專利名稱：門冬氨酸阿奇霉素及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種門冬氨酸阿奇霉素及其制劑。
背景技術(shù)：
阿奇霉素為當今世界上公認的抗生素“第一拳頭式”產(chǎn)品，由于阿奇霉素的自由堿形式不易溶于水，所以它的溶液從非胃腸道給藥的治療一直受到制約。市場上銷售的主要品種為口服制劑，且生物利用度不高(僅為40％左右)；另外阿奇霉素在酸性環(huán)境容易分解，不夠穩(wěn)定，導(dǎo)致制劑儲存時間不長，使用過程易出現(xiàn)副作用，對醫(yī)患產(chǎn)生一些不利的影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供一種門冬氨酸阿奇霉素及其制劑。
本發(fā)明所提供的門冬氨酸阿奇霉素，其化學(xué)名稱為(2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R)-13-[(2，6-二脫氧-3-C-甲基-3-O-甲基-(-L-核-己吡喃糖基)氧)-2-乙基-3，4，10-三羥基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脫氧-3-(二甲氨基)-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧雜-6-氮雜環(huán)十五烷-15酮門冬氨酸鹽；其分子式為C38H72N2O12(C4H7O4N2)2。
本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素具有阻礙細菌轉(zhuǎn)肽過程，從而抑制細菌蛋白質(zhì)的合成。體外試驗證明，對臨床上多種常見致病菌有抗菌作用，包括革蘭氏陽性需氧菌、革蘭氏陰性需氧菌以及特南包柔螺旋體(Lyme病原體)(Lyme disease agent)、肺炎支原體、人型支原體、脲素分解脲素原體、沙眼衣原體、卡氏肺孢子蟲、鳥分枝桿菌屬、彎曲菌屬、單核細胞增多性李斯德桿菌等其他微生物。臨床應(yīng)用中未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，臨床療效好，是目前臨床上較為理想的抗細菌感染的藥物。
門冬氨酸也是人體必須的氨基酸之一，與阿奇霉素成鹽后既能夠發(fā)揮協(xié)同作用，也能夠有效的改善阿奇霉素的溶解性，擴大了阿奇霉素的制劑范圍和用藥途徑。
本發(fā)明還提供一種上述門冬氨酸阿奇霉素的制備方法。
所述門冬氨酸阿奇霉素的制備方法，包括以下步驟1)將阿奇霉素溶于是阿奇霉素4-9倍質(zhì)量的注射用水中，調(diào)節(jié)pH值至5.5-6.5，在攪拌下加入是阿奇霉素0.30-0.40倍質(zhì)量的門冬氨酸，室溫攪拌4-6小時待固體溶解、反應(yīng)液澄明后，加活性炭脫色；2)過濾后，濾液經(jīng)0.18-0.25um濾膜過濾，濾液凍干后即得門冬氨酸阿奇霉素。
所述步驟1)中，阿奇霉素溶于是阿奇霉素8.4倍質(zhì)量的注射用水中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，在攪拌下加入是阿奇霉素0.36倍質(zhì)量的門冬氨酸。
所述方法中，所述阿奇霉素為阿奇霉素精品；所述阿奇霉素精品可按照以下步驟制備1)將阿奇霉素加入是阿奇霉素3-5倍質(zhì)量的乙醇中，再加入是阿奇霉素質(zhì)量2-3％的白陶土，攪拌30-40分鐘，過濾；2)將步驟1)得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素5-6倍質(zhì)量水中，將析出的白色固體濾出，加入是阿奇霉素四倍質(zhì)量的乙醇中，溶解，然后加入是阿奇霉素質(zhì)量的0.3％-0.5％的針用活性炭，室溫攪拌15-20分鐘，過濾，得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素3-5倍質(zhì)量水中，將析出的白色固體濾出，干燥，得到阿奇霉素精品。
