專利名稱：：石斛堿的新應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及石斛堿(Dendrobine)的新應(yīng)用，特別是在預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病，以及保護消化道粘膜損傷方面的應(yīng)用。石斛堿(Dendrobine)作為一種化學(xué)成分，1932年首次從中藥材金釵石斛(DendrobiumnobileLindl.)中分離得到(H.Suzuki,etal.:YakugakuZasshi，52,996,1049(1932);54，801(1934).)，1962年明確其提取分離方法，并確證其完整的化學(xué)結(jié)構(gòu)(T.Okamoto，etal.Thestructureofdendrobine.Chem.Pharm.Bull.，1964,12(4):506-512;Y.Inubushi，etal.IsolationandCharacterizationofAlkaloidsoftheChineseDrug"Chin曙Shih-Hu，，.Chem.Pharm.Bull.，1964，12(10):1175-1180)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下式I所示，分子式為C,6H25N02，分子量為263。
背景技術(shù)：
：據(jù)已有的文獻資料檢索顯示，石斛堿的藥理作用有以下幾個方面1、能抑制離體兔腸活動，而對離體豚鼠子宮有收縮作用；2、大劑量石斛堿可降低兔、豚鼠的心肌收縮力，降低血壓并抑制呼吸；3、有微弱的止痛退熱作用(ChengKe-hui，etal.JPharmacolExperTherap,1936，55(3):310;HenryML，etal.JPharmacolExperTherap，1936，56(4):466)。對該成分的其它藥理作用研究未見有任何報道。金釵石斛(DendrobiumnobileLindl.)是自然界中石斛堿的主要來源。本發(fā)明人曾研究發(fā)現(xiàn)金釵石斛藥材提取物具有預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病，及保護消化道粘膜損傷的功效(公開號為CN1533801的專利申請)。但由于上述金釵石斛提取物中的成分復(fù)雜，其中含有多種生物堿及其它化學(xué)成分，故并不明確其藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，即未明確藥理作用的有效成分。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人為進一步篩選金釵石斛提取物中的有效部位，經(jīng)過大量研究工作和藥理試驗發(fā)現(xiàn)，式I化合物石斛堿也具有預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病，以及保護消化道粘膜損傷的作用，且較上述專利文獻中公開的金釵石斛提取物的有關(guān)療效更佳。因此，本發(fā)明的目的是提供式I化合物石斛堿在上述兩方面的新應(yīng)用。本發(fā)明試驗表明，式I化合物石斛堿具有抑制大鼠角叉菜膠所致急性炎癥及大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的作用，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。因此，石斛堿可用于預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病。同時實驗也表明，式I化合物石斛堿同時具有抑制大鼠無水乙醇所致的急性消化道潰瘍和醋酸所致慢性胃潰瘍的作用。因此，石斛堿可用于保護消化道粘膜急性或慢性損傷，特別是用于防治急性和慢性消化道潰瘍。綜上所述，石斛堿2-40mg/kg即可產(chǎn)生上述兩方面的防治作用，在類似試驗條件下，較金釵石斛提取物需4-5g生藥/kg的有效劑量明顯降低。另外，目前治療關(guān)節(jié)炎常用的非留體類抗炎藥物，如布洛芬、二氯芬酸鈉等均能引起消化道損傷，故通常需與雷尼替丁等胃粘膜保護劑一起服用；石斛堿同時具有抗炎和保護胃粘膜損傷的作用，具有可競爭優(yōu)勢。具體實施例方式下面用實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。實施例l式I化合物石斛堿的提取分離根據(jù)上述文獻(T.Okamoto，etal.Thestructureofdendrobine.Chem.Pharm.Bull.，1964，12(4):506-512;Y.Inubushi，etal.IsolationandCharacterizationofAlkaloidsoftheChineseDrug"Chin-Shih-Hu".Chem.Pharm.Bull.，1964,12(10):1175-1180)中的方法進行提取分離，具體步驟如下將市售的1.0kg金釵石斛藥材切碎用甲醇8L浸漬兩天，過濾，殘渣以甲醇回流提取4次(每次5L)，合并提取液，減壓濃縮得稠浸膏，浸膏以5%鹽酸水溶液溶解提取多次，過濾，合并酸性水提液，在冰浴中加氨水調(diào)pH至11.0左右，該堿性水溶液，以乙醚萃取多次，合并乙醚層溶液，過濾，回收溶劑至干，得石斛堿粗提物，上氧化鋁柱層析，以苯洗脫，分步收集洗脫液，合并部分洗脫液，回收溶液至干，得一純品化合物，測定熔點為134-136°C，并對該化合物的MS、H-NMR、C-NMR等光譜進行解析，確證其結(jié)構(gòu)與文獻公布的石斛堿(即式I化合物)結(jié)構(gòu)完全一致。