正常水平；本發(fā)明注射液組血清ALT值、AST值指標(biāo)無差異(p＞0.05)，提示本發(fā)明注射液可降低CCl4所致劑型肝損傷小鼠血清ALT值、AST值指標(biāo)至正常水平。與西藥陽性藥聯(lián)苯雙酯組比較，本發(fā)明注射液不同劑量各項(xiàng)指標(biāo)基本無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，提示本發(fā)明注射液對(duì)CCl4所致劑型肝損傷小鼠保護(hù)作用與聯(lián)苯雙酯相似，其中高劑量作用強(qiáng)度強(qiáng)于聯(lián)苯雙酯，本發(fā)明注射液各劑量組小鼠血清AST指標(biāo)均優(yōu)于聯(lián)苯雙酯組。與中藥陽性藥清開靈注射液比較，本發(fā)明注射液中、高劑量血清AST值指標(biāo)均有差異(p＜0.05)，提示本發(fā)明注射液對(duì)小鼠血清AST值指標(biāo)作用強(qiáng)度強(qiáng)于清開靈注射液。拆方組中葛根素注射液、牛磺酸注射液、黃芩苷注射液與模型組比較，肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值各項(xiàng)指標(biāo)均顯著性差異(p＜0.05)，提示各拆方組對(duì)CCl4所致急性肝損傷小鼠均有一定保護(hù)作用；與本發(fā)明注射液中劑量比較，?；撬嶙⑸湟航M肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值指標(biāo)均有差異(p＜0.05或p＜0.01)；葛根素注射液組AST值指標(biāo)有差異(p＜0.05)；黃芩苷注射液則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)；但各拆方組對(duì)CCl4所致急性肝損傷小鼠保護(hù)作用強(qiáng)度均低于本發(fā)明注射液，提示本發(fā)明注射液三藥配伍應(yīng)用，藥效增強(qiáng)，提示本方三種成分配伍有協(xié)同、增效作用。
10.4討論從以上結(jié)果可以看出模型組的各項(xiàng)檢測指標(biāo)基本與空白組有差異，肝腫大，血清轉(zhuǎn)胺酶濃度顯著升高，表明此造模方法成功，能造成小鼠急性肝損傷；給予聯(lián)苯雙酯、清開靈注射液、本發(fā)明注射液、黃芩苷注射液、葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟哼M(jìn)行保護(hù)性給藥，能減少肝、脾等的腫大程度，降低血清中AST、ALT含量，表明藥物具有保肝、降酶作用；同時(shí)，本發(fā)明注射液各項(xiàng)檢測指標(biāo)結(jié)果優(yōu)于聯(lián)苯雙酯及清開靈注射液，表明本發(fā)明注射液具有良好的保肝降酶效果，能改善化學(xué)試劑四氯化碳引起的急性肝損傷。
11、對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用摘要探討本發(fā)明注射液對(duì)酒精所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。將實(shí)驗(yàn)小鼠分為空白對(duì)照組(即正常對(duì)照組)、酒精模型組、西藥聯(lián)苯雙酯對(duì)照組、中藥清開靈對(duì)照組、本發(fā)明注射液(低、中、高劑量)組、拆方對(duì)照組(黃芩苷注射液、葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟?，各組采取保護(hù)性連續(xù)給藥七天，末次給藥后用60％酒精一次性灌服致小鼠急性肝損傷。通過檢測造模后各組小鼠血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量，觀察肝、脾、胸腺系數(shù)變化，從而判斷本發(fā)明注射液對(duì)酒精所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。
11.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯勘景l(fā)明注射液對(duì)酒精碳所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。
11.2實(shí)驗(yàn)材料
受試藥本發(fā)明注射液，廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供陽性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯滴丸北京協(xié)和藥廠產(chǎn)品，批號(hào)04060107。清開靈注射液北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)511208A。
材料及試劑AST、ALT、SOD、MDA試劑盒購于南京建成生物研究所，批號(hào)20050707；LDZ5型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；722光柵分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司；無水乙醇，廣州化學(xué)試劑廠提供。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。SPF級(jí)，正常飼養(yǎng)3天后供試。