所述阿奇霉素精品按照以下步驟制備1)將阿奇霉素加入是阿奇霉素四倍質(zhì)量的乙醇中，再加入是阿奇霉素3％的白陶土，攪拌30分鐘，過濾；2)將步驟1)得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素5倍質(zhì)量蒸餾水中，將析出的白色固體濾出，加入是阿奇霉素四倍質(zhì)量的乙醇中，溶解，然后加入是阿奇霉素質(zhì)量的0.3％的針用活性炭，過濾，得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素五倍質(zhì)量的蒸餾水中，將析出的白色固體濾出真空干燥，得到阿奇霉素精品。
本發(fā)明的制備門冬氨酸阿奇霉素的方法，是通過阿奇霉素與門冬氨酸在適宜的反應(yīng)條件下獲得。由于阿奇霉素具有兩個氨基，可以與酸反應(yīng)生成鹽，門冬氨酸為氨基二羧酸結(jié)構(gòu)，其一個羧基與阿奇霉素中和成鹽；在成鹽過程中，阿奇霉素始終處于堿性或中性的環(huán)境，避免了阿奇霉素長時間在酸性溶液中不穩(wěn)定而分解的問題；從反應(yīng)完成后的溶液中采用水溶液冷凍干燥法獲得固體的門冬氨酸阿奇霉素。
本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素藥物制劑，以門冬氨酸阿奇霉素或其溶劑化合物或其任意的結(jié)晶形態(tài)為藥物活性成分，在其制劑中所占的質(zhì)量百分比可以是0.1％-99.9％，其余為藥物可接受的載體。本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素制劑，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片、膠囊劑的每粒、注射劑的每支等，單位劑量中含門冬氨酸阿奇霉素的量為0.1g-1.0g，優(yōu)選的是0.125g-0.680g。所述的門冬氨酸阿奇霉素的溶劑化合物可以是水合物，包括一水化合物、二水化合物等。
本發(fā)明提供的門冬氨酸阿奇霉素制劑可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、硬膠囊劑、口服液、糖漿劑、口含片、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、貼劑、緩釋制劑、控釋制劑等。本發(fā)明的制劑優(yōu)選的是注射劑型，如注射用凍干粉針劑、注射用粉針劑、注射液、輸液等，更優(yōu)選的是注射用凍干粉針劑。
本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素制劑是將上述門冬氨酸阿奇霉素或其溶劑化合物或其任意結(jié)晶體與藥學(xué)上可接受的載體輔料混合在一起，制備而成的。門冬氨酸阿奇霉素口服給藥的片劑、膠囊通常為一種單位劑量，并含有常用的賦型劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、潤活劑、崩解劑、著色劑調(diào)味劑等，并可對片劑進行包衣。
對于口服液體制劑的形式可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酊劑，或者可以是一種在使用前可以用水或其他適宜載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這些液體制劑可以含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑(例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素硬脂酸鋁或氫化食用脂肪)，乳化劑(例如卵磷脂、脫水山梨醇—油酸脂或阿拉伯膠)，非水性載體(例如杏仁油、丙二醇或乙醇)，防腐劑(例如對羥基苯甲酸酯、對羥基苯甲酸丙酯、山梨酸)等，并且如果需要，可以含有常規(guī)的香味劑或著色劑。
對于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素和無菌載體。根據(jù)載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是將門冬氨酸阿奇霉素溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶前過濾、消毒然后嚴封，輔料如防腐劑和緩沖劑也可溶解在這種載體中。為了提高門冬氨酸阿奇霉素制劑的穩(wěn)定性，可在將液體裝入小瓶以后，將這種組合物放入冷凍干燥機，在真空狀態(tài)下將其水分除去，得到注射用門冬氨酸阿奇霉素凍干制劑。
