專(zhuān)利名稱(chēng)：用作逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶及dna聚合酶抑制劑的抗病毒藥的核苷類(lèi)似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及核苷類(lèi)似物，這些化合物作為包括乙型肝炎病毒(HBV)的逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶及DNA聚合酶抑制劑的抗病毒素。本發(fā)明提供了具有良好藥效參數(shù)的新型化合物、其制備方法、含這些化合物的藥物組合物以及用它們抑制包括HBV和HIV的病毒和瘤的方法。
背景技術(shù)：
國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO88/00050描述了一系列3′-氟核苷，包括化合物2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(FLG)和3′-氟胸苷(FLT)的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒和抗-HBV的活性。作為抗-HIV劑，對(duì)后一化合物進(jìn)行了臨床鑒定，盡管其抗病毒活性和藥物動(dòng)力學(xué)良好，但它顯示了意想不到的毒性(Flexner等，J Inf Dis 170(6)1394-403(1994))。前一化合物FLG在體外具有良好的活性，但是本發(fā)明人已經(jīng)檢測(cè)到其生物可利用率非常低，約4％，致使該化合物在活體內(nèi)的用途至今仍限于腹膜內(nèi)或皮下用藥的動(dòng)物模型中。
美國(guó)專(zhuān)利4,963,662公開(kāi)了一系列3′-氟核苷類(lèi)及相應(yīng)的三磷酸鹽化合物，并具體描述了FLT的5′-O-棕櫚酰衍生物，但沒(méi)有報(bào)導(dǎo)生物可利用率的任何改進(jìn)。國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO 93 13778描述了在基質(zhì)的6位上改性的FLG衍生物，特別是用正丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)丙基氨基、哌啶基或吡咯烷基改性。國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)93 14103描述了在鳥(niǎo)嘌呤6位上的氧被氨基、醚、鹵素或磺酸酯取代的FLG衍生物。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明一方面提供了式I所示的化合物
其中R1選自羥基、氨基或羧基；任選在其上酯化/酰胺化的飽和或不飽和的C4-C22的、任選取代的脂肪酸或醇，或脂族L-氨基酸；R2為脂族L-氨基酸的殘基；L1為三官能連接基團(tuán)；L2為不存在或雙官能連接基團(tuán)；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明還提供了含有式I化合物或其鹽的藥物組合物及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明另一方面提供了抑制HBV和逆轉(zhuǎn)錄病毒如HIV的方法，包括將式I化合物或鹽與逆轉(zhuǎn)錄病毒或HBV接觸，例如將有效量的化合物或鹽注入受逆轉(zhuǎn)錄病毒或HBV感染的人中。本發(fā)明也提供了式I化合物或鹽的用途，例如用于制備治療逆轉(zhuǎn)錄病毒或HBV感染的藥物。
在治療由逆轉(zhuǎn)錄病毒如HIV或HBV引起的病癥中，式I化合物或鹽優(yōu)選每天以50～1500毫克的量一次、兩次或三次給藥，優(yōu)選每天二到三次以100～700毫克的量給藥。希望活性代謝物的血清濃度達(dá)到0.01～100微克/毫升的，優(yōu)選0.1～5微克/毫升。
當(dāng)R1為脂肪酸殘基，優(yōu)選總共具有偶數(shù)個(gè)碳原子，有利的是癸酰(C10)、月桂酰(C12)、肉豆蔻酰(C14)、棕櫚酰(C16)、硬脂酰(C18)、二十烷酰(C20)或山崳酰(C22)。脂肪酸優(yōu)選總共具有10～22個(gè)碳原子，更優(yōu)選16～20個(gè)碳原子，特別是18個(gè)碳原子。脂肪酸可以為不飽和并具有一個(gè)至三個(gè)雙鍵，特別是一個(gè)雙鍵。不飽和脂肪酸優(yōu)選屬于n-3或n-6系列。常用的不飽和R1基團(tuán)包括衍生自一元不飽和羧酸肉豆蔻腦酸、肉豆蔻反油酸(myristelaidic)、棕櫚油酸、棕櫚反油酸(palmiteladic)、n6-十八碳烯酸、油酸、反油酸、gandoic、芥酸、巴西烯酸或衍生自多元不飽和脂肪酸如亞油酸、γ-亞麻酸、花生四烯酸和α-亞麻酸。但是，當(dāng)這些化合物要具有更強(qiáng)的穩(wěn)定性和適用期時(shí)，作為脂肪酸的R1優(yōu)選為飽和的。
作為脂肪醇的R1殘基優(yōu)選對(duì)應(yīng)于上述脂肪酸。脂肪醇也可含有短鏈醇，如甲醇、乙醇或丙醇的殘基。
R1為飽和或不飽和脂肪酸或醇時(shí)，可任選被至多五個(gè)相同或不同的取代基取代，取代基分別選自羥基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷基酰基、氨基、鹵素、氰基、疊氮基、氧代、巰基和硝基等。
適于R2和R1(如果存在R1的話(huà))的脂族氨基酸包括L-丙氨酸、L-亮氨酸、L-異亮氨酸，最優(yōu)選L-纈氨酸。為便于合成，優(yōu)選R2和R1均為脂族氨基酸殘基，優(yōu)選為相同的殘基。
第一個(gè)連接基團(tuán)L1所表述的三官能是指連接基團(tuán)具有至少三個(gè)官能團(tuán)，包括至少兩個(gè)衍生自相應(yīng)的羥基、氨基或羧基。其中氨基和羥基官能團(tuán)是用于與R1和R2的羧基官能團(tuán)酯化/酰胺化；連接基團(tuán)中的羧基官能團(tuán)是用于與R2中游離的α-氨基，或視情況而定與R1中游離的α-氨基酰胺化；或R1為脂肪醇時(shí)，與R1發(fā)生酯化。當(dāng)R1本身定義為羥基、氨基或羧基時(shí)，其中羥基為三者中最適宜的，這時(shí)三官能連接基上某個(gè)官能團(tuán)就是該羥基、氨基或羧基。
三官能連接基還含有第三個(gè)官能團(tuán)，該官能團(tuán)與下面將詳述的任選的第二個(gè)連接基團(tuán)L2相連或母體核苷的5′位上的羥基相連，如2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷。合適的第三個(gè)官能團(tuán)取決于任選的連接基團(tuán)L2(如果存在的話(huà))上相連官能團(tuán)的性質(zhì)，且可包括氨基、羥基、羰基、磺?；?、磷?；?、膦?；?、氨基甲?；?。如果沒(méi)有L2，第一個(gè)連接基團(tuán)L1上的第三個(gè)官能團(tuán)一般含有可與核苷類(lèi)似物的5′-O基團(tuán)酯化的羧基。
與R1和R2相連的三官能連接基上的官能團(tuán)優(yōu)選為羥基官能團(tuán)，并且該連接是與R1脂肪酸(如果是的話(huà))和R2的羧基官能團(tuán)的酯連接。進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案是連接基上有一個(gè)游離的羥基作為R1，以及一個(gè)與R2的羧基酯化的羥基官能團(tuán)。另一個(gè)實(shí)施方案是連接基上含有一個(gè)(任選被保護(hù))的羧基R1，以及一個(gè)與R2的羧基酯化的羥基官能團(tuán)。
有用的三官能L1基團(tuán)，特別是能直接與核苷酯化的基團(tuán)，包括式IIa或IIb所示的連接基 其中，A和A′定義為在連接基上的羥基與R1或R2的羧基之間不同的酯連接，或?yàn)樵谶B接基上的羧基與脂肪醇R1的羥基之間的酯連接，或?yàn)樵谶B接基上的氨基和在R1或R2的羧基之間的酰胺連接，或?yàn)樵谶B接基的羧基與R1或R2的氨基之間的酰胺連接，或當(dāng)R1本身為游離的羥基、氨基或羧基時(shí)，A和A′之一如上定義，另一為羥基、氨基或羧基，Rx為H或C1-C3烷基，T為鍵、-O-或-NH-；Alk為不存在、C1-C4烷基或C2-C4鏈烯基，任選如上所述是被取代的；以及m和n獨(dú)立地為0、1或2。
在本發(fā)明該方面的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1或R2基團(tuán)分別與式IIa最左邊的不同的功能性羥基酯化(通過(guò)A和A′)，同時(shí)右邊的羰基部分任選通過(guò)第二個(gè)連接基團(tuán)L2，與核苷的5′-O-基酯化。
L1基團(tuán)也可含有式IIb所示的連接基 其中Ar為飽和或不飽和，優(yōu)選5或6個(gè)環(huán)原子的單碳環(huán)或雜環(huán)；A、A′、T、Alk、m和n如上定義。
式IIb中，Ar優(yōu)選為芳基，如吡啶或特別為苯基，作為芳基部分其中帶R1和R2的臂，相對(duì)于連接基的剩余部分分別為對(duì)和鄰、間和鄰、都為鄰、或優(yōu)選對(duì)和間、均為對(duì)或均為間位。
式IIa和IIb中，下列m、n和Alk的組合是有利的mnAlk10亞甲基101，2-亞乙基11不存在11亞甲基111，2-亞乙基111，2-亞丙基12不存在12亞甲基111，2-亞乙基111，2-亞丙基由于R1和R2具有不同的結(jié)構(gòu)，很明顯許多L1基團(tuán)，特別是式IIa的基團(tuán)，將定義為手性結(jié)構(gòu)。因此本發(fā)明包括所有的對(duì)映體，如消旋體或＞80％對(duì)映純，優(yōu)選＞95％對(duì)映純的化合物制劑。
特別優(yōu)選的三官能連接基含有式IIc所示的甘油衍生物 其中，A為氫、脂族L-氨基酸酯的?；鶜埢?、或脂肪酸酯的酰基殘基，A′為脂族氨基酸殘基的?；鶜埢?，D為飽和或不飽和C2-C6二元羧酸殘基。式IIc所示的三官能連接在活體內(nèi)水解或分解以釋放性能不變的化合物如甘油、L-氨基酸、脂肪酸(如果是的話(huà))和二元羧酸，每一種通常均在身體安全地新陳代謝和/或排泄。A和A′優(yōu)選均為脂族氨基酸殘基，最優(yōu)選為相同的殘基，特別是L-纈氨酸或L-異亮氨酸的殘基。
當(dāng)式IIc衍生物的二元羧酸部分直接與核苷的5′羥基官能團(tuán)(或等同物)酯化時(shí)，可解析地將甘油部分定義為三官能連接L1，二元羧酸部分定義為二官能連接L2。
特別優(yōu)選的二元羧酸殘基包括從草酸、丙二酸、丙醇二酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、富馬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、戊二酸、戊烯二酸、檸康酸、衣康酸、亞乙基丙二酸、中康酸、己二酸、烯丙基丙二酸、亞丙基丙二酸、氫化粘康酸、焦辛可酸和粘康酸等衍生的。二元羧酸殘基可任選被取代，例如被上述關(guān)于脂肪酸R1所列的取代基取代。羥基取代基可進(jìn)一步與另一個(gè)L-氨基酸或脂肪酸殘基酯化。
一些上述二元羧酸本身可定義為三官能連接基。例如，羥基取代的二元羧酸如酒石酸或馬來(lái)酸提供了在本發(fā)明范圍內(nèi)的許多構(gòu)型。以酒石酸為例，羧基官能團(tuán)可與核苷的5′-羥基官能團(tuán)酯化(任選通過(guò)雙官能連接基L2)。羥基官能團(tuán)可與R2和R1脂肪酸或氨基酸上不同的羧基進(jìn)行酯化，同時(shí)剩余的羧基可為游離或任選被保護(hù)，例如用常用的藥學(xué)上可接受的酯如甲酯或乙酯進(jìn)行保護(hù)?？蛇x的游離羧酸官能團(tuán)的保護(hù)是與R1脂肪醇形成的酯，該酯含有一個(gè)或兩個(gè)與R2酯化的羥基官能團(tuán) 上述酒石酸系列中有利的連接基通常如式IIe所述 以及其中R1和R2互換的異構(gòu)體，其中R1和R2如上所示，p、q和r分別為0～5，優(yōu)選0或1，且Ry是游離酸，R1酯或常用的藥學(xué)上可接受的羧基保護(hù)基，如甲酯、芐酯或特別是乙酯。
馬來(lái)酸系列的有利的連接具有式IIf 其中，Ry、p、q和R2如上定義，優(yōu)選p和q為零。
本發(fā)明該方面優(yōu)選的化合物包括5′-O-[3-甲氧基羰基-2-纈氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[3-芐氧基羰基-2-纈氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[3-甲氧基羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[3-芐氧基羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[4-甲氧基羰基-2，3-二纈氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[4-芐氧基羰基-2，3-二纈氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[4-甲氧基羰基-2，3-二異亮氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[4-芐氧基羰基-2，3-二異亮氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，特別優(yōu)選衍生自L-馬來(lái)酸和L-酒石酸的化合物；以及相應(yīng)地能在末端羧基官能團(tuán)上構(gòu)成常用的藥學(xué)上可接受的酯的衍生物。
特別有利的化合物包括5′-O-[3-乙氧基羰基-2-纈氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[3-乙氧基羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，5′-O-[4-乙氧基羰基-2，3-二纈氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，
5′-O-[4-乙氧基羰基-2，3-二異亮氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，特別是衍生自L-馬來(lái)酸和L-酒石酸的異構(gòu)體。
在本發(fā)明另一相關(guān)方面中，R1和R2的一個(gè)可被刪除。
本發(fā)明該方面典型的化合物包括式Ia 其中Alk為任選取代的C1-C4烷基或C2-C4鏈烯基，R2為上述R1和R2定義的脂族L-氨基酸的酯殘基或脂肪酸的酯殘基。本發(fā)明該方面中的連接基可從α-羥基ω-羧酸如碳酸、乙醇酸、羥丙酸、羥丁酸、羥戊酸或羥己酸方便地制備。
式Ia的典型化合物包括2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[3-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-戊酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[6-(L-纈氨酰氧基)-己酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[3-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-異亮氨酰氧基)-戊酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[6-(L-異亮氨酰氧基)-己酰]鳥(niǎo)苷，及其藥學(xué)上可接受的鹽。
特別有利的式Ia化合物包括2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丁酰]鳥(niǎo)苷，和2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[4-(L-異亮氨酰氧基)-丁酰]鳥(niǎo)苷，及其藥學(xué)上可接受的鹽。在活體內(nèi)這些化合物中R2基團(tuán)水解及脫除，遺留下活性端基，該端基能環(huán)化并促進(jìn)母體核苷的有效釋放。
在本發(fā)明涉及的一方面中，脂肪酸殘基R1本身能用作連接基，將R2的脂族L-氨基酸殘基相連在脂肪酸烷基鏈的氨基、羥基或羧基上進(jìn)行酯化/酰胺化，例如在β碳上。在該實(shí)施方案中，R1脂肪酸直接與核苷的5′-羥基(或等同物)酯化，通常此核苷具有已經(jīng)酯化/酰胺化的R2基團(tuán)。官能化的脂肪酸(羧基/羥基/氨基官能團(tuán)被適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù))也可首先酯化到核苷上，然后在與R2偶聯(lián)前脫保護(hù)。根據(jù)該方面優(yōu)選的實(shí)施方案中的連接基具有式IId所示結(jié)構(gòu) 其中R2為脂族L-氨基酸殘基，p為0，1或2-20(任選包括雙鍵)，q為0-5，優(yōu)選為0。典型的化合物包括2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-丁酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-己酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-辛酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-癸酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-十二烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-十四烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-十六烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-十八烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-二十烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-二十二烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-丁酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-己酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-辛酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-癸酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-十二烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-十四烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-十六烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-十八烷酰]鳥(niǎo)苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-二十烷酰]鳥(niǎo)苷，
2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-二十二烷酰]鳥(niǎo)苷，以及相應(yīng)的n-3和n-6一元不飽和類(lèi)似物，如6或9-十八烯?；苌?。
在式IId中，p和q優(yōu)選為0，因此定義為乳酸衍生物，優(yōu)選L-乳酸衍生物，如2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]鳥(niǎo)苷；和2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]鳥(niǎo)苷及其藥學(xué)上可接受的鹽，其分解產(chǎn)物，乳酸和氨基酸均為生理上可很好接受的。
在第二連接基團(tuán)L2所表述的雙官能是指具有兩個(gè)官能團(tuán)的連接基，使得其在第一個(gè)連接基團(tuán)L1和核苷的5′-O-基團(tuán)之間作為間隔區(qū)或橋。例如任選的基團(tuán)L2可含有式IIIa所示的連接基 其中R4和R4′為氫或C1-C4烷基。式IIIa中，R4優(yōu)選氫、甲基、乙基或異丙基，R4′為氫。由于多種核苷類(lèi)，如FLG母體化合物在其抑制病毒聚合酶之前，必須首先通過(guò)細(xì)胞酶磷?；?，式IIIa的連接基是有利的。本發(fā)明化合物的初級(jí)或其后的水解可在活體內(nèi)釋放出一元磷?；塑?，其能迅速轉(zhuǎn)化為二和三磷酸鹽。
任選的雙官能連接基團(tuán)L2也可含有式IIIb所示的結(jié)構(gòu) 其中R4和R4′分別為H或C1-C4烷基。
雙官能連接基的另一個(gè)基團(tuán)具有式IIIc所示的結(jié)構(gòu)
如上所述，優(yōu)選的雙官能連接的基團(tuán)含有α，ω-二羧酸C2-C6烷基衍生物，如琥珀酸，它們是任選取代的(例如用上述為脂肪酸R1定義的取代基)和/或?yàn)槿芜x一元或多元不飽和，如n-3或n-6一元不飽和的。此類(lèi)優(yōu)選的基團(tuán)如上所述。
盡管上述公開(kāi)的內(nèi)容集中在與二元羧酸L2基團(tuán)相連的甘油L1基團(tuán)，不難理解，大量的三官能連接基適用于和二羧酸L2基團(tuán)一起，例如上述沒(méi)有最右端羰基的式IIa和IIb所示的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明還包括含有常用的FLG前藥的R1(R2)L1L2-衍生物的雙重前藥，該常用的前藥可在活體內(nèi)釋放FLG，如在FLG鳥(niǎo)苷基質(zhì)的2和6位上的前藥衍生物。這種常用的FLG前藥的例子包括式IV所示的化合物 其中R1、R2、L1和L2如上定義；和R3為H、N3、NH2或OH或其藥學(xué)上可接受的醚或酯；和R3′為芳鍵或氫。
R3中有可能的藥學(xué)上可接受的酯包括上述R1相關(guān)的脂肪酸，如硬脂酰酯或油酰酯等或更短的酯，如乙酰酯或丁酰酯。其它有可能的酯包括R2的氨基酸衍生物或磷酸酯，如一磷酸酯。酯也可包括相應(yīng)的脂肪酸或烷基芳基碳酸酯、氨基甲酸酯或磺酸酯。
