專利名稱：甘草酸銨鹽在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘草酸銨鹽(甘草酸單銨、甘草酸二銨、甘草酸三銨)在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
炎性腸病(Inflammatory bowel disease IBD)是一種困擾醫(yī)生和科學(xué)家多年的頑疾，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克隆氏病(Crohn’s disease，CD)兩種，前者是一種慢性非特異性結(jié)腸炎癥，重者發(fā)生潰瘍甚至癌變，病變主要累及結(jié)腸粘膜及粘膜下層，臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛和粘液膿血便，后者病變可累及到胃腸道各部位，是一種慢性肉芽舯性炎癥，呈階梯性分布，臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、瘺管和不同程度的全身癥狀。第十屆歐洲胃腸病學(xué)年會上，歐洲克隆氏病與炎性腸病聯(lián)合會主席RodMitchell指出，目前在歐洲有100萬IBD患者，在西方國家大部分地區(qū)潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率穩(wěn)定，最高到10例/10萬人口。而克隆氏病的發(fā)病率在過去30年升高了600％，我國發(fā)病率也呈明顯的上升趨勢，此病癥可導(dǎo)致患者發(fā)生結(jié)直腸癌的風(fēng)險顯著升高，嚴重威脅人類的健康。盡管研究多年，人類目前仍然無法完全治愈該病。
目前常用的治療藥物為(1)氨基水楊酸類早在40年代就開始于IBD的治療，效果較好的是水楊酸偶氮磺胺吡啶，但可造成急慢性腎中毒，副反應(yīng)多，長期用藥患者難以耐受；(2)皮質(zhì)類固醇類1955年，Truelove應(yīng)用強的松龍治療UC取得良效，至今皮質(zhì)類固醇類仍為治療IBD的主藥，對控制發(fā)作特別有效，對中重度患者和活動期病例亦然，但有明顯的副作用，不易長期使用，停藥后易復(fù)發(fā)；(3)免疫抑制劑臨床應(yīng)用免疫抑制劑始于1962年，目前已成為治療IBD的一種重要方法，常用藥物包括嘌呤類藥物、氨甲蝶呤及環(huán)孢菌素等，但可產(chǎn)生包括過敏及抑制造血等嚴重的不良反應(yīng)?？梢?，研制新的安全、有效藥物，對人類最終攻克這一頑癥，有著重要的意義。我國傳統(tǒng)的天然藥物歷經(jīng)數(shù)千年臨床，為尋找有效藥物提供了豐富的藥源，因此從天然，傳統(tǒng)藥物中篩選治療炎癥性腸病的藥物不僅是可行的，而且可填補我國在這一領(lǐng)域的空白。
甘草二銨目前為我國主要治療肝病的藥物，具有療效確切，毒副作用小等特點。但甘草酸銨鹽防治炎癥性腸病(IBD)的作用尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對上述問題提供甘草酸銨鹽在制備抗炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用，用甘草酸銨鹽制備的抗炎癥性腸病的藥物，具有療效確切，副作用少等特點。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是甘草酸銨鹽在制備抗炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明經(jīng)口及靜脈注射給予甘草酸銨鹽，一天一次，10天后，可使炎癥性小鼠結(jié)腸臟器指數(shù)、結(jié)腸損傷系數(shù)明顯降低，結(jié)腸MPO活性明顯升高，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA明顯降低，SOD活性及GSH含量明顯升高，表明甘草酸銨鹽可治療炎癥性腸病。
