專利名稱：含有納米銀的阿莫西林抗菌劑及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含有納米銀的阿莫西林抗菌劑及其制備方法、應(yīng)用。
背景技術(shù)：
β-內(nèi)酰胺類(β-lactam)和磺胺類化合物是較為廣譜的抗菌素。由于長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)的應(yīng)用致使大量的細(xì)菌對(duì)此類抗菌劑產(chǎn)生強(qiáng)的抗藥性，因而在生活中和醫(yī)療上，通常采用增加抗菌的劑量來達(dá)到滿意的抗菌效果。這樣做的后果只能是不斷的增加細(xì)菌的抗藥性，細(xì)菌的抗藥性愈來愈成為影響人類健康和生活的嚴(yán)重問題。近年來，人們對(duì)細(xì)菌的抗藥性的機(jī)理進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類的抗藥性與其產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺類水解酶(β-lactamases)的量有關(guān)，β-內(nèi)酰胺類水解酶可水解β-內(nèi)酰胺類抗菌素，使其不能破壞細(xì)胞壁的合成，從而使其喪失藥效。為了滿足醫(yī)療和生活上的需要，藥劑學(xué)家和醫(yī)學(xué)家從各種不同角度不斷發(fā)展新的β-內(nèi)酰胺類抗菌素，如通過改變?chǔ)?內(nèi)酰胺類的非有效部位的部分結(jié)構(gòu)，使藥劑對(duì)水解酶呈現(xiàn)惰性，從而避免水解而失效；同時(shí)(或交替)使用兩種抗菌素，其原理是當(dāng)細(xì)菌對(duì)一種抗菌素產(chǎn)生抗藥性后，另外一種抗生素殺死細(xì)菌；在抗菌素中加入一些輔助有機(jī)物，如克拉維酸(Clavulanic acid)，這些輔助成分可以抑制β-內(nèi)酰胺類酶，從而使抗菌素的藥效得以發(fā)揮。這些方法在一定程度上解決了抗藥性的問題，但沒能顯著的提高抗菌劑的藥效，特別是隨著有些有機(jī)成份的進(jìn)入，藥物對(duì)人體的副作用也隨之增加。在人類與自然的抗?fàn)幹邪l(fā)現(xiàn)許多礦物和生物中存在具有抗菌作用的物質(zhì)，如硫磺、銀、殼聚糖、羥基磷灰石等等。近20年來，隨著納米科技的誕生和發(fā)展，人們驚喜的發(fā)現(xiàn)有多種納米顆粒也具有較好的抗菌作用，如納米金、納米銀、納米二氧化鈦、納米羥基磷灰石。因此，將可生物降解的無毒的納米級(jí)生物抗菌劑或無機(jī)低(或無)毒性的納米顆粒和常規(guī)抗生素聯(lián)合抗菌，以有效解決抗生素的低效是本領(lǐng)域人員的研究目標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出一種含有納米銀的阿莫西林抗菌劑、制備方法及其應(yīng)用。
本發(fā)明提出的一種含有納米銀的阿莫西林抗菌劑，由阿莫西林和納米銀混合而成，其中，阿莫西林可采用原藥和主要有效成分為阿莫西林的制劑，納米銀粒徑為10-50nm，阿莫西林與納米銀的質(zhì)量比為50∶1-10∶1。
本發(fā)明中，所述的阿莫西林制劑包括針劑、粉劑、片劑及氣霧劑等一種。
本發(fā)明提出的含有納米銀的阿莫西林抗菌劑的制備方法，在常溫下，將阿莫西林與納米銀按比例混合，攪拌8-20分鐘，即得所需產(chǎn)品。
本發(fā)明中，所述納米銀可以利用可溶性銀鹽，采用溶膠-凝膠法、微乳液法、反相膠束法、氣相沉積法等多種方法獲得，制備方便，也可以通過市售獲得(商業(yè)化)。本發(fā)明中所用納米銀通過下述方法制備獲得采用可溶性銀鹽，在常溫常壓下，向濃度為0.01-0.1mol/L的銀鹽中注入氨水，攪拌，維持溶液pH值為11-12，反應(yīng)時(shí)間為10-15分鐘，得到銀氨(Ag(NH3)2]+)溶液，把[Ag(NH3)2]+溶液和5wt％的十二烷基硫酸鈉(SDS)水溶液以1∶0.9-1∶1.1的體積比在反應(yīng)瓶中均勻混合后，置于溫度為60-80℃磁力攪拌器上，用醫(yī)用輸液器逐滴加入維生素C，維生素C的濃度為0.02mol/L，并保持?jǐn)嚢柁D(zhuǎn)速為100-130轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)1.5-2.5小時(shí)(以維生素C的用量略大于化學(xué)計(jì)量中的量為準(zhǔn))，得到黑色的沉淀物，以酒精為溶劑，離心洗滌沉淀物，以除去表面活性劑，然后減壓或真空蒸餾，溫度為50-80℃，即得納米銀。
