專利名稱：包含生物素殘基的抗血栓形成的雙重抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的含有生物素殘基或生物素衍生物的抗血栓形成的雙重抑制劑、它們的制備方法、含有作為活性成分的該化合物的藥物組合物、以及該化合物用于制備藥物的用途。
在尋找與肝素相比時(shí)具有相似或更好抗血栓形成性質(zhì)的合成活性藥用物質(zhì)中的最近進(jìn)展，導(dǎo)致新的雙重抑制劑(例如WO 99/65934和WO 01/42262中所述的)的設(shè)計(jì)。那些化合物通常是通過基本上藥理學(xué)上無活性的間隔基與直接凝血酶抑制劑連接的寡糖殘基的綴合物。分子中的寡糖殘基顯示了抗凝血酶III(AT-III)介導(dǎo)的抗-Xa活性。因此，新的綴合物具有雙重、抗血栓形成和抗凝血的活性。
該類新的雙重抑制劑的優(yōu)異實(shí)例是用代碼名稱Org 42675顯示的化合物，其中五糖與凝血酶的直接抑制劑連接，具有以下結(jié)構(gòu) 在實(shí)驗(yàn)性的血栓形成中的研究已經(jīng)證明，此化合物除了有效的抗凝血和抗血栓形成的性質(zhì)之外，還抑制凝塊結(jié)合的凝血酶的活性。進(jìn)一步，在預(yù)防閉合性動(dòng)脈血栓的血栓溶解后血栓形成性再閉塞中，Org42675好像是高度有效的。與由NAPAP衍生的相應(yīng)非-綴合的直接凝血酶抑制劑相比，該化合物顯示了10-倍延長的半衰期。同阿加曲班、肝素和磺達(dá)肝素相比，Org 42675顯示了改進(jìn)的功效(Journal ofThrombosis and Haemostasis，第1卷，第9期，第1945頁，2003年)。
新的雙重抑制劑的臨床潛力被認(rèn)為是巨大的，因此已經(jīng)開始了臨床試驗(yàn)。
作為預(yù)防性措施，在抗凝血和抗血栓形成治療的領(lǐng)域內(nèi)，需要一種解毒劑，其能夠有效地使所用的抗凝血或抗血栓形成藥的活性中和或降到最低。這是因?yàn)楸娝苤氖?，在由于任何偶然原因而進(jìn)行治療的患者中可能觸發(fā)出血。而且，在進(jìn)行抗血栓形成或抗凝血治療的患者中進(jìn)行手術(shù)干預(yù)可能是必要的。此外，在某些手術(shù)操作過程中，可以高劑量使用抗凝血藥，以便防止血液凝固，并且在手術(shù)結(jié)束時(shí)使它們中和是必需的。因此可得到可以被中和，以便在任何時(shí)間停止抗血栓形成/抗凝血活性的抗血栓形成/抗凝血?jiǎng)┦怯欣摹?br> 在US 2004/0024197中公開了，在緊急的情況下，使用抗生物素蛋白可以降低某些多糖的抗血栓形成活性，如果那些多糖含有至少一個(gè)與生物或生物素衍生物的共價(jià)鍵。
本發(fā)明涉及新的由WO 99/65934和WO 01/42262中所述的雙重抑制劑衍生的可中和雙重抑制劑。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，某些生物素“標(biāo)簽”(為基團(tuán) 在這篇文獻(xiàn)中也被稱為“BT”(由六氫-2-氧代-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-戊酸，優(yōu)選D(+)-異構(gòu)體產(chǎn)生)或其類似物)可被連接至或引入到WO 99/65934和WO 01/42262中所述化合物的結(jié)構(gòu)中，得到可中和的雙重抑制劑。
因此，本發(fā)明涉及下式(I)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其前藥或溶劑合物寡糖-間隔基-A(I)，其中，寡糖是帶負(fù)電荷的寡糖殘基，含有2至25個(gè)單糖單元，該電荷被帶正電的反荷離子抵消，并且其中寡糖殘基是由本身具有(AT-III介導(dǎo)的)抗-Xa活性的寡糖產(chǎn)生的；間隔基是基本上藥理學(xué)上無活性的柔性連接殘基，具有10至70個(gè)原子的鏈長；A是殘基-CH[NH-SO2-R1][CO-NR2-CH(4-芐脒)-CO-NR3R4]，其中，R1是苯基、萘基、1，2，3，4-四氫萘基、(異)喹啉基、四氫(異)喹啉基，3，4-二氫-1H-異喹啉基、色滿基或樟腦基，這些基團(tuán)可任選被一個(gè)或多個(gè)選自(1-8C)烷基或(1-8C)烷氧基的取代基取代；其中R2和R3獨(dú)立地是H或(1-8C)烷基；R4是(1-8C)烷基或(3-8C)環(huán)烷基；或R3和R4與它們所連接的氮原子一起是任選含有另外雜原子的非芳香族(4-8)元環(huán)，該環(huán)任選被(1-8C)烷基或SO2-(1-8C)烷基取代；其中，式I的化合物進(jìn)一步含有至少一個(gè)連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵。
本發(fā)明的化合物是雙重抑制劑，具有非介導(dǎo)的、直接的抗凝血酶(因子IIa)活性和抗凝血酶III(AT-III)介導(dǎo)的抗-Xa活性的可調(diào)混合特性。本發(fā)明化合物的混合特性可以通過改變寡糖殘基的性質(zhì)和直接凝血酶抑制劑(NAPAP類似物)的效價(jià)來調(diào)節(jié)。因此可得到一系列的特性。本發(fā)明的化合物具有長的血漿半衰期，結(jié)果，與先前文獻(xiàn)中報(bào)道的NAPAP或其衍生物相比，它們具有延長的抗凝血酶活性。此外，本發(fā)明的化合物可以避開血小板因子4(PF4)的中和作用。低毒性也是本發(fā)明的化合物的一個(gè)有利方面。
本發(fā)明的化合物適用于治療和預(yù)防凝血酶介導(dǎo)和凝血酶相關(guān)的疾病。這包括大量的其中凝血級聯(lián)被激活的血栓形成和血栓形成前狀態(tài)，其包括但不限于深靜脈血栓形成、肺栓塞、血栓性靜脈炎、血栓形成或栓塞引起的動(dòng)脈閉塞、血管成形術(shù)或血栓溶解過程中或之后的動(dòng)脈再閉塞、動(dòng)脈損傷或侵入性心臟學(xué)手術(shù)之后的再狹窄、術(shù)后靜脈血栓形成或栓塞、急性或慢性動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)、心肌梗死、癌癥和轉(zhuǎn)移，及神經(jīng)變性疾病。本發(fā)明的化合物還可以用作體外血液循環(huán)中的的抗凝血藥，如透析和手術(shù)中必需的。本發(fā)明的化合物還可以用作體外抗凝血藥。