R3中合適的藥學(xué)上可接受的醚包括C1-C6烷基、環(huán)烷基、C6-C12烷基芳基如芐基或甲基吡啶基，任何這些醚可被上述R1所述的取代基取代。有利的醚包括在上述WO93 13778中提及的醚，如正丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)丙基氨基、哌啶子基或吡咯烷基等。
本發(fā)明主要參照一羥基化核苷FLG來(lái)描述，但是，很顯然相應(yīng)的衍生物可從其它一羥基化核苷類(lèi)似物制備，特別是該羥基對(duì)應(yīng)于核苷的5′羥基官能團(tuán)的情形。因此本發(fā)明的另一方面提供了式Ic化合物 其中，R1、R2、L1和L2如上定義，-O-nuc為帶D-或L-核苷類(lèi)似物的一羥基的殘基。根據(jù)本發(fā)明這方面典型的核苷類(lèi)包括無(wú)環(huán)核苷類(lèi)似物如無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，和環(huán)核苷類(lèi)似物如ddI(2′，3′-雙脫氧肌苷)、ddC(2′，3′-雙脫氧胞苷)、d4T(2′，3′-雙脫氧胸苷)、FTC、拉米夫定，2′-脫氧-3′-硫代胞苷(-)對(duì)映體(3TC)、1592U89(4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇)、AZT(疊氮胸苷)、DAPD(D-2，6-二氨基嘌呤二氧戊環(huán))、F-ddA等，每一種均是核苷領(lǐng)域已知的。大量的一羥基L-核苷類(lèi)正處于發(fā)展中，本發(fā)明也發(fā)現(xiàn)了這些化合物的用途。本發(fā)明這方面的化合物將具有母體化合物所顯示的相應(yīng)用途，例如皰疹病毒感染對(duì)應(yīng)于無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷衍生物，HIV對(duì)應(yīng)于ddI、雙脫氧胸苷、ddC、拉米夫定、AZT&1592U89，HBV對(duì)應(yīng)于拉米夫定、FTC等。
有利的式Ic子群含有式Ic′所示的一羥基核苷類(lèi)的衍生物
其中A、A′、Alk和O-nuc如上定義。上述式Ic′描述了A和A′在甘油部分的1和3位上，且L2在甘油的2位的化合物?？赡艿漠悩?gòu)體為A和A′分別在甘油1和2位上或2和3位上，L2分別為3或2位上。
本發(fā)明這方面典型的化合物包括4′-O-[3-((2，3-二-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷(acyclovir)，4′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[3-((1-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，5′-O-[3-((2，3-二-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定，5′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定，5′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定，5′-O-[3-((2，3-二-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]DAPD，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]DAPD，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]DAPD，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]DAPD，5′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]DAPD，5′-O-[3-((1羥基-3-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]DAPD，5′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]DAPD，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]DAPD，5′-O-[3-((2，3-二-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]雙脫氧胸苷，4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇相應(yīng)的衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明這方面化合物的子集也可含有式Id所示的化合物
其中R2和Alk如式Ia中所定義的，O-nuc如上定義。
式Id典型的化合物包括4′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-戊酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[6-(L-纈氨酰氧基)-己酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[4-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[5-(L-異亮氨酰氧基)-戊酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[6-(L-異亮氨酰氧基)-己酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]ddI，5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-戊酰]ddI，5′-O-[6-(L-纈氨酰氧基)-己酰]ddI，5′-O-[4-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]ddI，5′-O-[5-(L-異亮氨酰氧基)-戊酰]ddI，5′-O-[6-(L-異亮氨酰氧基)-己酰]ddI，5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-戊酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[6-(L-纈氨酰氧基)-己酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[4-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[5-(L-異亮氨酰氧基)-戊酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[6-(L-異亮氨酰氧基)-己酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]DAPD，5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-戊酰]DAPD，5′-O-[6-(L-纈氨酰氧基)-己酰]DAPD，5′-O-[4-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]DAPD，5′-O-[5-(L-異亮氨酰氧基)-戊酰]DAPD，5′-O-[6-(L-異亮氨酰氧基)-己酰]DAPD，5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]拉米夫定，
5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-戊酰]拉米夫定，5′-O-[6-(L-纈氨酰氧基)-己酰]拉米夫定，5′-O-[4-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]拉米夫定，5′-O-[5-(L-異亮氨酰氧基)-戊酰]拉米夫定，5′-O-[6-(L-異亮氨酰氧基)-己酰]拉米夫定，以及4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇相應(yīng)的衍生物。
式Id特別優(yōu)選的化合物包括4′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丁酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)核，4′-O-[3-(L-異亮氨酰氧基)-丁酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)核，5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丁酰]ddI，5′-O-[3-(L-異亮氨酰氧基)-丁酰]ddI，5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丁酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-(L-異亮氨酰氧基)-丁酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丁酰]DAPD，5′-O-[3-(L-異亮氨酰氧基)-丁酰]DAPD，5′-O-[4-(L-纈氨酰氧基)-丁酰]拉米夫定，5′-O-[3-(L-異亮氨酰氧基)-丁酰]拉米夫定，以及4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇相應(yīng)的衍生物，及其藥學(xué)上可接受的鹽。
這些化合物中R2基團(tuán)在活體內(nèi)水解并脫除后，遺留下的活性端基可環(huán)化并促進(jìn)母體核苷的有效釋放。
同樣本發(fā)明提供式If所示的化合物 其中R1、R2、Ry、p、q、r和o-nuc如上定義。
本發(fā)明這方面有利的化合物包括
5′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨酰氧基-丙酰]-ddI，5′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酰]-ddI，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨酰氧基-丁酰]-ddI，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨酰氧基-丁酰]-ddI，4′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨酰氧基-丙酰]-無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酰]-無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨酰氧基-丁酰]-無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨酰氧基-丁酰]-無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，5′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨酰氧基-丙酰]-DAPD，5′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酰]-DAPD，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨酰氧基-丁酰]-DAPD，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨酰氧基-丁酰]-DAPD，5′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨酰氧基-丙酰]-雙脫氧胸苷，5′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酰]-雙脫氧胸苷，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨酰氧基-丁酰]-雙脫氧胸苷，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨酰氧基-丁酰]-雙脫氧胸苷，5′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨酰氧基-丙酰]-拉米夫定，5′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酰]-拉米夫定，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨酰氧基-丁酰]-拉米夫定，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨酰氧基-丁酰]-拉米夫定，以及4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇相應(yīng)的蘋(píng)果酸和酒石酸衍生物，及其藥學(xué)上可接受的鹽；在每種情況下，衍生自L-酒石酸和L-蘋(píng)果酸的異構(gòu)體是優(yōu)選的。
本發(fā)明提供了式Ig所示的化合物 其中R2、p、q和O-nuc如上定義。
優(yōu)選的式Ig化合物包括
4′-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，4′-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷，5′-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]ddI，5′-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]ddI，5′-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]雙脫氧胸苷，5′-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]拉米夫定，5′-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]拉米夫定，5′-O-[2-(L-纈氨酰氧基)-丙酰]DAPD，5′-O-[2-(L-異亮氨酰氧基)-丙酰]DAPD，以及4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇相應(yīng)的衍生物，及其藥學(xué)上可接受的鹽。這些化合物分解產(chǎn)物，乳酸和氨基酸，均為生理上可良好接受的。
本發(fā)明的化合物可形成鹽，從而構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。合適的式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括有機(jī)酸鹽，特別是羧酸鹽，包括但不限于乙酸鹽、三氟乙酸鹽、乳酸鹽、葡萄糖酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、泛酸鹽、羥乙基磺酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、門(mén)冬酸鹽、苯甲酸鹽、丁酸鹽、二葡萄糖酸鹽、環(huán)戊酸鹽、葡萄庚糖酸鹽、磷酸甘油鹽、草酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、延胡索酸鹽、煙酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、乳糖酸鹽、pivolate、樟腦酸鹽、十一烷酸鹽和琥珀酸鹽，有機(jī)磺酸鹽如甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)氯苯磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽；以及無(wú)機(jī)酸鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、半硫酸鹽、硫氰酸鹽、過(guò)硫酸鹽、磷酸鹽和磺酸鹽。有時(shí)，式I化合物可以水合物分離。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“N保護(hù)基團(tuán)”或“N保護(hù)”是指那些用來(lái)保護(hù)氨基酸或肽的N-末端，或是在合成過(guò)程中，保護(hù)氨基不發(fā)生不希望的反應(yīng)的基團(tuán)。常用的N保護(hù)基團(tuán)公開(kāi)在Greene，“有機(jī)合成中的保護(hù)基”(John Wiley & Sons，紐約，1981)，在此引作參考。N保護(hù)基團(tuán)包括酰基如甲?；⒁阴；⒈；?、新戊?；?、叔丁基乙?；?、2-氯乙?；?、2-溴乙?；?、三氟乙?；⑷纫阴；⑧彵蕉柞；⑧徬趸窖趸阴；?、α-氯丁酰基、苯甲?；?、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲?；龋换酋；绫交酋；?、對(duì)甲苯磺?；?，形成氨基甲酸酯的基團(tuán)如芐氧基羰基、對(duì)氯苯氧基羰基、對(duì)甲氧基芐氧基羰基、對(duì)硝基芐氧基羰基、2-硝基芐氧基羰基、對(duì)溴芐氧基羰基、3，4-二甲氧基芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基芐氧基羰基、3，4，5-三甲氧基芐氧基羰基、1-(對(duì)聯(lián)苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基芐氧基羰基、二苯甲基氧基羰基、叔丁氧基羰基、二異丙基甲氧基羰基、異丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基、環(huán)戊氧基羰基、金剛烷氧基羰基、環(huán)己氧基羰基、苯基硫羰基等；烷基如芐基、三苯基甲基、芐氧基甲基等；以及甲硅烷基如三甲基甲硅烷基等。較好的N保護(hù)基團(tuán)包括甲?；⒁阴；?、烯丙基、F-moc、苯甲?；⑿挛祯；?、叔丁基乙?；?、苯磺?；?、芐基、叔丁氧基羰基(BOC)和芐氧基羰基(Cbz)。
在Green上述文獻(xiàn)中也廣泛論述了羥基和/或羧基保護(hù)基，包括醚如甲基醚，取代甲醚基如甲氧基甲醚、甲硫基甲醚、芐氧基甲醚、叔丁氧基甲醚、2-甲氧基乙氧基甲醚等，硅醚如三甲基硅醚(TMS)、叔丁基二甲基硅醚(TBDMS)、三芐基硅醚、三苯基硅醚、叔丁基二苯基硅醚、三異丙基硅醚等，取代乙基醚如1-乙氧基甲乙醚、1-甲基-1-甲氧基乙醚、叔丁基乙醚、烯丙基乙醚、芐乙醚、對(duì)甲氧基苯甲基乙醚、二苯基甲乙醚、三苯基甲乙醚等，芳烷基如三苯甲基和pixyl(9-羥基-9-苯基呫噸衍生物，特別是氯化物)。酯羥基保護(hù)基包括甲酸酯、甲酸芐酯、氯乙酸酯、甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、新戊酸酯、金剛烷羧酸酯、酮酸酯、苯甲酸酯等。碳酸酯羥基保護(hù)基包括甲基酯、乙烯基酯、烯丙基酯、肉桂基酯、芐基酯等。
為了與逆轉(zhuǎn)錄病毒和HBV抑制劑的常規(guī)用法保持一致，同時(shí)服用一至三種或更多的抗病毒素是有利的，如在HIV情況下服用AZT、ddI、ddC、d4T、3TC、H2G、膦甲酸、ritonavir、indinavir、沙硅那韋、奈韋拉平、delaviridine、Vertex VA478或Agouron AG1343等，或在HBV情況下服用拉米夫定、干擾素、泛昔洛韋等。這些額外的抗病毒素將以大致能反映它們各自的治療價(jià)值的劑量給藥。相對(duì)于式I化合物或鹽，摩爾比通常為100∶1～1∶100，特別是25∶1～1∶25較為有利。對(duì)于治療皰疹感染的抗病毒核苷類(lèi)，同時(shí)使用其它抗病毒素并不常見(jiàn)。
盡管活性劑可以單獨(dú)給藥，優(yōu)選作為藥物制劑中的組分。這種制劑包括上述定義的活性劑以及一種或多種可接受的載體/賦形劑，以及任選的其它治療成分。載體必須與制劑中其它成分相容并對(duì)受體無(wú)害。
制劑包括那些適于直腸、鼻、局部(包括口和舌下)、鞘或腸胃外(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)和表皮內(nèi))給藥的制劑，但優(yōu)選口服制劑。制劑通常以單位劑量形式存在，如片劑和緩釋膠囊，并可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域任何已知的方法制備。
這些方法包括將上述定義的活性劑與載體結(jié)合，通常制備制劑的方法是，首先均勻緊密地將活性劑與液態(tài)載體或細(xì)碎的固態(tài)載體或兩者結(jié)合，然后，如果需要的話(huà)，定型產(chǎn)物。本發(fā)明提供了制備藥學(xué)組合物的方法，包括將式I化合物或其藥學(xué)可接受的鹽與藥學(xué)可接受的載體或賦形劑結(jié)合或混合。如果制劑的制造涉及鹽式活性組分與藥物賦形劑的密切混合，則常優(yōu)選使用非堿性賦形劑，即酸性或中性賦形劑。
本發(fā)明中的口服制劑可以離散的單元存在，如膠囊、扁囊劑或片劑，每一種均含有預(yù)定量的活性劑；可以粉劑或顆粒劑存在；可以活性劑在水或非水液體中的溶液或懸浮液形式存在；或以水包油乳液或油包水乳液及丸劑等形式存在。
對(duì)于口服組合物(如片劑和膠囊)，合適的術(shù)語(yǔ)“載體”包括載體如普通的賦形劑，如粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉鹽、羥丙基甲基纖維素、蔗糖和淀粉；填料和載體，如玉米淀粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露糖醇、磷酸二鈣、氯化鈉和藻酸；以及潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸鈉和其它硬脂酸金屬鹽，硬脂酸甘油酯、硬脂酸、聚硅氧烷流體、滑石、石蠟、油和膠態(tài)硅石，調(diào)味劑如薄荷、冬青油、櫻桃調(diào)味劑等也可采用。需要的話(huà)，或加入一種使制劑易于辨認(rèn)的著色劑。片劑也可通過(guò)本領(lǐng)域已知方法包衣。