用基本相同的方式制備胃腸外懸浮液，除了是將活化化合物懸浮在載體而不是將其溶解，而且在將其懸浮于無菌載體之前，采用適宜的消毒劑對其進行消毒，表面活性劑或濕潤劑可包括在此組化合物中，以利于這種活性化合物的均勻分布。
本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素制劑，在制備成制劑時可選擇性的加入適合的藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA二鈉、氯化鈉、氯化鉀、右旋糖苷、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、明膠、聚乙基吡咯烷酮、甘油、吐溫、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。
本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素制劑在使用時根據(jù)制劑的劑型、規(guī)格以及病人的情況確定用法用量，根據(jù)藥物劑可以采取口服、肌肉注射、靜脈注射等不同途徑。
本發(fā)明提供的門冬氨酸阿奇霉素粉針劑的制備方法，是在上述門冬氨酸阿奇霉素中加入是門冬氨酸阿奇霉素4-6倍注射用水溶解后，加入活性炭，攪拌15-30分鐘后，去掉活性炭，用0.22um微孔濾膜過濾，至溶液澄明，進行凍干得到門冬氨酸阿奇霉素粉針劑。
體外藥效試驗證明，本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素粉針劑對臨床上多種常見致病菌有抗菌作用，如金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌，綠濃假單胞菌，表皮葡萄球菌、β-溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、肺炎克雷伯菌和枸櫞酸桿菌等，臨床上主要用于阿奇霉素敏感致病菌株所引起的下列感染1.鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染；支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染；中耳炎；2.泌尿道感染如急性腎盂腎炎、慢性腎盂腎炎急性發(fā)作、膀胱炎、前列腺炎等；3.沙眼衣原體所致單純性生殖器感染；非多重耐藥淋球菌所致的單純性生殖器感染；4.外科切口、創(chuàng)面、皮膚、粘膜及軟組織感染。
本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素片劑是用于治療阿奇霉素敏感菌引起感染的口服用藥，該制劑主要由下述重量份的原料組成門冬氨酸阿奇霉素170-680重量份淀粉60-240重量份十二烷基硫酸鈉 4-16重量份羧甲基淀粉鈉5-20重量份硬脂酸鎂3.5-14重量份滑石粉 5-20重量份。
本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素片劑優(yōu)選主要由下述重量份的原料組成門冬氨酸阿奇霉素340重量份淀粉120重量份十二烷基硫酸鈉 8重量份羧甲基淀粉鈉10重量份硬脂酸鎂7重量份滑石粉 10重量份。
該門冬氨酸阿奇霉素片劑按照如下方法制備1)將上述量的門冬氨酸阿奇霉素、淀粉、十二烷基硫酸鈉、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、滑石粉，分別過80目篩；2)將步驟1)得到的門冬氨酸阿奇霉素、淀粉、十二烷基硫酸鈉加入7.5％聚乙烯吡咯烷酮的65％乙醇溶液制成軟材，用18目篩制成濕粒，40-60℃熱風(fēng)干燥，干粒加入上述量的硬脂酸鎂、羧甲基淀粉鈉、滑石粉混勻，16目篩整粒，混勻，得到片劑。
本發(fā)明的門冬氨酸阿奇霉素片劑適用于對門冬氨酸阿奇霉素敏感菌引起感染，為患者提供了另外一種用藥方式的選擇；門冬氨酸阿奇霉素片還具有容易儲存、便于攜帶等優(yōu)點。


圖1為靜脈注射門冬氨酸阿奇霉素粉針劑的小鼠死亡曲線具體實施方式
