專利名稱：高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制藥學(xué)中高純度原料藥的制備工藝，尤其是原料藥的規(guī)?；⑦B
續(xù)化、自動(dòng)化的制備工藝。
背景技術(shù)：
燈盞花素系從菊科植物短葶飛蓬燈盞花又名燈盞細(xì)辛全草中分離出來的黃酮 類有效成份，其中主要成份為燈盞花乙素，又名野黃芩苷，化學(xué)名4' 5、6-三羥基黃 酮-7-0-葡萄糖醛酸苷，分子式(:211118012，分子量462. 37。燈盞花乙素屬黃酮苷類，不溶于 水，由于含有羧基，可與堿或堿性鹽生成鹽，而易溶于水，棄除水不溶物。人們利用這一性 質(zhì)，從1984年開始就有多家藥廠相繼制成水針劑上市，由于各家的工藝各異所致，燈盞花 素原料HPLC分析，乙素含量在75X 90X之間，由此衍生的各種制劑在臨床已廣泛用于治 療心腦血管疾病，療效顯著，但臨床上也發(fā)生了不少不良反應(yīng)，如冷熱反應(yīng)、皮膚瘙癢、皮疹 等過敏現(xiàn)象，這些現(xiàn)象的發(fā)生主要是由于原料藥在生產(chǎn)過程中未除盡其中一些致敏雜質(zhì)所 致，這一問題自從燈盞花素產(chǎn)品問世30多年來一直未能解決，直到2004年后才逐步得以解 決。 本申請人先后六次申請"高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝"，其專利號 申請分別為200410062573.3、200410040182. 1、200410040352. 6、200410079583. 8、 2004100479642. 1和200510010723. 0，其方法均能制備純度高于99%的燈盞花乙素，隨著 2009年7月1日高純度燈盞花乙素注射劑2005版增補(bǔ)版標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行；隨著生產(chǎn)規(guī)模的逐 步擴(kuò)大，國家強(qiáng)制要求執(zhí)行"清潔"生產(chǎn)；隨著中藥現(xiàn)代化進(jìn)程的加快，連續(xù)化、自動(dòng)化要求 的提高；我們發(fā)現(xiàn)以上專利仍有缺陷，為了滿足燈盞花乙素原料藥不斷提高的質(zhì)量要求和 技術(shù)要求，實(shí)現(xiàn)燈盞乙素原料藥規(guī)模化、連續(xù)化、自動(dòng)化的制備是現(xiàn)有技術(shù)中亟待解決的技 術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供一種能夠規(guī)?；?、連續(xù)化、自動(dòng)化的 高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝。 本發(fā)明所述的高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝由以下步驟組成 —、在燈盞花素粗品中加入粗品重量2-15倍的水，攪拌，再加入粗品重量35
55%的精氨酸、賴氨酸或羥賴氨酸，所述的精氨酸、賴氨酸或羥賴氨酸配制成重量百分比為
10_30%的水溶液，加熱，溫度為45t:至煮沸，制成穩(wěn)定的水溶液，過濾，除棄濾渣； 二、濾液趁熱加入燈盞花素粗品重量0. 1-2. 0倍的酸性磷酸鹽，酸性磷酸鹽配制
成重量百分比為10_30%的水溶液；再加入所述合并液體積2-3倍的有機(jī)溶劑，使燈盞花乙
素結(jié)晶；所述的有機(jī)溶劑為能夠與水以任意比例相溶的有機(jī)溶劑； 三、在結(jié)晶物中加入以燈盞花素粗品重量計(jì)10倍以上的水，煮沸棄除殘留有機(jī)溶 劑后，待溶液冷卻至6(TC以下后，再加入燈盞花素粗品重量0. 2-1. 0倍的轉(zhuǎn)化劑有機(jī)酸，使燈盞花乙素鹽還原成燈盞花乙素，沉淀物過濾、烘干后即得高純度燈盞花乙素原料。