本發(fā)明化合物中的生物素標(biāo)簽(或其類似物)被特異性解毒劑快速識別并與其結(jié)合，該抗毒劑為抗生物素蛋白(The Merck Index，第十二版，1996，M.N.920，第151-152頁)或鏈霉抗生物素蛋白，這兩個(gè)四聚體蛋白質(zhì)分別具有大約66000至60000Da的質(zhì)量，其對于生物素具有非常高的親和力。因此，在緊急的情況下，可以通過使用抗生物素蛋白或鏈霉抗生物素蛋白快速中和雙重抑制劑的作用，例如，通過注射含有它們的藥物溶液?？梢韵嗨频厥褂镁哂懈呱锼赜H和力的抗生物素蛋白和鏈霉抗生物素蛋白的類似物。所得到的無活性解毒劑-抑制劑絡(luò)合物從血液循環(huán)中清除。
生物素類似物(根據(jù)本發(fā)明其可以被用作標(biāo)簽)可以選自但不限于Pierce目錄，1999-2000，第62-81頁所示的生物素類似物，例如6-生物素酰氨基己酸酯、6-(6-生物素酰氨基己酰氨基)己酸酯和2-生物素酰氨基乙硫醇等，在這些類似物中，如先前定義的生物素殘基BT是分子的特征部分。其他的類似物是例如在生物素酰胺鍵上被烷基化(其中烷基是(1-4C)烷基，優(yōu)選是甲基)，并且對生物素酰胺酶裂解穩(wěn)定的生物素類似物(Bioconjugate Chem.，第11卷，2000年，第569-583頁；Bioconjugate Chem.，第11卷，2000年，第584-598頁)或含有例如α連接至生物素酰胺鍵的羥基亞甲基、羧酸根或乙酸根的其它生物素類似物，如Bioconjugate Chem.，第12卷，第4期，2001年，第616-623頁中所述的。
生物素類似物的優(yōu)選殘基具有式-(NH-CO)n-(CH2)p-NR-BT，其中n是0或1(尤其n是0)，p是4或5(尤其p是4)，R＝H或(1-4C)烷基，并且BT是如先前定義的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R是H。
在用它們相應(yīng)的非生物素化的化合物的比較研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，把生物素標(biāo)簽引入本發(fā)明的雙重抑制劑基本上不干擾它們的直接凝血酶抑制效價(jià)，也不干擾它們的抗凝血酶III(AT-III)介導(dǎo)的抗-Xa活性。此外，當(dāng)給予抗生物素蛋白或鏈霉抗生物素蛋白時(shí)，式I化合物的抗血栓形成活性(基本上)被完全中和。
2至25個(gè)單糖單元的任何帶負(fù)電荷的寡糖殘基都可用于本發(fā)明的化合物中。本發(fā)明的適合化合物是其中寡糖是硫酸化的寡糖殘基的化合物。優(yōu)選地，寡糖殘基是由本身具有(AT-III介導(dǎo)的)抗-Xa活性的寡糖，如EP 0,454,220、EP 0,529,715、WO 97/47659、WO 98/03554、WO 99/36443和WO 99/36428中公開的寡糖產(chǎn)生的。進(jìn)一步優(yōu)選的是具有2至16個(gè)，特別是2至6個(gè)單糖單元的寡糖殘基。最優(yōu)選寡糖是硫酸化的五糖殘基。優(yōu)選的五糖殘基具有式(II) 其中，R5獨(dú)立地是生物素殘基或其類似物、OSO3-或(1-8C)烷氧基。在優(yōu)選的五糖殘基中，硫酸根基團(tuán)的總數(shù)是4、5、6或7。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中五糖殘基具有以下結(jié)構(gòu)的化合物 其中R5是OCH3或OSO3-。
特別優(yōu)選的五糖殘基是
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的化合物是式I的化合物，其中R1式苯基或萘基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自甲基或甲氧基的取代基取代。更優(yōu)選地，R1是4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基。在優(yōu)選的化合物中，NR3R4表示哌啶基。優(yōu)選地，R2是H。
間隔基是基本上藥理學(xué)上無活性的柔性連接殘基，優(yōu)選沿著間隔基的“主鏈”計(jì)具有10至50個(gè)原子，不包括寡糖殘基的氧。進(jìn)一步優(yōu)選是13至25個(gè)原子的長度，優(yōu)選是16至22個(gè)原子，最優(yōu)選是19個(gè)原子。
間隔基的化學(xué)性質(zhì)對于本發(fā)明化合物的抗血栓形成活性具有較小的重要性。間隔基可以包含(稍微)剛性單元，如環(huán)結(jié)構(gòu)和不飽和鍵。高度柔性間隔基比其他間隔基更適合。合適的間隔基可以被本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地設(shè)計(jì)。由于合成的原因，更長的間隔基被認(rèn)為是較不適合的，然而，更長的間隔基仍然可以成功地用于本發(fā)明的化合物中。優(yōu)選的間隔基包含至少一個(gè)-(CH2CH2O)-單元。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物包含一個(gè)連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵。
生物素(或其類似物)標(biāo)簽可以存在于式I化合物的所有部分中。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案是其中(a)式I化合物的寡糖殘基含有連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵、(b)式I化合物的間隔基含有連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵并且(c)式I化合物的殘基A含有連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵(其指的是在A定義中的氫原子或取代基已經(jīng)被生物素殘基替代)的化合物。
本發(fā)明的生物素化的雙重抑制劑的代表性的實(shí)例是
和 及其鹽，還有其中間隔基在另一個(gè)位置與寡糖連接的式I化合物，和/或其中生物素(類似物)殘基存在于分子的其他位置的化合物。優(yōu)選是鈉鹽。