下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。
實施例1、門冬氨酸阿奇霉素的制備1)精制將阿奇霉素加入是阿奇霉素四倍質(zhì)量的乙醇中，再加入是阿奇霉素質(zhì)量3％的白陶土，攪拌30分鐘、過濾，得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素5倍質(zhì)量的蒸餾水中，可見白色固體析出。將白色固體濾出，加入是阿奇霉素四倍質(zhì)量的乙醇中，溶解，然后加入阿奇霉素質(zhì)量的0.3％的針用活性炭，過濾，得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素五倍質(zhì)量的蒸餾水中，可見白色固體析出，將白色固體濾出真空干燥，得到阿奇霉素精品。
2)合成在裝有攪拌器、溫度計的反應(yīng)缻中加入5Kg步驟1)得到的阿奇霉素精品(6.6mol)溶于42L注射用水中，在激烈攪拌條件下分批加入門冬氨酸1.8Kg(0.136mol)，調(diào)節(jié)pH值至6.0，維持室溫攪拌4-6小時，待固體溶解、反應(yīng)液澄明后，加入300g的針用活性炭，攪拌15-30分鐘，過濾，得到的濾液繼續(xù)加入300g的針用活性炭攪拌30分鐘，過濾，得到門冬氨酸阿奇霉素溶液。將該溶液用0.22μm濾膜的進行超濾，待濾液澄明，進行門冬氨酸阿奇霉素溶液測量測定，采用效價法對門冬氨酸阿奇霉素溶液進行測定，測定表明本品每1mg的效價皆＞670阿奇霉素(C38H72N2O12)單位，測定可信限率＜5％。將超濾液灌裝于托盤中，置凍干箱中凍干，然后出箱，裝筒、加塞，軋蓋，包裝。該門冬氨酸阿奇霉素化學(xué)名稱為(2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R)-13-[(2，6-二脫氧-3-C-甲基-3-O-甲基-(-L-核-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3，4，10-三羥基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脫氧-3-(二甲氨基)-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧雜-6-氮雜環(huán)十五烷-15酮門冬氨酸鹽；分子式C38H72N2O12(C4H7O4N)2；分子量1015.19。
實施例2、凍干粉針劑的制備將170g(以門冬氨酸阿奇霉素計)實施例1制備的門冬氨酸阿奇霉素，加入1000ml注射用水攪拌溶解后，加入是門冬氨酸阿奇霉素質(zhì)量0.3％的針用活性炭，攪拌30分鐘后，脫炭，用0.22um微孔濾膜過濾，至溶液澄明，以效價法測定門冬氨酸阿奇霉素溶液含量，結(jié)果表明本品每1mg的效價皆＞670阿奇霉素(C38H72N2O12)單位后，檢驗合格后，分成1000份，分別無菌灌裝于西林瓶中，半壓塞，置入冷凍干燥機，按照設(shè)計的凍干曲線(對其凍干曲線的制定首先是確定其共晶點，將制品的預(yù)凍溫度控制在共晶點以下15℃-20℃，保持一定真空度的情況下，第一階段升華溫度控制在共晶點以上5℃-10℃，保溫，第二階段升華視真空度而定)進行凍干，具體凍干方法為預(yù)凍使制品溫度降至-40℃以下并保持1小時，在-45℃以下對冷阱制冷，然后抽真空至10Pa以下，保持1小時后加熱，加熱溫度保持在-11℃，8小時，二階段升華分次進行，每次6小時，制品溫度在31℃，當真空度在3Pa以下時關(guān)機，壓塞，出箱，壓蓋，軋蓋，燈檢，包裝。
