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      羊藿燈盞藥物組合物的制作方法

      文檔序號(hào):1035573閱讀:519來(lái)源:國(guó)知局

      專利名稱::羊藿燈盞藥物組合物的制作方法羊藿燈盞藥物組合物
      技術(shù)領(lǐng)域
      :本發(fā)明屬于醫(yī)藥
      技術(shù)領(lǐng)域
      ,特別涉及一種用于心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法。
      背景技術(shù)
      :心腦血管疾病一直號(hào)稱威脅人類健康的頭號(hào)殺手,據(jù)有關(guān)調(diào)査報(bào)告顯示,我國(guó)每年死于心腦血管病的人有300多萬(wàn),占我國(guó)每年總死亡人數(shù)的50%,而患病幸存下來(lái)的人75%不同程度喪失勞動(dòng)能力,4%重殘,特別是其發(fā)病和死亡的年齡日益呈年輕化趨勢(shì)。如何有效防治心腦血管疾病已經(jīng)引起了人們的高度重視。心腦血管疾病包括冠心病、心絞痛、心肌梗塞,瘀血型肺心病,缺血性腦病、腦血栓、髙血壓、髙血脂等。這些疾病的主要發(fā)病原因是動(dòng)脈硬化造成管腔狹窄、管道阻塞,從而導(dǎo)致心腦供血不足,才引起頭沉、頭暈、頭痛、胸悶等癥狀,嚴(yán)重者可導(dǎo)致腦中風(fēng)及心肌梗塞的發(fā)生。心腦缺血后影響能量代謝,繼發(fā)乳酸堆積、鈣超載、自由基損傷等多種變化?,F(xiàn)有治療方法中,主要采用溶栓療法,但血栓溶散,恢復(fù)組織器官血流的同時(shí),將會(huì)不同程度的發(fā)生再灌注損傷,可導(dǎo)致更為嚴(yán)重的后果,而現(xiàn)有治療心腦血管疾病的藥物如香丹注射液,脈絡(luò)寧注射液,丹參片等均無(wú)法較好的解決溶栓的同時(shí)產(chǎn)生的再灌注損傷,因而其療效并不是非常理想。淫羊藿為小檗科植物淫羊藿(£/M'ffjec//MOTZwev/corn訓(xùn)Maxin.)、箭葉淫羊藿(五pZ/ne力鵬sag故a/umMaxin.)、柔毛淫羊藿(jE:/加efif/鵬/w6asceAMMaxin.)、巫山淫羊藿(五/w'附ec/鵬vvws/wwe/MeT.S.Ying)或朝鮮淫羊藿(^/附W"附Nakai.)的干燥地上部分。辛、甘,溫。具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕之功效,用于陽(yáng)痿遺精、筋骨瘺軟、風(fēng)寒濕痹,麻木拘攣;更年期高血壓。近年來(lái),為綜合利用淫羊藿屬藥用植物資源,開(kāi)展了廣泛的研究?,F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究表明,淫羊藿能改善血液流變學(xué),增加心腦血管血流量,促進(jìn)造血系統(tǒng)功能,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能,改善骨代謝,延緩腎功能衰竭的進(jìn)程,增強(qiáng)雄性生殖功能,具有抗衰老、抗腫瘤等功效。現(xiàn)代化學(xué)成分研究顯示,淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿總黃酮,主要含有淫羊藿苷。燈盞花,又名燈盞細(xì)辛,為菊科植物短葶飛蓬5rigera"6w他capws(Vant.)Hand-Mazz的干燥全草。主要分布于我國(guó)云南、廣西等地,辛、微苦,溫。具有祛風(fēng)散寒,活血通絡(luò)止痛之功效,用于風(fēng)寒濕痹痛,中風(fēng)癱瘓、胸痹心痛。牙痛,感冒。燈盞花的主要有效成分有黃酮類、咖啡酰類、芳香酸類等,主要有改善血液流變學(xué)、改善微循環(huán)、抑制缺血后血小板聚集、抗缺血再灌注損傷等藥理作用。燈盞花素是燈盞花黃爾類成分最主要的活性成分,具有廣泛藥理作用,能擴(kuò)張腦血、降低腦血管阻力、改善微循環(huán)、抗血小板聚集等。燈盞花素已收載入部頒中藥成方制劑,20冊(cè),103頁(yè),其中規(guī)定含燈盞花乙素(C21H18012)應(yīng)為95.0105.0%。目前已有多家生產(chǎn)上市。臨床上主要用于治療腦血栓、腦栓塞、心絞痛等心腦血管疾病。目前利用淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素的相互作用,配伍組方,用于制備治療心腦血管疾病方面的藥物,尚未見(jiàn)報(bào)道。
      發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要,擴(kuò)大用藥品種,更好的治療心腦血管疾病,提高人民健康水平,本發(fā)明提供了一種用于心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法,用于腦血栓、冠心病、心絞痛、心肌梗塞等方面,產(chǎn)生了意想不到的效果。本發(fā)明藥物組合物主要由淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素制備而成,其重量份數(shù)為淫羊藿總黃酮25500份、燈盞花提取物10300份或或燈盞花素250份;優(yōu)選為淫羊藿總黃酮50200份、燈盞花提取物30120份或燈盞花素520份;最佳為淫羊藿總黃酮100份、燈盞花提取物60份或燈盞花素10份。上述所述藥物組合物中淫羊藿總黃酮中總黃酮的含量不低于50%,最好不低于80%,其中淫羊藿苷的含量不低于10%,最好不低于30%;燈盞花提取物中燈盞花總黃酮(以野黃芩苷計(jì))的含量不低于6%,最好不低于70%;總咖啡酸酯的含量不低于20%,最好不低于40%。燈盞花素可市購(gòu)。以上組成是按重量份作為配比的,在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小,如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位,或以噸為單位,小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位,重量可以增大或者減小,但各組成之間重量配比不變。以上組成,若以克為單位,可以制成10010000次用量的制劑,如作為注射劑,可制成10010000支,每次用量110支。如作為片劑,可制成10010000片,每次服用110片。以上重量配比的比例是經(jīng)過(guò)科學(xué)篩選得到的,對(duì)于特殊病人,可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例,增加或者減少不超過(guò)100%。本發(fā)明藥物組合物各組分的用量是經(jīng)過(guò)發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的,各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。淫羊藿總黃兩可通過(guò)以下工藝制備-稱取淫羊藿藥材,加水煎煮二次,每次1.5小時(shí),每次加水10倍量,合并煎液,濾過(guò),濾液冷藏放置過(guò)夜,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度為1.081.10的濃縮液,加乙醇至含醇量為60%,攪拌均勻,冷藏靜置24小時(shí),濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度為1.031.05,加于已處理好的聚酰胺樹(shù)脂(80100目)柱上,先用34倍柱體積的水沖洗,再用23倍柱體積的20%乙醇沖洗,棄去洗滌液,再用45倍柱體積的95%乙醇進(jìn)行洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,噴霧干燥,得淫羊藿總黃酮。通過(guò)本工藝制備的淫羊藿總黃酮的得率為2~3%,淫羊藿總黃酮中總黃酮含量不低于80%,淫羊蜜苷含量不低于30。/。。淫羊藿除采用上述方法提取外,還可以通過(guò)以下方法提取制備,但不僅限于下列方法方法一稱取淫羊藿藥材,加水煎煮二次,加水量分別為12倍量、10倍量,煎煮時(shí)間均為2小時(shí),合并煎液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.08,加入乙醇至含醇量為70%,充分?jǐn)嚢?,靜置24小時(shí),濾過(guò),濾液中加入氫氧化鈉,使pH值達(dá)8.5,濾過(guò),濾液調(diào)至中性,回收乙醇,殘?jiān)ㄟ^(guò)預(yù)先處理好的大孔吸附樹(shù)脂D301柱,用水洗脫至水洗脫液呈淡黃色,改用34倍(樹(shù)脂床體積)70%的乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,回收乙醇,噴霧干燥,得淫羊藿總黃酮。通過(guò)本工藝制得的淫羊藿總黃酮的得率為23%,淫羊藿總黃酮中總黃酮含量不低于70%,淫羊藿苷含量不低于25%。