式III化合物是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)例。
在式(I)化合物的描述中，使用以下的定義。
術(shù)語(1-4C)烷基和(1-8C)烷基是指有分支或無分支的烷基，分別具有1-4和1-8個(gè)碳原子，舉例而言，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、己基和辛基。甲基和乙基是優(yōu)選的烷基。
術(shù)語(1-8C)烷氧基是指具有1-8個(gè)碳原子的烷氧基，烷基部分具有如先前定義的含義。甲氧基是優(yōu)選的烷氧基。
術(shù)語(3-8C)環(huán)烷基是指具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基。環(huán)戊基和環(huán)己基是優(yōu)選的環(huán)烷基。
間隔基長度是間隔基的原子數(shù)，沿著寡糖殘基和分子的肽部分之間的最短鏈計(jì)算，不計(jì)算與間隔基連接的寡糖殘基的氧原子。
術(shù)語“前藥”是指其中例如脒基部分的氨基被保護(hù)的本發(fā)明的化合物，例如通過羥基或(1-6C)烷氧羰基進(jìn)行保護(hù)。
本發(fā)明的溶劑合物包括水合物。
關(guān)于其中將生物素殘基連接到式I化合物上的合成路線，化學(xué)文獻(xiàn)提供了可以利用的多種可能性，并且通過它們可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的不同組的保護(hù)基團(tuán)。包含例如活化酯、馬來酰亞胺、碘代乙?；虿奉愋偷姆磻?yīng)基團(tuán)的生物素殘基將優(yōu)選與胺官能團(tuán)或巰基官能團(tuán)、或羧酸官能團(tuán)、或醛官能團(tuán)反應(yīng)，反應(yīng)是按照文獻(xiàn)(cf.Savage等人，Avidin-Biotin ChemistryA Handbook；Pierce ChemicalCompany，1992)中所述的條件發(fā)生的。
生物素殘基可以例如直接結(jié)合(帶負(fù)電的)寡糖殘基，或通過寡糖-間隔基殘基的任選N-(1-4C)烷基化的氨基官能團(tuán)或通過任選N-(1-4C)烷基化氨基酸殘基連接式I化合物的寡糖殘基的任選N-(1-4C)烷基化的胺官能團(tuán)。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，生物素殘基可以是例如直接結(jié)合殘基A或通過連接殘基的任選N-(1-4C)烷基化的氨基官能團(tuán)，或通過任選N-(1-4C)烷基化的氨基酸殘基結(jié)合式I化合物的殘基A的任選N-(1-4C)烷基化的胺官能團(tuán)。
然而在本發(fā)明的另一個(gè)方面，生物素殘基可以例如被分步引入，首先直接結(jié)合殘基A或通過式I的間隔基的一部分的任選N-(1-4C)烷基化的氨基官能團(tuán)或通過任選N-(1-4C)烷基化的氨基酸殘基結(jié)合式I化合物殘基A的任選N-(1-4C)烷基化的胺官能團(tuán)，其次，直接結(jié)合寡糖或通過式I的間隔基的一部分的任選N-(1-4C)烷基化的氨基官能團(tuán)或通過任選N-(1-4C)烷基化的氨基酸殘基結(jié)合式I化合物(帶負(fù)電荷)的寡糖的任選N-(1-4C)烷基化的胺官能團(tuán)結(jié)合，或者反之亦然。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，任選N-烷基化的氨基酸殘基或α-N-取代的(β-)氨基酸類似物如[Bioconjugate Chem.，第12卷，第4期，2001年，第616-623頁]中所述的，可以通過使用本領(lǐng)域已知方法的肽偶合引入。疊氮基是適合的潛在的胺官能團(tuán)，其可以在式I化合物的前體中使用，用于隨后引入生物素殘基。制備式I化合物的優(yōu)選的方法包括其中殘基A的芐脒部分主前體的形式，優(yōu)選是1，2，4-二唑啉-5-酮基團(tuán)，接著通過脫保護(hù)，特別是通過氫化將其轉(zhuǎn)化成芐脒的步驟(Bolton，R.E.等人，Tetrahedron Letters，第36卷，第25期，1995年，第4471-4474頁)。
通過用半胱氨酸或賴氨酸或天冬氨酸在甘氨酸位置使用本領(lǐng)域熟知的方法衍生NAPAP(或NAPAP-類似物)，進(jìn)一步制備本發(fā)明的化合物，該化合物隨后(a)偶合至寡糖-間隔基殘基或(b)偶合至間隔基，然后用巰基官能團(tuán)或羧酸官能團(tuán)將其衍生，接著偶合至寡糖殘基。任何適合的寡糖可以用于此目的，例如文獻(xiàn)中已知的寡糖(例如，來自EP0,454,220和EP 0,529,715，但是不限于這些來源)或商業(yè)上可購的寡糖。間隔與寡糖的偶合可以例如通過使用EP 0,649,854中所述的方法完成。
肽偶合(上述制備本發(fā)明化合物的方法中的操作步驟)可以通過本領(lǐng)域用于肽片段的偶合-或縮合-的常規(guī)已知的方法進(jìn)行，如通過疊氮化物方法、混合酸酐方法、活化酯方法、碳二亞胺方法或，優(yōu)選地在銨/脲陽離子鹽如TBTU的影響下，特別是加入催化和外消旋抑制性化合物如N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基苯并三唑和7-氮雜-N-羥基苯并三唑。在The Peptides，Analysis，Synthesis，Biology，第3卷，E.Gross和J.Meienhofer編輯(Academic Press，New York，1981)和PeptidesChemistry and Biology，N.Sewald和H.-D.Jakubke(Wiley-VCH，Weinheim，2002)中給出了綜述。
在合成操作期間，化合物中存在的胺官能團(tuán)可以通過N-保護(hù)基團(tuán)來保護(hù)，N-保護(hù)基團(tuán)是指肽化學(xué)中通常用于保護(hù)α-氨基的基團(tuán)，如叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基(Z)、9-芴甲氧羰基(Fmoc)或鄰苯二甲酰(Phth)基，或者可以通過解蔽疊氮化物部分而被引入。在以上提到的ThePeptides，Analysis，Synthesis，Biology，第3卷和PeptidesChemistryand Biology中給出了氨基保護(hù)基團(tuán)及其除去方法的綜述。