效價法測定門冬氨酸阿奇霉素溶液含量，結(jié)果表明本品每1mg的效價皆＞670阿奇霉素(C38H72N2O12)單位實施例3、凍干粉針劑的制備將340g(以門冬氨酸阿奇霉素計)實施例1制備的門冬氨酸阿奇霉素，加入注射用水至2000ml，攪拌溶解后，加入是門冬氨酸阿奇霉素質(zhì)量0.3％針用活性炭，攪拌30分鐘后，脫炭，用0.22um微孔濾膜過濾，至溶液澄明，以效價法測定門冬氨酸阿奇霉素溶液含量，測定要求本品每1mg的效價皆＞670阿奇霉素(C38H72N2O12)單位，檢驗合格后無菌灌裝于西林瓶中，半壓塞，置入冷凍干燥機，按照設(shè)計的凍干曲線(對其凍干曲線的制定首先是確定其共晶點，將制品的預(yù)凍溫度控制在共晶點以下15℃-20℃，保持一定真空度的情況下，第一階段升華溫度控制在共晶點以上5℃-10℃，保溫，第二階段升華視真空度而定)進行凍干，具體凍干方法為預(yù)凍使制品溫度降至-40℃以下并保持1小時，在-45℃以下對冷阱制冷，然后抽真空至10Pa以下，保持1小時后加熱，加熱溫度保持在-11℃，8小時，二階段升華分次進行，每次6小時，制品溫度在31℃，當真空度在3Pa以下時關(guān)機，壓塞，出箱，壓蓋，軋蓋，燈檢，包裝。
經(jīng)過效價法測定門冬氨酸阿奇霉素溶液含量，結(jié)果表明上述得到的凍干粉針劑每1mg的效價皆＞670阿奇霉素(C38H72N2O12)單位。
實施例4、凍干粉針劑的制備將680g(以門冬氨酸阿奇霉素計)實施例1制備的門冬氨酸阿奇霉素，加入注射用水至4000ml，攪拌溶解后，加入是門冬氨酸阿奇霉素質(zhì)量0.3％的針用活性炭，攪拌30分鐘后，脫炭，用0.22um微孔濾膜過濾，至溶液澄明，以效價法測定門冬氨酸阿奇霉素溶液含量，測定要求本品每1mg的效價皆＞670阿奇霉素(C38H72N2O12)單位，檢驗合格后無菌灌裝于西林瓶中，半壓塞，置入冷凍干燥機，按照設(shè)計的凍干曲線(對其凍干曲線的制定首先是確定其共晶點，將制品的預(yù)凍溫度控制在共晶點以下15℃-20℃，保持一定真空度的情況下，第一階段升華溫度控制在共晶點以上5℃-10℃，保溫，第二階段升華視真空度而定)進行凍干，具體凍干方法為預(yù)凍使制品溫度降至-40℃以下并保持1小時，在-45℃以下對冷阱制冷，然后抽真空至10Pa以下，保持1小時后加熱，加熱溫度保持在-11℃，8小時，二階段升華分次進行，每次6小時，制品溫度在31℃，當真空度在3Pa以下時關(guān)機，壓塞，出箱，壓蓋，軋蓋，燈檢，包裝。
以效價法測定門冬氨酸阿奇霉素溶液含量，測定結(jié)果表明，上述得到凍干粉針劑的每1mg的效價皆＞670阿奇霉素(C38H72N2O12)單位。
實施例5、門冬氨酸阿奇霉素注射液的制備將340g(以門冬氨酸阿奇霉素計)實施例1制備的門冬氨酸阿奇霉素溶于2500ml注射用水后，加入活性炭脫色，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至5-7，脫炭，過濾，濾液過0.22um微孔濾膜，加注射用水到2000ml，灌裝成1000支，滅菌，貼標，包裝即得。
以效價法測定門冬氨酸阿奇霉素溶液含量，測定結(jié)果表明，上述得到門冬氨酸阿奇霉素注射液的每1mg的效價皆＞670阿奇霉素(C38H72N2O12)單位。
實施例6、門冬氨酸阿奇霉素片劑的制備將實施例1制備的門冬氨酸阿奇霉素、淀粉、十二烷基硫酸鈉、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、滑石粉分別過80目篩(必要時粉碎)，裝袋備用。稱取340g門冬氨酸阿奇霉素、120g淀粉、8g十二烷基硫酸鈉充分混勻，攪拌3分鐘，加入黏合劑(7.5％聚乙烯吡咯烷酮(65％乙醇))制成適宜軟材，用18目篩制成濕粒，40-60℃熱風(fēng)干燥，制成干粒，再加入7g硬脂酸鎂、10g羧甲基淀粉鈉、10g滑石粉混勻，16目篩整粒，混勻后，分為1000份壓成長圓型異型片。
實施例7、門冬氨酸阿奇霉素及其制劑的藥效學(xué)實驗1、體內(nèi)抗菌實驗藥物實施例2制備的注射用門冬氨酸阿奇霉素粉針劑。注射用乳糖酸紅霉素每mg相當于606μ，由上海四藥股份有限公司生產(chǎn)，批號050505-5。保護劑高活性干酵母，市售商品，廣東省東莞糖廠酵母分廠生產(chǎn)，批號05-2。
動物昆明種小鼠，由江蘇省藥物研究所實驗動物室提供，合格證號蘇動質(zhì)字05007菌株金黃色葡萄球菌，肺炎球菌，由江蘇省人民醫(yī)院檢驗科臨床分離鑒定后提供。
培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，按培養(yǎng)基方法配制。
將金黃色葡萄球菌、肺炎球菌在實驗前一天定量接種于2ml營養(yǎng)肉湯中，37℃孵育6h，取0.1ml轉(zhuǎn)種于10ml營養(yǎng)肉湯中，37℃孵育18h，為實驗用原菌液。預(yù)實驗實驗用原菌液用5％干酵母(5g干酵母/100ml水)稀釋，經(jīng)腹腔注射感染小鼠，測出所試菌株的100％最小致死量(100％MLD)。