方法二稱取淫羊藿藥材,加15倍量水浸泡1小時(shí),加熱煮沸0.5小時(shí),趁熱過(guò)濾,藥渣再加水提取2次,合并3次提取液,在65'C真空濃縮至相對(duì)密度為1.05,用正丁醇萃取6次,正丁醇每次的用量為提取濃縮液的3倍,合并正丁醇萃取液,減壓回收正丁醇至無(wú)正丁醇味,真空干燥,得淫羊藿總黃酮。通過(guò)本工藝制得的淫羊藿總黃酮的得率為45%,淫羊藿總黃酮中總黃酮含量不低于50Q/。,淫羊藿苷含量不低于10%。燈盞花提取物可通過(guò)以下工藝制備取燈盞花藥材,加水煎煮二次,每次煎煮1.5小時(shí),加水10倍量,合并提取液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度為1.101.12(50'C),加乙醇至含醇量為60%,攪拌,冷藏靜置12小時(shí),濾過(guò),濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.121.15(50°C),用鹽酸調(diào)pH值至2,于55'C保溫6小時(shí),濾過(guò),濾液通過(guò)聚酰胺柱,先用水洗去雜質(zhì),繼用90%乙醇洗脫,收集乙醇液,減壓回收乙醇并濃縮至稠膏,烘干,粉碎得藥粉;沉淀用20%的乙醇洗滌,揮干乙醇,用甲醇重結(jié)晶,真空干燥,合并上述藥粉得燈盞花提取物。通過(guò)本工藝制得的燈盞花提取物得率為0.51.5。/。,燈盞花提取物中總黃酮(以野黃吝苷計(jì))的含量不低于70%,總咖啡酸酯(以l,5-氧-二咖啡??鼘幩嵊?jì))的含量不低于20%。燈盞花除采用上述方法提取外,還可以通過(guò)以下方法提取制備,但不僅限于下列方法方法一將燈盞花藥材,加0.2%碳酸氫鈉溶液滲漉提取,收集約10倍量滲漉液,加稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至23,濾過(guò)(沉淀備用),濾液通過(guò)聚酰胺柱,先用水洗去雜質(zhì),繼用90%乙醇洗脫,收集乙醇液,備用;沉淀用90%乙醇提取3次,每次2小時(shí),濾過(guò),濾液與上述乙醇液合并,回收乙醇,減壓濃縮,加稀堿溶液溶解,濾過(guò),噴霧干燥,即得。通過(guò)本工藝制得的燈盞花提取物得率為12%,燈盞花提取物中總黃酮(以野黃芩苷計(jì))的含量不低于10%,總咖啡酸酯(以l,5-氧-二咖啡??鼘幩嵊?jì))的含量不低于40%。方法二將燈盞花藥材,加50%乙醇回流提取二次,第一次加醇8倍量,提取2小時(shí),第二次加醇6倍量,提取1小時(shí),合并提取液,濾過(guò),濾液回收乙醇至無(wú)醇味,加適量的水?dāng)嚢杈鶆颍洳仂o置12小時(shí),濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.08,加20%的石灰乳調(diào)pH=ll,放置半小時(shí),離心,將沉淀懸浮于70%乙醇液中,加稀硫酸調(diào)pH-3,攪拌,濾過(guò),濾液用氫氧化鈉調(diào)pH=56,濾過(guò),濾液濃縮至稠膏,烘干。通過(guò)本工藝制得的燈盞花提取物得率為1.52%,燈盞花提取物中總黃酮(以野黃芩苷計(jì))的含量不低于6%,總咖啡酸酯(以l,5-氧-二咖啡??鼘幩嵊?jì))的含量不低于40%。方法三將燈盞花藥材,加入70%丙酮-水溶液,分三次室溫浸提,合并提取液,過(guò)濾,濾液低溫減壓濃縮至約相對(duì)密度為1.081.12,濃縮液過(guò)已預(yù)處理的D101型大孔樹(shù)脂柱,先用水洗脫,再用60%丙酮-水洗脫。水洗液用稀鹽酸酸化至pH12,將該水溶液再次上D101型大孔樹(shù)脂柱,依次先用水洗脫至無(wú)酸性,繼以用60%丙酮-水洗脫,收集60%丙酮-水洗液,減壓濃縮至相對(duì)密度為U61.21,噴霧干燥,即得。通過(guò)本工藝制得的燈盞花提取物得率為24%,燈盞花提取物中總黃酮(以野黃芩苷計(jì))的含量不低于10%,總咖啡酸酯(以l,5-氧-二咖啡酰奎寧酸計(jì))的含量不低于25%。本發(fā)明提供了一種用于心腦血管疾病方面的藥物組合物。淫羊藿總黃酮能改善血液流變學(xué),增加心腦血管血流量,促進(jìn)造血系統(tǒng)功能;燈盞花提取物或者燈盞花素均有改善血液流變學(xué)、改善微循環(huán)、抑制缺血后血小板聚集、抗缺血再灌注損傷等藥理作用,兩者聯(lián)合應(yīng)用,用于治療腦血栓、冠心病、心絞痛、心肌梗塞等方面產(chǎn)生了意想不到的效果。本發(fā)明藥物組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體,以口服或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí),可將其制成常規(guī)的固體制劑,如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊,制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等;用于腸胃外給藥時(shí),可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等,如水針、凍干粉針、無(wú)菌粉針、輸液等。本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選的劑型是注射劑或口服制劑。本發(fā)明藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn),需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。本發(fā)明藥物組合物在制成口服制劑時(shí),可選擇的填充劑有淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等可選擇的粘合劑有羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、預(yù)膠化淀粉等;可選擇的崩解劑有干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等;可選擇的潤(rùn)滑劑有硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。本發(fā)明藥物組合物在制成注射劑時(shí),為了增加其溶解度,可以加入聚山梨酯80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑,例如,氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醉和右旋糖苷等,優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑,例如,甘露醇、葡萄糖等。本發(fā)明藥物組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)-(1)提供了一種用于心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法,滿足了臨床急需;(2)對(duì)本發(fā)明藥物組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究,得出了本發(fā)明藥物組合物的最優(yōu)配比;(3)對(duì)本發(fā)明藥物組合物的相互作用和配伍組方進(jìn)行了藥理學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)了該藥物組合物具有改善腦血管循環(huán),減小腦缺血面積;顯著抗血小板聚集;增加冠脈血流量,增加心肌供血,降低左室舒張末期壓,降低心臟前負(fù)荷等,明顯改善犬血液流動(dòng)力學(xué);上述各實(shí)驗(yàn)中,組合物實(shí)驗(yàn)組與單用淫羊藿總黃酮組、燈盞花提取物組、燈盞花素組相比,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均顯著,表明淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素合并用藥,用于治療心腦血管疾病效果顯著,其結(jié)果是本
      技術(shù)領(lǐng)域