可以游離堿的形式存在的本發(fā)明的化合物，可以藥學(xué)上可接受的鹽的形式從混合物中分離。藥學(xué)上可接受的鹽還可以通過用有機(jī)酸或無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸、乙酸、丙酸、羥基乙酸、馬來酸、丙二酸、甲磺酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、抗壞血酸等處理式(I)的游離堿而獲得。
本發(fā)明的化合物或其中間體具有手性碳原子，因此可以純的對映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體的混合物，或者包含非對映異構(gòu)體的混合物的形式獲得。獲得純的對映異構(gòu)體的方法是本領(lǐng)域熟知的，例如，由光學(xué)活性酸和外消旋混合物得到的鹽的結(jié)晶，或者使用手性柱的色譜法。對于非對映異構(gòu)體而言，可以使用正相或反相柱。
本發(fā)明的化合物可以腸內(nèi)或胃腸外給藥。這些化合物及其組合物的準(zhǔn)確劑量和方案將必然取決于將給藥的個(gè)體受試者的需要、痛苦的程度或執(zhí)業(yè)醫(yī)生的需求和判斷。通常，胃腸外給藥比更取決于吸收的其他給藥方法需要更低的劑量。然而，對人而言，每日劑量優(yōu)選是0.001-100mg/kg體重，更優(yōu)選是0.01-10mg/kg體重。采用本發(fā)明的化合物制備的藥物還可以用作急性抗凝血治療中的助劑。在這樣的情況下，該藥物與適用于治療這類疾病狀態(tài)的其他化合物一起給藥。
與藥學(xué)上適合的輔助劑，例如標(biāo)準(zhǔn)參考書，Gennaro等人，Remington′s Pharmaceutical Sciences，(第18版，Mack PublishingCompany，1990，特別參見第8部分Pharmaceutical Preparationsand Their Manufacture)中所述的混合，化合物可被壓制成固體劑量單位如丸劑、片劑或被加工成膠囊或栓劑。采用藥學(xué)上適合的液體，還可以溶液、混懸液、乳液的形式使用化合物，例如用作注射制劑或作為噴霧劑，例如用作鼻噴霧劑。
為了制備劑量單位例如片劑，考慮到常規(guī)添加劑如填充劑、著色劑、聚合物粘合劑等的使用。通常，可以使用不干擾活性化合物功能的任何藥學(xué)上可接受的添加劑。可與組合物一起給藥的適合載體包括乳糖、淀粉、纖維素衍生物等，或其混合物，以適當(dāng)?shù)牧渴褂盟鼈儭?


圖1.通過皮下給予100nmol/kg的本發(fā)明的生物素化的化合物III(“biotin”)之后測量抗-Xa或抗-IIa活性，測定的平均血漿水平。此外，測定抗-Xa活性之后給出了Org 42675(“original”)的血漿水平。
圖2.顯示了皮下給予100nmol/kg化合物之后的平均血漿水平±s.e.m。在t＝2h時(shí)，向這些用本發(fā)明的化合物III(“biotin”)或Org 42675(“original”)處理的那些大鼠中靜脈給予抗生物素蛋白(10mg/kg)。同原形化合物的行為相比，給予抗生物素蛋白影響了本發(fā)明化合物III的藥物動(dòng)力學(xué)行為。
通過以下的實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)施例所用的簡寫Aq.＝含水的ATIII＝抗凝血酶IIIBoc＝叔丁氧羰基DCM＝二氯甲烷DiPEA＝N，N-二異丙基乙胺DMF＝N，N-二甲基甲酰胺Et＝乙基fmoc＝9-芴基甲氧羰基NMM＝N-甲基嗎啉Me＝甲基
sat.＝飽和的PRP＝富含血小板的血漿PPP＝少含血小板的血漿RT＝室溫TBTU＝2-(1N-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽TFA＝三氟乙酸THF＝四氫呋喃實(shí)施例1方案1Ne-(D-(+)-生物素基)-N-{4-[[4-[[(1R)-1-[[4-(1，2，4-二唑-5-酮基)苯基]甲基]-2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]氨基]-3-[[(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)磺酰基]氨基]-1，4-(S)-二氧代-丁基]氨基]-丁?；鶀-L-賴氨酸(3)把根據(jù)WO 01/42262中所述的制備的化合物2(0.20g，0.27mmol)溶解于DCM(10mL)。加入DiPEA(0.14mL，0.81mmol)，接著加入TBTU(86mg，0.27mmol)。在氮?dú)鈿夥障聰嚢?小時(shí)之后，加入固體的化合物1(Nε-fmoc-Lys-OH，0.27mmol，F(xiàn)luka)。加入DMF(5mL)以溶解Nε-fmoc-Lys-OH?；旌衔飻嚢?6小時(shí)，傾入0.5 N HCl-溶液中。溶液用DCM(3x)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗，干燥(MgSO4)并減壓(850mbar，45℃)濃縮。粗制品通過二氧化硅柱色譜法(DCM/MeOH/AcOH，99/0/1→89/10/1，v/v/v)純化。剩余的AcOH通過在甲苯中反復(fù)濃縮除去。使用HPLC色譜法(ACN/H2O/0.1N TFA，20∶78∶3→95∶2∶3)完成進(jìn)一步的純化，得到0.15g(53％)的純化合物。TLCRf 0.5(DCM/MeOH/AcOH，90/9/1，v/v/v)。LC-MSm/z 1089[M+H]1+。
Fmoc保護(hù)的中間體(0.15g，0.14mmol)溶解于THF(5mL)中，加入Et2NH(2mL)。使混合物在45℃下攪拌45分鐘。溶液在減壓下濃縮并在甲苯濃縮。ESI-MSm/z 857[M+H]1+。
將Nε-脫保護(hù)的賴氨酸衍生物(0.14mmol)溶解于DMF(3mL)，并加入至已經(jīng)在氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)的含D-(+)-生物素(34mg，1當(dāng)量)、TBTU(45mg，1當(dāng)量)和DiPEA(61μL，2.5當(dāng)量)的DMF(4mL)的溶液中。所得的混合物攪拌16小時(shí)。減壓除去溶劑。加入EtOAc(30mL)并攪拌。過濾收集固體產(chǎn)物3，用MeOH和EtOAc洗滌，并在真空下干燥。收率86mg(57％)。Rf 0.15(DCM/MeOH，9/1，v/v)。ESI-MS1083.6[M+H]+。