本發(fā)明中，所述制備納米銀的銀源也可以采用金屬銀的塊體和粉體。如塊體或粉體銀通過激光誘導(dǎo)氣相沉積法、混合等離子法、濺射法、高能球磨法等物理方法制備出納米銀。
本發(fā)明所述的含有納米銀的阿莫西林抗菌劑用于大腸桿菌，也可用于溶血性鏈球菌、肺炎球菌、不產(chǎn)青霉素酶金葡菌或流感桿菌、奇異變形桿菌、腸球菌屬等細(xì)菌抑(抗)菌的應(yīng)用。
本發(fā)明獲得的含有納米銀的阿莫西林抗菌劑的抗菌性能的測(cè)試采用通用的抗菌材料抗菌性能的測(cè)試方法。在細(xì)菌量為5.0×106CFU下，分別檢測(cè)阿莫西林、納米銀的最小抑菌濃度；在同樣的條件下，分別加入納米銀和阿莫西林的不同濃度混合溶液并和它們單獨(dú)使用時(shí)進(jìn)行比較。根據(jù)Sondi描述的方法，建立它們的生長(zhǎng)曲線。
以試驗(yàn)大腸桿菌以例，具體的測(cè)試方法是采用微生物學(xué)通用抗菌劑抗菌性能測(cè)試方法，試驗(yàn)菌株(大腸桿菌F220)在LB培養(yǎng)基中37℃下被激活，繼而培養(yǎng)至細(xì)菌量達(dá)到108～109CFU。然后對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行無菌操作過濾洗滌，將菌種稀釋至無菌水中獲得5.0×106CFU的細(xì)菌樣本。
把這些細(xì)菌分成相等的若干等分，分別加入0mg/ml，0.150mg/ml，0.300mg/ml，0.375mg/ml，0.450mg/ml和0.525mg/ml的阿莫西林溶液和0μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml，20μg/ml，25μg/ml，30μg/ml，35μg/ml，40μg/ml的納米銀分散液，然后在溫度37℃下培養(yǎng)24小時(shí)。這樣可分別檢測(cè)到在細(xì)菌量為5.0×106CFU下，阿莫西林、納米銀的最小抑菌濃度。從圖2和3可以看出阿莫西林的最小抑菌濃度MIC＝0.525mg/ml；納米銀的最小抑菌濃度約為MIC＝40μg/ml。根據(jù)Sondi方法，建立它們的生長(zhǎng)曲線。大腸桿菌被添加到分別含有0.15mg/ml阿莫西林，5μg/ml納米銀和0.15mg/ml阿莫西林與5μg/ml納米銀混合抗菌劑的100ml LB液體培養(yǎng)基中。細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線通過檢測(cè)不同時(shí)間時(shí)菌液濃度的OD值來確定。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明提供了一種對(duì)常規(guī)抗菌劑，特別是細(xì)菌對(duì)其產(chǎn)生抗藥性的抗(滅)菌劑的改良和優(yōu)化的新思路、新途徑。即，在原有藥劑的基礎(chǔ)上，加入少量納米級(jí)無機(jī)抗菌材料，實(shí)施協(xié)同抗菌。這樣不僅大大降低了原有藥物為了克服抗藥性而人為增加的劑量，而且在在原有藥劑劑量較低的情況下，亦能達(dá)到較為理想的滅菌(或抑菌)效果。
2、本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了兩種抗菌劑的優(yōu)化組合，協(xié)同抗菌效果顯著優(yōu)于同等劑量的二者單獨(dú)使用時(shí)的效果之和，對(duì)傳統(tǒng)抗菌藥物來說是一個(gè)煥發(fā)新活力的契機(jī)。
3、本發(fā)明以常用的抗菌劑阿莫西林和易得的納米銀協(xié)同抗菌為主題，詳細(xì)闡明了協(xié)同抗菌的理念，對(duì)抗菌藥物新劑型的建立具有借鑒和指導(dǎo)意義。
5、本發(fā)明中所涉及的阿莫西林和納米銀協(xié)同抗菌，可以較為方便的制備成復(fù)合抗菌劑，且具有原料易得，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，操作方便，有利于工業(yè)化及商品化等優(yōu)點(diǎn)。具有用于家居、醫(yī)藥、環(huán)境、化工、以及公共場(chǎng)所的消毒劑和(或)殺菌劑的潛力。因而有較為廣闊的發(fā)展前景和應(yīng)用空間。


圖1 納米銀的TEM照片和ED圖。
圖2 不同濃度的阿莫西林抗菌效應(yīng)曲線圖。
圖3 不同濃度的納米銀抗菌效應(yīng)曲線圖。