      的普通技術(shù)人員所意想不到的;(4)本發(fā)明藥物組合物可以以原料或提取物投料制備,制備工藝簡(jiǎn)單,不同批次藥品間質(zhì)量差異小,藥品質(zhì)量更均勻穩(wěn)定;(5)進(jìn)行的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物組合物注射液各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定,保證了臨床用藥的安全;(6)本發(fā)明藥物組合物兩藥配伍用藥療效確切,且減小了相對(duì)用藥劑量,具有廣泛的應(yīng)用前景。以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物組合物的有益效果。下列實(shí)驗(yàn)例中淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素的組合物簡(jiǎn)稱羊藿燈盞組合物。實(shí)驗(yàn)例中所用的淫羊藿總黃爾取自實(shí)施例l,所用的燈盞花提取物取自實(shí)施例2,燈盞花素市購(gòu)。*翻1雜燈盤(pán)船物艦,^一錄燈纏^l鵬驗(yàn)雄缺血隨lft實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雜種犬,100只,體重在11.013.0公斤,每組5只。供試品空白對(duì)照組0.9%生理鹽水注射液,市購(gòu);淫羊藿總黃酮組淫羊藿總黃酮注射液,自制,規(guī)格15mg/10ml;燈盞花素組燈盞花素注射液,市購(gòu),規(guī)格5mg/2ml;燈盞花提取物組燈盞花提取物注射液,自制,規(guī)格10mg/10ml;羊藿燈盞組合物組羊藿燈盞組合物注射液,自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。實(shí)驗(yàn)方法取100只雜種犬,體重在11.013.0公斤,每組5只,雌雄兼用,隨機(jī)分為20組,分別為空白對(duì)照組、淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組、羊藿燈盞組合物(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物、淫羊藿總黃酮+燈盞花素)不同劑量配比組,注射給藥。犬大腦中動(dòng)脈結(jié)扎所致腦缺血模型的制作取犬腹腔注射3%戊巴比妥鈉1.0ml/kg(30mg/kg)麻醉,固定犬于手術(shù)臺(tái)上,然后在犬右外眼角與右耳根部l/2處(中點(diǎn)),用電刀切開(kāi)皮膚,分離肌肉,用手術(shù)專用顱骨鉆鉆開(kāi)顱骨,以咬骨鉗擴(kuò)大顱骨孔,切開(kāi)硬腦膜,找到大腦中動(dòng)脈。先用多譜勒超聲血流探測(cè)儀測(cè)定大腦中動(dòng)脈血流速度,然后立即將大腦中動(dòng)脈結(jié)扎造成腦缺血。大腦中動(dòng)脈結(jié)扎6小時(shí)后,分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈并夾閉之,即刻從右側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉處的遠(yuǎn)心端灌注20ml龍膽紫飽和溶液對(duì)腦組織進(jìn)行染色,然后處死動(dòng)物,開(kāi)顱取出腦組織,稱全腦重,遂切下未染色的腦組織(即缺血區(qū)腦組織)稱重,求出其占全腦重量的百分率,并進(jìn)行病理組織學(xué)檢査,以判斷其是否屬于腦缺血性損傷,結(jié)果見(jiàn)表l。表l羊藿燈盞組合物注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性犬腦缺血的影響(X±SD)組別重量配比給藥劑量(mg/kg)全腦重(g)腦缺血區(qū)重(g)缺血區(qū)重/全腦重(%)空白對(duì)照組—565.29±5.0819.36±2.6829.65±4.53淫羊藿總黃酮組—864.86±4.6215.56士3.32'23.99士4.15'燈盞花素組—265.17±4.5814.25±3.06'21.87士3.58'燈盞花提取物組—64.58±4.5514.47±2.69'22.41±3.55*50mg+120mg564.12±3.3810.35士3.11""16.14士2.79""60mg+100mg63.75±2.839.45±2.88""14.82±2.95""80mg+90mg563.51±3.238.26±3.16""13.01±3.22""羊藿燈盞組合物組(淫羊蓳總黃酮+燈盞花提取物)90mg+80mg100mg+60mg120mg+50mg62.67±3.0662.39±2.6562.57±3.127.87土3.32""7.21±2.85""8.15±3.16""12.56土3.27""11.56±3.26""13.03±3.34""140mg+45mg62.84±2.778.13士3.25""12.94士3.25""160mg+40mg63.26±3.118.53±3.37*'"13.48士2.78""180mg+35mg63.65±2.869.12士3.13""15.58±3.16""200mg+30mg563.96±3.349.55士3.37""14.33±3.25""50mg+20mg64.46±3.139.61±3.23""14.91±2.93""羊藿燈盞組合物組(淫羊藿總黃酮+燈盞花素)80mg+15mg100mg+10mg120mg+8mg263.97±3.0563.88±2.7564.32±3.128.35±3.3廣"7.56土2.78""8.06±3.05""13.01±3.15""11.83±3.22.'"12.53士3.06""160mg+6mg264.43±3.159.59士3.16""14.88±2.69""200mg+5mg264.51±2.929.89±3.41""15.33±3.24.*"注'p<0.05,"p<0.01,與空白對(duì)照組相比;<0.05,與淫羊藿總黃兩組相比;*p<0.05,與燈盞花提取物組相比;$p<0.05,與燈盞花素組相比。結(jié)論與空白對(duì)照組相比,各給藥組都能不同程度的降低犬大腦中動(dòng)脈結(jié)扎后的腦組織缺血區(qū)重量(p<0.05、p<0.01)。其中羊藿燈盞組合物不同配比組的作用與單用淫羊藿總黃酮或燈盞花提取物或燈盞花素相比,差別顯著(p<0.05),表明,淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素配伍有很好的抗腦缺血作用,且與組合物的劑量配比有關(guān),淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物-100mg+60mg,淫羊藿總黃酮+燈盞花素=100mg+10mg時(shí)作用最強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)例2羊藿燈盞組合物抗血小枳聚集作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠,雄性,體重200220g,100只,每組10只,隨機(jī)分為10組。供試品空白對(duì)照組0.9%生理鹽水注射液,市購(gòu);淫羊藿總黃酮組淫羊藿總黃酮注射液,自制,規(guī)格15mg/10ml;燈盞花素組燈盞花素注射液,市購(gòu),規(guī)格5mg/2ml;燈盞花提取物組燈盞花提取物注射液,自制,規(guī)格10mg/10ml;羊藿燈盞組合物組羊藿燈盞組合物注射液,分為低、中、高三個(gè)劑量組,自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為10組,每組10只,分別為空白對(duì)照組、淫羊藿提總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組、羊藿燈盞組合物(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物、淫羊藿總黃酮+燈盞花素)低、中、高三個(gè)劑量組。各給藥組動(dòng)物腹腔注射給藥,每日一次,連續(xù)給藥7天,末次給藥后l小時(shí),動(dòng)物麻醉后自腹主動(dòng)脈取血,抗凝劑采用3.28%枸櫞酸鈉,與血液以1:9比例混合。將抗凝全血在20。C條件下1500rmin"離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR后,將剩余PPR再次以3000rmin-1離心10min,獲得自身對(duì)照貧富血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PPR濃度,使各PPR濃度相同。將PPR在37'C的恒溫孔中預(yù)熱后,加入ADP(終濃度為3pmo卜i;1)引起血小板聚集,記錄最大聚集率。結(jié)果見(jiàn)表2。表2羊藿燈盞組合物抗血小板聚集作用(X土SD)組別給藥劑量(mg/kg)最大聚集率空白對(duì)照組1079.58±13.86淫羊奮總黃酮組1567.73±17.15'燈盞花素組265.56±16,21'燈盞花提取物組1065.87±16.37'羊藿燈盞低劑量組(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物)658.25±13.68"**羊藿燈盞中劑量組(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物)857.34±15.25"**羊藍(lán)燈盞高劑量組(淫羊藿總黃兩+燈盞花提取物)1050.63±12.18"**羊整燈盞低劑量組(淫羊藿總黃酮+燈盞花素)159.16±12.78,羊藿燈盞中劑量組(淫羊藿總黃酮+燈盞花素)1.556.13±12.83"#$羊蜜燈盞高劑量組(淫羊藿總黃兩+燈盞花素)250.17土R25"然注'p<0.05,"p<0.01,與空白對(duì)照組相比#p<0.05,與淫羊藿總黃兩組$p<0.05,與燈盞花素組&p<0.05,與燈盞花提取物組。