制備化合物III和IV的一般方法羧酸衍生物(33μmol)(即，化合物3或11)通過在無水DMF(2×2mL)中重復(fù)濃縮而干燥，再溶解于DMF(1mL)，并在TBTU(11mg，33μmol)和DiPEA(5.7mL，33μmol)存在下在氮?dú)鈿夥罩袛嚢琛?小時(shí)之后，加入五糖4(31μmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)，并用離子交換(Mono-Q)色譜法分析。濃縮(＜50℃，15mmHg)反應(yīng)混合物。(粗)產(chǎn)品(H2O/t-BuOH，1/1，v/v中10mg/mL)通過在10％Pd/C(相對于粗產(chǎn)品加入重量上相等量)上氫化(H2)脫保護(hù)。16小時(shí)之后，將溶液脫氣，通過0.45μM HPLC過濾器過濾，在減壓(＜50℃，15mmHg)下濃縮。綴合物通過離子交換色譜法(Q-sepharose，緩沖液H2O→2MNaCl)純化，接著用Sephadex G25-柱(H2O)脫鹽并冷凍干燥。
甲基O-2，3-二-O-甲基-4O-＜＜＜12-N-＜＜Nε-(D-(+)-生物素基)-N-＜)]-{4-[[4-[[(1R)-1-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]氨基]-3-[[(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)磺酰]氨基]-1，4-(S)-二氧代-丁基]氨基]-丁?；鶀-L-賴氨酰＞＞-12-氮雜-3，6，9-三氧雜-十二烷基＞＞＞-6O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷基-(1-＞4)-O-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸基(glucopyranuronosyl)-(1-＞4)-O-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷基-(1-＞4)-O-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸基(idopyranuronosyl)-(1-＞4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷八鈉鹽(III)化合物III通過化合物3(86mg，81μmol)和化合物4(0.14g，80μmol)的綴合而制備和純化，化合物4根據(jù)WO 01/42262中所述的，按照一般方法制得。收率0.14g(60％)。ESI/TOF-MS880.91[M-3H]3-，888.57 [M-3H+Na]3-，660.43[M-4H]4-。
1H-NMR(D2O，600 MHz)；在4.71ppm處的參照水信號阻止了4.80-4.50ppm之間的信號的可靠整合。δ7.66(m，2H)，7.30(m，2H)，6.74(m，1H)，5.36(m，1H)，5.25(m，1H)，5.05(m，1H)，4.98(m，1H)，4，84(m，1H)，4.46(m，2H)，4.31(m，1H)，4.27-4.13(5H)，4.13-3.99(5H)，3.92(m，1H)，3.88-3.70(8H)，3.70-3.07(49H±5)，3.07-2.92(4H)，2.85(m，1H)，2.76(m，1H)，2.65(m，1H)，2.51(s，3H)，2.40(s，3H)，2.36-2.22(m，2H)，2.21-2.11(m，2H)，2.08(m，1H)，2.06-1.91(4H)，1.83-1.03(20H±2)。
方案1
實(shí)施例2方案215-N-(9-芴基甲氧羰基)-15-氮雜-3，6，9，12-四氧雜-十五酸叔丁酯(6)將15-氨基-3，6，9，12-四氧雜-十五酸叔丁酯(5)(0.50g，1.45mmol)溶解于THF(7.5mL)和H2O(5mL)。加入4N NaOH溶液直至pH大約是9。分次加入N-9-芴基甲基氨基甲酸酯-琥珀酰亞胺(FmocOSu，0.54g，1.60mmol，1.1當(dāng)量)。10分鐘之后，加入另外的4N NaOH溶液以調(diào)節(jié)pH至大約9。3小時(shí)之后，反應(yīng)混合物用1N HCl溶液酸化至pH6-7。向反應(yīng)混合物中加入H2O，其再用EtOAc萃取三次。有機(jī)相用鹽水洗，并用MgSO4干燥。過濾之后，減壓(50mbar，50℃)除去溶劑。粗制的油通過二氧化硅柱色譜法(DCM/MeOH，1/0→95/5，v/v)純化得到化合物6，為淡黃色油(0.61g，79％)。Rf 0.64(DCM/MeOH，95/5，v/v)。
15-N-(9-芴基甲氧羰基)-15-氮雜-3，6，9，12-四氧雜-十五酸酯(7)將化合物6溶解于DCM(3.5mL)中，在氮?dú)鈿夥障录尤隩FA(3.5mL)。攪拌1.5小時(shí)之后，反應(yīng)混合物在減壓下濃縮。然后，通過在甲苯中的重復(fù)濃縮除去過量的TFA。加入DCM/Et2O(100mL，1/2，v/v)，并用1N HCl洗。水層用DCM/Et2O(100mL，1/2，v/v)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗，通過MgSO4干燥。過濾之后，在大氣壓下(50℃)除去溶劑。粗制油通過二氧化硅柱色譜法(DCM/MeOH/AcOH，99/0/1→89/10/1，v/v/v)純化得到化合物7。通過將粗制油狀產(chǎn)物溶解于DCM/Et2O(1/2，v/v)中并用水(3次)和鹽水洗，接著通過MgSO4干燥，除去剩余的AcOH。過濾之后，在大氣壓下(50℃)除去溶劑，以得到化合物7，為淡黃色油(0.37g，67％)。Rf 0.32(DCM/MeOH，89/10/1，v/v)。
叔丁基15-N-(9-芴基甲氧羰基)-15-氮雜-3，6，9，12-四氧雜-十五?；?ε-N-(Z)-L-賴氨酸(8)