若所用原料色素過多，燈盞花乙素含量低于85%，仍采用步驟一的方法，所得濾液 上型號為D101或AB-8的大孔樹脂柱層析，棄除色素和高分子物質(zhì)，由于柱層析過程燈盞花 素溶液體積增大，為了節(jié)約有機(jī)溶劑，可采用蒸餾濃縮的方法將體積濃縮到原濾液的體積 后，再進(jìn)行步驟二和步驟三。上大孔樹脂的工藝方法可以采用現(xiàn)有技術(shù)。若所用原料較為 特殊， 一次達(dá)不到目的，可以重復(fù)步驟二，使其達(dá)到要求。 上述加入的酸性磷酸鹽為磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、焦磷酸二氫二鈉 中的一種或幾種，其作用是作為靜電效應(yīng)調(diào)節(jié)劑。 上述的能與水以任意比例相溶的有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、丁酮、四氫呋 喃中的一種或幾種。 上述的有機(jī)酸為冰醋酸、丙酸、醋酸酐中的一種或幾種。 在步驟一中，所加入的水量太小，不利于燈盞花素粗品的溶解，但加入量太大，又 會(huì)使得步驟二中加入的有機(jī)溶劑過多，造成浪費(fèi)。加入的精氨酸、賴氨酸或羥賴氨酸主要 是用于使燈盞花素粗品溶解，其加入量和濃度的要求并不需要十分苛求，只要能夠達(dá)到溶 解的目的即可。步驟三中，對溫度條件的要求也不十分苛刻，棄除殘留有機(jī)溶劑即可，但在 60°C以下轉(zhuǎn)化形成的沉淀物顆粒較大，易于過濾。在柱層板和濃縮過程，也沒有改變燈盞花 素鹽的形式，不影響步驟二和步驟三的實(shí)施，也無特殊的條件要求。 以燈盞花素的理化性質(zhì)及化學(xué)結(jié)構(gòu)上的特征進(jìn)行工藝設(shè)計(jì)，燈盞花乙素在水中不 溶，在甲醇、乙醇、丙酮中的溶解度也很少，只有燈盞花乙素結(jié)構(gòu)上的活性基團(tuán)羧基上的『 被堿性氨基酸團(tuán)等取代后，才能溶于水中。溶于水后才能進(jìn)行過濾棄除水不溶物。水溶性 雜質(zhì)難以除去的原因，主要還是由于燈盞花乙素結(jié)構(gòu)上的羧基和多個(gè)羥基與水溶性雜質(zhì)結(jié) 構(gòu)上的相似所致，形成一個(gè)個(gè)相互制約強(qiáng)的帶電體，由于其靜電效應(yīng)，與水溶性雜質(zhì)易產(chǎn)生 締合、絡(luò)合，故難以分開。根據(jù)這一因素，本發(fā)明采用酸性磷酸鹽降低燈盞花乙素與水溶性 雜質(zhì)的靜電效應(yīng)，燈盞花乙素與水溶性雜質(zhì)的締合力、絡(luò)合力下降，然后再用極性相對較低 的有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、丙酮等結(jié)晶和共溶，燈盞花乙素就被結(jié)晶出來，而水溶性雜質(zhì)則溶 于母液中，達(dá)到燈盞花乙素與其它雜質(zhì)分離的目的。燈盞花乙素結(jié)晶還在是燈盞花乙素鹽， 只是改變了鹽的形式，溶解度有所降低，但能完全溶于水中，再利用燈盞花乙素活性基團(tuán)羧 基的性質(zhì)，用有機(jī)酸如冰醋酸、丙酸等將燈盞花乙素鹽還原成燈盞花乙素，燈盞花乙素沉淀 里殘留的有機(jī)酸通過烘烤易棄除，而無機(jī)酸如鹽酸、硫酸的殘留物必須通過大量的水洗滌 才能棄除。 在本發(fā)明中，由于加入了酸性磷酸鹽，使得有機(jī)溶劑用量顯著降低，只需加入2-3 倍，并且作為靜電效應(yīng)調(diào)節(jié)劑降低燈盞花乙素與水溶性雜質(zhì)的締合力、絡(luò)合力，使其與雜質(zhì) 容易分離。故用純度較低的燈盞花素粗品原料也能一步純化達(dá)到乙素純度99%以上的目 的。若不直接加靜電效應(yīng)調(diào)節(jié)劑，就要再轉(zhuǎn)化燈盞花乙素鹽的形成，出現(xiàn)第一個(gè)斷點(diǎn)，若用 有機(jī)溶劑洗滌又出現(xiàn)第二個(gè)斷點(diǎn)，也就是不能連續(xù)化，從而不能自動(dòng)化控制的原因所在。