結(jié)果與結(jié)論與空白對(duì)照組相比,淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組和燈盞花提取物組均能明顯抑制血小板聚集(p<0.05),羊藿燈盞組合物各劑量組均能顯著抑制血小板聚集(p<0.01)。與淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組相比,羊藿燈盞組合物各劑量組均能明顯抑制抑制血小板聚集(p<0.05)。表明,淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素配伍的組合物能夠增強(qiáng)抗血小板聚集作用,且與給藥劑量有關(guān),高劑量時(shí)作用最好。《翻3輔JJ鏡A鰣娜,絲赫,獻(xiàn)滅gft力糊糊實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雜種犬,50只,體重在11.013.0公斤,每組5只,隨機(jī)分為10組。供試品空白對(duì)照組氯化鈉注射液,山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司;淫羊藿總黃酮組淫羊藿總黃酮注射液,自制,規(guī)格15mg/10ml;燈盞花素組燈盞花素注射液,市購(gòu),規(guī)格5mg/2mh燈盞花提取物組燈盞花提取物注射液,自制,規(guī)格10mg/10ml;羊藿燈盞組合物組羊藿燈盞組合物注射液,分為低、中、高三個(gè)劑量組,自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。實(shí)驗(yàn)方法取30只雜種犬,體重在11.013.0公斤,每組5只,雌雄兼用,隨機(jī)分為6組,分別為空白對(duì)照組、淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組、羊藿燈盞組合物(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物、淫羊藿總黃酮+燈盞花素)低、中、高三個(gè)劑量組。各給藥組在給藥前用0.9%生理鹽水配制所需濃度藥液。給藥劑量空白對(duì)照組5ml/kg、淫羊藿總黃酮組8mg/kg、燈盞花素組2mg/kg、燈盞花提取物組5mg/kg、羊藿燈盞組合物(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物)低劑量組3mg/kg、中劑量組4mg/kg、高劑量組5mg/kg、羊藿燈盞組合物(淫羊藿總黃酮+燈盞花素)低劑量組lmg/kg、中劑量組1.5mg/kg、高劑量組2mg/kg。犬用3。/。戊巴比妥鈉lml/kg前肢靜脈注射麻醉,仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上,剪去頸部、胸部和右后肢內(nèi)側(cè)的毛。75%乙醇消毒剪毛區(qū)。分離氣管,并插入氣管插管,備人工呼吸用;分離頸外靜脈,并從頸外靜脈插管經(jīng)上腔靜脈進(jìn)入右心房并達(dá)到心房竇處,用于抽取冠狀靜脈的血液;分離股靜脈,插入靜脈插管,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中緩慢恒速注入100/。葡萄糖。分離股動(dòng)脈,插入動(dòng)脈插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素鈉生理鹽水),接通TP-400T型壓力換能器,由AP-641G型血壓放大器記錄血壓(收縮壓SAP,舒張壓DAP,平均動(dòng)脈壓MAP)。人工呼吸下,于第4肋間開(kāi)胸,剪開(kāi)心包膜,分離升主動(dòng)脈根部和左冠狀動(dòng)脈前降支,分別放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計(jì)探頭(13,2mm)測(cè)量心輸出量(CO)和冠狀動(dòng)脈血流量(CBF)。將左心室插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素生理鹽水)經(jīng)左心室心尖部插入左心室內(nèi),通過(guò)TP-400T型壓力換能器,由AP-641G型血壓放大器記錄左室內(nèi)壓(LVP),通過(guò)AD-601G型放大器記錄左室舒張末期壓(LVEDP):將針狀電極插入犬四肢皮下,描記標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖(ECG)。上述測(cè)量信號(hào)均輸入RM-6000型八道生理記錄儀記錄,描記。同時(shí)將心輸出量、心電、血壓及心室內(nèi)壓的電信號(hào)輸入微機(jī)的生物醫(yī)學(xué)生理信號(hào)處理系統(tǒng)進(jìn)行處理,并由微機(jī)讀出心室內(nèi)壓峰值(LVSP)、舒張末期壓(LVEDP)、心室收縮參數(shù)(+dp/dt皿x)、心室舒張參數(shù)(-dp/dtn^)。最后,計(jì)算心指數(shù)(CI)、每搏輸出量(SV)、心搏指數(shù)(SI)、每搏功指數(shù)(SWI)、血管總外周阻力等參數(shù)(TPVR)。手術(shù)完成后穩(wěn)定20min,將藥物溶于100ml生理鹽水中,15min內(nèi)經(jīng)股靜脈恒速滴入。在給藥前、給藥后lh、2h分別抽取左心室及冠狀靜脈血,肝素抗凝,注射于i-STATG3+Cartridges(i-STAT公司G3+型測(cè)試片)中,通過(guò)血?dú)夥治鰞x測(cè)量動(dòng)、靜脈血氧分壓。心肌耗氧量由Kanter公式計(jì)算而來(lái),其公式是MVO2=3.25X10XCF(PaOrPvO2)/Wt。MV02是指每100g左室心肌的耗氧量,CF為冠脈流量,Pa02、Pv02分別表示動(dòng)、靜脈血氧分壓,Wt是左心室肌重。所有數(shù)據(jù)均以平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差表示,根據(jù)用藥前后各組中各個(gè)指標(biāo)的變化,采用配對(duì)t-檢驗(yàn)來(lái)判斷用藥前后各種指標(biāo)改變的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對(duì)麻醉犬總外周血管阻力的影響與空白對(duì)照組比較,羊藿燈盞組合物低、中、高劑量組均能極顯著降低麻醉犬總外周血管阻力(p<0.01),淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組能明顯降低麻醉犬總外周血管阻力(p<0.05)。(2)對(duì)麻醉犬左室舒張末期壓的影響與空白對(duì)照組比較,羊藿燈盞組合物低、中、高劑量組均能極顯著降低麻醉犬左室舒張末期壓(pO.Ol),淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組均能明顯降低麻醉犬左室舒張末期壓(p<0.05)。(3)對(duì)麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量的影響與空白對(duì)照組比較,羊藿燈盞組合物低、中、高劑量組均能極顯著增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(pO.Ol),淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組均能明顯增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(p<0.05)。(4)對(duì)麻醉犬心室收縮參數(shù)的影響與空白對(duì)照組比較,羊藿燈盞組合物低、中、高劑量組均能極顯著增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(pO.Ol),淫羊藿總黃酮組、燈盞花提取物組均能明顯增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(p<0.05)。(5)對(duì)麻醉犬心室舒張參數(shù)的影響與空白對(duì)照組比較,羊藿燈盞組合物注射液低、中、高劑量組均能極顯著增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p<0.01),淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組均能明顯增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p<0.05)。