片劑可以通過(guò)壓制或模塑法制備，任選帶有一種或多種輔助組份。壓片可通過(guò)在合適的機(jī)器中，壓制以任意流動(dòng)形式(如粉末或粒狀)存在的活化劑來(lái)制備，任選與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合。塑片可通過(guò)在合適的機(jī)器中，將惰性液體稀釋劑潤(rùn)化的粉狀混合物成型來(lái)制備。片劑可任選被包衣或標(biāo)記，且配成后能達(dá)到緩慢釋放或受控釋放活性劑。
其它適用口服的制劑包括含有在調(diào)味基質(zhì)中的活性劑的錠劑，調(diào)味基質(zhì)通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠；含有在惰性基質(zhì)中的活化劑的軟錠劑，惰性基質(zhì)如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠，以及含有在合適液體載體中的活性劑的漱口藥。
本發(fā)明另一方面提供了一種制備式I或Ic化合物的方法，該方法包括核苷的?；颂帪榉肿邮絍所示的FLG，一般在5′羥基 其中，R1(R2)L1X代表活化酸，如式IIa或IIb所示的羧酸衍生物，其中R1、R2和L1如上定義或其被保護(hù)的衍生物。另外，活化酸也可包括式R1(R2)甘油-D-X的化合物，其中R1，R2和D如式IIc定義，或者在制備Ia化合物的情況下，活化酸包括活化的Rz-O-Alk-C(＝O)X衍生物。在后者中，連接基可通過(guò)下述方法依次構(gòu)建首先將適度保護(hù)的D或ω-羥基羧酸酯化至核苷上，將末端羧基或羥基脫保護(hù)，然后酯化其上適度保護(hù)的甘油或Rz部分。
?；磻?yīng)中所用的活化衍生物含有例如酰鹵、酸酐、活化酸酯或以偶聯(lián)劑存在的酸，例如二環(huán)己基碳化二亞胺。典型的活化酸衍生物包括酰鹵，烷氧基羰基鹵化物衍生的酐，如異丁氧基羰基氯化物等，N-羥基琥珀酰胺衍生的酯，N-羥基酞酰亞胺衍生的酯，N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二酰亞胺衍生的酯，2，4，5-三氯苯酚衍生的酯等?；罨徇€可包括分子式為RX的化合物，其中X代表OR′部分，其中R如R2所定義，R′為例如COCH3、COCH2CH3或COCF3，或者X為苯并三唑。
當(dāng)本發(fā)明用于其它一元羥基化核苷類(lèi)時(shí)，可應(yīng)用相應(yīng)的方法，即活化衍生物相應(yīng)地酯化至一元羥基核苷類(lèi)的游離5′羥基上(或等同物)，一元羥基核苷類(lèi)如無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷、ddI、FTC、拉米夫定、1592U89、DAPD、F-ddA等。
上述方法中所用的中間體本身定義了新的化合物，特別是那些式IIc′所示的化合物 其中A、A′和Alk如上定義(A和A′優(yōu)選用常用的保護(hù)基保護(hù))，X代表游離酸或上述活化酸。
式IIc′的典型化合物包括丙二酸2，3-二-(L-纈氨酰氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-纈氨酰氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-Boc-L-纈氨酰氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(L-異亮氨酰氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-CBZ-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-Boc-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(L-纈氨酰氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-纈氨酰氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-Boc-L-纈氨酰氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(L-異亮氨酰氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-Boc-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(L-纈氨酰氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-纈氨酰氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-Boc-L-纈氨酰氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(L-異亮氨酰氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-CBZ-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-Boc-L-異亮氨酰氧基)-丙基酯及其相應(yīng)的酰鹵，特別是酰氯、酸酐和上述各化合物的二酯，例如丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-丙基酯，4-甲氧基芐酯丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-丙基酯，1，1-二甲基乙酯，中間體優(yōu)選的基團(tuán)還含有式IIa′基團(tuán) 其中Rx、Alk、m、n和T如上所述，A和A′代表與連接基上羥基酯化的L′-脂族氨基酸(如果需要，保護(hù)N)的酰基殘基，或者A和A′之一為酰基殘基，另一為游離羥基，X代表上述的游離酸或活化酸，A和A′優(yōu)選為相同的氨基酸殘基。
其它新的中間體包括式Ia所示化合物的游離或活化酸前體，如3-N-Boc-L-纈氨酰氧基丙酸、3-N-Fmoc-L-纈氨酰氧基丙酸、3-N-CBZ-L-纈氨酰氧基丙酸、3-N-Boc-L-異亮氨酰氧基丙酸、3-N-Fmoc-L-異亮氨酰氧基丙酸、3-N-CBZ-L-異亮氨酰氧基丙酸、4-N-Boc-L-纈氨酰氧基丁酸、3-N-Fmoc-L-纈氨酰氧基丁酸、4-N-CBZ-L-纈氨酰氧基丁酸、4-N-Boc-L-異亮氨酰氧基丁酸、3-N-Fmoc-L-異亮氨酰氧基丁酸、3-N-CBZ-L-異亮氨酰氧基丁酸等，以及活化衍生物，如酰鹵。
新的中間體還包括上述式IIe和IIf所示化合物的前體，特別是那些從“天然”構(gòu)型(如L-蘋(píng)果酸和L-酒石酸)衍生的化合物，例如
3-乙氧基羰基-2-纈氨酰氧基-丙酸3-乙氧基羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酸4-乙氧基羰基-2，3-二-纈氨酰氧基-丁酸4-乙氧基羰基-2，3-二-異亮氨酰氧基-丁酸3-芐氧基羰基-2-纈氨酰氧基-丙酸3-芐氧基羰基-2-異亮氨酰氧基-丙酸4-芐氧基羰基-2，3-二-纈氨酰氧基-丁酸4-芐氧基羰基-2，3-二-異亮氨酰氧基-丁酸等；和相應(yīng)的活化衍生物，如酸酐。
新的中間體還包括對(duì)應(yīng)于式IId所示結(jié)構(gòu)的前體，如2-(L-纈氨酰氧基)丙酸、2-(N-Boc-L-纈氨酰氧基)丙酸、2-(N-Fmoc-L-纈氨酰氧基)丙酸、2-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)丙酸、2-(L-異亮氨酰氧基)丙酸、2-(N-Boc-L-異亮氨酰氧基)丙酸、2-(N-Fmoc-L-異亮氨酰氧基)丙酸、N-(CBZ-L-異亮氨酰氧基)丙酸、2-(L-纈氨酰氧基)丁酸、2-(N-Boc-L-纈氨酰氧基)丁酸、2-(N-Fmoc-L-纈氨酰氧基)丁酸、2-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)丁酸、2-(L-異亮氨酰氧基)丁酸、2-(N-Boc-L-異亮氨酰氧基)丁酸、2-(N-Fmoc-L-異亮氨酰氧基)丁酸、N-(CBZ-L-異亮氨酰氧基)丁酸等；及其活化衍生物，如酰鹵。
3′氟核苷如式V化合物的制備方法已經(jīng)由Herdiwijn等在《核苷和核苷酸》8(1)，65-96(1989)詳細(xì)論述，該文獻(xiàn)在此引作參考。其它一元羥基核苷如無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷、ddI(2′，3′-雙脫氧肌苷)、ddC(2′，3′-雙脫氧胞苷)、d4T(2′3′-雙脫氧胸苷)、FTC、拉米夫定(3TC)、1592U89(4-[2-氨基-6-(環(huán)丙氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇)、AZT(疊氮胸苷)、DAPD(D-2，6-二氨基嘌呤二氧戊環(huán))、F-ddA等是已知的，并在該文獻(xiàn)中詳細(xì)論述。
R1(R2)L1L2X基團(tuán)的活性衍生物可以預(yù)先制備或通過(guò)用試劑如二環(huán)己基碳化二亞胺(DDDC)或O-(1H-苯并三唑-1-基)N，N，N′，N′四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)在原位生成。當(dāng)使用酰鹵，如酰氯時(shí)，叔胺催化劑，如三乙胺、N，N′-二甲基苯胺、吡啶或二甲氨基吡啶可加到反應(yīng)混合物中，與釋放出的氫鹵酸結(jié)合。
反應(yīng)優(yōu)選在非反應(yīng)性溶劑如N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二烷、乙腈或鹵代烴如二氯甲烷中進(jìn)行，如果需要的話(huà)，上述提及的任何一種叔胺催化劑均可作為溶劑，只需注意保持適當(dāng)?shù)倪^(guò)量。反應(yīng)溫度一般在0～60℃內(nèi)變化，但優(yōu)選保持在5～50℃。1～60小時(shí)后，反應(yīng)通?；旧贤瓿桑缓笥帽由V(TLC)和合適的溶劑體系跟蹤反應(yīng)過(guò)程，通常當(dāng)用TLC確定反應(yīng)完成時(shí)，用有機(jī)溶劑萃取產(chǎn)物并用色譜純化和/或用合適的溶劑體系重結(jié)晶。
核苷基質(zhì)上發(fā)生酰化反應(yīng)所產(chǎn)生的副產(chǎn)物可用色譜法分離，但是這種錯(cuò)位的酰化作用可通過(guò)控制反應(yīng)條件而使之最小。例如通過(guò)控制試劑濃度或加料速率，特別是?；瘎?；通過(guò)降低溫度或通過(guò)選擇溶劑可達(dá)到控制條件。用TLC跟蹤反應(yīng)以監(jiān)測(cè)控制條件。用常用的保護(hù)基保護(hù)基質(zhì)上的6-氧基，特別是2-氨基，可以防止錯(cuò)位的酰化作用。
R3為氫時(shí)，式IV所示的化合物可按下述方法制備用一種活化基如鹵素將式I所示相應(yīng)的鳥(niǎo)嘌呤化合物在6位活化(其中R2氨基酸殘基中裸露的氨基官能團(tuán)任選用常用的N保護(hù)基團(tuán)保護(hù))。得到的活化6-嘌呤隨后還原為嘌呤，例如用鈀催化劑，然后脫去保護(hù)得到所需的式IV或式V化合物。
R3為R1或其它的酯的化合物可通過(guò)相應(yīng)的式I或式IV羥基化合物的酯化(類(lèi)似于上述的酯化反應(yīng))來(lái)制備，任選在R2和/或R3氨基酸殘基中裸露的氨基官能團(tuán)被N保護(hù)之后。R3為醚時(shí)的化合物可通過(guò)類(lèi)似于上述WO9313778公開(kāi)的方法制備，同樣任選裸露氨基的N保護(hù)。當(dāng)R3為疊氮化物時(shí)，如WO9709052所述的方法制備。
式IId所示的中間體可使用適當(dāng)活化的及N保護(hù)的R2衍生物，如N-CBZ纈氨酰基或異亮氨酰基衍生物結(jié)合常用偶聯(lián)劑如DMAP/DCC；或者使用氨基酸酰氯，將羧基一保護(hù)的羥基鏈烷酸酰化，一般是2-羥基-1-鏈烷酸來(lái)制備。然后除去羧基保護(hù)基，例如通過(guò)酸解。得到的中間體按上述方法活化，或者游離酸和偶聯(lián)劑一起在常用的酯化條件下酯化核苷。
式Ia化合物通?？捎们耙欢嗡龅姆椒ㄖ苽?，即羧基保護(hù)的α-羥基、ω-羧酸如乙醇酸、乳酸、羥基丁酸等和合適的N保護(hù)的R2衍生物酯化。也可用游離酸和偶聯(lián)劑一起或活化的酸，如相應(yīng)的酰鹵。除去羧基保護(hù)基，將得到的中間體用上述方法和核苷進(jìn)行酯化。
含有式IIe或IIf結(jié)構(gòu)的化合物可通過(guò)一般的羧基保護(hù)基團(tuán)如苯甲?；?，對(duì)不同的二元羧酸，如L-酒石酸或L-蘋(píng)果酸，的末端羧基進(jìn)行羧基保護(hù)來(lái)制備。然后游離的羥基用普通的酯化技術(shù)來(lái)酯化，如在DMF中DMAP & DCC，用適當(dāng)?shù)腘保護(hù)的R2氨基酸，如N-Boc-L-纈氨酰或N-Boc-L-異亮氨酰酯化。除去苯甲酰基羧基保護(hù)基，并用常規(guī)的方法，如實(shí)施例中的方法，將得到的產(chǎn)物與一羥基核苷的5′-羥基官能團(tuán)酯化。最后，游離的羧基官能團(tuán)與R1基團(tuán)酯化，或更優(yōu)選酯化為常用的藥學(xué)上可接受的酯-如乙酯。
含有磷?；糠諭II的化合物可通過(guò)2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)嘌呤-5-一磷酸鹽與式VIa化合物反應(yīng)制備， 其中Ha為鹵素，如氯、碘或溴，條件類(lèi)似于那些在US 4 337 201、US5227 506、WO 94/13682 & WO94/13324，Starret等在J Med Chem 371857-1864(1994)和Iyer等在Tetrahedron Lett 307141-7144(1989)所描述的條件，這些文獻(xiàn)在此引作參考。一磷酸鹽可通過(guò)常用的FLG的磷酸化作用制備，例如，在Herdwyn等上述文獻(xiàn)所述的。相應(yīng)的技術(shù)將用于其它一元羥基核苷的一磷酸鹽。
另一種得到磷酸酯的酯化反應(yīng)也可分兩個(gè)步驟進(jìn)行，包括第一步在FLG-一磷酸酯與式VII化合物之間的反應(yīng) 其中R4和R4′如上定義，PG為如上所述的常規(guī)羧基保護(hù)基，然后脫保護(hù)并與第三個(gè)，最右端官能團(tuán)為羥基的連接基L1酯化。這種連接基團(tuán)的兩個(gè)例子如下線路圖1(每系列中倒數(shù)第二個(gè)化合物)所述。在該實(shí)施方案中，式Va最左邊的羰基與式IIa連接的連接基的羰基相同。
含有任選連接基L2的化合物也可通過(guò)兩步法制備。特別是式ClC(＝O)OC(R4)(R4′)Cl的化合物可與FLG的5′羥基(任選在基質(zhì)上用常用保護(hù)基保護(hù))發(fā)生反應(yīng)，這在頭孢菌素領(lǐng)域是已知的。得到的FLG-5′-O-C(＝O)OC(R4)(R4′)鹽酸鹽隨后與R1以及帶三官能團(tuán)連接基的R2進(jìn)行反應(yīng)，其中第三個(gè)官能團(tuán)含有羧基官能團(tuán)，如鉀鹽。
應(yīng)當(dāng)理解，式IIa的三官能L1基團(tuán)，其中n和m為1，Alk為不存在時(shí)，可如下線路圖1所示，參見(jiàn)硬脂酰/L-纈氨?；慕M合，徑區(qū)域選擇性酯化反應(yīng)從甘油制備。簡(jiǎn)而言之，R1和R2選擇性與甘油的1和3位酯化，然后2位轉(zhuǎn)化為合適的-T-C(＝O)-基團(tuán)，該基團(tuán)隨后與氟核苷的5′位酯化，或與L2(未標(biāo)出)的協(xié)同基團(tuán)酯化。甘油衍生物的2位上的羥基也可以與在其左手端含協(xié)同羰基官能團(tuán)的L2基團(tuán)進(jìn)行酯化。
式IIa的L1基團(tuán)，其中m為1，n為0，Alk為亞甲基時(shí)，也可以通過(guò)區(qū)域選擇性地將R1和R2酯化至甘油的1和2位上而制備，如下線路圖1所示，然后3位的羥基轉(zhuǎn)化為合適的-T-C(＝O)-基團(tuán)。線路圖1中最右端的一系列的反應(yīng)顯示了R1與甘油的1位酯化以及R2與2位酯化的情況。其中R1與2位酯化，R2與1位酯化的相應(yīng)排列可通過(guò)下述方法得到首先用CBz-L-纈氨酸/DCC/DMAP/DMF處理甘油，然后在脂肪酸R1與甘油的2位酯化前，用pixyl氯化物保護(hù)3位，最后脫保護(hù)，如果需要的話(huà)，轉(zhuǎn)化3位。

盡管線路1已經(jīng)通過(guò)參考R1為硬脂酰，R2為L(zhǎng)-纈氨酰基的組合而進(jìn)行闡明，可認(rèn)為這種基本的框圖也可適用于其它氨基酸，其中可使用其它脂肪酸；或采用常規(guī)保護(hù)基團(tuán)，也適用于R2為氨基酸衍生物，R1為羥基的組合。當(dāng)T含有一個(gè)-NH-基團(tuán)時(shí)，連接基可通過(guò)類(lèi)似的區(qū)域選擇性酯化反應(yīng)進(jìn)行制備，然后將游離的羥基轉(zhuǎn)化為氨基，再還原為疊氮化物，最后與光氣反應(yīng)以生成相應(yīng)的氨基甲酰氯。
改變線路圖I可制備式IIc所示的連接基。在這種改動(dòng)中，上述光氣反應(yīng)步驟用與活化二元羧酸如琥珀酸酐進(jìn)行的反應(yīng)來(lái)代替。這樣得到甘油三酯(含(任選保護(hù)的)R1酯，保護(hù)的R2酯和二元羧酸的酯)，然后將二元羧酸上的游離羧基活化并按常用方式酯化到核苷上。式IIc所示的連接基也可在核苷原位生成，在這種改動(dòng)中，二元羧酸酯化到被適當(dāng)保護(hù)的甘油衍生物上。這種琥珀酸單酯隨后按常用的方式酯化到核苷的5′-羥基官能團(tuán)上。最終甘油部分中一個(gè)或二個(gè)保護(hù)基被L-氨基酸酯代替。另外，如果存在的話(huà)，剩余的保護(hù)基被脂肪酸酯所代替，或被除去而余下游離羥基。線路圖IA所示說(shuō)明了一個(gè)實(shí)施例，其中核苷是環(huán)鳥(niǎo)苷(虛影表示FLG)，二元羧酸為琥珀酸，R1和R2都為CBZ-保護(hù)的纈氨酰基，當(dāng)然它也可應(yīng)用到式Ic的其它變化。在每一種情況下，偶聯(lián)條件是指常規(guī)酯化條件，如偶聯(lián)劑DMAP、DCC等或把相關(guān)的羧基官能團(tuán)轉(zhuǎn)化為活性衍生物如酰氯，或者活化的琥珀酸部分中含有酸酐。
在線路圖IA的一種改動(dòng)，是將琥珀酸酐直接與核苷反應(yīng)，從而避免了第一步保護(hù)和脫保護(hù)過(guò)程。另一種方法是用N保護(hù)的氨基酸部分來(lái)區(qū)域選擇性地酯化甘油部分，一般同時(shí)將偶聯(lián)到核苷的羥基予以保護(hù)，然后將該羥基脫保護(hù)并和核苷偶聯(lián)。

m和n為1，Alk為亞烷基或亞烯基，T為單鍵時(shí)，連接基可如上線路圖II所示的方法制備。式IIa的三官能連接基團(tuán)L1中的m、n、Alk和各種官能團(tuán)的其它組合方式可用相應(yīng)的原料，通過(guò)類(lèi)似于上述的方法制備。原料如1，2，4-三羥基丁烷(CA登記號(hào)3968-00-6)、3，4-二羥基丁酸(1518-61-2&22329-74-4)、(S)-3，4-二羥基丁酸(51267-44-8)、(R)-3，4-二羥基丁酸(158800-76-1)、1，2，5-戊三醇(51064-73-4&14697-46-2)、(S)-1，2，5-戊三醇(13942-73-9)、(R)-1，2，5-戊三醇(171335-70-9)、4，5-二羥基戊酸(66679-29-6&129725-14-0)、1，3，5-戊三醇(4328-94-3)和3-(2-羥乙基)-1，5-戊二醇(53378-75-9)。每一種原料的制備方法參照各自的登記號(hào)。Ohsawa等在Chem.Pharm.Bull.41(11)1906-1909(1993)中和Terao等在Chem.Pharm.Bull.39(3)823-825(1991)中描述了用脂肪酶P控制三官能連接基的立體化學(xué)。
R2的氨基酸衍生物和R1(如果存在的話(huà))也可以通過(guò)2-氧雜-4-氮雜-環(huán)烷-1，3-二酮法酯化到連接基上，該方法在國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO94/29311中描述，該文獻(xiàn)在此引作參考。
通過(guò)常用的肽化學(xué)，將R1和/或R2的羧基官能團(tuán)連接到連接基衍生的氨基上，一般同時(shí)用常用的N保護(hù)基保護(hù)α-氨基。在連接基的羧基和R2的α-氨基之間，通過(guò)常用的肽化學(xué)形成酰胺鍵，一般同時(shí)進(jìn)行α-羧基官能團(tuán)的保護(hù)。脂肪醇R1酯化到連接基上的羧基官能團(tuán)的類(lèi)似于上述R1為脂肪酸的的酯化方法，但是酯化是反方向的。


現(xiàn)在舉例說(shuō)明本發(fā)明的各個(gè)方面，以下實(shí)施例及其附圖僅作為參考，其中圖1所示為經(jīng)過(guò)治療和未經(jīng)治療的血清病毒-DNA濃度，感染DHBV的鴨子作為時(shí)間函數(shù)，如生物實(shí)施例3所示；圖2所示為經(jīng)過(guò)治療的體重增值，感染DHBV的鴨子作為時(shí)間函數(shù)，如生物實(shí)施例3所示。
實(shí)施例12-(硬脂酰氧基甲基)-2-(N-(芴基甲氧基羰基)-L-纈氨酰氧基甲基)-丙酸向2，2-二(羥甲基)丙酸(28.16克，210毫摩爾)的水(50毫升)溶液中加入氫氧化鉀(11.78克，210毫摩爾)。5分鐘后，在真空中蒸發(fā)溶液，并用無(wú)水DMF共蒸發(fā)殘余物三次。然后將殘余物溶解在DMF(500毫升)中，向該溶液中加入苯甲酰溴(3.57毫升，30毫升)。攪拌30分鐘后，通過(guò)Celite過(guò)濾反應(yīng)混合物，倒入碳酸氫鈉水溶液中，并用二氯甲烷萃取。收集有機(jī)相，然后用碳酸氫鈉的水溶液洗滌。隨后在真空中蒸發(fā)得到2，2-二(羥甲基)丙酸芐酯(4.37克)，1H-NMR(CDCl3)7.35(s，5H)，5.20(d，2H)，3.91-3.71(m，4H)，1.10(s，3H)。