11.3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取NIH小鼠22～25g100只，雌雄各半，隨機(jī)分成10個(gè)組空白組，模型組，聯(lián)苯雙酯陽性對(duì)照組，清開靈陽性對(duì)照組，本發(fā)明注射液低、中、高劑量組(按體重計(jì)算相當(dāng)于臨床劑量的10、20、40倍)，黃芩苷注射液組，葛根素注射液組、牛磺酸注射液組。除聯(lián)苯雙酯灌胃給藥，它各組均肌肉注射給藥，空白組及模型組給予等容積的生理鹽水。給藥劑量見表1，連續(xù)給藥7d，第七天動(dòng)物禁食不禁水，并于最末1次給藥后2h，除空白對(duì)照組灌服等容量的生理鹽水外，其余各組均灌服60％酒精溶液20mL/kg，繼續(xù)禁食。12h后眼眶靜脈叢采血，分離血清檢測ALT、AST的值；剖腹取出肝臟、脾臟、胸腺，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精確稱重肝臟、脾臟、胸腺的重量。t檢驗(yàn)比較各組動(dòng)物肝臟、脾臟、胸腺的臟器系數(shù)、AST、ALT的含量差異有無顯著性。結(jié)果見表12。
表12 本發(fā)明注射液對(duì)酒精所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用(x±s)

注與空白組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與模型組比較△p＜0.05，△△p＜0.01；與聯(lián)苯雙酯比較，#p＜0.05，##p＜0.01；與清開靈注射液比較，$p＜0.05，$$p＜0.01；與本發(fā)明注射液中劑量比較，&p＜0.05，&&p＜0.01。
表12結(jié)果顯示與空白組比較，模型組小鼠肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值各項(xiàng)指標(biāo)均與空白組有差異(p＜0.05)，提示造模成功。與模型組比較，西藥陽性藥聯(lián)苯雙酯、中藥陽性藥清開靈注射液組小鼠肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值指標(biāo)均有極顯著差異(p＜0.05)，說明聯(lián)苯雙酯及清開靈注射液均可顯著降低酒精所致急性肝損傷小鼠肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值各項(xiàng)指標(biāo)，對(duì)酒精所致急性肝損傷小鼠有良好的保護(hù)作用；本發(fā)明注射液各劑量組，肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值指標(biāo)均有極顯著差異(p＜0.05)，提示本發(fā)明注射液對(duì)酒精所致急性肝損傷小鼠也有良好保護(hù)作用，并在肝臟系數(shù)指標(biāo)具有明顯的量效關(guān)系。與空白組比較，西藥陽性藥聯(lián)苯雙酯組各項(xiàng)指標(biāo)均無差異(p＞0.05)，提示聯(lián)苯雙酯可降低酒精所致劑型肝損傷小鼠各指標(biāo)至正常水平；中藥陽性藥清開靈注射液小鼠血清ALT值、AST值指標(biāo)無差異(p＞0.05)，提示清開靈注射液可降低酒精所致劑型肝損傷小鼠血清ALT值、AST值指標(biāo)至正常水平；本發(fā)明注射液組各項(xiàng)指標(biāo)無差異(p＞0.05)，提示本發(fā)明注射液可降低酒精所致劑型肝損傷小鼠各項(xiàng)指標(biāo)至正常水平。與西藥陽性藥聯(lián)苯雙酯組比較，本發(fā)明注射液不同劑量小鼠血清ALT值指標(biāo)均有差異(p＜0.05)，其它指標(biāo)無差異，提示本發(fā)明注射液對(duì)酒精所致劑型肝損傷小鼠保護(hù)作用與聯(lián)苯雙酯相似，其中對(duì)ALT值指標(biāo)作用強(qiáng)度強(qiáng)于聯(lián)苯雙酯組。與中藥陽性藥清開靈注射液比較，本發(fā)明注射液肝臟系數(shù)指標(biāo)均有差異(p＜0.05)，提示本發(fā)明注射液對(duì)肝臟系數(shù)指標(biāo)作用強(qiáng)度強(qiáng)于清開靈注射液。拆方組中葛根素注射液、?；撬嶙⑸湟?、黃芩苷注射液與模型組比較，肝臟系數(shù)、血清ALT值、AST值各項(xiàng)指標(biāo)均顯著性差異(p＜0.05)，提示各拆方組對(duì)酒精所致急性肝損傷小鼠均有一定保護(hù)作用；與本發(fā)明注射液中劑量比較，?；撬嶙⑸湟?、葛根素注射液、黃芩苷注射液組血清ALT值、AST值指標(biāo)均有差異(p＜0.05或p＜0.01)；提示各拆方組對(duì)酒精所致急性肝損傷小鼠保護(hù)作用強(qiáng)度均低于本發(fā)明注射液，本發(fā)明注射液三藥配伍應(yīng)用，藥效增強(qiáng)，提示本方三種成分配伍有協(xié)同、增效作用。
11.4討論從以上結(jié)果可以看出模型組的各項(xiàng)檢測指標(biāo)基本與空白組有差異，肝、脾腫大，血清轉(zhuǎn)胺酶濃度顯著升高，表明此造模方法成功，能造成小鼠急性肝損傷；給予聯(lián)苯雙酯、清開靈注射液、本發(fā)明注射液、黃芩苷注射液、葛根素注射液、牛磺酸注射液進(jìn)行保護(hù)性給藥，能減少酒精引起的肝、脾等的腫大程度，降低血清中AST、ALT含量，表明藥物具有保肝、降酶作用；同時(shí)，本發(fā)明注射液各項(xiàng)檢測指標(biāo)結(jié)果與聯(lián)苯雙酯無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，保肝作用基本優(yōu)于清開靈注射液，表明本發(fā)明注射液具有良好的保肝降酶效果，能預(yù)防酒精引起的急性肝損傷。