(6)對(duì)麻醉犬心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)以及心搏指數(shù)的影響與空白對(duì)照組比較,羊藿燈盞組合物低、中、高劑量組均能極顯著增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(pO.Ol),淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組均能明顯增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(p<0.05)。結(jié)論淫羊藿總黃醐和燈盞花提取物或燈盞花素合并用藥可通過(guò)增加冠狀動(dòng)脈血流量,增加心肌的供血,降低左室舒張末期壓,使血液易于從心外膜向心內(nèi)膜下區(qū)域流動(dòng),對(duì)冠狀動(dòng)脈血流量進(jìn)行重新分配;能明顯降低心臟前負(fù)荷,對(duì)后負(fù)荷無(wú)明顯影響;能顯著改善心臟的泵血功能能明顯改善心臟的收縮和舒張功能。淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素合并用藥的效果優(yōu)于淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素單獨(dú)用藥的效果,提示兩藥聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同增效作用。實(shí)驗(yàn)例4羊耱'燈讓組合物對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用受試動(dòng)物大鼠,220只,雌雄兼用,體重200220g,隨機(jī)分為假手術(shù)組、氯化鈉注射液對(duì)照組、淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組、燈盞花提取物組、羊藿燈盞組合物(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物、淫羊藿總黃酮+燈盞花素)低、中、高劑量組,每組20只。供試品氯化鈉注射液,山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司淫羊藿總黃酮組淫羊藿總黃酮注射液,自制,規(guī)格15mg/10ml;燈盞花素組燈盞花素注射液,市購(gòu),規(guī)格5mg/2ml;燈盞花提取物組燈盞花提取物注射液,自制,規(guī)格10mg/10ml;羊藿燈盞組合物組羊藿燈盞組合物注射液,分為低、中、高三個(gè)劑量組,自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。實(shí)驗(yàn)方法大鼠用10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉,頸正中切口,分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈近心端、頸外動(dòng)脈及其分支動(dòng)脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈,沿頸內(nèi)動(dòng)脈向下分離翼顎動(dòng)脈,根部結(jié)扎該分支。在頸內(nèi)動(dòng)脈近端備線、遠(yuǎn)端放置動(dòng)脈夾,頸總動(dòng)脈分叉處切口,插入尼龍線(深度為1720mm),拴線進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈,入顱至大腦前動(dòng)脈,阻斷大腦中動(dòng)脈所有血流來(lái)源。撤掉動(dòng)脈夾,扎緊備線,外留lcm長(zhǎng)線頭,縫合皮膚。缺血lh后灌胃給藥或氯化鈉注射液,繼續(xù)缺血lh后再灌注,勿需再次麻醉和切開(kāi)皮膚,輕輕提拉所留線頭至有阻力時(shí)提示尼龍線頭端已至頸總動(dòng)脈切口處,血流再通。假手術(shù)組除不插線外,其余步驟同上。存活鼠再灌注24h后,觀察大鼠行為變化,進(jìn)行行為評(píng)分。參考zeaLonga的5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0分,正常,無(wú)神經(jīng)損傷癥狀;l分,不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪2分,向外側(cè)轉(zhuǎn)圈3分,向?qū)?cè)傾倒4分,不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失。然后快速斷頭取鼠大腦。一部分(每組10只)分別稱左右腦半球濕重,置160'C烤箱內(nèi)24h后稱干重,按以下公式計(jì)算腦組織含水量腦組織含水量(%)=(濕重一干重)/濕重X100%;一部分(每組10只)在前連合平面切下厚約2mm冠狀腦片,立刻置于2%TIE溶液中,37'C孵育30min。梗塞區(qū)呈現(xiàn)白色,非梗塞區(qū)呈現(xiàn)紅色。用求積儀(C63圖像分析系統(tǒng))測(cè)出各區(qū)面積,并計(jì)算梗塞區(qū)占全腦的百分比(%)。表3羊藿燈盞組合物注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用(x土s,n=20)組別劑量(mg/kg)神經(jīng)病學(xué)行為評(píng)分腦組織含水量(》/。)腦梗塞體積(%)左半球右半球假手術(shù)組—078.15±0.5878.36±0.610氯化鈉注射液對(duì)照組2.2±0.678.3ftt0.7780.12±0.85**38.12±6.68淫羊蜜總黃翻組151.5±0.7.78.06±0.9279.53±0.54,25.67±5.35..燈盞花素組21.1±0.6'78.06±0.9278.82±0.65'21.27±6.03*'燈盡花提取物組101.2±0.5'78.21±0.6579.63±0.73*22.35士5.65.'羊奮燈盞低劑量組(用燈盞花提取物)60.7±0.3*.78.32±0.7279.06±0.83"19.76i6.05"'羊蹇燈盞中劑量組(用燈盞花提取物)80.5±0.4"*77.訴±0.8578.79±1.02**16.56±5.37"*羊蕾燈盞高劑量組(用燈盞花提取物)100.4±0.2"'78.28±0.8378.58±0.96**13.23±4.68"*羊籌燈盞低劑量組(用燈盞花素)10肚0.2"78.17±0.6278.95±0.68'*18.56±6.35"'羊轚燈盞中劑量組(用燈蓋花素)1.50.5±0.3"'78.35±0.5979.08±1.0廣15.63土5.57'"羊奮燈盞高劑量組(用燈盞花素)20雖3'"78.26±0.7378.88±0.86**13.45±4.72*"注'p<0.05,"p<0.01,'"P<0.001(與氯化鈉注射液對(duì)照組相比較);**p<0.01(與假手術(shù)組相比較)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。(l)對(duì)行為的影響假手術(shù)組大鼠均無(wú)異常癥狀,神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分為O。氯化鈉注射液對(duì)照組出現(xiàn)不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪或向外側(cè)轉(zhuǎn)圈或向?qū)?cè)傾倒的神經(jīng)損傷癥狀,行為評(píng)分為2.2±0.6。與氯化鈉注射液對(duì)照組相比較,淫羊藿總黃酮治療組、燈盞花素組和燈盞花提取物治療組均可明顯降低神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,分別為1.5±0.7、1.1±0.6、1.2±0.5(p<0.05);羊藿燈盞組合物低、中、高三個(gè)劑量組均可顯著降低神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,分別為0.7土0.3、0.5±0.4、0.4±0.2、0.6±0.2、0.5±0.3、0.4±0.3(p<0.01、pO.OOl),降低程度有劑量依賴關(guān)系。(2)對(duì)腦組織含水量的影響氯化鈉注射液對(duì)照組缺血再灌注側(cè)(大腦右半球)的腦組織含水量顯著高于假手術(shù)組(pO.Ol)。與氯化鈉注射液對(duì)照組相比較,淫羊藿總黃酮組、燈盞花組和燈盞花提取物組的腦組織含水量明顯降低(pO.05);羊藿燈盞組合物低、中、高三個(gè)劑量組的腦組織含水量顯著降低(p<0.01)。(3)對(duì)梗死面積的影響假手術(shù)組腦組織無(wú)梗塞。氯化鈉注射液對(duì)照組缺血側(cè)腦組織有梗塞現(xiàn)象。與氯化鈉注射液對(duì)照組相比較,淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組和燈盞提取物組均可顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積(p<0.01),羊藿燈盞組合物各劑量治療組均可極顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積(pO.OOl)。