專(zhuān)利名稱(chēng)：以2－羥基－1,3－丙二胺為載體基團(tuán)的鉑(Ⅱ)抗癌配合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，特別是涉及一類(lèi)以2-羥基-1，3-丙二胺為載體基團(tuán)的鉑(II)抗癌配合物。
背景技術(shù)：
癌癥作為疾病中的第二大死亡原因，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的安全和健康，全世界每年約有700萬(wàn)人死于癌癥。近年來(lái)，因人們的不良生活習(xí)慣和環(huán)境污染，癌癥的發(fā)病率和死亡率急劇上升，已成為人類(lèi)亟待攻克的難題?；熓悄壳芭R床治療癌癥的三大手段之一，因此世界各國(guó)每年都投入大量人力、物力和財(cái)力進(jìn)行化療用的抗癌藥物的研究和開(kāi)發(fā)。鉑類(lèi)藥物是上世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)新型無(wú)機(jī)抗癌藥，經(jīng)歷近30年的研究發(fā)展，已相繼成功開(kāi)發(fā)了順鉑(Cisplatin)、卡鉑(Carbonplatin)、奈達(dá)鉑(Nedaplatin)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、舒鉑(Sunpla)和洛鉑(Lobaplatin)，用于臨床治療癌癥。特別是順鉑和卡鉑是目前臨床上使用最廣的抗癌藥物之一，也是治療許多腫瘤的首選藥物[李以欣譯.癌癥化學(xué)治療的首選藥物[J].國(guó)外醫(yī)藥-合成藥生 化藥制劑分冊(cè)，1998，19(2)89-101；張倫.鉑類(lèi)抗癌藥物市場(chǎng)分析[J].中國(guó)藥方，2003，3138-141]。據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，現(xiàn)臨床使用的聯(lián)合化療方案中，有85％的方案是以順鉑或卡鉑為主藥，或有順鉑或卡鉑參與配伍。同時(shí)，其它鉑類(lèi)抗癌藥，如奧沙利鉑、奈達(dá)鉑、舒鉑和洛鉑正逐漸得到醫(yī)生和患者的認(rèn)識(shí)，也將成為治療癌癥的重要藥物(Emest Wong，Christen MG，Current status of platinum-based antitumor drugs，Chem.Rev.，1999，992451-2466.)。

然而，近年來(lái)不斷出現(xiàn)對(duì)鉑類(lèi)藥物產(chǎn)生耐藥性的病例，嚴(yán)重影響其臨床療效，同時(shí)鉑類(lèi)藥物還存在較大的毒副作用如骨髓抑制、神經(jīng)損傷等和抗癌譜相對(duì)窄的缺點(diǎn)，因此設(shè)計(jì)和合成新型的鉑類(lèi)抗癌藥物仍是現(xiàn)在抗癌藥研究的主要方向之一(M A Jakuper，M.Galanski，B.K.Keppler.Tumour-inhibiting platinum complexes-state of art and future perspectives，Rev.PhysiolBiochem Pharmacol，2003，1461-53.)。
目前，臨床上使用的鉑類(lèi)抗癌藥均以NH3或有機(jī)二胺為載體基團(tuán)，有機(jī)二胺與鉑(II)形成五元或七元環(huán)螯合物。作用機(jī)制研究表明胺載體的性質(zhì)決定鉑類(lèi)配合物的抗癌譜和抗癌細(xì)胞的耐藥作用(Yee-Ping Ho，Steve CF Au-Yeung，Kenneth KW To，Platinum-based anticancer AgentsInnovative design strategies and biological perspectives，Medicinal ResearchRev.，2003，23(5)，633-655.)。