將實驗用小鼠雌雄各半，體重18-22g，隨機分成22組，每組10只。其中11組小鼠每只用金黃色葡萄球菌腹腔感染，另外11組小鼠每只用肺炎球菌腹腔感染，每只鼠注射菌量為1MLD/0.5ml，每組10只小鼠感染后即刻靜脈注射給藥0.5ml/20g體重，其中5組注射實施例2制備的門冬氨酸阿奇霉素粉針劑，5組注射乳糖酸紅霉素作為陽性對照，1組作為空白對照，只注射注射用水，各組的注射劑量如表1、表2所示。連續(xù)觀察7天動物反應(yīng)，記錄給藥后小鼠死亡數(shù)。采用Bliss法于IBM計算機上用POMS軟件程序計算門冬氨酸阿奇霉素粉針及陽性對照藥乳糖酸紅霉素對金黃色葡萄球菌、肺炎球菌感染小鼠的體內(nèi)抗菌作用半數(shù)有效量ED50及95％可信限。門冬氨酸阿奇霉素粉針對金黃色葡萄球菌感染小鼠的體內(nèi)保護實驗結(jié)果如表1所示，表明靜脈注射門冬氨酸阿奇霉素粉針對金葡球菌感染小鼠的體內(nèi)抗菌作用的ED50值為35.31mg/kg，低于靜脈注射乳糖酸紅霉素的ED50值70.60mg/kg。門冬氨酸阿奇霉素粉針對肺炎球菌感染小鼠的體內(nèi)抗菌作用如表2所示，表2結(jié)果表明靜脈注射門冬氨酸阿奇霉素粉針對肺炎球菌感染小鼠的體內(nèi)抗菌作用的ED50為9.59mg/kg，低于靜脈注射乳糖酸紅霉素的ED50為48.23mg/kg。表明靜脈注射門冬氨酸阿奇霉素粉針對金黃色葡球菌、肺炎球菌感染小鼠的體內(nèi)抗菌作用強于乳糖酸紅霉素。
表1 注射用門冬氨酸阿奇霉素粉針對金黃色葡球菌感染小鼠的體內(nèi)保護實驗


表2 門冬氨酸阿奇霉素粉針靜脈注射對肺炎球菌感染小鼠的體內(nèi)保護實驗

2、門冬氨酸阿奇霉素粉針劑體外抗菌藥效實驗受試藥物實施例2制備的注射用門冬氨酸阿奇霉素粉針劑對照藥物注射用乳糖酸紅霉素，購自上海四藥股份有限公司；批號050505-5；含量606μ/mg。
菌株藥敏質(zhì)控標準株金黃色葡萄球菌(ATCC，29213)，大腸埃希菌(ATCC，25922)和綠濃假單胞菌(ATCC，27853)；表皮葡萄球菌、β-溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、肺炎克雷伯菌和枸櫞酸桿菌全部分離自臨床標本，并嚴格按文獻(中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司，全國臨床檢驗操作規(guī)程，第一版，南京東南大學(xué)出版社，1990399；Murry PR，etal.Manual of Clinical Microbiology.6thed.WashingtonD C.American Society for Microbiology，1995246)規(guī)定進行了種屬鑒定。
菌株菌液的制備以接種環(huán)在血平皿上挑取4-5個具有相同形態(tài)的待檢菌菌落種入MH肉湯中，35℃培養(yǎng)至輕度混濁(約2-5h)，以滅菌生理鹽水調(diào)節(jié)其濁度，使<p>實施例4犬干擾素α組合物2及其粉針劑和水針劑的制備組合物2每1mL溶液包含以下成分

其制備方法類似于實施例3。
實施例5犬干擾素α組合物3及其粉針劑和水針劑的制備組合物3每1mL溶液包含以下成分

其制備方法類似于實施例3。
實施例6犬干擾素α組合物4及其粉針劑和水針劑的制備組合物4每1mL溶液包含以下成分

其制備方法類似于實施例3。
實施例7犬干擾素α組合物5及其粉針劑和水針劑的制備組合物5
表6 實驗條件對藥物MIC(mg/L)值的影響

3、注射用門冬氨酸阿奇霉素的急性試驗藥品供靜脈注射用液將實施例2制備的注射用門冬氨酸阿奇霉素溶于滅菌生理鹽水中。供口服用液將實施例2制備的注射用門冬氨酸阿奇霉素粉針劑或?qū)嵤├?制備的門冬氨酸阿奇霉素溶于蒸餾水中，配制成實驗所需濃度。
動物昆明種小鼠，由江蘇省藥物研究所實驗動物室提供，合格證號蘇動環(huán)字05012，蘇動質(zhì)字05007。