圖4 不同的濃度阿莫西林和納米單獨(dú)抗菌以及聯(lián)合抗菌的對(duì)照試驗(yàn)圖。其中圖4(A)表示抗菌效果柱狀圖。圖4(B)是與實(shí)驗(yàn)相對(duì)應(yīng)實(shí)景照片，圖中a，5μg/ml納米銀，b，0.15mg/ml阿莫西林，c，0.15mg/ml阿莫西林+5μg/ml納米銀，d，0.15mg/ml阿莫西林+10μg/ml納米銀。
圖5為細(xì)菌在含有不同抗菌劑LB培養(yǎng)液中的生長(zhǎng)曲線圖。其中▲，5μgml納米銀，●，0.15mg/ml阿莫西林，■，0.15mg/ml阿莫西林+5μg/ml納米銀。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(1)納米銀的制備在常溫常壓下，向濃度0.01mol/L AgNO3溶液注入氨氣，維持溶液pH＝12，然后把[Ag(NH3)2]+溶液和5％(wt％)十二烷基硫酸鈉(SDS)水溶液等體積混合進(jìn)三角瓶，置于溫度為70℃磁力攪拌器上。用醫(yī)用輸液器逐滴加入維生素C(濃度0.01mol/L)，同時(shí)保持?jǐn)嚢枳拥霓D(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)2小時(shí)。用酒精做溶劑離心洗滌沉淀(重復(fù)若干次，除去表面活性劑)，然后真空干燥即得納米銀。
(2)納米銀和阿莫西林抗菌性能測(cè)試(最小抑菌濃度測(cè)試)在抗菌測(cè)試中，試驗(yàn)菌株(大腸桿菌F220)在LB培養(yǎng)基中37℃下被激活，繼而培養(yǎng)至細(xì)菌量達(dá)到108～109CFU。然后對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行無菌操作過濾洗滌，將菌種稀釋至無菌水中獲得5.0×106CFU的細(xì)菌樣本。
把這些細(xì)菌分成相等的若干等分，分別加入0mg/ml，0.150mg/ml，0.300mg/ml，0.375mg/ml，0.450mg/ml and 0.525mg/ml的阿莫西林溶液和0μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml，20μg/ml，25μg/ml，30μg/ml，35μg/ml，40μg/ml的納米銀分散液，然后在溫度37℃下培養(yǎng)24小時(shí)。這樣可分別檢測(cè)到在細(xì)菌量為5.0×106CFU下，阿莫西林、納米銀的最小抑菌濃度。從圖2和3可以看出阿莫西林的最小抑菌濃度MIC＝0.525mg/ml；納米銀的最小抑菌濃度約為MIC＝40μg/ml。
(3)納米銀和阿莫西林協(xié)同抗菌性能測(cè)試和比較在同樣的條件下，在等份量菌株中分別加入1ml的納米銀和阿莫西林的不同濃度混合溶液，0.15mg/ml阿莫西林+5μg/ml納米銀，通過圖4可以看出，阿莫西林和納米銀協(xié)同抗菌的效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于阿莫西林和納米銀單獨(dú)使用的效果。
(4)抗菌動(dòng)力學(xué)測(cè)試根據(jù)Sondi描述的方法，建立它們的生長(zhǎng)曲線。大腸桿菌被添加到分別含有0.15mg/ml阿莫西林，5μg/ml納米銀和0.15mg/ml阿莫西林與5μg/ml納米銀混合抗菌劑的100ml LB液體培養(yǎng)基中。細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線通過檢測(cè)不同時(shí)間時(shí)菌液濃度的OD值來確定。
實(shí)施例2在同樣的條件下，在等份量菌株中分別加入1ml的納米銀和阿莫西林的不同濃度混合溶液，0.15mg/ml阿莫西林+10μg/ml納米銀，攪拌10分鐘得到產(chǎn)品，通過圖4可以看出，阿莫西林和納米銀協(xié)同抗菌的效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于阿莫西林和納米銀單獨(dú)使用的效果。
實(shí)施例3利用市售納米銀(粒徑為30-40nm)配制成10μg/ml的銀膠體分散液與市售阿莫西林膠囊中的粉劑(規(guī)格0.125g/粒)配制成0.25mg/ml的溶液混和，納米銀與阿莫西林的質(zhì)量比為1∶10，攪拌8分鐘，得到產(chǎn)品，實(shí)施聯(lián)合抗菌也取得滿意的結(jié)果。
實(shí)施例4
利用市售納米銀(粒徑范圍25-30nm)配制成10μg/ml的銀膠體分散液與市售阿莫西林膠囊中的粉劑(規(guī)格0.125g/粒)配制成0.25mg/ml的溶液混和，納米銀與阿莫西林的質(zhì)量比為1∶20，攪拌15分鐘，得到產(chǎn)品，實(shí)施聯(lián)合抗菌也取得滿意的結(jié)果。