發(fā)明內(nèi)容
我們發(fā)明一類(lèi)以2-羥基1，3-丙二胺為載體基團(tuán)的新型六元螯環(huán)鉑(II)抗腫瘤配合物，同時(shí)在該配合物的載體基團(tuán)上引入了羥基，目的在于(1)通過(guò)羥基的氫鍵作用力，加強(qiáng)Pt(II)與靶標(biāo)DNA的結(jié)合力，抵抗癌細(xì)胞的自我修復(fù)能力；(2)通過(guò)羥基的親水性，提高配合物的溶解度；(3)通過(guò)羥基可以偶聯(lián)上能識(shí)別癌細(xì)胞的生物分子，使鉑配合物具有靶向性。實(shí)驗(yàn)表明所發(fā)明的鉑(II)配合物具有抗癌活性高、水溶解性好、化學(xué)性質(zhì)的穩(wěn)定的特點(diǎn)，同時(shí)對(duì)多藥耐藥癌細(xì)胞株也有高的活性，顯示出良好的應(yīng)用前景。
本發(fā)明的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式下圖所示
R1＝H，CH3，C2H5R2＝H，OH本發(fā)明鉑化合物的制備方法是以K2PtCl4為起始原料，加入KI，轉(zhuǎn)化成K2PtI4后，與載體基團(tuán)A2(A2＝2-羥基-1，3-丙二胺)反應(yīng)，制備出相應(yīng)的cis-[Pt(II)A2I2]中間體，再在水中與AgX2等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過(guò)濾分離AgI，母液濃縮和冷凍干燥得到粗品；或cis-[Pt(II)A2I2]先與Ag2SO4在水中等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過(guò)濾分離AgI，母液與等摩爾的BaX2定量反應(yīng)，過(guò)濾分離BaSO4，母液濃縮和冷凍干燥得到粗品。粗品經(jīng)水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶得到本發(fā)明的配合物純品。
本發(fā)明的制備方法具有產(chǎn)率高、產(chǎn)品純、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，制備所涉及的化學(xué)反應(yīng)為 本發(fā)明化合物在體外對(duì)A549人肺癌細(xì)胞株和SGC-7901人胃癌細(xì)胞株和LNcap人前列腺癌細(xì)胞有明顯的殺滅作用，活性高于目前臨床廣泛使用的鉑類(lèi)抗癌藥卡鉑(Carboplatin)；在體內(nèi)對(duì)小鼠的S180肉瘤有明顯的抑制作用，療效顯著高于卡鉑。同時(shí)對(duì)順鉑、卡鉑等抗癌藥耐受的多藥耐藥癌細(xì)胞株A549/ATCC也顯示出高的活性。所發(fā)明的化合物cis-[2-羥基-1，3-丙二胺·1，1-環(huán)丁烷二羧酸根·合鉑(II)](LLC-0804)，cis-[2-羥基-1，3-丙二胺·3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根·合鉑(II)](LLC-0805)水溶性大于10mg/ml(25℃)，穩(wěn)定72小時(shí)，具有良好的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式
(1)cis-[Pt(II)A2I2]中間體的制備稱(chēng)取10gK2PtCl4(24mmol)溶于100ml水中，過(guò)濾除去不溶物，在60℃下，緩慢加入含KI24g(144mmol)的水溶液100ml，避光反應(yīng)1小時(shí)后，滴加等摩爾的載體基團(tuán)A2(2.17g，24mmol)，得到黃色沉淀，過(guò)濾收集，用水、乙醇洗滌后在60-70℃下真空干燥4小時(shí)，分別得到cis-[Pt(II)A2I2](Pt36.3％，計(jì)算值36.2％)12g，產(chǎn)率92％。
(2)本發(fā)明的化合物cis-[2-羥基-1，3-丙二胺·草酸根·合鉑(II)](LLC-0802)的合成取5g的cis-[Pt(II)A2I2]，懸浮100ml水中，加入等摩爾量的草酸銀2.82g，在45℃下攪拌反應(yīng)15小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過(guò)濾除去AgI沉淀，母液減壓濃縮到20ml，冷凍干燥得白色晶體，在水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶提純得到精品2.5克，產(chǎn)率71％。
特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為<1>元素分析C 15.8％，N 7.44％，H 2.73％，Pt 52.2％與理論值C 16.1％，N7.51％，H 2.68％，Pt 52.5％一致。<2>FAB+-MS(m/e，RI)374(M+，100％)，466(M++Gly，25％)。
<3>IR(cm-1，KBr壓片)3231(s vNH3)，2950(w，vCH2)，1692(ws vasCOO)，1386(s vsCOO)。
<4>1H-NMR(DMSO，ppm)2.33(m，2H，CH2-N)，2.435(m，2H，CH2-N)，3.65(s 1H，CH-O)。
這些參數(shù)符合所發(fā)明的配合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
(3)本發(fā)明的化合物cis-[2-羥基-1，3-丙二胺·1，1-環(huán)丁烷二羧酸根·合鉑(II)](LLC-0804)的合成取5g的cis-[Pt(II)A2I2]，懸浮100ml水中，加入等摩爾量的硫酸銀2.89g，在45℃下閉光攪拌反應(yīng)8小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過(guò)濾除去AgI沉淀。在母液中再加入等摩爾量的1，1-環(huán)丁烷二羧酸鋇，再在45℃下攪拌反應(yīng)6小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過(guò)濾除去BaSO4沉淀，母液減壓濃縮到15ml，冷凍干燥得白色晶體，在水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶提純得到精品3.0克，產(chǎn)率76％，特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為<1>元素分析C 25.1％，N 6.44％，H 3.80％，Pt 45.3％與理論值C 25.3％，N 6.55％，H 3.75％，Pt 45.6％一致。
<2>FAB+-MS(m/e，RI)428(M+，100％)，855(2M+，35％)，284(M+-X2，35％)。
<3>IR(cm-1，KBr壓片)3193，3114(s，vNH3)，2939(w，vCH2)，1616(vs vasCOO)，1389(svsCOO)。
<4>1H-NMR(DMSO，ppm)1.63(m，2H，CH2)，2.30(m，2H，CH2-N)，2.43(m，2H，CH2-N)，2.65(m，4H，2CH2)，3.61(s 1H，CH-O)。
這些參數(shù)符合所發(fā)明的配合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
(4)發(fā)明的化合物的體外抗癌活性以水為溶媒、卡鉑為對(duì)照，采用SRB法測(cè)定所發(fā)明的化合物對(duì)A549人肺癌細(xì)胞株、SGC-7901人胃癌細(xì)胞株和LNcap人前列腺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)的抑制作用，計(jì)算IC50。所發(fā)明的化合物有很高的抗癌活性，IC50均比卡鉑小，明顯優(yōu)于卡鉑Carboplatin(見(jiàn)表1，LLC-0803為cis-[2-羥基-1，3-丙二胺·丙二二酸根·合鉑(II)])表1化合物抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)50％的濃度IC50(M)