將化合物7(0.37mg，0.77mmol)溶解于DCM(18mL)。在氮?dú)鈿夥障乱来渭尤隓IPEA(0.40μL，2.31mmol，3當(dāng)量)和TBTU(0.25g，0.77mmol)，攪拌溶液10分鐘。再加入ε-(Z)-L-Lys-OtBu·HCl(0.29g，0.77mmol)，混合物再攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物用DCM稀釋，并用H2O、0.1N HCl、飽和的NaHCO3-溶液和鹽水清洗。干燥(MgSO4)有機(jī)相，在大氣壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法(DCM/MeOH，1/0→9/1，v/v)完成純化，以得到化合物8，為淡黃色油(0.51g，83％)。Rf 0.85(DCM/MeOH，9/1，v/v)。ESI-MS792.6[M+H]+，814.6[M+Na]+，736.4[M-tBu+H]+叔丁基15-N-叔丁氧羰基-15-氮雜-3，6，9，12-四氧雜-十五?；?ε-N-(Z)-L-賴氨酸(9)將化合物8(0.26g，0.32mmol)溶解于THF(5mL)。加入Et2N(1mL)，使溶液攪拌24小時(shí)。過量的Et2N和溶劑在減壓(50℃)下除去。加入甲苯，并在減壓(50℃，65mbar)下除去，得到N-脫保護(hù)的中間體產(chǎn)物(0.21g，0.32mmol)，Rf 0.23(DCM/MeOH，9/1，v/v)ESI-MS570.4[M+H]+，514.4[M-tBu+H]+。粗產(chǎn)品溶解于DCM(3mL)。在氮?dú)鈿夥障录尤隕t3N(0.11mL)，接著加入二碳酸二-叔丁酯(73mg，0.34mmol，1.1當(dāng)量)。攪拌5小時(shí)之后，把混合物加入至0.1N HCl的冷(5℃)溶液，并用EtOAc萃取.有機(jī)層用鹽水洗并干燥(MgSO4)。過濾之后，在減壓(180mbar，50℃)下除去溶劑。通過硅膠柱色譜法(DCM/MeOH，1/0→95/5，v/v)完成純化，以得到9，為無色油(0.17g，82％)。Rf 0.5(DCM/MeOH，9/1，v/v). ESI-MS670.6[M+H]+，692.4[M+Na]+，570.4 [M-Boc+H]+，514.1[M-Boc-tBu+H]+.
15-氮雜-3，6，9，12-四氧雜-十五?；?ε-[D-(+)-生物素基]-L-賴氨酸(10)將化合物9(0.23g，0.34mmol)溶解于EtOH(8mL)和水(1.2mL)中。用氮?dú)鉀_洗溶液5分鐘之后，加入Pd/C 10％(0.11g)。向溶液中通入氫氣4小時(shí)。向溶液中沖入氮?dú)?0分鐘以除去所有的氫氣?；旌衔锝?jīng)過decalite過濾，并在減壓(170mbar，50℃)下濃縮以得到N-L-賴氨酸脫保護(hù)的中間體，為無色油(0.15g，81％)。Rf 0.02(DCM/EtOAc，9/1，v/v)。
將D-(+)-生物素(75mg，0.31mmol)懸浮于DCM(7mL)。接著在氮?dú)鈿夥障录尤隓IPEA(0.11mL，0.62mmol，2當(dāng)量)和TBTU(0.10g，0.31mmol)，使溶液攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入上述N-L-賴氨酸脫保護(hù)的中間體的DCM(3mL)的溶液。使混合物攪拌16小時(shí)。加入水，并用DCM(3x)萃取。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過濾并減壓(850 mbar，50℃)濃縮。通過硅膠柱色譜法(洗脫劑DCM/MeOH，1/0→9/1v/v)完成純化，以得到油(0.13g，60％)。Rf 0.48(DCM/MeOH，9/1，v/v)。ESI-MS762.6[M+H]，784.6[M+Na]，662.4[M-Boc+H]，606.4[M-Boc-tBu+H]。將該油溶解于無水的二烷(4mL)中的4N HCl溶液中，并攪拌。1小時(shí)之后出現(xiàn)不溶的油，在此之后，在減壓(100mbar，50℃)下除去溶劑，以定量的收率得到化合物10。ESI-MS606.4[M+H]+，628.4[M+Na]+。
方案2 方案3Nε-(D-(+)-生物素基)-N-{{4-[[4-[[(1R)-1-[[4-(1，2，4-二唑-5-酮基)苯基]甲基]-2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]氨基]-3-[[(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)磺?；鵠氨基]-1，4-(S)-二氧代-丁基]氨基]-丁?；鶀-15-N-(15-氮雜-1-氧代-3，6，9，12-四氧雜-十五烷基)]}-L-賴氨酸(11)按照關(guān)于制備化合物3所述的，將化合物10(0.12g，0.21mmol)偶合至化合物2(0.15g，0.21mmol)。粗制品通過制備型HPLC(C18，ACN/H2O，0.01％TFA)純化，以得到純的化合物11。收率是60mg(22％)。ESI-MS1316.8[M+H]+甲基O-2，3-二-O-甲基-4O-＜＜＜12-N-＜＜Nε-(D-(+)-生物素基)-N-＜[15-N-(15-氮雜-1-氧代-3，6，9，12-四氧雜-十五烷基)]-{4-[[4-[[(1R)-1-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]氨基]-3-[[(4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)磺?；鵠氨基]-1，4-(S)-二氧代-丁基]氨基]-丁?；鶀＞-L-賴氨酰＞＞-12-氮雜-3，6，9-三氧雜-十二烷基＞＞＞-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷基-(1-＞4)-O-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖醛酸基-(1-＞4)-O-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷基-(1-＞4)-O-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸基-(1-＞4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷八鈉鹽(IV)將化合物11偶合至化合物4，中間體綴合物根據(jù)常規(guī)方法脫保護(hù)以得到化合物IV。
