專利名稱：燈盞花乙素注射制劑及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及藥劑學領域。
背景技術(shù)：
燈盞花即菊科植物短葶飛蓬(Erigeron breviscapus(vant)Hand-Mazz)，最早收載于《滇南本草》，1974年收入云南省藥品標準(燈盞細辛(燈盞花)，滇Q/W62-1974)，1977年納入中國藥典(一部，245頁)。1980年云南省藥物研究所從燈盞花中提取出治療中風及其后遺癥的黃酮類成份，并研制成水針劑。1984年云南省衛(wèi)生廳將從燈盞花中提取的黃酮類成份命名為燈盞花素(燈盞花素，滇Q/W696-1984)，并制訂了水針劑的質(zhì)量標準(燈盞花素注射液，滇Q/WS697-1984)，批準水針劑上市。燈盞花素屬黃酮甙(苷)類，不溶于水，但可溶于稀堿溶液(中國醫(yī)學科學院藥物研究所編，《中草藥有效成份的研究》，人民衛(wèi)生出版社1972年版，P220)。燈盞花素注射液實質(zhì)上是將燈盞花素與碳酸氫鈉反應后生成的燈盞花素鈉鹽，因此，云南省藥物研究所解決了燈盞花素(燈盞花黃酮類成份)不溶于水的問題。1989年以后，燈盞花素被制成鐵鹽、鎂鹽、鈣鹽(王兆鉞，等，中草藥，1989，20(2)23～25)和堿性氨基酸鹽(CN1049121C)應用于藥理研究或臨床。
燈盞花素可溶于稀堿溶液中，當PH在8以下不會導致燈盞花素斷鏈或氧化(自1980年至今燈盞花素注射液和注射用燈盞花素的質(zhì)量標準規(guī)定的制劑PH為6～8)。然而，燈盞花素的堿性溶液不穩(wěn)定一是非黃酮甙(苷)類的黃酮類成份隨著時間的延長而聚集成絮狀沉淀析出，致使制劑的澄明度不合格；二是與葡萄糖注射液(PH3.2～5.5)等酸性藥液混合使用時會析出沉淀。為解決燈盞花素注射劑的不穩(wěn)定性，公開了不少專利。概括起來，這些解決燈盞花素注射劑的不穩(wěn)定性的方法，是在燈盞花素注射劑中加入“穩(wěn)定劑”。如CN1555807A的“一種穩(wěn)定性提高的燈盞花素注射劑及其制備方法”所述的穩(wěn)定劑是有機堿、有機酸、抗氧化劑。有機堿中的檸檬酸鹽、葡甲胺、泛酸鈉、L-半胱氨酸、苯甲胺、煙酰胺、硫脲、乙醇胺、脲中的一種或二種；有機酸中的檸檬酸、醋酸、草酸、馬來酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、抗壞血酸中的一種或二種；抗氧化劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、L-半胱氨酸、抗壞血酸中的一種或幾種。還有的用金屬離子鰲合劑作為穩(wěn)定劑，如CN1187356A的“燈盞花素注射液穩(wěn)定的處方和工藝過程”，將EDTA-2Na作為燈盞花素注射液的穩(wěn)定劑使用，同時還公布了L-半胱氨酸、烏洛托品、焦亞硫酸鈉、磷酸鹽類、煙酰胺、乙醇胺、丙二醇、亞硫酸氫鈉、碳酸鹽或碳酸氫鹽，硫脲等。CN1476840A公開了“一種穩(wěn)定的燈盞花素注射液的制備方法”，以CN1187356A為例，否定了上述一系列穩(wěn)定劑“中國專利CN1187356A 1998年公開，公開了一種燈盞花素注射液穩(wěn)定的處方，采用一系列穩(wěn)定劑，將PH值調(diào)至7.0～7.8，事實上仍不能解決穩(wěn)定性問題”。該專利申請?zhí)岢隽苏J為能解決穩(wěn)定燈盞花素注射劑的方法以燈盞花素為主要成份，在制備過程中加入精氨酸，并調(diào)節(jié)PH值到4.5～6.5，并將“制備過程中加入L-精氨酸，調(diào)節(jié)PH值至4.5～5.6，L-精氨酸的量為40～80mg/100ml”納入了權(quán)利要求。
燈盞花素注射劑除了由于制劑本身不穩(wěn)定，貯藏中容易析出沉淀，導致澄明度不合格外，在燈盞花注射劑與葡萄糖注射液(PH3.2～5.5)、葡萄糖氯化鈉注射液混合使用時，如果這些制劑的PH值低于4，則在配制或輸液過程中會析出沉淀，帶來安全問題。