將小鼠分為兩組，靜脈注射(iv)組和口服(p.o)組靜脈注射(iv)組預(yù)試驗表明實施例2制備的注射用門冬氨酸阿奇霉素粉針劑100％估計致死量為500mg/kg體重，0％估計致死量為150mg/kg體重，而且在靜脈推注緩慢下進行。據(jù)此，取健康小鼠50只，雌雄各半，體重18-22g，隨機分成5組，每組10只。組間劑量等比級1∶0.80，劑量范圍為163.8-400mg/kg體重，iv量為等容積，0.5ml/20g，按體重一次靜脈注射給藥，45s推注完畢。給藥后觀察7天內(nèi)的動物癥狀和死亡情況。
口服(p.o)組預(yù)試驗表明實施例2制備的注射用門冬氨酸阿奇霉素粉針劑5g/kg劑量口服給藥，未見動物死亡。據(jù)此，取健康小鼠40只，雌雄各半，體重18-22g，隨機分成注射用實施例2制備的門冬氨酸阿奇霉素粉針組和實施例1制備的門冬氨酸阿奇霉素兩組。試驗前禁食6h，給以水自飲。P.o量為0.5ml/20g，按體重一次灌胃給藥。給藥后觀察7天內(nèi)動物癥狀和死亡情況。同時測定實施例2制備的注射用門冬氨酸阿奇霉素粉針劑的口服LD50值，并與實施例1制備的門冬氨酸阿奇霉素進行比較。采用Bliss法于IBM計算機上用POMS軟件程序計算LD50及95％可信限。
小鼠靜脈注射實施例2制備的門冬氨酸阿奇霉素粉針劑后，大部分中毒小鼠在45s靜脈注射完畢后呼吸急促、蹬腿、掙扎而亡。部分中毒小鼠匍伏在地，呼吸急促，輕敲鼠盒仍有知覺，中毒死亡時間在10分鐘內(nèi)，死亡前也是蹬腿、掙扎而亡。呼吸停止后立即解剖，各臟器無異常表現(xiàn)。毒性死亡時間在30分鐘之內(nèi)。存活7天的小鼠解剖亦未見明顯異常。小鼠口服5g/kg實施例2制備的門冬氨酸阿奇霉素粉針劑和實施例1制備的門冬氨酸阿奇霉素后，小鼠活動自如，未見異常表現(xiàn)。在給藥1h后，少數(shù)小鼠活動減少，似睡狀，輕敲鼠盒有知覺，7天內(nèi)未見動物死亡。存活7天的小鼠解剖亦未見明顯異常。
靜脈注射門冬氨酸阿奇霉素粉針7天后的小鼠急性毒性動物死亡情況及LD50和95％可信限如表7所示，死亡曲線如圖1所示；口服門冬氨酸阿奇霉素粉針劑或門冬氨酸阿奇霉素7天后的小鼠急性毒性動物死亡情況及LD50和95％可信限如表8所示。表明，門冬氨酸阿奇霉素粉針的靜脈注射LD50為274.59mg/kg，95％可信限為244.97-307.80mg/kg；門冬氨酸阿奇霉素粉針劑和門冬氨酸阿奇霉素口服LD50均大于5g/kg。
表7 靜脈注射門冬氨酸阿奇霉素粉針劑的急性LD50的實驗結(jié)果

表8 口服門冬氨酸阿奇霉素粉針劑的急性LD50的實驗結(jié)果

權(quán)利要求
1.一種門冬氨酸阿奇霉素，其化學(xué)名稱為(2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R)-13-[(2，6-二脫氧-3-C-甲基-3-O-甲基-(-L-核-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3，4，10-三羥基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脫氧-3-(二甲氨基)-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧雜-6-氮雜環(huán)十五烷-15酮門冬氨酸鹽；其分子式為C38H72N2O12(C4H7O4N2)2。
2.權(quán)利要求1所述的門冬氨酸阿奇霉素的制備方法，包括以下步驟1)將阿奇霉素溶于是阿奇霉素4-9倍質(zhì)量的注射用水中，在攪拌下加入是阿奇霉素0.30-0.40倍質(zhì)量的門冬氨酸，調(diào)節(jié)pH值至5.5-6.5，室溫攪拌4-6小時待固體溶解、反應(yīng)液澄明后，加活性炭脫色；2)過濾后，濾液經(jīng)0.18-0.25um濾膜過濾，濾液凍干后即得門冬氨酸阿奇霉素。