專利名稱：核苷酸類似物組合物的制作方法
背景技術：
本申請是申請日為1998年7月23日、申請?zhí)枮?0137059.6、發(fā)明名稱為“核苷酸類似物組合物”的專利申請的分案申請。
本發(fā)明涉及核苷酸類似物9-〔2-〔〔雙(新戊酰氧基)甲氧基〕氧膦基〕甲氧基〕乙基〕腺嘌呤(“阿德福韋酯(adefovir dipivoxil)”或簡稱“AD”)及其應用。本發(fā)明還涉及合成AD的方法。
AD是母化合物9-〔2-(膦羧基甲氧基)乙基〕腺嘌呤(“PMEA”)的雙新戊酰氧基甲酯，其對動物和人具有抗病毒活性。AD和PMEA例如在下述文獻中有敘述美國專利No.4,724,233和4,808,716，EP481 214，Benzaria等，Nucleosides andNucleotides(1995)14(3-5)563-565，Holy等，Collect.Czech.Chem.Commun.(1989)542190-2201和522801-2809，Rosenberg等，Collect.Czech.Chem.Commun.(1988)532753-2777，Starrett等，Antiviral Res.(1992)19267-273和J.Med.Chem.(1994)371857-1864。迄今，AD僅以非結晶(亦即無定形)的形式提供的。尚未有將其制成晶體物質的報道。
使有機化合物結晶化的方法本身在以下文獻中有描述J.A.Landgrebe，Theoryand Practice in the Organic Laboratory第2版第43-51頁，麻薩諸塞州D.C.Heathand Co.，Lexington公司1977年出版；A.S.Myerson，Handbook of IndustrialCrystallization第1-101頁，麻薩諸塞州Butterworth-Heinemann，Stoneham公司1993年出版。
發(fā)明目的本發(fā)明提供一種或多種符合下述一種或多種目的的組合物或方法。
本發(fā)明的主要目的是，提供含新形態(tài)的AD結晶的組合物，這種新形態(tài)的AD結晶具有大規(guī)模合成或配制成治療用制劑所需的性能。
本發(fā)明的另一個目的是，提供具有良好的熔點和/或流動性能或堆積密度性能的AD，該AD能使含AD的組合物的制造和配制變得容易。
本發(fā)明的又一個目的是，提供耐貯型AD。
本發(fā)明的再一個目的是，提供可容易地過濾和干燥的AD。
本發(fā)明的還有一個目的是，提供純度至少約為97％(w/w)(較好的是，至少約為98％)的高純AD。
本發(fā)明的另一個目的是，將AD合成過程中產生的副產物消除或減少到最低程度。
本發(fā)明的又一個目的是，提供一種可避免昂貴且費時的柱色譜的AD純化方法。
發(fā)明概要本發(fā)明是通過提供以下化合物而達到其主要目的的結晶AD，尤其是無水結晶形(以下稱“形態(tài)1”)、水合形(C20H32N5O8P1·2H2O，以下稱“形態(tài)2”)、甲醇溶劑化形(C20H32N5O8P1·CH3OH，以下稱“形態(tài)3”)，富馬酸鹽或復合物(C20H32N5O8P1·C4H4O4，以下稱“形態(tài)4”)，半硫酸鹽或復合物，氫溴酸鹽或復合物，鹽酸鹽或復合物，硝酸鹽或復合物，甲磺酸(CH3SO3H)鹽或復合物，乙磺酸(C2H5SO3H)鹽或復合物，β-萘磺酸鹽或復合物，α-萘磺酸鹽或復合物，(S)-樟腦磺酸鹽或復合物，琥珀酸鹽或復合物，馬來酸鹽或復合物，抗壞血酸鹽或復合物，煙酸鹽或復合物。
本發(fā)明的實例包括(1)結晶形態(tài)1的AD，其以度2θ表示的、使用Cu-Kα輻射的X射線粉末衍射(“XRD”)光譜基本上在約6.9、約11.8、約12.7、約15.7、約17.2、約20.7、約21.5、約22.5和約23.3有一個或多個(以任何組合)峰；(2)結晶形態(tài)2的AD，其以度29表示的、使用Cu-Kα輻射的X射線粉末衍射(“XRD”)光譜基本上在約8.7-8.9、約9.6、約16.3、約18.3、約18.9、約19.7、約21.0、約21.4、約22.0、約24.3、約27.9、約30.8和約32.8有一個或多個(以任何組合)峰；(3)結晶形態(tài)3的AD，其以度2θ表示的、使用Cu-Kα輻射的XRD光譜基本上在約8.1、約8.7、約14.1、約16.5、約17.0、約19.4、約21.1、約22.6、約23.4、約24.2、約25.4和約30.9有一個或多個(以任何組合)峰；和結晶形態(tài)4的AD，其以度2θ表示的、使用Cu-Kα輻射的XRD光譜基本上在約9.8、約15.2、約15.7、約18.1、約18.3、約21.0、約26.3和約31.7有一個或多個(以任何組合)峰。
本發(fā)明的實例包括具有圖4-10中的任一個或多個所示的結晶形態(tài)的AD結晶。