燈盞花素的法定概念是燈盞花中的黃酮類成份(中華人民共和國衛(wèi)生部藥品質(zhì)量標準中藥成方制劑第二十冊，P103燈盞花素)，而不是燈盞花乙素(野黃芩苷)。乙素只是燈盞花素中的一種，然而卻是主要的藥效成份。因此，以燈盞花素冠名的所有制劑的質(zhì)量標準都是以燈盞花乙素的含量決定制劑中藥效成份的量。由于2005年以前的質(zhì)量標準中法定檢測燈盞花乙素含量的方法是紫外分光光度吸收系數(shù)法，該法將凡是在335nm波長的吸收值都誤認為是燈盞花乙素的吸收值，將不是燈盞花乙素，但在335nm波長也有吸收的物質(zhì)都當作乙素計算含量，因而測定結(jié)果必然偏高，致使現(xiàn)市售燈盞花素制劑(口服劑、片劑、水針劑、粉針劑等)中的乙素含量用高效液相色譜法檢測一般都在90％以下。也就是說，現(xiàn)今上市的燈盞花素及其制劑都不是純的燈盞花乙素制劑，而是含6-11種燈盞花黃酮類物質(zhì)的混合物。本申請人于2004年申請、2005年公開的“高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝”(申請?zhí)柗謩e為CN200410010182.1、CN200410040352.6、CN200410062573.3)公開了燈盞花乙素含量在98％以上(用高效液相色譜法檢測)的燈盞花乙素原料藥的制備方法，首次制備出燈盞花乙素(而不是燈盞花素)原料藥。
也就是說，上面所報道的解決燈盞花素注射劑穩(wěn)定性問題的技術(shù)方案都是針對燈盞花素原料藥，而不是針對燈盞花乙素原料藥。
提純了的燈盞花乙素，由于其結(jié)構(gòu)為4′，5′，6′-三羥基黃酮-7-O-葡萄糖醛酸苷，其葡萄糖上的羧基(-COOH)的氫離子與有機堿或無機堿或堿性鹽的金屬離子置換，生成的乙素鹽而較燈盞花素(4-11種黃酮的混合物)易溶于水，但是，燈盞乙素的注射劑(水針劑、粉針劑)也存在與PH較低的注射液(如PH為3.2-5.5的葡萄糖注射液)混合使用時會出現(xiàn)沉淀的問題；在制備高濃度的燈盞花乙素注射液時，易出現(xiàn)澄明度不合格的問題。中國專利申請CN1640409A“一種高純度的燈盞花乙素注射劑”中并沒有涉及上述燈盞花乙素注射劑的不穩(wěn)定性問題。但是對于高純度的燈盞花乙素，其穩(wěn)定性問題較低純度燈盞花乙素更為突出。
因此，燈盞花乙素注射劑的穩(wěn)定性問題迄今仍未解決。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以高純度燈盞花乙素為原料藥的、穩(wěn)定的注射制劑。
本發(fā)明的另一目的在于提供這種注射制劑的制備方法。
本發(fā)明所述的燈盞花乙素注射制劑是由燈盞花乙素-Na與PH為7-8的藥用有機堿和有機酸組成的水溶液穩(wěn)定系統(tǒng)組成的水針劑，或再加藥用賦形劑組成的凍干粉針劑。
所述的燈盞花乙素-Na為純度大于98％的燈盞花乙素原料藥與碳酸氫鈉反應后生成的燈盞花乙素鈉；所述的有機堿為L-精氨酸；所述的有機酸為冰醋酸；所述的水溶液穩(wěn)定系統(tǒng)為L-精氨酸∶冰醋酸的質(zhì)量比為1∶0.28～0.33所組成的水溶液系統(tǒng)。在本制劑中燈盞花乙素∶L-精氨酸的重量比為1∶0.3～0.6；L-精氨酸的濃度為1500～3000mg/100ml注射液。所述的藥用賦形劑為甘露醇、低分子右旋糖酐、甘氨酸等中的一種或2種。
本發(fā)明所述的燈盞花乙素注射劑(水針劑和凍干粉針劑)是以98％以上的燈盞花乙素為藥效成份，以乙素鈉的形式溶解于水，以L-精氨酸-冰醋酸為穩(wěn)定系統(tǒng)，PH為7-8。
本發(fā)明所述的燈盞花乙素注射制劑的制備方法由以下步驟組成配制燈盞花乙素鈉水溶液；配制PH為7-8的L-精氨酸-冰醋酸穩(wěn)定系統(tǒng)；二者混合補加注射用水至所需濃度，除菌過濾分裝，即為水針劑；或再加賦形劑，補加注射用水至所需濃度，除菌過濾分裝，凍干，即為凍干粉針劑。