12、復(fù)方牛磺注射液溶血試驗(yàn)報(bào)告
12.1材料12.1.1受試藥物復(fù)方?；亲⑸湟海蓮V州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供，批號(hào)20050809。
12.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Beagle犬1只(9.0kg♀)，由-------------研究所Beagle犬養(yǎng)殖場提供合格證號(hào)，醫(yī)動(dòng)字------------。室溫17～20℃，相對(duì)濕度60％～68％。
12.1.3試劑、儀器氯化鈉注射液，批號(hào)030701，四川省奇力同心制藥有限公司生產(chǎn)；XLJ-II型離心沉淀機(jī)，上海醫(yī)用儀器廠；小型三用恒溫水浴箱，北京醫(yī)療設(shè)備廠。
12.2方法采Beagle犬前肢靜脈血10ml，用玻璃球珠在錐形玻璃瓶中除去纖維蛋白，置于刻度離心管內(nèi)，加入適量的氯化鈉注射液，以2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，棄去上液，再加氯化鈉注射液混勻、離心，如此反復(fù)洗滌，至離心后上液呈無色透明為止，將所得紅細(xì)胞用氯化鈉注射液制備成2％紅細(xì)胞懸液。取7支試管按表1加入藥液量，再加氯化鈉注射液至總量2.5ml，與2％紅細(xì)胞懸液2.5ml混合，各管搖勻，放置在37℃恒溫水箱中，分別于15、30、60分鐘，2、3、4、6小時(shí)以及次日觀察各管有無溶血及紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。
受試藥物加入方法見表13，溶血判斷方法見表14。
表13 受試藥物加入方法

表14 溶血判斷方法

12.3.結(jié)果見表15。
表15 凍干粉溶血試驗(yàn)結(jié)果


注“+”表示溶血，“-”表示不溶血結(jié)果顯示復(fù)方?；亲⑸湟航M(1～5號(hào)管)和氯化鈉注射液對(duì)照組(6號(hào)管)在觀察時(shí)間內(nèi)，上清液澄明無色，紅細(xì)胞下沉，未見溶血，振搖后紅細(xì)胞能均勻分散，無凝集；蒸餾水對(duì)照組(第7號(hào)管)加入紅細(xì)胞后，可看見溶血，管底無細(xì)胞殘留，振搖后不見液體中有懸浮物，紅細(xì)胞被蒸餾水全部破壞，始終為紅色。
12.4.結(jié)論復(fù)方?；亲⑸湟簩?duì)Beagle犬靜脈血溶血試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1本發(fā)明的藥物組合物的注射液的制備取?；撬?5g，黃芩苷10g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，濾液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃滅菌30min，得到注射液。
實(shí)施例2本發(fā)明的藥物組合物的注射液的制備取牛磺酸40g，黃芩苷30g，葛根素20g，加水至1000ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，濾液灌封在2、5或10ml的安瓿中，100℃滅菌30min，得到注射液。
實(shí)施例3本發(fā)明的藥物組合物的粉針的制備取?；撬?5g，黃芩苷10g，葛根素5g，加水至500ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，濾液100℃滅菌30min，，，灌封在10ml的粉針安瓿中，100℃滅菌30min，得到粉針。
實(shí)施例4本發(fā)明的藥物組合物的合劑的制備取?；撬?0g，黃芩苷20g，葛根素10g，加水至200ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，加入蔗糖等矯味劑，灌封在10ml的口服液瓶中，即得合劑。
實(shí)施例5本發(fā)明的藥物組合物片劑的制備
取?；撬?0g，黃芩苷20g，葛根素10g，加淀粉、羧甲基纖維素，制粒，壓片。
實(shí)施例6本發(fā)明的藥物組合物膠囊劑的制各取?；撬?0g，黃芩苷50g，葛根素30g，加淀粉、羧甲基纖維素，制粒，灌裝膠囊，即得膠囊劑。
實(shí)施例7本發(fā)明的藥物組合物軟膠囊劑的制備取?；撬?0g，黃芩苷50g，葛根素50g，加植物油，灌裝軟膠囊，即得軟膠囊劑。
實(shí)施例8本發(fā)明的藥物組合物的丸劑的制備取?；撬?0g，黃芩苷20g，葛根素10g，加淀粉、煉蜜，泛丸，即得丸劑。
實(shí)施例9本發(fā)明的藥物組合物的滴丸的制備取?；撬?g，黃芩苷5g，葛根素5g，加聚乙二醇，制滴丸，即得滴丸。
實(shí)施例10本發(fā)明的藥物組合物的顆粒劑的制備取牛磺酸50g，黃芩苷40g，葛根素40g，加淀粉、羧甲基纖維素，制粒，即得顆粒劑。
實(shí)施例11本發(fā)明的藥物組合物的口服液，用于治療小兒外感高熱取?；撬?0g，黃芩苷5g，葛根素2g，加水至1000ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，加入蔗糖等矯味劑，灌封在10ml的口服液瓶中，制成口服液。用于小兒外感高熱20例，一日三次，一次10ml，服藥后解熱效果明顯，在兩小時(shí)內(nèi)均有體溫下降的作用，有效率為90％。