在40分鐘時(shí)間，向2，2-二(羥甲基)丙酸芐酯(4.37克，19.5毫摩爾)的吡啶(50毫升)溶液中滴加硬脂酰氯(4.13克，13.6毫摩爾)的二氯甲烷溶液。然后反應(yīng)保持16小時(shí)，并倒入碳酸氫鈉水溶液中，用二氨甲烷萃取。收集有機(jī)相并在真空中蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物2-(羥乙基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙酸芐酯(1.97克)，1H-NMR(CDCl3)7.34(s，5H)，5.17(d，2H)，4.28(dd，2H)，3.69(dd，2H)，2.24(t，2H)，1.57(m，2H)，1.25(s，28H)，1.22(s，3H)，0.87(t，3H)。
將2-(羥乙基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙酸芐酯(1.86克，3.8毫摩爾)溶解在吡啶(30毫升)中。向溶液中加入甲苯磺酸(73毫克，0.39毫摩爾)、N-芴基甲氧基羰基-L-纈氨酸(3.94克，11.6毫摩爾)和DCC(3.58克，17.4毫摩爾)。反應(yīng)在4℃保持16小時(shí)，然后通過(guò)Celite(硅藻土)過(guò)濾。將濾液倒入碳酸氫鈉水溶液中，并用二氯甲烷萃取。收集有機(jī)相并在真空中蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物2-(N-芴基-甲氧基羰基)-L-纈氨酰氧基甲基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙酸芐酯，產(chǎn)量2.38克，1H-NMR(CDCl3)7.78-7.25(m，13H)，5.29(m，1H)，5.15(d，2H)，4.38-4.23(m，7H)，2.19(t，2H)，2.10(m，1H)，1.55(m，2H)，1.24(m，31H)，0.94-0.83(m，9H)。
向THF/甲醇(16毫升/8毫升)混合溶劑中的2-(N-芴基-甲氧基羰基)-L-纈氨酰氧基甲基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙酸芐酯(1.86克，3.8毫摩爾)溶液中加入甲酸銨(376毫克，6毫摩爾)、甲酸(1.87毫升)和鈀黑(40毫克)。反應(yīng)在室溫中保持16小時(shí)，然后通過(guò)Celite過(guò)濾。蒸發(fā)后，通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量1.05克。
實(shí)施例2
1-O-硬脂酰-2-O-(N-CBz-L-纈氨酰)甘油a)制備1-O-硬脂酰甘油向溶解在DMF(300毫升)中的甘油(30克，326毫摩爾)和吡啶(25毫升)混合物中滴加溶解在DMF(100毫升)中的硬脂酰氯(10克，33毫摩爾)。混合物在冰浴上冷卻直至滴加完成。反應(yīng)在N2氣氛下保持過(guò)夜。15小時(shí)后加入CH2Cl2(300毫升)和飽和的NaHCO3(水溶液)。分相并用水(50毫升)洗滌有機(jī)相，Na2SO4干燥并在真空下蒸發(fā)溶劑和吡啶，在二氧化硅柱上進(jìn)行色譜分離(CH2Cl2-MeOH，20∶1)粗產(chǎn)物并重結(jié)晶(CH2Cl2-乙醚)，產(chǎn)量約7克。
b)制備pixyl氯化物將乙酰氯(150毫升，2.1摩爾)加入到磁力攪拌下的9-羥基-9-苯基呫噸(20克，72毫摩爾)的苯懸浮液中。得到均勻的深紅色溶液，該溶液在20℃攪拌30分鐘。在減壓下除去揮發(fā)性物質(zhì)。仔細(xì)加入乙醇，中和過(guò)量的AcCl。殘余物和甲苯(2×30毫升)及環(huán)己烷(2×30毫升)共蒸發(fā)，得到結(jié)晶殘余物，該殘余物密閉保存。也可從Aldrich買(mǎi)到Pixyl氯化物。
c)制備1-O-硬脂酰，3-O-pixyl甘油混合從上述a)得到的產(chǎn)物(2.28克)和吡啶(25毫升)，并加熱直至溶解。在冰浴中冷卻后加入從步驟b)中得到的pixyl氯化物(1.92克)。攪拌下，氬氣氣氛下在冰浴中保持混合物半小時(shí)，然后在室溫下保持1.5小時(shí)。在真空下蒸發(fā)吡啶，殘余物溶解在CH2Cl2(70毫升)中并用0.5M檸檬酸洗滌以除去剩余吡啶。用Na2SO4干燥殘余物，蒸發(fā)并色譜分離(乙醚-己烷1∶3)，得到1.25克純產(chǎn)物，TLC Rf約0.2。
d)制備1-O-硬脂酰，2-O-(N-CBz-L-纈氨酰)，3-O-pixyl甘油步驟c)的產(chǎn)物(237毫克，0.39毫摩爾)、CBz-L-纈氨酸(116毫克，0.46毫摩爾)、DCC(96毫克，0.46毫摩爾)和DMAP(4.7毫克，0.04毫摩爾)溶解在CH2Cl2(4毫升)中。在攪拌下，氮?dú)鈿夥罩谢旌衔锉３诌^(guò)夜。18小時(shí)后用玻璃過(guò)濾器過(guò)濾混合物，通過(guò)硅膠柱(乙醚-己烷1∶4)色譜分離得到產(chǎn)率為230毫克，TLC Rf為0.2。
e)制備1-O-硬脂酰-2-O(N-CBz-L-纈氨酰)甘油用實(shí)施例3描述的方法，通過(guò)選擇性脫保護(hù)除去步驟d)的產(chǎn)物中的pixyl基團(tuán)得到標(biāo)題化合物，1H-NMR(CDCl3)δ7.35(m，5H)，5.3-4.9(m，4H)，4.35-4.25(m，3H)，3.8-3.6(m，2H)，2.31-2.25(m，2H)，2.20-2.10(m，1H)，1.60(m，2H)，1.02-0.86(m，9H)。
實(shí)施例31-O-(N-CBz-L-纈氨酰)-2-O-硬脂酰甘油a)制備1-O-(N-CBz-L纈氨酰)甘油在室溫下，將CBz-L-纈氨酸(4.35克，17.3毫摩爾)、二環(huán)己基碳化二亞胺(4.29克，20.8毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(0.212克)一起加入到五倍過(guò)量的甘油中(8毫升，86.9毫摩爾)。攪拌過(guò)夜后，過(guò)濾懸浮液，在真空中從濾液中除去DMF。將殘余物溶解在CH2Cl2中，連續(xù)用飽和NaHCO3、鹽水和水洗滌，然后干燥。粗產(chǎn)物在硅膠上以4/1EtOAc-己烷作為洗脫液進(jìn)行色譜純化，產(chǎn)量為2.465克，Rf(4/1EtOAc-己烷)0.17，(20/1CH2Cl2-甲醇)0.12。
b)制備1-O-(N-CBz-L-纈氨酰)-3-O-pixyl甘油在氮?dú)庀?，將步驟a)的產(chǎn)物(0.672克，20.1毫摩爾)溶解在干的吡啶(3.5毫升)中。加入9-氯-9-苯基呫噸(如上制備的pixyl氯化物，0.65克，22.0毫摩爾，1.1當(dāng)量)，混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)。加入MeOH(1.5毫升)，將混合物在10毫升Et2O和10毫升飽和NaHCO3之間分配。水層用更多的乙醚萃取，合并有機(jī)層，干燥并用甲苯濃縮數(shù)次，得到白色固體。粗產(chǎn)物在硅膠上以3/1己烷-EtOAc作為洗脫液進(jìn)行色譜純化，得到0.681克。
pixyl基團(tuán)也可通過(guò)Gaffney等，在Tetrahedron Lett 1997，38，2539-2542描述的步驟用PxOH和乙酸載上。
c)制備1-O-(N-CBz-L-纈氨酰)-2-O-硬脂酰-3-O-pixyl甘油在冰浴，氮?dú)庵?，攪拌下向步驟b)的產(chǎn)物(0.658克，1.13毫摩爾)的11毫升吡啶溶液中滴加在1.5毫升CH2Cl2中的硬脂酰氯(496毫升，1.3當(dāng)量)。15分鐘后，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。混合物用20毫升Et2O稀釋?zhuān)⒂?0毫升飽和NaHCO3洗滌。用更多的Et2O萃取水層，合并有機(jī)層，用鹽水(20毫升)洗滌，Na2SO4干燥，并用甲苯濃縮數(shù)次、粗產(chǎn)物(1.37克)在130克硅膠上以6/1己烷-EtOAc進(jìn)行色譜純化。第一段取500毫升，隨后各取100毫升，所需的物質(zhì)在2-5段中洗脫，產(chǎn)量0.748克。
d)制備1-O-(N-CBz-L-纈氨酰)-2-O-硬脂酰甘油在室溫下，向溶解在35毫升中的CH2Cl2的步驟c)的產(chǎn)物(0.748克，872毫摩爾)的0.025M溶液中加入吡咯(16.5摩爾當(dāng)量)和二氯乙酸(5.5摩爾當(dāng)量)。5分鐘后TLC顯示反應(yīng)完成?；旌衔镉?00毫升CH2Cl2稀釋?zhuān)⒂?0毫升飽和NaHCO3洗滌。水層用更多的CH2Cl2萃取。合并有機(jī)相，用鹽水(30毫升)洗滌，Na2SO4干燥并濃縮。粗產(chǎn)物用硅膠以2/1己烷-EtOAc(含0.3％乙酸)作為洗脫液進(jìn)行色譜純化，產(chǎn)量0.363克，Rf(2/1己烷-EtOAc)0.21，1H NMR(CDCl3)δppm 0.86-0.99(m，9H)，1.25(s，28H)，1.61(m，2H)，2.16(m，1H)，2.32(m，2H)，3.74(br s，2H)，4.28-4.44(m，3H)，5.09(m，1H)，5.11(s，2H)，5.22(d，1H)，7.36(m，5H)。
實(shí)施例41-O-硬脂酰-3-O-(N-CBz-L-纈氨酰)甘油實(shí)施例2部分a)的產(chǎn)物(2.86克，7.99毫摩爾)、DCC(0.9克，4.36毫摩爾)、4-(N，N-二甲基)氨基吡啶(DMAP)(0.048克，0.39毫摩爾)和N-CBz-L-纈氨酸(1克，3.98毫摩爾)溶解在CH2Cl2(60毫升)和DMF(6毫升)中。反應(yīng)在環(huán)境溫度下放置18小時(shí)，然后過(guò)濾，在減壓下蒸發(fā)溶劑，殘余物溶解在CH2Cl2(100毫升)中并過(guò)濾。粗標(biāo)題化合物用色譜[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]純化，得到1.3克所需產(chǎn)物。未反應(yīng)的1-硬脂酰甘油可用CH2Cl2/MeOH(20∶1)洗脫回收，1H-NMR(CDCl3)δ5.25(d，1H)，5.11(s，2H)，4.30-4.05(m，6H)，2.65(d，1H)，2.35(t，2H)，2.06(m，1H)，1.62(m，2H)，1.26(s，28H)，1.00-0.84(m，9H)。
實(shí)施例5 向冰冷卻的氯甲酸1-氯乙基酯(1.89克，13.2毫摩爾)的無(wú)水CH2Cl2(5毫升)的溶液中加入在CH2Cl2(20毫升)中的實(shí)施例4化合物，然后加入無(wú)水吡啶(1.2毫升，29.6毫摩爾)。在氬氣氣氛中冷卻下攪拌反應(yīng)混合物，直至TLC(乙醚/己烷1∶2)表明原料耗盡。1.5小時(shí)后，混合物用水(3×5毫升)、飽和NaHCO3(5毫升)洗滌并干燥(Na2SO4)。用色譜[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]純化，得到標(biāo)題化合物(4.0克)，1H-NMR(CDCl3)δ7.36-7.32(m，5H)，6.40(m，1H)，5.24(m，1H)，5.11(s，2H)，4.30(m，6H)，2.32(m，2H)，2.15(m，1H)，1.82(m，3H)，1.60(m，2H)，1.25(br s，28H)，0.97(m，3H)，0.86(m，6H)。
實(shí)施例6 向?qū)嵤├?的化合物(3.4克，4.87毫摩爾)的無(wú)水乙腈(47毫升)溶液中加入碘化鈉(3.65克，24.3毫摩爾)。得到的溶液在氬氣氣氛下回流直至NMR表明原料耗盡。4.5小時(shí)后，加入乙醚(50毫升)并過(guò)濾混合物。蒸發(fā)除去溶劑，粗產(chǎn)物溶解在乙醚(50毫升)中。乙醚溶液用水(2×10毫升)洗滌并干燥(Na2SO4)，在減壓下蒸發(fā)。用色譜[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]純化，得到標(biāo)題化合物(2.15克)，1H-NMR(CDCl3)δ7.37(m，5H)，6.75(m，1H)，5.22(m，1H)，5.15(s，1H)，4.3(m，6H)，2.32(m，1H)，2.22(m，2H)，1.6(m，2H)，1.25(s，28H)，0.95(m，9H)。
實(shí)施例7 在冰浴，氬氣中，攪拌下冷卻實(shí)施例3化合物(810毫克，1.37毫摩爾)的2.2毫升無(wú)水二氯甲烷溶液。加入氯甲酸1-氯乙基酯(298微升，2.74毫摩爾)，再滴加2.5毫升二氯甲烷中的吡啶(665微升，8.22毫摩爾)。2.5小時(shí)后，混合物用25毫升二氯甲烷稀釋?zhuān)⑦B續(xù)用10毫升水和10毫升鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥并用甲苯濃縮數(shù)次得到黃色油。用閃蒸塔色譜在硅膠上以40/1二氯甲烷-二乙醚純化得到油狀標(biāo)題化合物(96毫克，定量收率)。
1H-NMR(CDCl3)δppm 0.85-0.98(m，9H)，1.25(s，28H)，1.60(m，2H)，1.83(d，3H，J＝5.8Hz)，2.17(m，1H)，2.31(t，2H)，4.19-4.48(m，5H)，5.11(s，2H)，5.22(d，1H)，5.27(m，1H)，6.38-6.43(m，1H)，7.36(m，5H)。
實(shí)施例8 在氮?dú)庀?，?shí)施例7的化合物(1.896克，2.71毫摩爾)和碘化鈉(1.80克，12.0毫摩爾)的乙腈溶液(27毫升)在80℃回流。4.5小時(shí)后，反應(yīng)混合物用100毫升1/1己烷-二乙醚稀釋?zhuān)⒂?5毫升水洗滌。水相用更多溶劑(25毫升)萃取，合并有機(jī)相，連續(xù)用5％硫代硫酸鈉水溶液(25毫升)和鹽水(25毫升)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，并在真空下濃縮。用閃蒸塔色譜在硅膠上以80/1二氯甲烷-甲醇作為洗脫液純化得到含有90％標(biāo)題化合物和10％實(shí)施例7化合物的油(1.45克)，1H-NMR(CDCl3)δppm 0.85-0.99(m，9H)，1.25(s，28H)，1.60(m，2H)，2.17(m，1H)，2.23(d，3H，J＝6Hz)，2.31(t，2H)，4.16-4.49(m，5H)，5.10(s，2H)，5.20-5.29(m，2H)，6.69-6.79(m，1H)，7.36(m，5H)。
實(shí)施例94-芐氧基-2-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-1-硬脂酰氧基丁烷a)合成二乙基-2-(2-芐氧基乙基)丙二酸酯向新制備的鈉(0.95克，41.4毫摩爾)的50毫升乙醇溶液中加入丙二酸二乙酯(6.4克，40毫摩爾)的10毫升乙醇溶液，混合物攪拌15分鐘。然后滴加入2-芐氧基-1-碘乙烷(11.5克，41.35毫摩爾)溶液。混合物回流4小時(shí)，在真空中蒸發(fā)。加入100毫升的水，混合物用50毫升的二乙醚萃取三次，有機(jī)相用硫酸鈉干燥，并在真空中蒸發(fā)，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)率8.6克，1H-NMR(CDCl3)1.26(m，6H)2.26(m，2H)3.54(m，3H)4.16(m，4H)4.57(s，2H)7.32(m，5H)。
b)合成4-芐氧基-2-羥甲基-丁醇-1。
在約15℃，向攪拌的氫化鋁鋰(3.0克，80毫摩爾)的100毫升二乙醚的懸浮液中滴加二乙基-2-(2-芐氧基乙基)丙二酸酯(8.5克，28.8毫摩爾)的20毫升二乙醚溶液?；旌衔锘亓?小時(shí)，冷卻下滴加約4毫升水，過(guò)濾混合物并用二烷洗滌。在減壓下蒸發(fā)濾液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量3.4克，1H-NMR(CDCl3)1.60(m，2H)1.82(m，1H)3.00(m，2H)3.56(t，2H)3.69(m，4H)4.50(s，2H)7.32(m，5H)。
c)合成4-芐氧基-2-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-丁醇-1向N-三苯甲基-L-纈氨酸(4.66克，13毫摩爾)和4-芐氧基-2-羥甲基-丁醇-1(3.3克，15.6毫摩爾)的50毫升二氯甲烷溶液中加入DCC(3.0克，14.5毫摩爾)和DMAP(0.18克，1.45毫摩爾)。混合物攪拌三天，混合物冷卻至5℃，過(guò)濾尿烷。溶液在減壓下蒸發(fā)，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量2.5克，1H-NMR(CDCl3)1.00(m，6H)1.55(m，4H)1.72(m，1H)2.18(m，1H)2.70(m，1H)3.27(m，2H)3.43(m，3H)4.50(s，2H)7.26(m，20H)。
d)合成4-芐氧基-2-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-1-硬脂酰氧基丁烷向4-芐氧基-2-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-丁醇-1(2.4克，4.35毫摩爾)的50毫升二氯甲烷溶液中加入吡啶(1.72克，21.7毫摩爾)。溶液冷卻至10℃，在10～15℃之間滴加硬脂酰氯(2.64克，8.7毫摩爾)的10毫升二氯甲烷溶液。在室溫下混合物攪拌過(guò)夜。加入100毫升5％碳酸氫鈉溶液，混合物攪拌30分鐘。分離有機(jī)相，用二氯甲烷萃取水相兩次。合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，并在真空中濃縮。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量3.0克，1H-NMR(CDCl3)0.98(m，9H)1.26(m，28H)1.54(m，2H)1.94(m，1H)2.25(m，2H)3.23(m，2H)3.44(m，2H)3.58(m，1H)3.91(m，2H)4.10(m，1H)4.47(s，2H)7.28(m，20H)。
實(shí)施例105-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己酸a制備2-烯丙基1，3-丙二醇在0℃將在無(wú)水乙醚(100毫升)中的烯丙基丙二酸二乙酯(20毫升，101毫摩爾)滴加至攪拌的氫化鋁鋰(9.6克，253毫摩爾)溶液中。反應(yīng)加熱至室溫，并保持5小時(shí)。冷卻至0℃，仔細(xì)滴加水(12毫升)。攪拌30分鐘后，通過(guò)Celite過(guò)濾混合物，然后用乙醇(2×500毫升)洗滌，在真空下干燥溶液得到9.5克產(chǎn)物，1H-NMR(CDCl3)5.78(m，1H)，5.03(m，2H)，3.78(m，2H)，3.69(m，2H)，2.06(t，2H)，1.87(m，1H)。
b)制備1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇向N-三苯甲基-L-纈氨酸(5.5克，15.2毫摩爾)、2-烯丙基-1，3丙二醇(4.4克，38毫摩爾)、N，N-二甲基氨基吡啶(183毫克，1.5毫摩爾)的二氯甲烷(120毫升)溶液中加入DCC(3.5克，16.7毫摩爾)。反應(yīng)在回流下保持過(guò)夜。用Celite過(guò)濾后，有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液洗滌并干燥。硅膠柱色譜得到4.6克中間體1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇。
c)制備1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-3-硬脂酰-1，3-丙二醇在0℃，向1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇(1.83克，4毫摩爾)的二氯甲烷(40毫升)和吡啶(3.2毫升，40毫摩爾)溶液中滴加在二氯甲烷中的硬脂酰氯(3.62克，12毫摩爾)。溶液加熱至室溫并保持3小時(shí)，用碳酸氫鈉水溶液洗滌并干燥，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物1.9克，1H-NMR(CDCl3)7.30(m，15H)，5.70(m，1H)，4.99(m，2H)，3.93(m，2H)，3.55(m，1H)，3.27(m，2H)，2.68(m，1H)，2.30(m，2H)，2.33(m，1H)，2.01(m，2H)，1.85(m，1H)，1.62(m，2H)，1.3(m，28H)，0.98(dd，6H)，0.91(t，3H)。
d)制備3-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁醛將1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-3-硬脂酰-1，3-丙二醇(580毫克，0.8毫摩爾)溶解在二烷(5毫升)中。向溶液中加入四氧化鋨(20毫克，0.08毫摩爾)和吡啶(0.05毫升，0.64毫摩爾)。將過(guò)碘酸鈉的水(3.5毫升)溶液加入至反應(yīng)混合物中。反應(yīng)保持過(guò)夜，然后冷卻至0℃。加入亞硫酸酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取混合物。干燥有機(jī)相并用硅膠柱色譜純化，產(chǎn)率250毫克，1H-NMR(CDCl3)9，68(s，1H)，7.25(m，15H)，3.92(m，2H)，3.58(m，1H)，2.32(m，2H)，2.68(m，1H)，2.34(m，7H)，1.58(m，2H)，1.53(m，28H)，0.96(dd，6H)，0.86(t，3H)。
f)制備3-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基己烯-2-酸芐酯向3-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁醛(15.8克，21.8毫摩爾)的二氯甲烷溶液中加入(芐氧基羰基甲基)三苯基溴化磷(10.7克，21.8毫摩爾)和三乙胺(2.21克，21.8毫摩爾)。反應(yīng)在室溫下保持過(guò)夜并蒸發(fā)混合物。向殘余物中加入二乙醚(200毫升)，并在4℃保持兩小時(shí)。然后過(guò)濾，蒸發(fā)濾液，產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，產(chǎn)量10克，1H-NMR(CDCl3)7.30(m，20H)，6.89(m，1H)，5.88(d，1H)，5.19(d，2H)，3.95(m，2H)，3.57(m，1H)，3.29(2H)，2.68(m，1H)，2.23(m，5H)，1.93(m，1H)，1.60(m，2H)，1.32(m，28H)，0.95(dd，6H)，0.89(t，3H)。