(5)發(fā)明的化合物的體內(nèi)抗癌活性小鼠S180肉瘤接種于小鼠右側(cè)腋窩皮下。接種后次日分組給藥。所發(fā)明的化合物溶于5％的葡萄糖溶液，按3、6、12mg/kg的劑量注射給藥，d1、4共2次。第8天稱(chēng)體重，逐個(gè)解剖取瘤稱(chēng)重，計(jì)算抑瘤率，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。
抑瘤率(％)＝(對(duì)照組平均瘤重-用藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100表2.LLC-0804對(duì)小鼠S180肉瘤生長(zhǎng)的抑制作用

*P＜0.01與對(duì)照組相比較試驗(yàn)結(jié)果表明所發(fā)明的化合物L(fēng)LC-0804明顯抑制小鼠S180肉瘤的生長(zhǎng)，抑制作用具有劑量依賴(lài)性，療效明顯好于卡鉑。
(6)所發(fā)明的化合物對(duì)A549/ATCC活性

A549/ATCC為對(duì)順鉑、卡鉑等抗癌藥耐受的多藥耐藥癌細(xì)胞株，我們所發(fā)明的化合物對(duì)A549/ATCC仍具有高的活性，IC50為7.55M，活性明顯高于卡鉑，與順鉑相當(dāng)。
權(quán)利要求
1.以2-羥基-1，3-丙二胺為載體基團(tuán)的新型六元螯環(huán)鉑(II)配合物，其特征在于結(jié)構(gòu)式為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以2-羥基-1，3-丙二胺為載體基團(tuán)的新型六元螯環(huán)鉑(II)配合物，其特征在于可以將其制備成注射劑液或凍干粉劑，作為制備臨床治療癌癥的藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類(lèi)以2－羥基－1，3－丙二胺為載體基團(tuán)的新型六元螯環(huán)鉑(II)配合物。它們的制備是以K
文檔編號(hào)A61K9/08GK1948323SQ20061004877
公開(kāi)日2007年4月18日 申請(qǐng)日期2006年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月3日
發(fā)明者劉偉平, 樓麗廣, 諶喜珠, 侯樹(shù)謙, 李永年 申請(qǐng)人:昆明貴研藥業(yè)有限公司, 中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所, 昆明貴金屬研究所