結(jié)論上述結(jié)果表明,淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素合并用藥可顯著改善局灶性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)損傷癥狀,降低缺血再灌注損傷腦組織含水量,減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度,縮小腦梗塞體積,作用強(qiáng)度有劑量依賴性。羊藿燈盞組合物低、中、高劑量組在各項(xiàng)指標(biāo)中的效果均優(yōu)于淫羊藿總黃酮、燈盞花素或燈盞花提取物單獨(dú)用藥的效果,提示淫羊藿總黃酮與燈盞花提取物或燈盞花素合并用藥具有協(xié)同增效作用,在治療缺血性心腦血管疾病方面將有顯著療效。實(shí)驗(yàn)例5羊藿燈盞組合物對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響受試動(dòng)物大鼠,70只,體重200220g,雌雄兼用,隨機(jī)分為7組,每組10只。供試品假手術(shù)組、模型組氯化鈉注射液,山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司淫羊藿總黃酮組淫羊藿總黃酮注射液,自制,規(guī)格15mg/10ml;燈盞花素組燈盞花素注射液,市購(gòu),規(guī)格5mg/2ml;燈盞花提取物組燈盞花提取物注射液,自制,規(guī)格10mg/10ml;羊藿燈盞組合物組羊藿燈盞組合物注射液,分為低、中、高三個(gè)劑量組,自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。給藥劑量氯化鈉注射液10ml/kg、淫羊藿總黃酮組15mg/kg、燈盞花素組2mg/kg、燈盞花提取物組10mg/kg、羊藿燈盞組合物(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物)低劑量組6mg/kg、中劑量組8mg/kg、高劑量組10mg/kg、羊藿燈盞組合物(淫羊藿總黃酮+燈盞花素)低劑量組lmg/kg、中劑量組1.5mg/kg、高劑量組2mg/kg、。實(shí)驗(yàn)方法大鼠用烏拉坦lg/kg腹腔注射麻醉,背位固定,記錄心電,接人工呼吸機(jī)進(jìn)行人工呼吸,打開(kāi)胸腔,剪開(kāi)心包,各給藥組動(dòng)物分別靜脈注射給藥,模型組和假手術(shù)組分別給藥氯化鈉注射液,3min后結(jié)扎左側(cè)冠狀動(dòng)脈前降枝,全程記錄心電30min,結(jié)扎后lh取血,檢測(cè)磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)。取出大鼠心臟,沿結(jié)扎線將心室肌均勻橫切4片,0.50/。氯化硝基四氮唑蘭染色,用求積儀測(cè)每片心肌兩面的缺血面積,計(jì)算心肌缺血面積占心室面積的百分比。表4羊藿燈盞組合物對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響(x土s,n=10)組別CK(u/ml)LDH(u/L)心肌缺血百分比假手術(shù)組48.13±12.238652.43±686.1530.52±5.39模型組102.43±37.25**8939.35±712.36**33.26±4.42#淫羊藿總黃酮組87.63土28.15'8928.25±665.5628.36±5.32'燈盞花素組83.83士26.65'柳6.25±676.6626.56±4.82.燈盞花提取物組84.71±27.26'8917.58±716.6327.64±4.52'羊蜜燈盞低劑量組(淫羊藿總黃爾+燈盞花提取物)72.37±25.17"8885.26±579.52'20.57±5.28"羊楚燈盞中劑量組(淫羊藿總黃酮+燈盞花提取物)63.37±22.35**8554.52±597.65*'18.53士4.45"羊藿燈盞高劑量組(淫羊藿總黃兩+燈盞花提取物)52.63i26.45"8486.32±673.57"15.32±5.77*'羊藿燈盞低劑量組(淫羊鼈總黃酮+燈盞花素)73.23±23.67"8757.36±637.62*'21.56i5.26"羊藿燈盞中劑量組(淫羊藍(lán)總黃兩+燈盞花素)62.56±26.43"8638.65±586.58"17.87士4.65"羊蜜燈盞高劑量組(淫羊藿總黃瞎+燈盞花素)51.72±25.55"8369.37±652.73**15.15±5.36"注*pO.05,**p<0.01,與假手術(shù)組比較;'p<0.05,"p<0.01,與模型組比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)扎后,模型組大鼠心電的QRS波均突然異常增高、加寬,心肌大范圍缺血,生化檢測(cè)表現(xiàn)為CK和LDH均異常增高。與模型組相比較,淫羊藿總黃酮組、燈盞花素組和燈盞花提取物組均能明顯降低CK活性(p<0.05),明顯減小心肌缺血面積(pO.05);各個(gè)劑量組的羊藿燈盞組合物均能顯著減小因結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致的心電和生化指標(biāo)的異常改變(p<0.05、p<0.01),顯著減小心肌缺血范圍(pO.Ol)。各個(gè)劑量組的羊藿燈盞組合物的效果均優(yōu)于淫羊藿總黃酮或燈盞花提取物或燈盞花素組單獨(dú)給藥的效果,提示淫羊藿總黃酮與燈盞花提取物或燈盞花素聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同增效作用,在治療缺血性心腦血管疾病方面將有顯著療效。實(shí)驗(yàn)例6羊蜜燈盞組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品羊藿燈盞組合物注射液(自制,制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)??疾祉?xiàng)目性狀、pH值、澄明度、含量、有關(guān)物質(zhì)長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品置溫度25'C土2'C、相對(duì)濕度60%±10%的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月、24個(gè)月,各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物注射液長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式,對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換,或者減少、增加。實(shí)施例39中所用的淫羊藿總黃翻取自實(shí)施例l,使用的燈盞花提取物取自實(shí)施例2,使用的燈盞花素來(lái)自市購(gòu)。實(shí)施例l淫羊藿總黃酮的制備淫羊藿總黃爾制備工藝稱取淫羊藿藥材,加水煎煮二次,每次1.5小時(shí),每次加水10倍量,合并煎液,濾過(guò),濾液冷藏放置過(guò)夜,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度為1.08U0的濃縮液,加乙醇至含醇量為60%,攪拌均勻,冷藏靜置24小時(shí),濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度為1.031.05,加于已處理好的聚酰胺樹(shù)脂(80100目)柱上,先用34倍柱體積的水沖洗,再用23倍柱體積的20%乙醇沖洗,棄去洗滌液,再用45倍柱體積的95%乙醇進(jìn)行洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,噴霧干燥,得淫羊藿總黃酮。淫羊藿總黃翻的鑒別取淫羊藿總黃酮O.lg,加乙醇10ml,溫浸30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖糽ml使溶解,作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每lml含O.lmg的溶液,作為對(duì)照品溶液。薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10nl,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上,以乙酸乙脂-丁酮-甲酸-水(10:1:1:1)作為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,涼干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的暗紅色斑點(diǎn);噴以三氯化鋁試液,再置紫外光燈(365nm)下檢視,顯相同的橙紅色熒光斑點(diǎn)。