g)制備3-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基己酸酯向3-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基己烯-2-酸芐酯(70毫克，0.08毫摩爾)的甲醇(3毫升)和乙酸乙酯(1毫升)溶液中加入碳酸氫鈉(10毫克)和鈀黑(20毫克)。反應(yīng)在氫氣，大氣壓下保持2小時(shí)。過(guò)濾混合物并蒸發(fā)。將殘余物溶解在二氯甲烷中并連續(xù)用EDTA水溶液和冷的2％檸檬水溶液洗滌，蒸發(fā)有機(jī)相得到61毫克產(chǎn)物，1H-NMR(CDCl3)7.30(m，15H)，3.93(m，2H)，3.57(m，1H)，3.25(m，2H)，2.30(dt，4H)，2.20(m，1H)，1.70(m，1H)，1.62(m，4H)，1.30(m，28H)，0.95(dd，6H)，0.87(t，3H)。
實(shí)施例113-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酸a)制備1-O-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇向2-烯丙基-1，3-丙二醇(4.6克，40毫摩爾)和N-芐氧基羰基-L-纈氨酸(5.02克，20毫摩爾)的二氯甲烷溶液中加入二甲基氨基吡啶(244毫克，2毫摩爾)和DCC(4.5克，22毫摩爾)。兩小時(shí)后，用Celite過(guò)濾混合物，蒸發(fā)，分離產(chǎn)物1-O-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇，產(chǎn)量5.01克。
1H-NMR(CDCl3)7.36(m，5H)，5.78(m，1H)，5.26(d，1H)，5.11(s，2H)，5.06(d，2H)，4.22(m，3H)，3.59(m，2H)，2.13(m，3H)，1.98(m，2H)，0.94(dd，6H)。
b)制備1-O-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-3-O-硬脂酰-1，3-丙二醇在冰浴中，向1-O-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇(4.46克，12.7毫摩爾)的二氯甲烷(70毫升)和吡啶(6.1毫升，76毫摩爾)溶液中加入硬脂酰氯(7.8克，26毫摩爾)。反應(yīng)混合物加熱至室溫并保持一小時(shí)。然后倒入碳酸氫鈉水溶液中，干燥有機(jī)相，用硅膠柱色譜純化產(chǎn)物1-O-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-3-O-硬脂酰-1，3-丙二醇6.7克，1H-NMR(CDCl3)7.34(m，5H)，5.77(m，1H)，5.30(d，1H)，5.11(s，2H)，5.08(d，2H)，4.32(m，1H)，4.10(m，4H)，2.29(t，2H)，2.13(m，4H)，1.62(m，3H)，1.25(m，28H)，0.90(m，9H)。
c)制備3-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酸將高錳酸鉀(756毫克，4.8毫摩爾)溶解在水(7.5毫升)中。該溶液在劇烈攪拌下保持10分鐘。加入在苯(5毫升)中的1-O-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰)-2-烯丙基-3-O-硬脂酰-1，3-丙二醇(1克，1.6毫摩爾)和溴化四丁銨(77毫克，0.24毫摩爾)溶液。漿液攪拌1.5小時(shí)，加入二氯甲烷。將酸式亞硫酸鈉水溶液加入到漿液中直至混合物褪色。有機(jī)相用乙酸酸化，并用水洗滌。蒸發(fā)后，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物3-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酸(390毫克)，1H-NMR(CDCl3)7.33(m，5H)，5.38(d，1H)，5.11(s，2H)，4.14(m，5H)，2.60(m，1H)，2.45(m，2H)，2.29(t，2H)，2.18(m，1H)，1.58(m，2H)，1.25(m，28H)，0.90(m，9H)。
實(shí)施例122′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己酰基]鳥(niǎo)苷a)制備2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己?；鵠鳥(niǎo)苷向5-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己酸(462毫克，0.6毫摩爾)和2′3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(340毫克，1.25毫摩爾)的DMF(3毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(7毫克，0.06毫摩爾)和DCC(136毫克，0.66毫摩爾)。反應(yīng)在室溫下保持過(guò)夜，然后在40℃保持2小時(shí)。用Celite過(guò)濾反應(yīng)混合物，并倒入二氯甲烷中，用碳酸氫鈉水溶液洗滌。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-三苯甲基-L-纈氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己酰基]鳥(niǎo)苷(93毫克)，1H-NMR(DMSO d-6)7.88(s，1H)，7.29(m，15H)，6.52(s，2H)，6.17(dd，1H)，5.45(m，1H)，4.35(m，1H)，4.20(m，2H)，3.82(m，2H)，3.502.60(m，5H)，2.30(m，4H)，2.10(m，1H)，1.70(m，1H)，1.50(m，4H)，1.22(m，28H)，0.85(m，9H)。
b)制備2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己?；鵠鳥(niǎo)苷在室溫下，通過(guò)用80％乙酸(5毫升)處理30分鐘，以脫去步驟b)的化合物(90毫克，0.088毫摩爾)的N保護(hù)。蒸發(fā)，產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，得到標(biāo)題化合物72毫克，1H-NMR(DMSO d-6)7.88(s，1H)，6.54(s，2H)，6.18(dd，1H)，5.48(dd，1H)，4.27(dt，1H)，4.19(m，2H)，3.98(m，4H)，3.17-2.55(m，4H)，2.29(m，4H)，1.95(m，1H)，1.75(m，1H)，1.50(m，4H)，1.21(m，28H)，0.84(m，9H)。
實(shí)施例132′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁?；鵠鳥(niǎo)苷a)制備2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基丁酰]鳥(niǎo)苷向2′3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(113毫克，0.42毫摩爾)和3-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酸(140毫克，0.21毫摩爾)的DMF(2毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(3毫克，0.02毫摩爾)和DCC(52毫克，0.25毫摩爾)。兩天后，加入二氯甲烷(10毫升)和數(shù)滴乙酸，用Celite過(guò)濾有機(jī)相。濾液用碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酰]鳥(niǎo)苷，產(chǎn)量51毫克，1H-NMR(CDCl3)7.79(d，1H)，7.26(m，5H)，6.38(s，2H)，6.23(t，1H)，5.44(m，2H)，5.08(s，2H)，4.50-4.10(m，8H)，3.15-2.40(m，5H)，2.30(t，2H)，2.14(m，1H)，1.58(m，2H)，1.24(m，28H)，0.87(m，9H).
b)制備2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁酰]鳥(niǎo)苷步驟a)的產(chǎn)物(76毫克，0.084毫摩爾)溶解在甲醇(3毫升)、乙酸乙酯(0.5毫升)和乙酸(0.01毫升)的混合溶劑中。向該溶液中加入鈀黑(10毫克)，2小時(shí)后，再加入10毫克鈀黑。3小時(shí)后，過(guò)濾混合物并蒸發(fā)，將殘余物溶解在二氯甲烷中并用EDTA水溶液洗滌。干燥有機(jī)相并和甲苯共蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物的乙酸鹽，產(chǎn)量65毫克，1H-NMR(DMSO d-6+D2O)7.87(s，1H)5.16(dd，1H)，5.37(dd，1H)，4.24(m，3H)，4.01(m，4H)，3.10-2.60(m，3H)，2.40(m，2H)，2.24(t，2H)，1.70(m，1H)，1.48(m，2H)，1.25(m，28H)，0.82(m，9H)。
實(shí)施例14氯甲酸3-[1-(N-CBz-L-纈氨酰)-2-硬脂酰]丙基酯1-(N-CBz-L-纈氨酰)-2-硬脂酰甘油(300毫克，0.5毫摩爾)溶解在20％光氣的甲苯(15毫升)中。18小時(shí)后，蒸發(fā)溶液，殘余物和甲苯共蒸發(fā)數(shù)次，定量得到了標(biāo)題產(chǎn)物。該產(chǎn)物和目標(biāo)核苷用常規(guī)方法生成碳酸酯，例如在0℃，10∶1DMF/吡啶溶液中反應(yīng)3-24小時(shí)，注入至NaHCO3溶液中，用二氯甲烷萃取。氨基酸脫保護(hù)，例如用鈀黑的甲醇、乙酸乙酯、乙酸溶液，以得到核苷-O-[1-(L-纈氨酰)-2-硬脂酰-3-丙氧基羰基]，1H-NMR(CDCl3)7.40(m，5H)，5.28(m，2H)5.10(s，2H)，4.35(m，5H)，2.35(m，2H)，2.17(m，1H)，1.56(m，2H)，1.30(m，28H)，0.95(m，9H)。
實(shí)施例155-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酸a)4，5-二羥基-2-戊烯酸芐酯
DL-甘油醛(4.5克，50毫摩爾)和(芐氧基羰基甲基)-三苯基-溴化磷(24.57克，50毫摩爾)的100毫升1，2-環(huán)氧丁烷的混合物回流過(guò)夜。在真空下蒸發(fā)混合物，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)率8克＝71％，1H-NMR(CDCl3)2.50(s，1H)2.96(s，1H)3.54(m，1H)3.70(m，1H)4.38(m，1H)5.12(s，2H)6.14(m，1H)6.90(m，1H)7.30(m，5H)。
b)5-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-羥基-2-戊烯酸芐酯4，5-二羥基-2-戊烯酸芐酯(4.4克，20毫摩爾)、N-FMOC-L-纈氨酸(5.8克，17毫摩爾)和DMAP(0.21克，1.7毫摩爾)的100毫升二氯甲烷混合物冷卻至約10℃。在相同溫度下滴加DCC(4.2克，20毫摩爾)的25毫升二氯甲烷溶液，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將混合物冷卻至5℃，過(guò)濾尿烷。在減壓下蒸發(fā)濾液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)率6.6克＝71％，1H-NMR(CDCl3)0.91(m，6H)2.12(m，1H)4.38(m，5H)，5.14(s，2H)5.24(m，1H)6.20(m，1H)6.92(m，1H)7.30(m，13H)。
c)5-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-2-戊烯酸芐酯在10℃，向5-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-羥基-2-戊烯酸芐酯(6.5克，12毫摩爾)和吡啶(2.0克，25毫摩爾)的100毫升二氯甲烷溶液中滴加硬脂酰氯(4.55克，15毫摩爾)的25毫升二氯甲烷溶液，混合物攪拌過(guò)夜。加入100毫升5％碳酸氫鈉溶液，混合物攪拌30分鐘。分離有機(jī)相，用二氯甲烷兩次萃取水相。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)相，并在真空下濃縮。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物。
產(chǎn)率7.8克＝80％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.58(m，2H)2.14(m，1H)2.32(m，2H)4.22(m，5H)5.19(s，2H)5.25(m，1H)6.12(m，1H)6.85(m，1H)7.35(m，13H)。
d)5-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酸室溫，常壓下，5-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-2-戊烯酸芐酯(3.8克，4.69毫摩爾)的50毫升乙酸乙酯溶液用10％鈀炭(0.5克)氫化5小時(shí)。過(guò)濾催化劑，用乙酸乙酯和1，4-二烷洗滌，在減壓下蒸發(fā)溶液，產(chǎn)率3.3克＝99％1H-NMR(CDCl3)0.92(m，9H)1.25(m，28H)1.54(m，2H)1.98(m，2H)2.18(m，1H)2.28(m，2H)2.41(m，2H)4.32(m，5H)5.13(m，1H)5.33(m，1H)7.50(m，8H)。
實(shí)施例163-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸a)2，3-二羥基丙酸芐酯D，L-甘油酸鈣鹽二水合物(2.9克，10毫摩爾)和芐基溴(3.8克，22毫摩爾)的25毫升DMF混合物在60℃攪拌過(guò)夜。在減壓下蒸發(fā)混合物，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)率4克＝100％，1H-NMR(CDCl3)3.26(s，1H)3.90(m，2H)4.32(m，1H)5.25(s，2H)7.28(m，5H)。
b)3-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-2-羥基丙酸芐酯2，3-二羥基丙酸芐酯(4.0克，20毫摩爾)、N-FMOC-L-纈氨酸(5.4克，16毫摩爾)和DMAP(0.2克，1.6毫摩爾)的80毫升二氯甲烷溶液冷卻至約10℃。在相同溫度下滴加DCC(4.12克，20毫摩爾)的25毫升二氯甲烷溶液，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將混合物冷卻至5℃，過(guò)濾尿烷。在減壓下蒸發(fā)溶液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物。產(chǎn)率4.7克＝45％1H-NMR(CDCl3)0.88(m，6H)2.05(m，1H)4.40(m，6H)5.23(m，3H)7.50(m，13H)c)3-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸芐酯向攪拌的3-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-2-羥基丙酸芐酯(4.6克，8.89毫摩爾)和吡啶(1.41克，17.8毫摩爾)的80毫升二氯甲烷溶液中滴加硬脂酰氯(3.64克，12毫摩爾)的20毫升二氯甲烷溶液，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。加入100毫升5％碳酸氫鈉溶液，混合物攪拌30分鐘。分離有機(jī)相，用二氯甲烷兩次萃取水相。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)相，并在真空在濃縮。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)率6.1克＝87％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.26(m，28H)1.56(m，2H)2.06(m，1H)2.34(m，2H)4.36(m，6H)5.19(s，2H)5.32(m，1H)7.50(m，13H)d)3-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸室溫，常壓下，3-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸芐酯(0.78克，1毫摩爾)的20毫升乙酸乙酯溶液用10％鈀炭(0.2克)氫化3小時(shí)。過(guò)濾催化劑，用乙酸乙酯和1，4-二烷洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，產(chǎn)率0.63克＝90％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.24(m，28H)1.40(m，2H)2.12(m，3H)4.30(m，5H)5.16(m，1H)5.60(m，1H)7.40(m，8H)。
實(shí)施例171-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰氧基甲基)-2-硬脂酰氧基乙氧基羰基氯化物室溫，攪拌下將碳酸二(三氯甲基)酯(160毫克，0.54毫摩爾)加入至1-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰)-3-硬脂酰甘油/1-(N-芐氧基羰基-L-纈氨酰氧基)-3-硬脂酰氧基-2-丙醇/實(shí)施例4制備的(660毫克，1.12毫摩爾)和三乙胺(200毫克，2.0毫摩爾)的二氯甲烷(5毫升)溶液中。1小時(shí)后，加入正己烷(10毫升)，經(jīng)短硅膠柱濾掉沉淀的鹽酸三乙胺，產(chǎn)物再用正己烷洗脫，在真空中蒸發(fā)溶劑，得到650毫克(89％)的標(biāo)題化合物，13C NMR(CDCl3，62.975MHz)δ172.8(stea-COO)，171.2(Val-COO)，155.9(CONH)，154.1(COCl)，136.0(Ph-Cl-Val)，128.1-127.7(Ph)，67.2(CHOH)，66.7(PH CH2)，63.1(ValCOOCH2)，61.8(stea-COOCH2)，58.7(Val-αC)，33.7(stea-C2)，31.6(stea-C16)，31.0(Val-βC)，29.3-28.8(stea-C4-15)，24.5(stea-C3)，18.6和17.1(Val 2 CH3)，13.8(stea-C18)。
實(shí)施例18氯甲酸3-(N-CBz-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁基酯a)3-(N-CBz-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁醇在10℃下，向攪拌的4-硬脂酰氧基-3-(N-CBz-L-纈氨酰氧基甲基丁醛(按類(lèi)似于實(shí)施例6的方法制備，步驟d用CBz保護(hù)纈氨酸)(2.0克，3.2毫摩爾)的25毫升甲醇溶液中少量分次地加入硼氫化鈉(0.6克，16毫摩爾)。混合物攪拌30分鐘，然后用乙酸酸化。混合物用水稀釋并用二氯甲烷萃取三次。用硫酸鈉干燥有機(jī)相并在真空中濃縮。產(chǎn)物用硅膠柱色譜分離。產(chǎn)率1.5克＝75％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.52(m，4H)2.24(m，3H)3.68(m，2H)4.12(m，1H)4.24(m，1H)5.08(s，2H)5.22(m，1H)7.36(m，5H)
b)氯甲酸3-(N-CBz-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁基酯步驟中間體a)在20毫升20％光氣的甲苯溶液中攪拌過(guò)夜?；旌衔镌跍p壓下蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物，產(chǎn)率1.5克＝97％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.28(m，28H)1.58(m，2H)1.72(m，2H)2.15(m，1H)2.31(m，2H)4.08-4.42(m，5H)5.10(s，2H)5.22(m，1H)7.36(m，5H)。