而 且酸性磷酸鹽可以和有機(jī)酸交換而溶于水，不進(jìn)入燈盞花乙素結(jié)晶體內(nèi)形成包裹，從而不 需要進(jìn)行水洗工序，使得整個(gè)工藝能夠連續(xù)進(jìn)行。本發(fā)明所加入的有機(jī)酸殘留可以在烘干 過程中揮發(fā)，也不需要水洗；若不用所述的有機(jī)酸，就會(huì)出現(xiàn)第三個(gè)斷點(diǎn)，使得整個(gè)工藝不 能夠連續(xù)進(jìn)行。即便是使用較為粗級的原料，需要上大孔樹脂及濃縮洗脫液，也不影響工藝的連續(xù)化。連續(xù)化生產(chǎn)正是規(guī)?；牧己没A(chǔ)。在整個(gè)工藝連續(xù)化的同時(shí)，也就意味著能 夠進(jìn)行自動(dòng)化控制。本發(fā)明所加入的所有輔料都是以所投粗品的重量倍數(shù)計(jì)算，便于自動(dòng) 化控制。對于間歇性生產(chǎn)，往往在規(guī)模化方面受到很大的限制，更不能作自動(dòng)化的設(shè)計(jì)。
本發(fā)明與現(xiàn)有的6個(gè)專利的比對表
本發(fā)明ZL200410 062573. 3ZL200410 040182. 1ZL200410 040352. 6ZL200410 079583. 8ZL200410 079642. 1ZL200510 010723.0
助溶劑精氨酸、賴氨 酸或羥賴氨酸堿性堿金屬磷 酸鹽堿性磷酸衍生堿性磷次衍生堿或堿金屬碳 酸鹽有機(jī)堿減性鈉鹽和 三(羥甲基) 胺基甲烷
靜電效應(yīng) 調(diào)節(jié)劑酸性磷酸鹽不加靜電效應(yīng) 調(diào)節(jié)劑不加靜電效應(yīng) 調(diào)節(jié)劑不加靜電效應(yīng) 調(diào)節(jié)劑不加靜電效應(yīng) 調(diào)節(jié)劑不加靜電效應(yīng) 調(diào)節(jié)劑不加靜電效 應(yīng)調(diào)節(jié)劑
燈盞花乙 素鹽轉(zhuǎn)化 劑有機(jī)酸無機(jī)酸鹽酸、 硫酸無機(jī)酸鹽酸、 硫酸無機(jī)酸鹽酸、 硫酸無機(jī)酸鹽酸、 硫酸無機(jī)酸鹽酸、 硫酸無機(jī)酸鹽 酸、硫酸
燈盞花素 粗品原料 純度要求85%以上90%以上90%以上90%以上90%以上90%以上90%以上
有機(jī)溶劑 殘留無不易合格不易合格不易合格不易合格不易合格不易合格
有機(jī)溶劑 用量2- 3倍3-15倍3-15倍3-15倍3-15倍3-15倍3 15倍
有機(jī)溶劑 洗滌過程不需洗滌三次洗滌三次洗滌三次洗滌三次洗滌三次洗滌三次洗滌
加轉(zhuǎn)化劑 條件水溶液10 60%有機(jī) 溶劑10 60%有機(jī) 溶劑10 60%有機(jī) 溶劑10 60%有機(jī) 溶劑10 60%有機(jī) 溶劑10 60%有 機(jī)溶劑
水洗滌沉 淀過程不需洗滌洗至中性洗至中性洗至中性洗至中性洗至中性洗至中性
連續(xù)化、自 動(dòng)化程度從投料到出料 能連續(xù)化、自 動(dòng)化有三處斷點(diǎn)不 能連續(xù)化、自 動(dòng)化有三處斷點(diǎn)， 不能連續(xù)化、 自動(dòng)化有三處斷點(diǎn)， 不能連續(xù)化、 自動(dòng)化有三處斷點(diǎn)， 不能連續(xù)化、 自動(dòng)化有三處斷點(diǎn)， 不能連續(xù)化、 自動(dòng)化有三處斷 點(diǎn)，不能連 續(xù)化、自動(dòng) 化
純度檢測 結(jié)果99.8449%99. 43%99.2888%99. 5315%99. 6872%99.2851%99. 5861%