實(shí)施例5利用市售納米銀(粒徑范圍35-40nm)配制成10μg/ml的銀膠體分散液與市售阿莫西林膠囊中的粉劑(規(guī)格0.125g/粒)配制成0.25mg/ml的溶液混和，納米銀與阿莫西林的質(zhì)量比為1∶40，攪拌25分鐘，得到產(chǎn)品，實(shí)施聯(lián)合抗菌也取得滿意的結(jié)果。
實(shí)施例6利用市售納米銀(粒徑范圍25-30nm)配制成10μg/ml的銀膠體分散液與市售阿莫西林膠囊中的粉劑(規(guī)格0.125g/粒)配制成0.25mg/ml的溶液混和，納米銀與阿莫西林的質(zhì)量比為1∶50，攪拌30分鐘，得到產(chǎn)品，實(shí)施聯(lián)合抗菌也取得滿意的結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種含有納米銀的阿莫西林抗菌劑，其特征在于由阿莫西林和納米銀混合而成，其中，阿莫西林可采用原藥和主要有效成分為阿莫西林的制劑，納米銀粒徑為10-40nm，阿莫西林與納米銀的質(zhì)量比為50∶1-10∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有納米銀的阿莫西林抗菌劑，其特征在于所述的阿莫西林制劑包括針劑、粉劑、片劑及氣霧劑之一種。
3.一種如權(quán)利要求1所述的含有納米銀的阿莫西林抗菌劑的制備方法，其特征在于在常溫下，將阿莫西林與納米銀按比例混合，攪拌8-20分鐘，即得所需產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含有納米銀的阿莫西林抗菌劑的制備方法，其特征在于所述納米銀使用可溶性銀鹽采用溶膠-凝膠法、微乳液法、反相膠束法、氣相沉積法之一種方法獲得，或采用金屬銀的塊體或粉體獲得。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含有納米銀的阿莫西林抗菌劑的制備方法，其特征在于制備納米銀采用可溶性銀鹽，在常溫常壓下，向濃度為0.01-0.1mol/L的銀鹽中注入氨水，攪拌，維持溶液pH值為11-12，反應(yīng)時(shí)間為10-15分鐘，得到銀氨(Ag(NH3)2]+)溶液，把[Ag(NH3)2]+溶液和5wt％的十二烷基硫酸鈉水溶液以1∶0.9-1∶1.1的體積比在反應(yīng)瓶中均勻混合后，置于溫度為60-80℃磁力攪拌器上，滴加維生素C，維生素C的濃度為0.02mol/L，并保持?jǐn)嚢柁D(zhuǎn)速為100-130轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)1.5-2.5小時(shí)，得到黑色的沉淀物，以酒精為溶劑，離心洗滌沉淀物，除去表面活性劑，然后減壓或真空蒸餾，溫度為50-80℃，即得納米銀。
6.一種如權(quán)利要求1所述的含有納米銀的阿莫西林抗菌劑用于溶血性鏈球菌、肺炎球菌、不產(chǎn)青霉素酶金葡菌或流感桿菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌或腸球菌屬細(xì)菌抑菌的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含有納米銀的阿莫西林抗菌劑及其制備方法、應(yīng)用。在常溫狀態(tài)下，將納米銀與阿莫西林抗菌劑均勻混合，即得含有納米銀的阿莫西林抗菌劑。將得到的抗菌劑以大腸桿菌為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，進(jìn)行抗菌研究。結(jié)果表明納米銀與阿莫西林混合后表現(xiàn)出較為突出的協(xié)同抗菌作用，其抗菌效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過二者同等劑量單獨(dú)使用時(shí)抗菌效果之和。本發(fā)明所用原料易得，成本低廉，操作和儀器設(shè)備簡(jiǎn)便，可以較為方便的制備成復(fù)合抗菌劑，有利于產(chǎn)業(yè)化和商品化。
文檔編號(hào)A61K9/14GK1850113SQ200610024308
公開日2006年10月25日 申請(qǐng)日期2006年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月2日
發(fā)明者吳慶生, 馬杰, 李平, 吳昌柱, 孫冬梅, 丁亞平 申請(qǐng)人:同濟(jì)大學(xué)