收率9.2mg(7.6％)。
1H-NMR(D2O，600MHz)，在4.70ppm處的參照水信號阻止了4.80-4.54ppm之間的信號的可靠整合。δ7.59(d，2H)，7.23(d，2H)，6.68(s，1H)，5.32(m，1H)，5.19(m，1H)，4.91(m，1H)，4.85(m，1H)，4.76(m)，4.53-4.31(3H)，4.30-4.05(9H)，4.04-3.90(7H)，3.89-3.62(7H)，3.61-3.42(42H±4)，3.42-3.31(18H±2)，3.31-3.14(12H)，3.14-3.05(5H)，3.03-2.94(3H)，2.93-2.84(2H)，2.81(dd，1H)，2.70(dd，1H)，2.59(d，1H)，2.44(s，3H)，2.34(s，3H)，2.22-2.08(4H)，2.06(t，2H)，1.96(s，3H)，1.72-1.01(18H±2)ESI/TOF-MSm/z 574.72[M-5H]5-，m/z 718.66[M-4H]4-，m/z958.56[M-3H]3-。
方案3 實(shí)施例3藥理學(xué)測定人血漿中抗-因子Xa和因子IIa活性的體外試驗(yàn)分別使用S2222或S2238(Chromogenix，Chromogenics Ltd，Molndal，瑞典)作為底物，通過酰胺分解測量在人血漿中試驗(yàn)化合物的抗-因子Xa和IIa活性。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是基于Teien和Lie所述的方法。(Teien AN，Lie M.Evaluation of an amidolytic heparin assay methodincreased sensitivity by adding purified antithrombin III.Thromb.Res.1977，10399-410)。以IC-50(Mol/L)表示該兩種活性。
表1.體外抗血栓形成活性的總結(jié)

3.1藥物動(dòng)力學(xué)在300-400gr的雄性Wistar大鼠中研究Org 42675和本發(fā)明化合物III的藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。通過吸入O2/N2O/異氟烷的混合物使大鼠麻醉，此后，右頸靜脈插管。第二天用100nmol/kg劑量皮下處理大鼠。皮下給藥后，以多個(gè)時(shí)間間隔取血樣。然后，離心血液，此后，虹吸出血漿，在-20℃貯存直至使用。通過酰胺分解測量試驗(yàn)化合物的濃度，使用S-2222或S-2238作為底物(Chromogenix，ChromogenicsLtd，Molndal，瑞典)，以分別測定抗-Xa或抗-IIa活性。兩個(gè)方法都是基于Teien和Lie的方法(Teien AN，Lie M.Evaluation of an amidolyticheparin assay method increased sensitivity by adding purifiedantithrombin III.Thromb.Res.1977，10399-410)。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定得到的血漿樣品中的濃度，標(biāo)準(zhǔn)曲線由試驗(yàn)化合物本身的儲備溶液制得。樣品中的濃度以nmol/mL表示，并用WinNonlin的非房室模型計(jì)算動(dòng)力學(xué)參數(shù)(參見圖1)。
表2大鼠皮下給予本發(fā)明的化合物III或Org 42675(100nmol/kg)后的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。以n＝3/處理進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

結(jié)論是，在實(shí)驗(yàn)的變異性之內(nèi)，本發(fā)明的化合物III和Org 42675在大鼠中顯示了相同的藥物動(dòng)力學(xué)行為。
3.2藥物動(dòng)力學(xué)-中和實(shí)驗(yàn)大鼠用本發(fā)明的化合物III或Org 42675以皮下劑量100nmol/kg處理。t＝2h時(shí)，抽取血樣，并向用本發(fā)明的化合物III或Org 42675處理的大鼠靜脈內(nèi)給予10mg/kg的抗生物素蛋白(來自蛋清，Sigma)。相繼在0.17、0.5、1、2、3和7小時(shí)抽血樣。根據(jù)藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中所述的來處理血液，并通過測量(殘留)抗-Xa或抗-IIa活性來測定樣品的濃度。(參見圖2)
表3t＝2h時(shí)皮下給予100nmol/kg本發(fā)明化合物III或Org42675和抗生物素蛋白(10mg/kg)后計(jì)算的曲線下面積(AUC’s)。
從T＝2h起計(jì)算數(shù)據(jù)。以n＝3/處理進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

結(jié)論是，皮下給予本發(fā)明化合物III(100nmol/kg)之后，通過測量(殘留)抗-Xa和抗-IIa活性而測定的抗血栓形成活性，可以通過靜脈內(nèi)給予10mg/kg的抗生物素蛋白中和。同化合物Org 42675比較，給予抗生物素蛋白之后，抗生物素蛋白對本發(fā)明化合物III的中和反映在本發(fā)明化合物III的血漿濃度快速減少和明顯減少的AUCinf。此外，非生物素化的相當(dāng)化合物Org 42675的藥物動(dòng)力學(xué)行為不受加入抗生物素蛋白的影響。后者證實(shí)，中和與存在生物素標(biāo)簽相關(guān)，并且其不影響雙重抑制劑的藥物動(dòng)力學(xué)行為。
權(quán)利要求