淫羊蹇總黃酮含量測(cè)定(1)淫羊藿總黃酮的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品O.OOlg,加70%乙醇適量使溶解,并稀釋成每lml中含淫羊藿苷25ug的對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、7.0與9.0ml,分別置10ml量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻。以70%乙醇為空白,于270nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。測(cè)定精密稱取淫羊蜜總黃酮O.Olg,置50ml量瓶中,加70%乙醇超聲處理30分鐘,加70%乙酵稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),作為供試品溶液。以70%乙醇為空白,照分光光度法,在270nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算,即得。(2)淫羊藿苷的含量測(cè)定照髙效液相色譜法檢測(cè)。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基鍵合硅膠為填充劑;以乙睛-水(30:70)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算不低于1500。對(duì)照品溶液得制備精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每lml含0.1mg的溶液,即得。供試品溶液的制備精密量取各樣品液2ml,置25ml量瓶中,加70%稀釋至刻度,搖勻,即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各lOnl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。通過(guò)上述工藝制備三批淫羊藿總黃酮,淫羊藿總黃酮中總黃酮和淫羊藿苷的含量測(cè)定結(jié)果和得率見(jiàn)表5。由表可見(jiàn),通過(guò)本工藝制備的淫羊藿總黃酮的得率為23%,淫羊藿總黃酮中總黃酮含量不低于80%,淫羊藿苷含量不低于30%。表5淫羊藿總黃酮的含量測(cè)定結(jié)果和得率<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實(shí)灘例2燈盞花提取物的制備燈盞花提取物制備工藝取燈盞花藥材,加水煎煮二次,每次煎煮1.5小時(shí),加水10倍量,合并提取液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)密度為1.101.12(50'C),加乙醇至含醇量為60%,攪拌,冷藏靜置12小時(shí),濾過(guò),濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.121.15(50'C),用鹽酸調(diào)pH值至2,于55'C保溫6小時(shí),濾過(guò),濾液通過(guò)聚酰胺柱,先用水洗去雜質(zhì),繼用90%乙醇洗脫,收集乙醇液,減壓回收乙醇并濃縮至稠膏,烘干,粉碎得藥粉;沉淀用20%的乙醇洗滌,揮干乙醇,用甲醇重結(jié)晶,真空干燥,合并上述藥粉得燈盞花提取物。燈盞花提取物的鑒別取燈盞花提取物50mg,加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至23,加正丁醇5ml,振搖提取,分取正丁醇液,蒸干,殘?jiān)蛹状糽ml使溶解,作為供試品溶液。另取野黃芩苷對(duì)照品、1,5-氧-二咖啡??鼘幩釋?duì)照品和咖啡酸對(duì)照品,加甲醇制成每lml中各含2mg的溶液作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各0.5^1,分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上,用冰醋酸為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。總黃翻含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-四氫呋喃-0.1%磷酸溶液(14:14:72)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm;柱溫40'C。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。對(duì)照品溶液的制備取野黃芩苷對(duì)照品適量,精密稱定,加卯M甲醇制成每lml中含0.1mg的溶液,即得。供試品溶液的制備精密稱取本品10mg,置10ml量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。通過(guò)上述工藝制備三批燈盞花提取物,燈盞花提取物中黃酮的含量測(cè)定結(jié)果和得率見(jiàn)表6。由表可見(jiàn),通過(guò)本工藝制備的燈盞花提取物得率為0.51.5%,燈盞花提取物中總黃酮(以野黃芩苷計(jì))的含量不低于70%,總咖啡酸酯(以l,5-氧-二咖啡??鼘幩嵊?jì))的含量不低于20%。表6燈盞花提取物得率和含量測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>處方處方l:淫羊藿總黃酮燈盞花提取物聚山梨酯80甘露醇無(wú)菌注射用水100g60g60g300g加至3000ml共制備處方2:淫羊藿總黃酮燈盞花素聚山梨酯80甘露醇無(wú)菌注射用水1000支100g10g60g300g加至3000ml共制備1000支制備工藝1)先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶,膠塞等進(jìn)行無(wú)菌處理。2)按照處方量稱取原料和輔料。3)將聚山梨酯80加20%的無(wú)菌注射用水后制成水溶液,將淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素加入配液量60%無(wú)菌注射用水中加熱溶解完全,合并上述溶液,補(bǔ)加無(wú)菌注射用水至全量。4)加入配液量0.1%的針用活性炭,加熱攪拌15分鐘。5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。6)經(jīng)0.22nm的微孔濾膜精濾。7)檢査溶液的澄明度,半成品化驗(yàn)。8)分裝于抗生素玻璃瓶中,半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍一45'C5小時(shí),低溫真空干燥一45'C0'C36小時(shí),然后升溫至3(TC真空干燥3小時(shí)。9)凍干結(jié)束,壓塞,軋蓋。10)成品全檢,包裝入庫(kù)。實(shí)施例4:羊董燈盞組合物水針布j的制備處方l:淫羊藿總黃酮燈盞花提取物聚山梨酯80注射用水100g60g100g加至10000ml共制備誦支處方2:淫羊藿總黃酮燈盞花素聚山梨酯80注射用水加至10000ml100g10g100g共制備1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等,臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。2)將淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素加入配液量80%的注射用水中加熱攪拌溶解完全,補(bǔ)加注射用水至全量,加入聚山梨酯80攪拌溶解。3)加入配液量0.1%的針用活性炭,加熱攪拌15分鐘。4)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。5)經(jīng)0.45pm的微孔濾膜精濾。6)檢査溶液的澄明度,半成品化驗(yàn)。7)將溶液灌封于玻璃安瓿中。8)100'C流通蒸汽滅菌30分鐘。9)趁熱將樣品放入O.OP/。的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。10)燈檢,成品全檢,包裝入庫(kù)。實(shí)施例S:羊藿燈盤(pán)組合物輸液的制備氯化鈉輸液處方處方l:淫羊藿總黃酮100g燈盞花提取物60g聚山梨酯8060g氯化鈉900g注射用水_加至畫(huà)00ml_共制備1000瓶處方2:淫羊藿總黃酮燈盞花素聚山梨酯80氯化鈉注射用水100g10g60g900g加至100000ml共制備1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等,臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。2)將淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素加入配液量60%注射用水加熱攪拌溶解完全,加入聚山梨酯80攪拌溶解,將氯化鈉用配液量10%的注射用水溶解完全。