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述步驟1)中，阿奇霉素溶于是阿奇霉素8.4倍質(zhì)量的注射用水中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，在攪拌下加入是阿奇霉素0.36倍質(zhì)量的門冬氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于所述阿奇霉素為阿奇霉素精品；所述阿奇霉素精品按照以下步驟制備1)將阿奇霉素加入是阿奇霉素3-5倍質(zhì)量的乙醇中，再加入是是阿奇霉素質(zhì)量2-3％的白陶土，攪拌30-40分鐘，過濾；2)將步驟1)得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素5-6倍質(zhì)量水中，將析出的白色固體濾出，加入是阿奇霉素四倍質(zhì)量的乙醇中，溶解，然后加入是阿奇霉素質(zhì)量的0.3-0.5％的針用活性炭，過濾，得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素3-5倍質(zhì)量水中，將析出的白色固體濾出干燥，得到阿奇霉素精品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述阿奇霉素精品按照以下步驟制備1)將阿奇霉素加入是阿奇霉素四倍質(zhì)量的乙醇中，再加入是阿奇霉素3％的白陶土，攪拌30分鐘，過濾；2)將步驟1)得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素五倍質(zhì)量蒸餾水中，將析出的白色固體濾出，加入是阿奇霉素四倍質(zhì)量的乙醇中，溶解，然后加入是阿奇霉素質(zhì)量的0.3％的針用活性炭，過濾，得到的濾液慢慢滴入是阿奇霉素五倍質(zhì)量的蒸餾水中，將析出的白色固體濾出真空干燥，得到阿奇霉素精品。
6.權(quán)利要求1所述的門冬氨酸阿奇霉素的制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制劑，其特征在于所述門冬氨酸阿奇霉素的制劑為門冬氨酸阿奇霉素針劑、粉針劑或片劑。
8.權(quán)利要求7所述的門冬氨酸阿奇霉素粉針劑的制備方法，是在權(quán)利要求1所述的門冬氨酸阿奇霉素中加入是門冬氨酸阿奇霉素4-6倍質(zhì)量的注射用水溶解后，加入活性炭，攪拌15-30分鐘后，去掉活性炭，用0.22um微孔濾膜過濾，至溶液澄明，進行凍干得到門冬氨酸阿奇霉素粉針劑。
9.權(quán)利要求7所述的門冬氨酸阿奇霉素片劑，主要由下述重量份的原料組成門冬氨酸阿奇霉素170-680重量份淀粉60-240重量份十二烷基硫酸鈉 4-16重量份羧甲基淀粉鈉5-20重量份硬脂酸鎂3.5-14重量份滑石粉 5-20重量份。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的片劑，其特征在于所述門冬氨酸阿奇霉素片劑主要由下述重量份的原料組成門冬氨酸阿奇霉素340重量份淀粉120重量份十二烷基硫酸鈉 8重量份羧甲基淀粉鈉10重量份硬脂酸鎂7重量份滑石粉 10重量份；其中，所述片劑是按照如下方法制備1)將上述量的門冬氨酸阿奇霉素、淀粉、十二烷基硫酸鈉、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、滑石粉，分別過80目篩；2)將步驟1)得到的門冬氨酸阿奇霉素、淀粉、十二烷基硫酸鈉加入7.5％聚乙烯吡咯烷酮的65％乙醇溶液制成軟材，用18目篩制成濕粒，40-60℃熱風(fēng)干燥，干粒加入上述量的硬脂酸鎂、羧甲基淀粉鈉、滑石粉混勻，16目篩整粒，混勻得到片劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種門冬氨酸阿奇霉素及其制劑。該門冬氨酸阿奇霉素，其化學(xué)名稱為(2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R)－13－[(2，6－二脫氧－3－C－甲基－3－O－甲基－(－L－核－己吡喃糖基)氧]－2－乙基－3，4，10－三羥基－3，5，6，8，10，12，14－七甲基－11－[[3，4，6－三脫氧－3－(二甲氨基)－β－D－木－己吡喃糖基]氧]－1－氧雜－6－氮雜環(huán)十五烷－15酮門冬氨酸鹽；其分子式為C
文檔編號A61P31/04GK1861623SQ200610083980
公開日2006年11月15日 申請日期2006年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月16日
發(fā)明者高凱, 周慶柱 申請人:海南斯達制藥有限公司