實(shí)施例12本發(fā)明的藥物組合物的口服液，用于治療酒精性肝損傷取?；撬?0g，黃芩苷30g，葛根素20g，加水至1000ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，加入蔗糖等矯味劑，灌封在10ml的口服液瓶中，制成口服液。用于治療酒精性肝損傷40例，一日三次，一次10ml，服藥后有效率為87.5％。
實(shí)施例13本發(fā)明的藥物組合物的口服液，用于治療乙型慢性肝炎取?；撬?5g，黃芩苷10g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，加入蔗糖等矯味劑，灌封在10ml的口服液瓶中，制成口服液。用于治療乙型慢性肝炎10例，一日三次，一次10ml，服藥后疲勞感消失，食欲增加，有效率為100％。
實(shí)施例14本發(fā)明的藥物組合物的口服液，用于治療小兒外感高熱取?；撬?5g，黃芩苷10g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，加入蔗糖等矯味劑，灌封在10ml的口服液瓶中，制成口服液。與銀翹解毒顆粒合用，用于治療小兒外感高熱10例，一日三次，一次10ml，服藥后解熱效果明顯，在兩小時(shí)內(nèi)均有體溫下降的作用，有效率為90％。
實(shí)施例15本發(fā)明的藥物組合物的口服液，用于治療小兒外感高熱取牛磺酸25g，黃芩苷10g，葛根素5g，加水至1000ml，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至6.5-7.5，過濾，加入蔗糖等矯味劑，灌封在10ml的口服液瓶中，制成口服液。與銀翹解毒顆粒合用，用于治療小兒外感高熱10例，一日三次，一次10ml，服藥后解熱效果明顯，在兩小時(shí)內(nèi)均有體溫下降的作用，有效率為90％。
權(quán)利要求
1.一種用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物，其特征在于它由以下重量份的中藥成分組成?；撬?～50重量份，黃芩苷1～50重量份，葛根素1～50重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物，其特征在于它由以下重量份的中藥成分組成?；撬?0～40重量份，黃芩苷5～30重量份，葛根素2～20重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物，其特征在于它由以下重量份的中藥成分組成?；撬?5重量份，黃芩苷10重量份，葛根素5重量份。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物中可以加入其它一種或多種中藥材、中藥提取物或中藥有效成分或西藥進(jìn)行配伍，制成各種藥品。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物，其特征在于其可加入輔料或賦形劑制成臨床可接受的注射液、粉針、輸液、合劑、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、顆粒劑。
6.一種制備權(quán)利要求1所述的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物的方法，其特征在于以上三味，混合，加輔料適量，混勻，制成臨床上可接受的各種劑型。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物的制備方法，其特征在于取以上三味，加水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至6.0-8.0，過濾，濾液灌封在安瓿中，滅菌，得到注射液。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物的制備方法，其特征在于取以上三味，加水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至6.0-8.0，過濾，濾液滅菌后灌封在粉狀安瓿中，再次滅菌，得到粉針。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物的制備方法，其特征在于取以上三味，加水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至6.0-8.0，過濾，加入矯味劑，灌封在口服液瓶中，得到合劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物的制備方法，其特征在于取以上三味，加淀粉、羧甲基纖維素，制粒，壓片，得到片劑或者，灌裝膠囊，得到膠囊劑或者軟膠囊劑或者，加淀粉、煉蜜，泛丸，得到丸劑或者，加聚乙二醇，得到滴丸劑或者，加淀粉、羧甲基纖維素，制粒，得到顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于治療外感高熱和急慢性肝損傷的中藥成分組合物，其特征在于它由以下重量份的中藥成分組成?；撬?～50重量份，黃芩苷1～50重量份，葛根素1～50重量份。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是有效成分清楚、質(zhì)量可控程度高、藥理作用機(jī)理明確，安全性高。
文檔編號(hào)A61K9/08GK1813780SQ20051010182
公開日2006年8月9日 申請(qǐng)日期2005年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月1日
發(fā)明者蘇子仁, 賴小平, 陳建南 申請(qǐng)人:廣州中醫(yī)藥大學(xué)