LD50測定 結(jié)果1236 1314mg/kg 1794. 98 1987. 64 mg/kg1314mg/kg — 1794. 98mg/kg1314mg/kg — 1794. 98mg/kg1314mg/kg — 1794.98mg/kg1314mg/kg — 1794. 98mg/kg1314mg/kg — 1794.98mg/kg1314mg/kg 1794. 98mg/ kg 本發(fā)明所述工藝步驟簡單，適用于規(guī)模化、連續(xù)化、自動(dòng)化的大生產(chǎn)，所制備燈盞 花乙素經(jīng)高壓液相色譜(HPLC)分析，燈盞花乙素純度99.5%以上，填補(bǔ)了本申請人以前 申請的六個(gè)"高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝"專利的缺陷。即①解決了較低純度燈 盞花素粗品也能一步純化到99%以上的問題；@解決了高純度燈盞花乙素原料有機(jī)溶劑殘留物不易處理合格的問題；③解決了有機(jī)溶劑用量太大，耗費(fèi)能源太多的問題； 解決 了有機(jī)溶劑洗滌過程不能連續(xù)化、自動(dòng)化的問題；⑤解決了加轉(zhuǎn)化劑還需要大量有機(jī)溶劑， 有機(jī)溶劑被燈盞花乙素包裹，烘烤難棄除的問題，減少資源浪費(fèi)；⑥解決了水洗滌沉淀至中 性，不能連續(xù)化、自動(dòng)化操作的問題；⑦解決了 PH值控制，不能定量操作，避免人為因素、儀 器誤差造成的問題；⑧解決了生產(chǎn)周期較長，不易控制微生物污染的問題；⑨也解決了燈 盞花素在30多年的臨床應(yīng)用中沒有解決的技術(shù)難題，即解決了注射劑存在的冷熱反應(yīng)、皮 疹、皮膚瘙癢等不良反應(yīng)；⑩降低毒性，提高了療效和使用的安全性，LD5。由1236 1314mg/ kg提高到1794. 98 1987. 64mg/kg ;O.本發(fā)明所制得的產(chǎn)品不僅可作為原料藥，還可用作對 照品，為其他人對該產(chǎn)品的研究提供了方便，真正做到了中藥西化，符合國家的產(chǎn)業(yè)政策。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1液相色譜圖。
圖2為本發(fā)明實(shí)施例2液相色譜圖。
使用儀器類型高效液相色譜 梯度方式恒流 檢測器紫外 儀器型號Agilent1100 波長(nm) :335nm 柱溫(。C ) :32 計(jì)算方法面積歸一法 檢測方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(用十八烷基鍵合硅膠為填充劑甲 醇-O. 1%磷酸溶液(40 : 60)為流動(dòng)相；檢測波長為335nm。理論板數(shù)按燈盞乙素峰計(jì)算 不應(yīng)低于5000)。取本品，按照每10mg燈盞乙素加水lml溶解，加甲醇制成每lml約含燈盞 乙素0. 4mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1. 0ml，置100ml量瓶中，加甲醇 至刻度，混勻，作為對照溶液。取對照溶液5ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分 色譜峰的峰高為滿量程的10%。再取供試品溶液5ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成 分峰保留時(shí)間的2. 5倍左右。測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)峰面積并與對照溶液主成分 的峰面積比較，計(jì)算出燈盞花乙素純度。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 :稱取燈盞花乙素含量89. 25%的粗品原料10kg，加水50L攪拌，加10% 精氨酸液38L加熱至沸，補(bǔ)加水制成100L水溶液，濾除不溶物后，濾液趁熱邊加邊攪加入 10%的磷酸二氫鈉液50L，然后邊加邊攪拌再加入450L丙酮，使燈盞花乙素結(jié)晶，靜置3小 時(shí)后，過濾，抽干丙酮，加150L水煮沸棄除殘留有機(jī)溶劑，待溶液冷卻至60°C以下時(shí)，再加 入20%的冰醋酸液25L，靜置2小時(shí)以后，抽濾，烘干得干品6. 25kg ;即為高純度燈盞花乙 素原料，經(jīng)HPLC測定乙素純度為99. 5907%，如圖1所示。 