1.式(I)的抗血栓化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥或其溶劑化物；寡糖-間隔基-A(I)，其中，寡糖是帶負(fù)電荷的寡糖殘基，含有2至25個(gè)單糖單元，該電荷被帶正電的反荷離子抵消，并且其中寡糖殘基是由本身具有(AT-III介導(dǎo)的)抗-Xa活性的寡糖產(chǎn)生的；間隔基是基本上藥理學(xué)上無活性的柔性連接殘基，具有10至70個(gè)原子的鏈長；A是殘基-CH[NH-SO2-R1][CO-NR2-CH(4-芐脒)-CO-NR3R4]，其中，R1是苯基、萘基、1，2，3，4-四氫萘基、(異)喹啉基、四氫(異)喹啉基，3，4-二氫-1H-異喹啉基、色滿基或樟腦基團(tuán)，這些基團(tuán)可任選被一個(gè)或多個(gè)選自(1-8C)烷基或(1-8C)烷氧基的取代基取代；并且其中R2和R3獨(dú)立地是H或(1-8C)烷基；R4是(1-8C)烷基或(3-8C)環(huán)烷基；或R3和R4與它們所連接的氮原子一起是任選含有另外雜原子的非芳香族的(4-8)元環(huán)，該環(huán)任選被(1-8C)烷基或SO2-(1-8C)烷基取代；其中，式I的化合物進(jìn)一步含有至少一個(gè)連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中所述寡糖殘基具有2至16個(gè)單糖單元。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中所述寡糖是硫酸化的五糖殘基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中所述寡糖是式(II)的五糖殘基， 其中，R5獨(dú)立地是生物素殘基或其類似物、OSO3-或(1-8C)烷氧基。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中所述五糖殘基具有以下結(jié)構(gòu) 其中，R5是OCH3或OSO3-。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中所述五糖殘基具有以下結(jié)構(gòu)
7.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物，其中所述間隔基具有10至50個(gè)原子的長度，優(yōu)選是16至22個(gè)原子，最優(yōu)選是19個(gè)原子的長度。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中所述間隔基具有16至22個(gè)原子的長度。
9.權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)的化合物，其中所述間隔基包含至少一個(gè)-(CH2CH2O)-單元。
10.權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)的化合物，其中R1是苯基或萘基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自甲基或甲氧基的取代基取代。
11.權(quán)利要求10的化合物，其中R1是4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基。
12.權(quán)利要求1至11任一項(xiàng)的化合物，其中NR3R4表示哌啶基。
13.權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)的化合物，其中R2是H。
14.權(quán)利要求1至13任一項(xiàng)的化合物，它含有一個(gè)連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵。
15.權(quán)利要求1至4、7至14任一項(xiàng)的化合物，其中所述式I化合物的寡糖殘基含有連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵。
16.權(quán)利要求15的化合物，其中所述式I化合物的寡糖殘基含有一個(gè)連接式-(NH-CO)-(CH2)5-NR-BT的生物素類似物的共價(jià)鍵，其中BT是殘基 其中，R是H或(1-4C)烷基。
17.權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物，其中所述式I化合物的間隔基含有連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵。
18.權(quán)利要求17的化合物，其中所述式I化合物的間隔基含有一個(gè)連接式-(CH2)4-NR-BT的生物素類似物的殘基的共價(jià)鍵，其中R和BT具有先前所定義的含義。
19.權(quán)利要求18的化合物，它是 或其藥學(xué)上可接受的鹽、其前藥或溶劑合物。
20.權(quán)利要求19的化合物，它呈其鈉鹽的形式。
21.權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物，其中式I化合物的殘基A含有連接生物素殘基或其類似物的共價(jià)鍵。
22.一種藥物組合物，它含有權(quán)利要求1至21任一項(xiàng)的化合物和藥學(xué)上適合的輔助劑。
23.制備式I化合物的方法，它包括其中殘基A中的芐脒部分呈前體的形式，為1，2，4-二唑啉-5-酮基團(tuán)，隨后通過脫保護(hù)將其轉(zhuǎn)化成芐脒的步驟。
24.權(quán)利要求1至21任一項(xiàng)的化合物，其用于治療中。
25.權(quán)利要求1至21任一項(xiàng)的化合物在制備用于治療或預(yù)防血栓形成或其他與凝血酶有關(guān)的疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)寡糖－間隔基－A(I)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥或其溶劑化物，其中寡糖是帶負(fù)電荷的寡糖殘基，含有2至25個(gè)單糖單元，該電荷被帶正電的反荷離子抵消，并且其中寡糖殘基是由本身具有(AT－III介導(dǎo)的)抗－Xa活性的寡糖產(chǎn)生的；間隔基是基本上藥理學(xué)上無活性的柔性連接殘基，具有10至70個(gè)原子的鏈長；A是殘基－CH[NH－SO
文檔編號A61P9/00GK101087622SQ200580044491
公開日2007年12月12日 申請日期2005年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月23日
發(fā)明者M·德科特, C·A·A·范伯克爾 申請人:歐加農(nóng)股份有限公司