具體步驟為一、配制穩(wěn)定系統(tǒng)取所述量的L-精氨酸，加入注射水中溶解后，加入所述量的冰醋酸；混勻，補加注射用水，測PH為7-8，即為L-精氨酸-冰醋酸穩(wěn)定系統(tǒng)；二、制備燈盞花乙素-Na溶液稱取燈盞花乙素原料藥，加入注射水中，加熱助溶，加入NaHCO3調(diào)PH至7-8，混勻，即為燈盞花乙素鈉鹽溶液；三、將步驟(一)、(二)混合，補加注射用水至1000ml，使其中L-精氨酸的濃度為1500～3000mg/100ml注射液，除菌過濾或高壓滅菌，分裝，即得到燈盞花乙素注射液；或注射液再加賦形劑，除菌過濾或高壓滅菌，分裝，冷凍干燥，即為注射用燈盞花乙素凍干粉針劑。
本發(fā)明是以純度達98％以上的純乙素單體為原料藥，因而本發(fā)明所述的燈盞花乙素注射制劑是一種全新的注射制劑。本發(fā)明與CN1476840A有著本質(zhì)的區(qū)別1.本發(fā)明是燈盞乙素單體注射劑，而不是燈盞花素(總黃酮)注射劑。2、穩(wěn)定系統(tǒng)由L-精氨酸與冰醋酸組成。(3)加入穩(wěn)定系統(tǒng)的PH為7-8，即注射液PH為7-8，而不是4.5～6.5。4、L-精氨酸的濃度CN1476840A為40-80mg/100ml，本專利為1500～3000mg/100ml，為CN1476840A專利用量的37.5倍。5、CN1476840A燈盞花素∶精氨酸＝1∶2.5，L-精氨酸用量為藥效成份的近2.5倍；本發(fā)明專利燈盞花乙素∶L-精氨酸＝1∶0.3～0.6，只是藥效成份的30％～60％。
本發(fā)明與CN155807A的區(qū)別CN155807A未提及L-精氨酸。在CN155807A所涉及的上百種技術(shù)方案中，均未涉及到本發(fā)明的L-精氨酸-冰醋酸系統(tǒng)。
因此，本發(fā)明的燈盞花乙素水溶液的穩(wěn)定系統(tǒng)，是全新的穩(wěn)定系統(tǒng)。
1、本發(fā)明的穩(wěn)定性試驗經(jīng)HPLC檢測，乙素純度達98％以上；實施例1注射液在PH為3.2、濃度為5％的葡萄糖注射液中＞8小時溶液清亮，無沉淀析出；在PH為4.2的上述葡萄糖溶液中＞24小時溶液清亮，無沉淀析出。不加本發(fā)明穩(wěn)定系統(tǒng)的燈盞花乙素鈉鹽注射液在PH為3.2、5％的葡萄糖注射液中2分鐘溶液混濁，并有顆粒狀沉淀析出，在PH為4.2的5％的葡萄糖注射液中6小時混濁，并有顆粒狀沉淀析出(見表1)。
表1在不同PH值的5％葡萄糖注射液(250ml)中純度達98％以上的燈盞花乙素注射液(50mg/ml)的穩(wěn)定性對比表

2、對兔血小板聚集率的影響用實施例1注射用燈盞花乙素用家兔進行了血小板聚集抑制試驗。日本大耳兔36只，分為5、10、20、40、80mg/kg五個給藥組和1個生理鹽水對照組。每組自耳靜脈給藥1次，連續(xù)注射3周，于第21天靜脈給藥后10分鐘自靜、動脈插管取血，用北京普利生精密儀器研究中心生產(chǎn)的LBY-NJ血液凝集儀測血小板聚集率，用Born氏法計算血小板聚集抑制率，用SPSS 11.5計算機軟件多次給藥單因素方差分析法處理試驗數(shù)據(jù)，結(jié)果80mg/kg體重組對血小板聚集的抑制率為37.46％(見表2)。
表2多次耳靜脈注射燈盞花乙素凍干粉針劑對兔血小板聚集率的影響

注x±S，n＝6，單因素方差分析，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