本發(fā)明經(jīng)口給予甘草酸單銨、甘草酸二銨、甘草酸三銨14mg/kg，一天一次，10天后，結(jié)腸系數(shù)分別下降14.3％、39.4％、14.9％；炎癥評分級別分別下降1.5倍、1.73倍、1.5倍；MPO活性分別升高1.25倍、1.20倍、0.20倍。
本發(fā)明經(jīng)注射給予甘草酸二銨鹽14mg/kg，一天一次，10天后，結(jié)腸系數(shù)下降45.7％、炎癥評分級別下降2.75倍，MPO活性升高1.67倍。


附圖為本發(fā)明甘草酸銨鹽處理10天對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷的保護作用圖。
具體實施例方式
本發(fā)明通過以下實施例作進一步說明中醫(yī)藥學(xué)在治療慢性、疑難疾病方面常能發(fā)揮重要作用，療效好、特別是毒副作用小等特點。本發(fā)明選擇甘草酸銨鹽作為抗炎癥性腸病的藥物，通過建立炎癥性腸病的動物模型，探討甘草酸銨鹽對炎癥性腸病的影響及藥物作用機制。旨在選擇一種抗炎癥性腸病療效確切、毒性小的藥物。
本發(fā)明通過建立炎癥性腸病動物模型等技術(shù)揭示了甘草酸銨鹽對炎癥性腸病的作用及機制。
材料與方法藥品及試劑 甘草酸單銨、甘草酸二銨、甘草酸三銨，由深圳資福藥業(yè)提供；美莎拉秦緩釋顆粒劑(艾迪莎)，由法國愛的發(fā)制藥集團提供；MPO檢測試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供。牛血清白蛋白、DTNB及GSH標(biāo)準(zhǔn)品均由sigma公司提供。TBA、鄰苯三酚、乙酸、乙醚等試劑均為市售分析純試劑。
動物 健康成熟雄性昆明小鼠45只，體重18～22g，雌雄各半，由武漢大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(鄂)2003-2004。小鼠飼料，購于武漢大學(xué)實驗動物中心。
儀器TG328A型分析天平，紫外分光光度計，高速勻漿器等。
實驗方法動物分組與處理昆明小鼠隨機分組正常對照組，模型組，艾迪莎陽性藥物對照組，甘草酸單銨口服組，甘草酸二銨口服組，甘草酸三銨口服組，甘草酸二銨注射組。艾迪莎組小鼠灌腸給予艾迪莎600mg/Kg，一日一次； 甘草酸銨鹽口服組小鼠分別經(jīng)口給予甘草酸單銨、甘草酸二銨、甘草酸三銨14mg/Kg，一日一次；甘草酸二銨注射組小鼠腹腔注射給予甘草酸二銨14mg/Kg，一日一次；正常對照組和模型組小鼠經(jīng)口給予等量的生理鹽水，一日一次。給藥7天后，除正常對照組外，其余各組乙酸刺激造結(jié)腸炎模型，小鼠于第6日給藥后禁食，次日給藥后，乙醚吸入麻醉，用聚乙烯管給小鼠直腸注入乙酸，注入前先排清腸內(nèi)大便，將聚乙烯管插入小鼠肛門約1.5cm，注入0.1ml6％的乙酸，1min后用等張生理鹽水沖洗兩次，讓動物保持平躺，自然蘇醒。正常對照組直腸注入等體積的生理鹽水。各組小鼠持續(xù)給藥至第10天，末次給藥后24h，頸椎脫臼處死，冰上解剖，取全段結(jié)腸，稱重，計算結(jié)腸臟器指數(shù)，進行結(jié)腸炎癥(CMDI)評分。取結(jié)腸組織用Tris緩沖液制成5％的勻漿液，供檢測MPO、MDA、SOD、GSH。
檢測指標(biāo)結(jié)腸損傷指數(shù)(CMDI)取全段結(jié)腸，沿腸系膜剪開腸腔，肉眼觀察腹腔粘連及結(jié)腸潰瘍、充血情況，按表1評分標(biāo)準(zhǔn)(CMDI)評分。
髓過氧化物酶(MPO)準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量體積比為1∶19加入Tris緩沖勻漿液，高速勻漿后反復(fù)凍融，制成5％的腸勻漿液，Lowry法檢測蛋白量。按MPO檢測試劑盒檢測MPO活性。
脂質(zhì)過氧化物酶(MDA)采用TBA比色法檢測腸勻漿中MDA含量。
超氧化物歧化酶(SOD)采用鄰苯三酚法檢測腸勻漿中SOD活力。
谷胱甘肽(GSH)按GSH檢測試劑盒，檢測腸勻漿中GSH的含量。
表1.結(jié)腸損傷指數(shù)(CMDI)評分標(biāo)準(zhǔn)

兩項分數(shù)相加為總得分。