實(shí)施例192′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[L-(L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-3-丙氧基羰基]鳥(niǎo)苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[1-(N-CBz-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-3-丙氧基羰基]鳥(niǎo)苷在0℃，向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(270毫克，1毫摩爾)的DMF(10毫升)和吡啶(1毫升)溶液中加入氯甲酸3-{1-(N-CBz-L-纈氨酰)-2-硬脂酰}丙酯(619毫克，0.5毫摩爾)。3小時(shí)后，反應(yīng)混合物倒入碳酸氫鈉溶液中，并用二氯甲烷萃取。有機(jī)相在真空中干燥，用硅膠柱色譜分離2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[1-(N-CBz-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-3-丙氧基羰基]鳥(niǎo)苷(195毫克)，1H-NMR(CDCl3)7.69(s，1H)，7.31(m，5H)，6.50(m，2H)，6.32(m，1H)，5.3(m，2H)，5.09(m，2H)，4.35(m，7H)，2.60(m，2H)，2.31(t，2H)，2.20(m，1H)，1.58(m，2H)，1.23(m，28H)，0.92(m，9H)。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[1-(L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-3-丙氧基羰基]鳥(niǎo)苷將2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[1-(N-CBz-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-3-丙氧基羰基]鳥(niǎo)苷(190毫克)溶解在甲醇(6毫升)、乙酸乙酯(2毫升)和乙酸(1毫升)的混合溶劑中。向該溶液中加入鈀黑(30毫克)，反應(yīng)混合物在氫氣下保持2小時(shí)，然后過(guò)濾，蒸發(fā)濾液，用硅膠柱色譜分離標(biāo)題產(chǎn)物110毫克，1H-NMR(DMSO-δ6)7.86(ds，1H)，6.51(s，2H)，6.17(dd，1H)，5.48(m，1H)，5.20(m，1H)，4.25(m，7H)，2.70(m，2H)，2.27(m，2H)，1.72(m，1H)，1.47(m，2H)，1.22(m，28H)，0.84(m，9H).
實(shí)施例202′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊?；鵠鳥(niǎo)苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(0.27克，1毫摩爾)和5-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基戊酸(0.94克，1.3毫摩爾)的30毫升DMF溶液中加入DMAP(16毫克，0.13毫摩爾)、HOBT(0.176克，1.3毫摩爾)和DCC(0.248克，1.2毫摩爾)。在室溫下攪拌混合物三天。加入4克硅膠，在真空中蒸發(fā)混合物。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酰基]鳥(niǎo)苷，產(chǎn)量0.45克，1H-NMR(DMSO-δ6)0.88(m，9H)1.20(m，28H)1.45(m，2H)1.78(m，2H)2.18(m，2H)2.36(m，1H)2.62(m，2H)3.88(m，1H)4.22(m，6H)4.92(m，1H)5.45(m，1H)6.19(m，1H)6.52(s，2H)7.26-7.88(m，8H)。
被保護(hù)的中間體如上述方法脫保護(hù)得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例202′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-丙?；鵠鳥(niǎo)苷向攪拌的3-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸(0.61克，0.88毫摩爾)的5毫升無(wú)水二乙醚混合物的加入一滴DMF和亞硫酰氯(0.52克，4.4毫摩爾)。混合物回流兩小時(shí)，然后在減壓下蒸發(fā)。產(chǎn)物溶解在無(wú)水二氯甲烷中并滴加2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(0.215克，0.8毫摩爾)和吡啶(0.35克，4.4毫摩爾)的20毫升DMF溶液中。溶液攪拌過(guò)夜。加入兩克硅膠，混合物在真空中蒸發(fā)。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)率0.19克＝25％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.62(m，2H)2.12(m，1H)2.38(m，2H)2.58(m，2H)4.12-4.76(m，6H)5.32(m，2H)6.12(m，1H)6.26(m，1H)6.44(m，1H)7.12-7.78(m，8H)。
實(shí)施例21丁二酸1-(N-CBz-L-纈氨酰)-3-硬脂酰-2-丙基單酯1-(N-CBz-L-纈氨酰)-3-硬脂酰甘油(886毫克，1.5毫摩爾)和丁二酸酐(450毫克，4.5毫摩爾)溶解在DMF(15毫升)和吡啶(1毫升)的混合溶劑中。反應(yīng)在室溫下保持3小時(shí)，然后在60℃保持5小時(shí)。反應(yīng)混合物倒入乙酸和水的溶液中，并用二氯甲烷萃取。用水洗滌有機(jī)相，并蒸發(fā)，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量900毫克，
1H-NMR(CDCl3)7.43(m，5H)，5.27(m，1H)，5.09(m，2H)，4.21(m，5H)，2.54(m，4H)，2.29(t，2H)，2.13(m，1H)，1.59(m，2H)，1.25(m，28H)，0.90(m，9H)。
實(shí)施例222′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-纈氨酰氧基)-3-硬脂酰氧基-2-丙氧基羰基]-丙酰基}鳥(niǎo)苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(351毫克，1.3毫摩爾)和丁二酸1-(N-CBz-L-纈氨酰)-3-硬脂酰-2-丙基單酯(900毫克，1.3毫摩爾)的DMF(15毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(24毫克，0.2毫摩爾)、1-羥基苯并三唑(175毫克，1.3毫摩爾)、DCC(321毫克，1.56毫摩爾)。48小時(shí)后，過(guò)濾反應(yīng)混合物，濾液倒入碳酸氫鈉溶液中，并用二氯甲烷萃取。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBz-L-纈氨酰)-3-硬脂酰-甘油氧基羰基]-丙?；鶀鳥(niǎo)苷780毫克，1H-NMR(DMSO-d6)7.89(s，1H)，7.34(m，5H)，6.50(s，2H)，6.17(dd，1H)，5.46(m，1H)，5.38(m，1H)，5.02(s，2H)，4.22(m，7H)，3.32(s，4H)，2.80(m，2H)，2.57(m，2H)，2.31(t，2H)，2.05(m，1H)，1.48(m，2H)，1.21(m，28H)，0.84(m，9H)。
向2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBz-L-纈氨酰)-3-硬脂酰-2-丙氧基羰基]-丙?；鶀鳥(niǎo)苷(460毫克，0.5毫摩爾)的甲醇(10毫升)、乙酸乙酯(3毫升)和乙酸(2毫升)的混合溶劑的溶液中加入鈀黑(50毫克)。在氫氣氣氛下反應(yīng)2小時(shí)后，過(guò)濾混合物，干燥濾液，用硅膠柱色譜分離目標(biāo)產(chǎn)物360毫克，1H-NMR(DMSO-d6)7.89(s，1H)，6.51(s，2H)，6.16(dd，1H)，5.48(m，1H)，5.17(m，1H)，4.28(m，7H)，2.90(m，2H)，2.58(m，4H)，2.28(t，2H)，1.85(m，1H)，1.49(m，2H)，1.22(m，28H)，0.85(m，9H)。
實(shí)施例23
在室溫下，將硬脂酰氯(12.1克，40毫摩爾，1.0當(dāng)量)的CH2Cl2(100毫升)溶液緩慢地(1小時(shí))加入到2，2-二(羥甲基)丙酸(26.8克，200毫摩爾，5.0當(dāng)量)的吡啶(400毫升)溶液中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，然后在真空下濃縮(100毫升)。反應(yīng)混合物慢慢用飽和NaHCO3(400毫升)處理，然后用CH2Cl2(3×300毫升)萃取。合并有機(jī)相，用鹽水洗滌，Na2SO4干燥，并在真空中濃縮。粗產(chǎn)物在硅膠上(500克)以19/1～4/1 CH2Cl2-MeOH作為洗脫劑進(jìn)行色譜分離，得到硬脂酸單酯，Rf(9/1 CH2Cl2-MeOH)0.33，產(chǎn)率12.5克(78％)。
將N-Cbz-L纈氨酸(18.85克，75毫摩爾，2.4當(dāng)量)和DMAP(855毫克，7毫摩爾，0.22當(dāng)量)的CH2Cl2(800毫升)溶液冷卻至0℃，并用DCC(14.4克，70毫摩爾，2.2當(dāng)量)處理。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后慢慢地(1小時(shí))用上述硬脂酸單酯(12.5克，31.2毫摩爾，1當(dāng)量)的CHCl3(200毫升，不含醇)溶液處理。攪拌過(guò)夜后，過(guò)濾懸浮液，用鹽水洗滌濾液，Na2SO4干燥，并在真空中濃縮。粗產(chǎn)物在硅膠上(500克)以19/1～4/1 CH2Cl2-MeOH作為洗脫劑進(jìn)行色譜純化，得到上述二酯，Rf(9/1 CH2Cl2-MeOH)0.46，產(chǎn)率13.8克(70％)，1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ7.35-7.3(m，5H，ArH)，5.32(d，1H，CH)，5.10(s，2H，CH2Ph)，4.33-4.18(m，4H，CH2)，2.28(t，2H，CH2)，2.22-2.05(m，1H，CH)，1.65-1.50(m，2H，CH2)，1.35-1.15(m，31H)，1.00-0.82(m，9H，Me)。
實(shí)施例242′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酰基]鳥(niǎo)苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊?；鵠鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(269毫克，1.0毫摩爾)、5-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酸(940毫克，1.3毫摩爾)、DMAP(16毫克，0.13毫摩爾)和HOBT(176毫克，1.3毫摩爾)和DMF共蒸發(fā)二次，減至30毫升。加入DCC(248毫克，1.2毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶液。加入乙酸乙酯(50毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩遍。用硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物。產(chǎn)量450毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.22(m，28H)1.45(m，2H)1.83(m，2H)2.21(m，2H)2.37(m，1H)3.90(m，1H)5.36-5.58(m，1H)6.18(m，1H)6.50(s，2H)7.28-7.91(m，10H)。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊?；鵠鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酰基]鳥(niǎo)苷(300毫克，0.308毫摩爾)的5毫升N，N-二異丙基乙胺和5毫升DMF的混合物在室溫下攪拌三天。加入乙酸(5毫升)，混合物在減壓下蒸發(fā)，用硅膠柱色譜以乙酸鹽形式分離產(chǎn)物，產(chǎn)量90毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.24(m，28H)1.55(m，2H)1.91(m，2H)2.31(m，2H)2.44(m，1H)2.56-3.08(m，2H)3.15(m，1H)4.00-4.49(m，5H)5.08(m，1H)5.40-5.62(m，1H)6.24(m，1H)6.54(s，2H)7.96(s，1H)。
實(shí)施例252′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-丙?；鵠鳥(niǎo)苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-丙?；鵠鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(404毫克，1.5毫摩爾)、3-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-丙酸(1.06克，1.75毫摩爾)、DMAP(24毫克，0.2毫摩爾)和HOBT(264毫克，1.82毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發(fā)二次，減至約30毫升。加入DCC(372毫克，1.8毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶液。加入乙酸乙酯(50毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機(jī)相兩遍，用硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)，通過(guò)用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)率0.73克，1H-NMR(DMSO d-6)0.82(m，9H)1.22(m，28H)1.48(m，2H)2.31(m，2H)2.50-3.00(m，2H)3.91(m，1H)4.18-4.52(m，5H)5.00(s，2H)5.30-5.61(m，2H)6.16(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，5H)7.71(m，1H)7.92(s，1H)10.18(s，1H)。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-丙?；鵠鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-纈氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-丙酰基]鳥(niǎo)苷(350毫克，0.4毫摩爾)的乙酸乙酯(25毫升)、甲醇(5毫升)和乙酸(5毫升)的溶液用鈀黑(300毫克)在常壓下氫化三小時(shí).濾掉催化劑，用乙酸乙酯和甲醇洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，用硅膠柱色譜以乙酸鹽形式分離產(chǎn)物，產(chǎn)量120毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，9H)1.22(m，28H)1.50(m，2H)2.32(m，2H)2.50-3.00(m，2H)3.07(m，1H)4.21-4.59(m，5H)5.38-5.59(m，2H)6.17(m，1H)6.0(s，2H)7.90(s，1H)。
實(shí)施例262′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(L-纈氨酰氧基甲基)-丙酸]鳥(niǎo)苷a)合成4，4-二(N-CBZ-L-纈氨酰氧基甲基)丁-1-烯向2-烯丙基-1，3-丙二醇(2.32克，20毫摩爾)、N-CBZ-L-纈氨酸(10.06克，40毫摩爾)和DMAP(0.488克，4毫摩爾)的120毫升二氯甲烷溶液中分批加入DCC(9.08克，44毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，將混合物冷卻至5℃，濾掉尿烷。蒸發(fā)濾液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量9.0克，1H-NMR(CDCl3)0.89(m，12H)5.11(s，2H)5.73(m，1H)b)合成3，3-二(N-CBZ-L-纈氨酰氧基甲基)丙酸向冷卻的4，4-二(N-CBZ-L-纈氨酰氧基甲基)-丁-1-烯(14.6克，25毫摩爾)和四丁基溴化銨(1.3克，4毫摩爾)的120毫升苯溶液中加入100毫升水。劇烈攪拌下分批加入高錳酸鉀(15.8克，100毫摩爾)，混合物在15-20℃間攪拌2小時(shí)。向漿液中加入酸式亞硫酸鹽水溶液直至混合物褪色?；旌衔镉?N鹽酸酸化，并用乙酸乙酯萃取四次。用水洗滌有機(jī)相兩次，碳酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)。產(chǎn)物用硅膠柱色譜分離，產(chǎn)量7.5克，1H-NMR(CDCl3)0.89(m，12H)2.05(m，2H)2.46(m，2H)2.62(m，1H)4.20(m，6H)5.11(s，4H)5.30(m，2H)7.35(m，10H)c)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(N-CBZ-L-纈氨酰氧基甲基)-丙酰]鳥(niǎo)苷
2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(1.35克，5毫摩爾)、3，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基甲基)-丙酸(3.6克，6毫摩爾)、DMAP(0.061克，0.5毫摩爾)和HOBT(0.81克，6毫摩爾)的溶液與DMF共蒸發(fā)二次，減至約120毫升。加入DCC(1.24克，6毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶劑。加入乙酸乙酯(200毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機(jī)相兩遍。用硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物。產(chǎn)量2.7克。
1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.00(m，2H)2.50-3.00(m，2H)3.90-4.43(m，10H)5.08(s，4H)5.32-5.59(m，1H)6.17(m，1H)6.50(s，2H)7.28(m，10H)7.72(m，2H)7.90(s，1H)d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(L-纈氨酰氧基甲基)-丙酸]鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(N-CBZ-L-纈氨酰氧基甲基)-丙酰]鳥(niǎo)苷(2.6克，3.1毫摩爾)的80毫升乙酸乙酯、20毫升甲醇和20毫升乙酸的溶液用鈀黑(0.3克)在常壓下氫化兩小時(shí)。濾掉催化劑，用乙酸乙酯和甲醇洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，用硅膠柱色譜以二乙酸鹽形式分離產(chǎn)物，產(chǎn)量1.2克。
1H-NMR(DMSO d-6)0.90(m，12H)1.78(m，2H)2.50-3.00(m，2H)3.09(m，2H)4.02-4.45(m，8H)5.34-5.59(m，1H)6.17(m，1H)6.62(s，2H)7.88(s，1H)。
實(shí)施例272′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁氧基?；鵠鳥(niǎo)苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁氧基羰基]鳥(niǎo)苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(269毫克，1.0毫摩爾)的絕對(duì)DMF溶液中加入吡啶(198毫克，2.5毫摩爾)和3-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁氧基羰基氯化物(750毫克，1.1毫摩爾)的5毫升二氯甲烷溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢枞?，在減壓下蒸發(fā)溶液。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量120毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.24(m，28H)5.08(，2H)6.24(m，1H)8.00(s，1H)。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁氧基羰基]鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-纈氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁氧基羰基]鳥(niǎo)苷的15毫升乙酸乙酯、2毫升甲醇和2毫升乙酸的混合物用鈀黑(40毫克)在常壓下氫化兩小時(shí)。濾掉催化劑，用乙酸乙酯和甲醇洗滌，在減壓下蒸發(fā)溶液，產(chǎn)物以乙酸鹽形式用硅膠柱色譜分離，產(chǎn)量78毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.87(m，9H)1.22(m，28H)1.48(m，2H)1.68(m，2H)2.12(m，1H)2.26(m，2H)2.50-3.00(m，2H)4.00-4.42(m，10H)5.34-5.58(m，1H)6.18(m，1H)6.52(s，2H)7.82(s，1H)。
實(shí)施例282′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[2-(L-纈氨酰氧基)硬脂酰]鳥(niǎo)苷a)合成2-羥基硬脂酸芐酯向攪拌的DL-2-羥基硬脂酸(3.0克，10毫摩爾)的20毫升無(wú)水DMF溶液中加入叔丁醇鉀(1.23克，11毫摩爾)，混合物在60℃攪拌一小時(shí)，加入芐基溴(2.14克，12.5毫摩爾)，混合物在80℃攪拌六小時(shí)，在減壓下蒸發(fā)混合物并加入100毫升乙酸乙酯。分離有機(jī)相并用水洗滌四次，用硫酸鈉干燥有機(jī)相并在真空中濃縮，通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量3.3克，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，3H)1.26(m，28H)1.62(m，2H)4.20(m，1H)5.20(s，2H)7.36(m，5H)。