實(shí)施例2 :稱取燈盞花乙素含量84. 24X的粗品原料20kg，加水IOOL攪拌，加20% 精氨酸液38L加熱至沸，補(bǔ)加水制成200L水溶液，濾除不溶物后，濾液上型號為AB-8的大 孔樹脂柱層析，棄除色素和高分子物質(zhì)后，收集洗脫液蒸餾濃縮至200L左右，濃縮液趁熱 邊加邊攪拌加入10%的磷酸二氫鉀液100L，然后邊加邊攪拌再加入800L丙酮，使燈盞花 乙素結(jié)晶，靜置3小時(shí)后，過濾，抽干丙酮，加200L水煮沸棄除殘留有機(jī)溶劑，待溶液冷卻至 60°C以下時(shí)，再加20%的醋酸酐液50L，靜置2小時(shí)后，抽濾，烘干得干品11. 61kg，即為高純度燈盞花乙素原料，經(jīng)HPLC測定乙素純度為99. 8448，如圖2所示。
權(quán)利要求
一種高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝，其特征在于由以下步驟組成一、在燈盞花素粗品中加入粗品重量2-15倍的水，攪拌，再加入粗品重量35～55％的精氨酸、賴氨酸或羥賴氨酸，所述的精氨酸、賴氨酸或羥賴氨酸配制成重量百分比為10-30％的水溶液，加熱，溫度為45℃至煮沸，制成穩(wěn)定的水溶液，過濾，除棄濾渣；二、濾液趁熱加入燈盞花素粗品重量0.1-2.0倍的酸性磷酸鹽，酸性磷酸鹽配制成重量百分比為10-30％的水溶液；再加入所述合并液體積2-3倍的有機(jī)溶劑，使燈盞花乙素結(jié)晶；所述的有機(jī)溶劑為能夠與水以任意比例相溶的有機(jī)溶劑；三、在結(jié)晶物中加入以燈盞花素粗品重量計(jì)10倍以上的水，煮沸棄除殘留有機(jī)溶劑后，待溶液冷卻至60℃以下后，再加入燈盞花素粗品重量0.2-1.0倍的轉(zhuǎn)化劑有機(jī)酸，使燈盞花乙素鹽還原成燈盞花乙素，沉淀物過濾、烘干后即得高純度燈盞花乙素原料。
2. 如權(quán)利要求1所述的高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝，其特征在于所述加入的 酸性磷酸鹽為磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨、焦磷酸二氫二鈉中的一種或幾種。
3. 如權(quán)利要求1所述的高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝，其特征在于所述的能與 水以任意比例相溶的有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、丁酮、四氫呋 喃中的一種或幾種。
4. 如權(quán)利要求1所述的高純度燈盞花乙素原料藥的制備工藝，其特征在于所述的有機(jī) 酸為冰醋酸、丙酸、醋酸酐中的一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制藥學(xué)中高純度原料藥的制備工藝。本發(fā)明所述工藝由以下步驟組成一、在燈盞花素粗品中加入粗品重量2-15倍的水，攪拌，再加入粗品重量35～55％的精氨酸、賴氨酸或羥賴氨酸，加熱，溫度為45℃至煮沸，制成穩(wěn)定的水溶液，過濾，除棄濾渣；二、濾液趁熱加入燈盞花素粗品重量0.1-2.0倍的酸性磷酸鹽，酸性磷酸鹽配制成重量百分比為10-30％的水溶液；再加入所述合并液體積2-3倍的有機(jī)溶劑，使燈盞花乙素結(jié)晶；三、在結(jié)晶物中加入以燈盞花素粗品重量計(jì)10倍以上的水，煮沸，待溶液冷卻至60℃以下后，再加入燈盞花素粗品重量0.2-1.0倍的轉(zhuǎn)化劑有機(jī)酸，使燈盞花乙素鹽還原成燈盞花乙素，沉淀物過濾、烘干后即得高純度燈盞花乙素原料。
文檔編號C07H17/00GK101735291SQ20091016321
公開日2010年6月16日 申請日期2009年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月22日
發(fā)明者張人偉, 樊獻(xiàn)俄, 趙爾躍 申請人:樊獻(xiàn)俄