效果實施例1不同劑量石斛堿對足跖角叉菜膠所致急性炎癥的抑制作用實驗方法大鼠隨機分組，每組10只動物，于致炎前l(fā)小時灌胃給藥，無菌操作，給大鼠右后足跖腱膜下注射1%角叉菜膠O.lml致炎，用排水法測定致炎前及致炎后不同時間的右后足跖容積，以致炎前后的足容積差值為腫脹值，根據(jù)腫脹值計算腫脹率及抑制率。實驗結(jié)果見下表l,與對照組比，承為p〈0.05，^為p〈0.01。腫脹率。/。-En-E(,/^X100E。-致炎后不同時間的腫脹值E。-致炎前的腫脹值抑制率n/FOT/CX100O對照組的腫脹率T-治療組的腫脹率表1不同劑量石斛堿對大鼠角叉菜膠所致急性炎癥的抑制作用組別致炎后不同時間的腫脹率％(;±SD)(括號內(nèi)為抑制率)mg/kg1(小時)2(小時)3(小時)4(小時)石斛堿233.96±10.2136.23±12.6335.46±10.5333.30±10.86(4.21)(17.16)(17.65)(14.10)石斛堿531.25±9.8835.87±6.7632.60±5.9924.42±3.46'(14.68)(17.97)(24.28)(37.01)石斛堿1029.95±9.1335.65±6.9931.85土4.54'24,20±3.40"(15.54)(18.50)(26.04)(37.58)石斛堿2027.65±6.8533.27±8.16*30.66土3.72"23.07±2.75"(22.01)(23.93)(28.80)(40.49)石斛堿4026.28±6.6228.68土8.2廣27.88±11.46*22.38土5.28"(25.88)(34.42)(35.24)(42.26)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以上實驗結(jié)果顯示石斛堿確有抑制大鼠角叉菜膠所致急性炎癥的作用，并隨著劑量的增加而逐漸增強。效果實施例2不同劑量石斛堿對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防和治療作用實驗方法體重180-200g雄性SD大鼠，每鼠右后足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑O.lml致炎，次日開始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)20天，用排水法測定致炎前及致炎后不同天數(shù)的足跖腫脹體積，并計算腫脹率及抑制率，并以檢驗法用藥組與模型對照組比較。實驗結(jié)果見下表2，與對照組比，*為p<0.05，^為p〈0.01。實驗結(jié)果顯示石斛堿2mg/kg的給藥劑量時即對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生一定的抑制作用，并隨著劑量的增加，抑制作用加強。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>效果實施例3不同劑量石斛堿對大鼠無水乙醇所致的急性胃粘膜損傷的影響實驗方法SD大鼠隨機分組，禁食48小時，自由飲水。實驗時灌服無水乙醇lml/只，在灌服無水乙醇前一小時灌胃給藥，服無水乙醇后3小時處死動物，解剖取胃，以1%甲醛溶液固定，損傷程度以潰瘍指數(shù)表示，條索狀損傷的長度大于lmm者測量其長度，每mm記1分，若其長度寬度大于lmm者將其記分加倍，記分總數(shù)為該動物的潰瘍指數(shù)，各項間進行比較。實驗結(jié)果見下表3，與對照組比，*為？〈0.05，"為p〈0.01。表3不同劑量石斛堿對大鼠無水乙醇所致急性胃粘膜損傷的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上實驗結(jié)果顯示石斛堿具有抑制大鼠無水乙醇所致的急性消化道潰瘍的作用，其40mg/kg的給藥劑量時與雷尼替丁(50mg/kg)的幾乎等同。效果實施例4不同劑量石斛堿對大鼠醋酸燒灼型慢性胃潰瘍的影響實驗方法SD大鼠空腹24小時，自由飲水，在3%戊巴比妥鈉麻醉下打開腹腔，在胃漿膜下注入30。/。冰醋酸0.1ml，隨即縫合，次日起灌胃給藥，每天1次，連續(xù)10天。解剖取胃，用甲醛固定，測量潰瘍面積，進行各組間比較。實驗結(jié)果見下表4，與對照組比，"為p〈0.01。表4不同劑量石斛堿對大鼠醋酸燒灼型慢性胃潰瘍的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>以上實驗結(jié)果顯示石斛堿具有抑制大鼠慢性胃潰瘍的作用。權(quán)利要求1、式I化合物石斛堿在制備預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病的藥物中的應(yīng)用。2、式I化合物石斛堿在制備保護消化道粘膜損傷的藥物中的應(yīng)用。3、如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于該藥物為防治急性和慢性消化道潰瘍的藥物。全文摘要本發(fā)明公開了石斛堿的兩個新用途，即在制備預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎疾病，以及保護消化道粘膜損傷的藥物中的應(yīng)用。文檔編號A61P19/00GK101103974SQ20061002899公開日2008年1月16日申請日期2006年7月14日優(yōu)先權(quán)日2006年7月14日發(fā)明者劉全海,劉珉宇,華茉莉,盧艷萍,莊賢韓,戴靜芝,李定祥,李晶晶,沈龍海,王小晨申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;上海先導(dǎo)藥業(yè)有限公司