3、安全性試驗對2％兔紅血球無溶血作用；小鼠急性毒性試驗測得半數(shù)致死量LD50為1677.212mg/kg(95％可信區(qū)為1477.412～1904.02mg)，遠高于燈盞花素的半數(shù)致死量1314mg/kg；32只Begle犬連續(xù)靜注40mg/kg(2400mg/60kg)以上13周，恢復期4周，未見任何毒性反應；食蟹猴3只連續(xù)靜脈注射200mg/kg(12000mg/60kg)，試驗周期10周，未觀察到明顯毒性反應。因此，本發(fā)明制備的燈盞花乙素注射劑更安全有效。
具體實施例方式
實施例1注射液(50mg/ml/瓶)(1)燈盞花乙素-Na的配制(PH7.5)∷燈盞花乙素(純度98％以上)50gNaHCO3(配制成10％水溶液) 8.5～9.5g注射水加至 750ml(2)穩(wěn)定系統(tǒng)配制(PH 7.5)L-精氨酸17g冰醋酸 5ml注射水加至 200ml(3)注射用燈盞花乙素
燈盞花乙素-Na(1) 750ml穩(wěn)定系統(tǒng)(2)200ml注射水補加至 1000ml分裝成1000瓶注射液。
實施例2注射凍干劑(100mg/2ml/瓶)(1)燈盞花乙素-Na的配制(PH7.5)燈盞花乙素(純度98％以上) 100gNaHCO3(配制成10％水溶液) 17～19g注射水補加至 1500ml(2)穩(wěn)定系統(tǒng)配制(PH7.5)L-精氨酸 34g冰醋酸 10ml注射水加至 400ml(3)注射用燈盞花乙素配方燈盞花乙素-Na 1500ml穩(wěn)定系統(tǒng) 400ml甘露醇(干粉) 100g注射水加至 2000ml分裝成1000瓶，凍干，即得凍干制劑。
權(quán)利要求
1.一種燈盞花乙素注射制劑，其特征在于是由燈盞花乙素-Na與PH為7-8的藥用有機堿和有機酸組成的水溶液穩(wěn)定系統(tǒng)組成的水針劑，或再加藥用賦形劑組成的凍干粉針劑。
2.如權(quán)利要求1所述的燈盞花乙素注射制劑，其特征在于所述的燈盞花乙素-Na為純度大于98％的燈盞花乙素原料藥與碳酸氫鈉反應后生成的燈盞花乙素鈉。
3.如權(quán)利要求1所述的燈盞花乙素注射制劑，其特征在于所述的水溶液穩(wěn)定系統(tǒng)為L-精氨酸∶冰醋酸的質(zhì)量比為1∶0.28～0.33所組成的水溶液系統(tǒng)。
4.如權(quán)利要求2、3所述的燈盞花乙素注射制劑，其特征在于其中燈盞花乙素∶L-精氨酸的重量比為1∶0.3～0.6；L-精氨酸的濃度為1500～3000mg/100ml注射液。
5.如權(quán)利要求1所述的燈盞花乙素注射制劑，其特征在于所述的藥用賦形劑為甘露醇、低分子右旋糖酐、甘氨酸等中的一種或2種。
6.一種如權(quán)利要求1所述的燈盞花乙素注射制劑的制備方法，其特征在于由以下步驟組成配制燈盞花乙素鈉水溶液；配制PH為7-8的L-精氨酸-冰醋酸穩(wěn)定系統(tǒng)；二者混合補加注射用水至所需濃度，除菌過濾分裝，即為水針劑；或再加賦形劑，補加注射用水至所需濃度，除菌過濾分裝，凍干，即為凍干粉針劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥劑學領域。本發(fā)明所述的燈盞花乙素注射制劑是由燈盞花乙素－Na與pH為7－8的藥用有機堿和有機酸組成的水溶液穩(wěn)定系統(tǒng)組成的水針劑，或再加藥用賦形劑組成的凍干粉針劑。制備方法由以下步驟組成配制燈盞花乙素鈉水溶液；配制pH為7－8的L－精氨酸－冰醋穩(wěn)定系統(tǒng)；二者混合補加注射用水至所需濃度，除菌過濾分裝，即為水針劑；或再加賦形劑，補加注射用水至所需濃度，除菌過濾分裝，凍干，即為凍干粉針劑。本發(fā)明的燈盞花乙素水溶液的穩(wěn)定系統(tǒng)，是全新的穩(wěn)定系統(tǒng)。
文檔編號A61K47/16GK1850097SQ20061001090
公開日2006年10月25日 申請日期2006年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月19日
發(fā)明者張人偉, 葉萌, 趙爾躍, 樊獻俄 申請人:昆明龍津藥業(yè)有限公司