b)合成2-(N-FMOC-L-纈酰氨氧基)硬脂酸芐酯向2-羥基硬脂酸芐酯(3.2克，8.2毫摩爾)、N-FMOC-L-纈氨酸(3.4克，10毫摩爾)和DMAP(0.12克，1毫摩爾)的80毫升二氯甲烷溶液中加入DCC(2.5克，12毫摩爾)溶液，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，將混合物冷卻至5℃，并濾掉尿烷。蒸發(fā)濾液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量4.5克，1H-NMR(CDCl3)0.90(m，6H)1.26(m，6H)1.82(m，2H)2.16(m，1H)4.21(m，1H)4.36(m，2H)5.10(m，1H)5.18(s，2H)5.28(m，1H)7.20-7.80(m，13H)。
c)合成2-(N-FMOC-L-纈酰氨氧基)硬脂酸2-(N-FMOC-L-纈酰氨氧基)硬脂酸芐酯(4.4克，6.2毫摩爾)的50毫升乙酸乙酯溶液用10％的鈀炭(0.5克)在常壓下氫化兩小時(shí)。濾掉催化劑，用乙酸乙酯和1，4-二烷洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，產(chǎn)物以乙酸鹽形式通過(guò)硅膠柱色譜分離，產(chǎn)量3.4克，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，6H)1.26(m，28H)1.82(m，2H)2.28(m，1H)4.20(m，1H)4.40(m，2H)5.00(m，1H)5.41(m，1H)7.26-7.82(m，8H)。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[2-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)硬脂酰]鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(404毫克，1.5毫摩爾)、2-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)-硬脂酸(1.24克，2毫摩爾)、DMAP(24毫克，0.2毫摩爾)和HOBT(264毫克，1.95毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發(fā)二次，減至約30毫升。加入DCC(372毫克，1.8毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶液。加入乙酸乙酯(50毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機(jī)相兩次，用硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)，產(chǎn)物以乙酸鹽形式通過(guò)硅膠柱色譜分離，產(chǎn)量1.2克，1H-NMR(DMSO d-6)0.80-0.90(m，9H)1.22(m，28H)2.12(m，1H)2.50-3.00(m，2H)3.98(m，1H)4.96(m，1H)6.17(m，1H)6.50(s，2H)7.32-7.95(m，10H)e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[2-(L-纈氨酰氧基)硬脂酰]鳥(niǎo)苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[2-(N-FMOC-L-纈氨酰氧基)硬脂酰]鳥(niǎo)苷(800毫克，0.89毫摩爾)的15毫升DMF溶液中加入DBU(1.35克，8.9毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌5分鐘。加入乙酸(2毫升)，混合物在減壓下蒸發(fā)。加入水(20毫升)，混合物用二氯甲烷萃取三次。用硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)，通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量165毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.87(m，9H)1.22(m，28H)1.70(m，2H)1.88(m，1H)2.50-3.00(m，2H)3.20(m，1H)4.32(m，3H)4.94(m，1H)5.32-5.54(m，1H)6.14(m，1H)6.49(s，2H)7.89(s，1H)實(shí)施例292′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[13-二-(L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基丙?；鵠鳥(niǎo)苷a)合成丁二酸1，3-二芐氧基-2-丙基單酯在60℃下，1，3-二芐氧基丙-2-醇(6.8克，25毫摩爾)和丁二酸酐(7.5克，75毫摩爾)和DMAP(12.2克，100毫摩爾)攪拌一小時(shí)?；旌衔镌跍p壓下蒸發(fā)，用2N HCl酸化并用乙酸乙酯萃取兩次。用水洗滌合并的有機(jī)相三次，用硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)，通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量7.8克，b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二芐氧基-2-丙氧基羰基)丙?；鵠鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(1.61克，6毫摩爾)、HOBT(0.972克，7.2毫摩爾)、DMAP(73.3毫克，0.6毫摩爾)和丁二酸單1，3-二芐氧基-2-丙酯(2.68克，7.2毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發(fā)二次，減至約150毫升。加入DCC(1.55克，7.5毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌72小時(shí)。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶劑。加入乙酸乙酯(200毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機(jī)相兩遍，硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)，通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量3.3克。
c)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二羥基-2-丙氧基羰基)丙?；鵠鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二芐氧基-2-丙氧基羰基)丙?；鵠鳥(niǎo)苷(3.2克，5.13毫摩爾)的50毫升乙酸乙酯、50毫升甲醇和10毫升乙酸溶液用鈀黑(0.6克)在40psi壓力下氫化過(guò)夜。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量1.64克。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二羥基-2-丙氧基羰基)丙?；鵠鳥(niǎo)苷(1.93克，2.93毫摩爾)、N-CBZ-L-纈氨酸(1.76克，7毫摩爾)、HOBT(0.95克，7毫摩爾)和DMAP(85.5毫克，0.7毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發(fā)二次，減至約60毫升。加入DCC(1.55克，7.5毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，混合物在60℃保溫四小時(shí)，然后冷卻至10℃。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶劑。加入乙酸乙酯(150毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機(jī)相兩次，硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)，通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量1.6克。
e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷(1.6克，1.75毫摩爾)的80毫升乙酸乙酯、20毫升甲醇和20毫升乙酸溶液用鈀黑(0.3克)在室溫和常壓下氫化兩小時(shí)。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，產(chǎn)物以二乙酸鹽形式用硅膠柱色譜分離，產(chǎn)量1.02克，1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，12H)1.85(m，2H)2.58(m，4H)2.60-3.10(m，2H)3.11(m，2H)3.61-4.39(m，7H)5.19(m，1H)5.35-5.56(m，1H)6.16(m，1H)，6.62(s，2H)7.89(s，1H)。
實(shí)施例302′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-纈氨酰氧基)-3-羥基-2-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-3-羥基-2-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-羥基-2-丙氧基羰基)丙酰基]鳥(niǎo)苷(1.3克，2.93毫摩爾)、N-CBZ-L-纈氨酸(1.00克，4毫摩爾)、HOBT(0.54克，4毫摩爾)和DMAP(48.8毫克，0.4毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發(fā)兩次，減至約60毫升。加入DCC(0.91克，4.4毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌72小時(shí)。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶液。加入乙酸乙酯(150毫升)，有機(jī)相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量0.99克。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-纈氨酰氧基)-3-羥基-2-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-3-羥基-2-丙氧基羰基]丙酰基}鳥(niǎo)苷(0.82克，1.21毫摩爾)的30毫升乙酸乙酯、15毫升甲醇和15毫升乙酸溶液用鈀黑(0.15克)在室溫和常壓下氫化兩小時(shí)。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，產(chǎn)物以乙酸鹽形式通過(guò)硅膠柱色譜分離，產(chǎn)量0.5克，1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，6H)1.86(m，1H)2.58(m，4H)2.63-3.02(m，2H)3.10-4.38(m，9H)5.34-5.55(m，1H)6.16(m，1H)6.56(s，2H)7.90(s，1H)。
實(shí)施例315′-L-纈氨酰-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(810毫克，3毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(73毫克，0.6毫摩爾)、N-CBz-L纈氨酸(1.5克，6毫摩爾)和1-羥基苯并三唑(810毫克，6毫摩爾)的DMF(20毫升)溶液中加入DCC(1.36克，6.6毫摩爾)。72小時(shí)后，過(guò)濾反應(yīng)混合物，在真空中濃縮。用硅膠柱色譜分離5′-(N-CBz-L-纈氨酰)-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(1.15克)。
將該中間體(503毫克，1毫摩爾)溶解在乙酸乙酯(10毫升)、甲醇(20毫升)和乙酸(2毫升)的混合溶劑中。向混合物中加入鈀黑(100毫克)，在氫氣中，常壓下保持反應(yīng)混合物3小時(shí)。過(guò)濾和濃縮后，用硅膠柱色譜分離目標(biāo)產(chǎn)物(370毫克)，1H-NMR(DMSO d-6)7.94(s，1H)，6.52(s，2H)，6.17(dd，1H)，5.47(dd，1H)，4.15(m，3H)，3.15(d，1H)3.01-2.62(m，2H)1.80(m，1H)0.82(dd，6H)。
實(shí)施例322′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)丙酰基]鳥(niǎo)苷a)合成2-羥基丙酸4-甲氧基芐酯向攪拌的DL-2-羥基丙酸(9.0克，100毫摩爾)的100毫升無(wú)水DMF溶液中加入叔丁醇鉀(12.34克，110毫摩爾)，在60℃下攪拌混合物一小時(shí)。加入4-甲氧基苯甲酰氯(18.8克，120毫摩爾)，在60℃下攪拌混合物8小時(shí)?；旌衔镌跍p壓下蒸發(fā)，加入250毫升乙酸乙酯。用水洗滌有機(jī)相四次，硫酸鈉干燥并在真空中濃縮，產(chǎn)量16.8克，1H-NMR(CDCl3)1.40(m，3H)3.81(s，3H)4.26(m，1H)5.14(s，2H)6.90(d，2H)7.28(d，2H)。
b)合成2-(N-CBZ-L纈氨酰氧基)丙酸4-甲氧基芐酯向2-羥基丙酸4-甲氧基芐酯(4.2克，20毫摩爾)、N-CBZ-L纈氨酸(5.02克，20毫摩爾)和DMAP(0.24克，2毫摩爾)的100毫升二氯甲烷溶液中加入DCC(4.54克，22毫摩爾)溶液，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，將混合物冷卻至5℃，濾掉尿烷。蒸發(fā)濾液并用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量7.9克，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，6H)1.50(m，3H)2.26(m，1H)3.81(s，3H)4.34(m，1H)5.04-5.30(m，6H)6.88(d，2H)7.26(m，7H)。
c)合成2-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-丙酸向2-(N-CBZ-L纈氨酰氧基)丙酸4-甲氧基芐酯(7.8克，17.5毫摩爾)的二氯甲烷(100毫升)溶液中加入三氟乙酸(10毫升)，在室溫下攪拌溶液一小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)溶液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量5.0克，1H-NMR(CDCl3)0.94(m，6H)1.56(d，3H)2.30(m，1H)4.42(m，1H)5.12-5.30(m，4H)7.28(m，5H)。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)丙?；鵠鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(404毫克，1.5毫摩爾)、2-(N-CBZ-L纈氨酰氧基)丙酸(0.582克，1.8毫摩爾)、DMAP(22毫克，0.18毫摩爾)和HOBT(243毫克，1.8毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發(fā)兩次，減至約30毫升。加入DCC(412毫克，2.0毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶液。加入乙酸乙酯100毫升，有機(jī)相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量0.72克，1H-NMR(DMSO d-6)0.92(m，6H)1.40(d，3H)2.10(m，1H)2.50-3.06(m，2H)4.03(m，1H)4.20-4.44(m，3H)5.04(s，2H)5.12(m，1H)5.44-5.58(m，1H)6.18(t，1H)6.52(s，2H)7.36(m，5H)7.70(d，2H)7.92(s，1H)e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(L-纈氨酰氧基)丙?；鵠鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)丙?；鵠鳥(niǎo)苷(0.6克，1.04毫摩爾)的20毫升乙酸乙酯、10毫升甲醇和10毫升乙酸溶液用鈀黑(0.1克)在室溫和常壓下氫化兩小時(shí)。濾掉催化劑，用甲醇洗滌，在減壓下蒸發(fā)溶液，得到乙酸鹽形式的標(biāo)題化合物，產(chǎn)量0.5克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，6H)1.40(d，3H)1.92(m，4H)2.52-3.04(m，2H)3.18(m，1H)4.18-4.42(m，3H)5.06(m，1H)5.32-5.58(m，2H)6.18(m，1H)6.52(s，2H)7.90(s，1H)。
實(shí)施例332′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[2，3-二-(L-纈氨酰氧基)-1-丙氧基羰基]丙?；B(niǎo)苷a)合成丁二酸4-甲氧基芐基單酯向丁二酸酐(75克，750毫摩爾)和4-甲氧基芐醇(69.1克，500毫摩爾)的1，4-二烷(300毫升)混合物中加入吡啶(79.1克，1000毫摩爾)，混合物在80℃攪拌5小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)混合物，加入600毫升乙酸乙酯和60毫升乙酸。用水洗滌有機(jī)相三次，硫酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)。產(chǎn)物用甲苯進(jìn)行重結(jié)晶，產(chǎn)量104克，1H-NMR(DMSO d-6)2.48(m，4H)3.72(s，3H)5.00(s，2H)6.90(d，2H)7.28(d，2H)。
b)合成丁二酸2，3-二羥基-丙酯，4-甲氧基芐酯向甘油(23.0克，250毫摩爾)、丁二酸4-甲氧基芐基單酯(5.96克，25毫摩爾)和DMAP(0.36克，3毫摩爾)的DMF(200毫升)溶液中加入DCC(6.2克，30毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，在減壓下蒸發(fā)混合物，加入150毫升二氯甲烷。過(guò)濾混合物，溶液用水洗滌兩次。水相用二氯甲烷萃取兩次，合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥。溶液在減壓下蒸發(fā)，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量3.0克，1H-NMR(CDCl3)2.65(m，4H)3.61(m，2H)3.80(s，3H)3.90(m，1H)4.18(m，2H)5.05(s，2H)6.89(d，2H)7.26(d，2H)。
c)合成丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-丙酯，4-甲氧基芐酯向攪拌的丁二酸2，3-二羥基-丙酯，4-甲氧基芐酯(2.9克，9.28毫摩爾)、N-CBZ-L-纈氨酸(5.03克，20毫摩爾)和DMAP(0.244克，2毫摩爾)的二氯甲烷(60毫升)溶液中加入DCC(4.5克，22毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，過(guò)濾混合物，溶液在減壓下蒸發(fā)，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量2.5克，1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)2.16(m，2H)2.62(m，4H)3.80(s，3H)4.32(m，4H)5.05-5.52(m，9H)6.89(d，2H)7.30(m，12H)。
d)合成丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-丙酯向上述中間體(2.3克，2.95毫摩爾)的二氯甲烷(25毫升)溶液中加入三氟乙酸(2.5毫升)，溶液在室溫下攪拌兩小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)溶液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量1.8克，1H-NMR(CDCl3)0.92(m，12H)2.12(m，2H)2.64(m，4H)4.32(m，4H)5.10(s，4H)5.22-5.50(m，3H)7.34(m，10H)。