3)合并上述溶液,補(bǔ)加注射用水至全量。4)加入配液量0.1%的針用活性炭,加熱攪拌15分鐘。5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。6)經(jīng)0.45pm的微孔濾膜精濾。7)檢査溶液的澄明度,半成品化驗(yàn)。8)灌裝于100ml的輸液瓶中。9)115'C熱壓滅菌30分鐘。10)燈檢,成品全檢,包裝入庫(kù)。處方處方l:淫羊藿總黃酮燈盞花提取物聚山梨酯80葡萄糖注射用水100g60g60g5000g加至100000ml共制備處方2:淫羊藿總黃酮燈盞花素聚山梨酯80葡萄糖注射用水共制備廳瓶100g10g60g5000g加至100000ml畫(huà)瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等,臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。2)將聚山梨酯80加20%的無(wú)菌注射用水后制成水溶液,將淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素加入配液量60%注射用水中加熱攪拌溶解完全,將葡萄糖用配液量10%的注射用水溶解完全,加熱煮沸15分鐘。3)合并上述溶液,補(bǔ)加注射用水至全量。4)加入配液量0.1%的針用活性炭,加熱攪拌15分鐘。5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。6)經(jīng)0.45nm的微孔濾膜精濾。7)檢査溶液的澄明度,半成品化驗(yàn)。8)灌裝于100ml的輸液瓶中。9)115'C熱壓滅菌30分鐘。10)燈檢,成品全檢,包裝入庫(kù)。實(shí)麄例6:羊藿燈盞組合物片劑的制備處方處方1:淫羊藿總黃酮lOOg燈盞花提取物60g預(yù)膠化淀粉40g低取代羥丙基纖維素20g微晶纖維素30g2%HPMC水溶液適量微粉硅膠6.0g硬脂酸鎂3.0g羧甲淀粉鈉15.0g共制備1000片處方2:淫羊藿總黃酮預(yù)膠化淀粉lOOg10g40g20g30g適量6.0g3.0g15.0g低取代羥丙基纖維素微晶纖維素2%HPMC水溶液微粉硅膠硬脂酸鎂羧甲淀粉鈉共制備1000片制備工藝1)將淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物粉碎過(guò)100目篩備用。2)按照處方量稱取原料和輔料。3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2%的水溶液備用。4)將淫羊藿總黃酮、燈盞花提取物或燈盞花素、預(yù)膠化淀粉、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素混合均勻,加入2MHPMC水溶液適量,攪拌均勻,制成適宜軟材。5)過(guò)20目篩制顆粒。6)顆粒在6(TC的條件下烘干。7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂、微粉硅膠和羧甲淀粉鈉,過(guò)18目篩整粒,混合均勻。8)取樣,半成品化驗(yàn)。9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。10)成品全檢,包裝入庫(kù)。實(shí)灘例7:羊藿燈籙組合物膠囊劑的制備處方處方l:淫羊藿總黃酮lOOg燈盞花提取物60g預(yù)膠化淀粉40g低取代羥丙基纖維素20g微晶纖維素30g2%HPMC水溶液適量微粉硅膠6.0g硬脂酸鎂_3.0g共制備誦粒處方2:淫羊藿總黃酮100g燈盞花素10g預(yù)膠化淀粉40g低取代羥丙基纖維素20g微晶纖維素30g2MHPMC水溶液適量微粉硅膠6.0g硬脂酸鎂_3.0g共制備畫(huà)粒制備工藝1)將淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物粉碎過(guò)100目篩備用。2)按照處方量稱取原料和輔料。3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2%的水溶液備用。4)將淫羊藿總黃酮、燈盞花提取物或燈盞花素、預(yù)膠化淀粉、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素混合均勻,加入2MHPMC水溶液適量,攪拌均勻,制成適宜軟材。5)過(guò)20目篩制顆粒。6)顆粒在60'C的條件下烘干。7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂、微粉硅膠,過(guò)18目篩整粒,混合均勻。8)取樣,半成品化驗(yàn)。9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。10)成品全檢,包裝入庫(kù)。實(shí)施例8:羊藿燈盞組合物顆粒劑的制備處方處方l:淫羊藿總黃酮100g燈盞花提取物60g糖粉2000.0g2XHPMC6(W乙醇溶液適量共制備1000包處方2:淫羊藿總黃酮100g燈盞花素10g糖粉2000.0g2%HPMC60%乙醇溶液適量共制備1000包制備工藝-1)將淫羊藿總黃酮、燈盞花提取物和蔗糖粉碎過(guò)100目篩備用。2)按照處方量稱取原料和輔料。3)將淫羊藿總黃酮、燈盞花提取物或燈盞花素與糖粉以等量遞加的方法混合均勻,加入2XHPMC60%乙醇溶液適量,攪拌均勻,制成適宜軟材,4)過(guò)20目篩制顆粒。5)顆粒在60"C的條件下烘干。6)干顆粒過(guò)18目篩整粒。7)取樣,半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量,確定裝量。8)包裝,成品全檢,包裝入庫(kù)。實(shí)施例9:羊藿燈盤(pán)組合物CI服雙的制備處方處方l:淫羊藿總黃酮100g燈盞花提取物60g苯甲酸鈉15g甜菊甙10g純化水_加至10000ml共制備畫(huà)支處方2:淫羊藿總黃酮100g燈盞花素10g苯甲酸鈉15g甜菊式10g純化水_加至10000ml共制備誦支制備工藝1)將淫羊藿總黃酮和燈盞花提取物或燈盞花素加入配液量50%的純化水中加熱攪拌溶解完全。2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20%的水溶解完全。3)合并上述溶液,補(bǔ)加純化水水至全量。4)過(guò)0.8nm的微孔濾膜過(guò)濾。5)半成品化驗(yàn)。6)灌裝。成品全檢,包裝入庫(kù)。權(quán)利要求1.一種藥物組合物,其特征在于,該藥物組合物主要由下列重量份的原料藥制成淫羊藿總黃酮25~500份、燈盞花提取物10~300份或或燈盞花素2~50份。2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物,其特征在于,各原料藥的重量份為淫羊藿總黃酮50200份、燈盞花提取物30120份或燈盞花素520份。3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物,其特征在于,各原料藥的重量份為淫羊藿總黃酮100份、燈盞花提取物60份或燈盞花素10份。4.如權(quán)利要求13所述的任一藥物組合物,其特征在于,所述的淫羊藿總黃酮中總黃酮的含量不低于50%,其中淫羊藿苷的含量不低于10%;燈盞花提取物中燈盞花總黃酮的含量不低于6%,總咖啡酸酯的含量不低于20%。5.如權(quán)利要求4所述的任一藥物組合物,其特征在于,所述的淫羊藿總黃酮中總黃酮的含量不低于80%,其中淫羊藿苷的含量不低于30%;燈盞花提取物中燈盞花總黃酮的含量不低于70%,總咖啡酸酯的含量不低于40%。6.根據(jù)權(quán)利要求13所述的任一藥物組合物,其特征在于,該藥物組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的任一藥物組合物,其特征在于,該藥物組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成注射劑和口服制劑。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
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      ,公開(kāi)了一種用于心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法,該組合物主要由淫羊藿總黃酮10~600份和燈盞花提取物5~450份或燈盞花素2~50份與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成各種藥學(xué)上可接受的劑型,優(yōu)選注射劑和口服制劑。二者配伍具有協(xié)同增效作用,產(chǎn)生了意想不到的效果。文檔編號(hào)A61P9/12GK101108198SQ20061004554公開(kāi)日2008年1月23日申請(qǐng)日期2006年7月21日優(yōu)先權(quán)日2006年7月21日發(fā)明者黃振華申請(qǐng)人:黃振華
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