實驗結(jié)果1.甘草酸銨鹽對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷的保護作用由附圖1可見，甘草酸銨鹽經(jīng)口和注射給藥均可明顯的保護乙酸導(dǎo)致的小鼠結(jié)腸損傷。模型組可見重度粘連，潰瘍多于2處以上，評分級別7.5；陽性對照組可見一處潰瘍，未見粘連，輕度紅腫，評分級別2.5級；甘草酸單銨口服組、甘草酸二銨口服組、甘草酸三銨口服組、甘草酸二銨注射組評分級別分別為3.0級、2.75級、3.0級、2.0級，其中甘草酸二銨注射組效果最好，表明甘草酸銨對炎癥性腸病有明顯的保護作用。結(jié)果見附圖。
2.甘草酸銨鹽對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸臟器系數(shù)、損傷系數(shù)、MPO活性的影響可見甘草酸銨鹽能明顯減輕炎癥性腸病小鼠結(jié)腸水腫，單銨組、二銨組、三銨組、二銨注射組腸臟器系數(shù)分別下降14.3％、39.4％、14.9％、45.7％，與陽性對照藥的16.7％相比，效果較好；炎癥評分級別分別降低1.5倍、1.73倍、1.5倍、2.75倍，與陽性對照藥相似；可使MPO活性分別升高1.25倍、1.20倍、0.20倍、1.67倍，較陽性對照藥升高的0.47倍相比作用更顯著，進一步表明甘草酸銨鹽對炎癥性腸病的有益作用，結(jié)果見表2。
表.2甘草酸銨鹽對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸臟器系數(shù)、炎癥評分、MPO活性的影響(x±s，n＝10)

與正常組相比**P＜0.01；與模型組相比篇▲P＜0.05▲▲P＜0.013.甘草酸銨鹽對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸MDA、6SH含量及SOD活性的影響與正常組相比，模型組結(jié)腸組織中MDA的含量顯著升高(P＜0.01)，GSH含量及SOD活性顯著下降；與模型組相比，甘草各銨鹽均可有效改善上述指標(biāo)，且較陽性對照藥效果更好，結(jié)果見表3。
表3甘草酸銨鹽對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸MDA、GSH含量及SOD活性的影響(x±s，n＝10)

與正常組相比**P＜0.01；與模型組相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01實驗結(jié)論甘草酸銨鹽能有效保護炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷，其機制可能與增強組織抗氧化能力有關(guān)，與目前主要治療炎癥性腸病的藥物—艾迪莎相比，療效更為顯著。甘草酸二銨臨床主要用于肝病的治療，長期臨床應(yīng)用顯示，安全范圍大，毒副作用小，無激素類的全身副作用，也無免疫抑制劑的免疫抑制作用。本發(fā)明應(yīng)用甘草酸銨鹽治療炎癥性腸病采用的劑量在臨床常用量范圍內(nèi)，表明甘草酸銨鹽在炎癥性腸病治療中不僅有效，而且安全、副作用小。
權(quán)利要求
1.甘草酸銨鹽在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所述甘草酸銨鹽為甘草酸單銨、甘草酸二銨或甘草酸三銨。
全文摘要
本發(fā)明涉及甘草酸銨鹽在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。甘草酸銨鹽可通過抑制炎癥反應(yīng)及抗氧化作用達到抗炎癥性腸病的作用。用甘草酸銨鹽制備的抗炎癥性腸病的藥物對炎癥性腸病具有療效好，安全范圍大等優(yōu)點，可以作為抗人炎癥性腸病的藥物。
文檔編號A61P1/00GK1846706SQ200610018369
公開日2006年10月18日 申請日期2006年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月17日
發(fā)明者丁虹, 馬瑤, 周惠萍 申請人:武漢華納生物工程有限公司