e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-1-丙氧基羰基]丙酰基}鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(0.538克，2毫摩爾)、HOBT(0.327克，2.42毫摩爾)、DMAP(29.3毫克，0.24毫摩爾)和丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-1-丙酯(1.6克，2.42毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發(fā)兩次，減至約50毫升。加入DCC(0.536克，2.6毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌72小時(shí)。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶液。加入乙酸乙酯100毫升，有機(jī)相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量0.65克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.08(m，2H)2.58-3.04(m，6H)3.92(m，2H)4.10-4.46(m，7H)5.00(s，4H)5.22(m，1H)5.32-5.56(m，1H)6.17(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，10H)7.70(d，2H)7.92(s，1H)。
f)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[2，3-二-(L-纈氨酰氧基)-1-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷上述中間體(0.57克，0.626毫摩爾)的20毫升乙酸乙酯、10毫升甲醇和10毫升乙酸溶液用鈀黑(0.1克)在室溫和常壓下氫化兩小時(shí)。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)物溶解在二氯甲烷中，并加入1M鹽酸的乙醚溶液(1.1毫升)。混合物在減壓下蒸發(fā)，在真空中干燥得到二鹽酸鹽形式的標(biāo)題化合物，產(chǎn)量0.37克，1H-NMR(DMSO d-6)0.92(m，12H)2.12(m，2H)2.58-3.04(m，6H)3.75(m，2H)4.16-4.50(m，7H)5.19-5.60(m，2H)6.18(m，1H)6.76(s，2H)7.92(s，1H)。
實(shí)施例34
2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙?；B(niǎo)苷二鹽酸鹽a)合成丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，4-甲氧基芐酯在約10℃，向1，3-二溴丙-2-醇(21.8克，100毫摩爾)、丁二酸4-甲氧基芐酯(28.6克，120毫摩爾)和DMAP(1.22克，10毫摩爾)的二氯甲烷(400毫升)溶液中分批加入DCC(24.8克，120毫摩爾)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^(guò)夜，并冷卻至約5℃。過(guò)濾混合物，溶液在減壓下蒸發(fā)。加入600毫升乙酸乙酯，有機(jī)相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉干燥溶液，并在減壓下蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量34.8克，1H-NMR(CDCl3)2.69(m，4H)3.57(m，4H)3.81(s，3H)5.07(s，2H)5.14(m，1H)6.88(d，2H)7.26(d，2H)。
b)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙酯，4-甲氧基芐酯向N-CBZ-L-纈氨酸(58.5克，232.8毫摩爾)的無(wú)水DMF(300毫升)溶液中加入叔丁醇鉀(24.68克，220毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌一小時(shí)。加入丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，4-甲氧基芐酯(34克，77.6毫摩爾)的無(wú)水DMF(50毫升)溶液，混合物在60℃攪拌18小時(shí)。濾掉溴化鉀，溶液在減壓下蒸發(fā)。加入600毫升乙酸乙酯，有機(jī)相用5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量45克，1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)2.16(m，2H)2.61(m，4H)3.80(s，3H)4.12-4.42(m，6H)5.02(s，2H)5.10(s，4H)5.43(m，3H)6.88(d，2H)7.32(m，12H)。
c)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙酯在5-10℃，向上述冷卻的中間體(44.5克，57.1毫摩爾)的二氯甲烷(500毫升)的溶液中加入三氟乙酸(50毫升)，該溶液在10℃攪拌兩小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)溶液，和甲苯共蒸發(fā)兩次。加入400毫升乙醇，混合物在40℃攪拌30分鐘。冷卻混合物，濾掉副產(chǎn)物。溶液在減壓下蒸發(fā)，用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量33克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.04(m，2H)2.46(m，4H)，3.94-4.40(m，6H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)7.32(m，10H)7.74(d，2H)。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷(17.8克，66毫摩爾)、HOBT(10.64克，78.8毫摩爾)、丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙酯(52克，78.8毫摩爾)和DMAP(0.96克，7.88毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發(fā)兩次，減至約500毫升。加入DCC(17.3克，84毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過(guò)夜?；旌衔镌?0℃保溫6小時(shí)，然后冷卻到約10℃。過(guò)濾混合物，在減壓下蒸發(fā)溶液。加入乙酸乙酯1200毫升，有機(jī)相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉干燥有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量42克，1H-NMR(DMSO d-6)0.90(m，12H)2.02(m，2H)2.5-3.02(m，6H)3.94(m，2H)4.22(m，7H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)5.22-5.50(m，1H)6.16(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，10H)7.72(d，2H)7.92(s，1H)。
e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙?；B(niǎo)苷二鹽酸鹽2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙?；鶀鳥(niǎo)苷(5.0克，5.9毫摩爾)的75毫升乙酸乙酯和75毫升甲醇溶液用載在活性碳上的10％鈀(1克)在室溫和常壓下氫化一小時(shí)。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶液，產(chǎn)物溶解在二氯甲烷中，并在冷卻下加入1M鹽酸的乙醚溶液(6毫升)。混合物在減壓下蒸發(fā)，產(chǎn)量3.5克，1H-NMR(DMSO d-6)0.94(m，12H)2.18(m，2H)2.5-3.04(m，6H)4.20-4.54(m，7H)5.24(m，1H)5.34-5.64(m，1H)6.22(m，1H)6.92(s，2H)8.30(s，1H)8.62(s，6H)。
實(shí)施例35合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙酰基鳥(niǎo)苷a)合成丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，1，1-二甲基乙酯在約10℃，向1，3-二溴丙-2-醇(10.9克，50毫摩爾)、丁二酸1，1-二甲基乙酯(J.Org.Chem 59(1994)4864)(10.45克，60毫摩爾)和DMAP(0.61克，5毫摩爾)的二氯甲烷(180毫升)溶液中分批加入DCC(12.4克，60毫摩爾)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^(guò)夜，并冷卻至約5℃。過(guò)濾混合物，溶液在減壓下蒸發(fā)。加入250毫升乙酸乙酯，有機(jī)相用5％檸檬酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次。用硫酸鈉干燥溶液，并在減壓下蒸發(fā)。在真空中蒸餾產(chǎn)物(沸點(diǎn)0.5135-140℃)，產(chǎn)量16.8克，1H-NMR(CDCl3)1.45(s，9H)2.58(m，4H)3.61(m，4H)5.12(m，1H)。
b)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙酯，1，1-二甲基乙基酯向N-CBZ-L-纈氨酸(18.85克，75毫摩爾)的無(wú)水DMF(100毫升)溶液中加入叔丁醇鉀(7.85克，70毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌一小時(shí)。加入丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，1，1-二甲基乙酯(9.35克，25毫摩爾)的無(wú)水DMF(20毫升)溶液，混合物在60℃攪拌18小時(shí)。濾掉溴化鉀，溶液在減壓下蒸發(fā)。加入300毫升乙酸乙酯，有機(jī)相用5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，并在減壓下蒸發(fā)。用硅膠柱色譜分離產(chǎn)物，產(chǎn)量14克。
1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)1.42(s，9H)2.14(m，2H)2.52(m，4H)4.32(m，6H)5.10(s，4H)5.32(m，3H)7.26(m，10H)c)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙基單酯向上述冷卻的丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨酰氧基)-2-丙酯，1，1-二甲基乙酯(13克，18.18毫摩爾)的二氯甲烷(100毫升)溶液中加入三氟乙酸(20毫升)，溶液在室溫下攪拌六小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)溶液，加入200毫升乙酸乙酯，有機(jī)相用5％碳酸氫鈉和水洗滌，溶液在減壓下蒸發(fā)，產(chǎn)量11.7克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.04(m，2H)2.46(m，4H)，3.94-4.40(m，6H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)7.32(m，10H)7.74(d，2H)。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-纈氨酰氧基)-2-丙氧基羰基]丙?；B(niǎo)苷如實(shí)施例34步驟b)所示的方法，將步驟c)的中間體酯化到FLG上，并用常用的技術(shù)，如實(shí)施例35步驟e)或?qū)嵤├?9步驟e)，除去纈氨酰部分上的N保護(hù)基。
生物學(xué)實(shí)施例藥動(dòng)學(xué)在老鼠模型中可以確認(rèn)本發(fā)明口服的前藥在活體內(nèi)釋放FLG，該模型被認(rèn)為是用于評(píng)價(jià)核苷類(lèi)藥物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的有用模型。口服組合物可以藥學(xué)賦形劑給藥，賦形劑包括丙二醇，或?qū)τ诟兹芙獾幕衔铮鐚?shí)施例26或?qū)嵤├?4所述的化合物，用水給藥，以0.1毫摩爾/千克的劑量對(duì)抗食動(dòng)物重復(fù)實(shí)驗(yàn)。為了進(jìn)行比較，一組老鼠靜脈注射0.01毫摩爾/千克代謝物2′，3′-雙脫氧-3′氟鳥(niǎo)苷。給藥0.5-12小時(shí)后(對(duì)于FLG為5分鐘-6小時(shí))，通過(guò)不斷地從各個(gè)動(dòng)物體內(nèi)收集的血清監(jiān)測(cè)血清代謝物的濃度。
按類(lèi)似于Stahle等1995，J Pharm，Biomed.Anal，13，369-376的方法，用帶254納米UV檢測(cè)的HPLC分析代謝物，HPLC體系基于緩沖值為pH4.5的含1.2％ 2-丙醇溶劑的0.05M磷酸二氫銨緩沖溶液，或基于緩沖值為pH7.0的含2％乙腈溶劑的30mM磷酸二氫鈉緩沖溶液。柱子為帶7有微米C18防護(hù)柱的100×2.1毫米BAS C18 5微米粒徑或150×4.6毫米的Zorbax SB-CN C18，5微米柱。本發(fā)明化合物的蛋白鍵合力可忽略，同樣代謝物的鍵合力也可被忽略，Amicon或Microcon 30過(guò)濾器的超濾作用對(duì)于血清樣品是有用的。有利的是主峰可再進(jìn)行柱色譜，以更利于提高FLG對(duì)低分子量血清組分的分辨率。將iv值乘以10，以達(dá)到能與口服值相比的AUC值，。絕對(duì)口服的生物利用率以在0→∞AUCiv和0→∞AUC口服間的比率測(cè)定。
表1

*測(cè)定值 **文獻(xiàn)值因此，相對(duì)于代謝物2′3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷，本發(fā)明的化合物提供了明顯改進(jìn)的口服生物利用率。特別是，化合物在血中以相對(duì)持續(xù)的方式釋放，而不是以間峰(immediate peak)的方式。這意味著活性代謝物在血中的有效量能持續(xù)很多小時(shí)，從而有助于每日一次的劑量。另外，持續(xù)釋放避免了化合物快速釋放時(shí)產(chǎn)生的急性毒性問(wèn)題。
盡管大鼠可認(rèn)為是一種很好的用于預(yù)測(cè)人體內(nèi)核苷的生物利用率的動(dòng)物模型，但是本發(fā)明化合物(實(shí)施例34)的各自的生物利用率的確定是通過(guò)≈11.5千克雄性和雌性警犬進(jìn)行的，以0.05毫摩爾/千克(38毫克/千克)化合物水劑口服或以0.005毫摩爾/千克(1.35毫克/千克)代謝物水劑靜脈注射。血漿的收集和分析如上所述。
雄犬12小時(shí)后絕對(duì)生物利用率51％雌犬12小時(shí)后絕對(duì)生物利用率74％生物實(shí)施例2抗病毒活性-逆轉(zhuǎn)錄病毒通過(guò)生物實(shí)施例1所描述的方法證明本發(fā)明的化合物在活體內(nèi)釋放了代謝物2′3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷。因此，該代謝物在體外測(cè)定的抗病毒活性將反映本發(fā)明化合物的實(shí)際活性。
Koshide等在Antimicrob Agents Chemother 33 778-780(1989)中所述的XTT染料攝入分析中利用了MT4細(xì)胞的XYY染料攝入分析，上述生物實(shí)施例1測(cè)定的代謝物顯示了下列在體外的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒活性。
表2

*引起50％抑制病毒復(fù)制的代謝物濃度。
因此很明顯，攝入本發(fā)明的化合物對(duì)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒HIV-l，HIV-2和SIV產(chǎn)生了強(qiáng)大的抗病毒活性。同時(shí)根據(jù)HIV-12441AZTr和HIV-lIIIBTIBOr的結(jié)果，應(yīng)注意到本發(fā)明化合物的抗病毒活性沒(méi)有顯示抗HIV菌株的交叉阻力，而這些菌株對(duì)其它HIV劑如核苷類(lèi)AZT或非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑TIBO是抗藥性的。
生物實(shí)施例3抗病毒活性-HBV在鴨子體內(nèi)對(duì)于鴨子的乙型肝炎病毒(DHBV)的抗病毒活性是一種驗(yàn)證人體內(nèi)乙型肝炎病毒活性的公認(rèn)的動(dòng)物模型。上述生物實(shí)施例2中測(cè)定的活體內(nèi)代謝物的活性已按照Sherker等在(1986)Gastroenterology 91，818-824頁(yè)所描述的DHBV模型進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果如附圖1和2所示，4只對(duì)照的鴨子用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)處理，另4只鴨子以5毫克/千克/天的量攝入活性代謝物，當(dāng)種入DHBV后，鴨子能活兩天，而得到治療的鴨子能活18天。十天內(nèi)每天兩次，早8點(diǎn)和下午4點(diǎn)腹膜內(nèi)注射代謝物和PBS(對(duì)照)。治療持續(xù)33天，動(dòng)物在治療結(jié)束后仍活了5周。
用放射性探針，通過(guò)DHBV DNA的斑點(diǎn)印跡雜交，進(jìn)行療效跟蹤，并以測(cè)定的放射性雜交的量作為DHBV的量。附圖1繪制了治療之前，期間以及之后的不同時(shí)間點(diǎn)血清中DHBV DNA的量。
如附圖1所示，在用PBS(對(duì)照，實(shí)線)處理期間DHBV的量沒(méi)有降低。給予生物實(shí)施例2中測(cè)定的代謝物(虛線)的動(dòng)物顯示了在治療的前十天內(nèi)，血清中DHBV量急劇降低，此后，在治療的剩余時(shí)間中，以5毫克/千克/天給藥的DHBV的濃度低于檢測(cè)限。以30和3毫克/千克/天劑量重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在先天感染的鴨子中(未顯示)也得到了同樣的結(jié)果，即血清中DHBV DNA急劇降至檢測(cè)限以下。盡管以3毫克/千克/天的低劑量，代謝物也能在活體內(nèi)產(chǎn)生了相當(dāng)大的DHBV抑制作用。治療完畢后，病毒在血清中再次出現(xiàn)，如附圖1所示，在慢性乙型肝炎病毒感染的人類(lèi)和動(dòng)物中很早就觀察到用常用的抗病毒劑短期治療后，HBV重新出現(xiàn)。
如附圖2所示，鴨子的重量和對(duì)照組(用PBS治療)動(dòng)物同樣增加。在治療期間觀察到重量從約270克增至約800克，其增重之大，使人認(rèn)為，假如存在毒性的話(huà)，其生長(zhǎng)速率會(huì)有顯而易見(jiàn)的變化。對(duì)于接受30毫克/千克/天的更高劑量的鴨子也可觀察到相同的生長(zhǎng)曲線。因此該代謝物很明顯是無(wú)毒的。由于本發(fā)明的化合物在活體內(nèi)水解生成這種代謝物，如上述實(shí)施例2所述，以及與性質(zhì)相同、易于代謝的脂肪酸，可以推斷，給藥本發(fā)明化合物不會(huì)引起長(zhǎng)期的毒性問(wèn)題。
口給藥本發(fā)明的化合物而不引起急性(短期)毒性在上述生物實(shí)施例2得到證實(shí)。
制劑實(shí)施例1片劑制劑用0.15毫米的篩將下述組分過(guò)篩，并干法混合10克2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-纈氨酰氧基)-2丙氧基羰基丙?；鵠鳥(niǎo)苷40克乳糖49克結(jié)晶纖維素1克 硬脂酸鎂用壓片儀將混合物壓制成含250毫克活性組分的片劑。
制劑實(shí)施例2腸溶衣片劑在片劑包衣器中用含下述組分的溶液將制劑實(shí)施例1的片劑噴涂包衣120克乙基纖維素30克 丙二醇10克 脫水由梨醇一油酸酯加入1000毫升蒸餾水制劑實(shí)施例3控釋制劑50克 2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基甲基)-6硬脂酰氧基己?；鵠鳥(niǎo)苷12克 羥丙基甲基纖維素(Methocell K15)4.5克乳糖干法混合，并用聚維酮的水糊成粒。加入硬脂酸鎂(0.5克)，混合物在壓片儀中制成含500毫克活性劑的13毫米直徑的片劑。
制劑實(shí)施例4軟膠囊50克 2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨酰氧基甲基)-6硬脂酰氧基己酰基]鳥(niǎo)苷100克卵磷脂100克花生油本發(fā)明化合物分散在卵磷脂和花生油中，并裝入軟凝膠的膠囊中。
權(quán)利要求
1.5′-L-纈氨酰-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷所指的化合物。
2.5′-L-纈氨酰-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥(niǎo)苷所指的化合物在制備用于治療或者預(yù)防HBV或者逆轉(zhuǎn)錄酶病毒感染的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及5′－L－纈氨酰－2′，3′－雙脫氧－3′－氟鳥(niǎo)苷所指的化合物及其在制備用于治療或者預(yù)防HBV或者逆轉(zhuǎn)錄酶病毒感染的藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61P1/16GK1872869SQ20061009972
公開(kāi)日2006年12月6日 申請(qǐng)日期1998年8月14日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月15日
發(fā)明者周曉雄, N·-G·約翰松, H·瓦林 申請(qǐng)人:美迪維爾公司