在其它實例中，本發(fā)明提供由含約6-45％AD和約55-94％結晶化溶劑的結晶化溶液形成結晶從而制備AD結晶的方法，其中，所述混合溶劑選自(1)約1∶10v/v至約1∶3v/v的丙酮∶二正丁基醚的混合液、(2)約1∶10v/v至約1∶3v/v的乙酸乙酯∶二正丙基醚的混合液、(3)約1∶10v/v至約10∶1v/v的叔丁醇∶二正丁基醚的混合液、(4)約1∶10v/v至約1∶3v/v的二氯甲烷∶二正丁基醚的混合液、(5)約1∶10v/v至約10∶1v/v的乙醚∶二正丙基醚的混合液、(6)約1∶10v/v至約1∶3v/v的四氫呋喃∶二正丁基醚的混合液、(7)約1∶10v/v至約1∶3v/v的乙酸乙酯∶二正丁基醚的混合液、(8)約1∶10v/v至約1∶3v/v的四氫吡喃∶二正丁基醚的混合液、(9)約1∶10v/v至約1∶3v/v的乙酸乙酯∶乙醚的混合液、(10)叔丁基·甲基醚、(11)乙醚、(12)二正丁基醚、(13)叔丁醇、(14)甲苯、(15)乙酸異丙酯、(16)乙酸乙酯、(17)基本上由以下(A)和(B)組成的混合液(A)第一結晶化溶劑，由式R1-O-R2的第一二烷基醚組成，其中，R1是1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，R2是2、3、4、5或6個碳原子的烷基，或者R1和R2兩者連接在一起，形成5、6、7或8元環(huán)，其條件是，二烷基醚不是甲基·乙基醚，(B)第二結晶化溶劑，選自(a)式R1-O-R2的第二二烷基醚，其中，第二二烷基醚不同于第一二烷基醚，但不是甲基·乙基醚，(b)甲苯、(c)四氫呋喃、(d)叔丁醇、(e)乙酸乙酯、(f)二氯甲烷、(g)乙酸丙酯和(h)異丙醇。
本發(fā)明的實例包括純結晶AD(例如，形態(tài)1和/或形態(tài)2)。本發(fā)明的實例還包括含結晶AD(例如，形態(tài)1和/或形態(tài)2)和一種或多種化合物(如藥用賦形劑或含結晶AD的反應混合物中存在的化合物)的組合物。
本發(fā)明的實例包括一種制備AD的方法，在該方法中，將AD溶解在甲醇中使其形成結晶。
另一個實例是這樣一種結晶AD它適合含例如形態(tài)1、形態(tài)2、形態(tài)3和/或形態(tài)4的AD中的一種或多種及藥用載體的、用于治療人或動物中已知PMEA對此有效的病毒癥狀〔反轉錄病毒感染(HIV、SIV、FIV)或乙型肝炎病毒或其它肝炎病毒(hepadnavirus)感染、或DNA病毒感染(人細胞巨化病毒或皰疹病毒，如HSV1或HSV2)〕的藥學組合物或藥學用途。
本發(fā)明提供一種制備結晶形態(tài)2的AD的方法，在該方法中，在水的存在下形成AD結晶。
在另一個實例中，制備AD的方法包括在N-甲基吡咯烷酮(NMP，1-甲基-2-吡咯烷酮)和三烷基胺〔如三乙胺(TEA)〕中使PMEA與新戊酸氯甲酯接觸，并將AD回收。
在又一實例中，提供含小于約2％的鹽的PMEA組合物，該組合物可用于包含以下步驟的方法與含小于約2％的鹽的PMEA接觸。
在再一個實例中，用包含以下步驟的方法得到AD產物由含液體的、形態(tài)1的AD和合乎要求的賦形劑的混合物制備濕顆粒，并可視需要將濕顆粒干燥。
圖面簡述

圖1是形態(tài)1的結晶的XRD圖。圖2是對形態(tài)1的結晶進行差示掃描量熱測定而得到的差示熱分析圖。圖3是形態(tài)1的結晶的傅里葉變換紅外吸收光譜。圖4-10是形態(tài)1的結晶放大100倍的照片。圖4-10是放大128％而得到的照片的副本。圖11是形態(tài)2的結晶的XRD圖。圖12是對形態(tài)2的結晶進行差示掃描量熱測定而得到的差示熱分析圖。圖13是形態(tài)2的結晶的傅里葉變換紅外吸收光譜。圖14是形態(tài)3的結晶的XRD圖。圖15是對形態(tài)3的結晶進行差示掃描量熱測定而得到的差示熱分析圖。圖16是形態(tài)4的結晶的XRD圖。圖17是對形態(tài)4的結晶進行差示掃描量熱測定而得到的差示熱分析圖。圖18是AD半硫酸鹽結晶的XRD圖。圖19是AD氫溴酸鹽結晶的XRD圖。圖20是AD硝酸鹽結晶的XRD圖。圖21是AD甲磺酸鹽結晶的XRD圖。圖22是AD乙磺酸鹽結晶的XRD圖。圖23是ADβ-萘磺酸鹽結晶的XRD圖。圖24是ADα-萘磺酸鹽結晶的XRD圖。圖25是AD(S)-樟腦磺酸鹽結晶的XRD圖。圖26是AD琥珀酸鹽結晶的XRD圖。圖27是形態(tài)1AD的單位晶胞的堆積圖。圖28是形態(tài)1的AD的原子編號圖。圖29是形態(tài)1的AD的粉末X射線衍射圖(a)觀察值，(b)計算值。
發(fā)明詳述除非另有說明，在本文中，溫度是指攝氏溫度(℃)。室溫是指約18-23℃。
在本文中，烷基是指線形的、分支的和環(huán)狀的飽和烴。除非另有相反的說明，在本文中，“烷基”或“烷基部分”是指含1、2、3、4、5、6、、7、8、9、10、11或12個正、仲、叔或環(huán)狀的烴。“C1-10烷基”一詞是指含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個碳原子的烷基。其例子有-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-C(CH3)3、-CH2CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH2CH3、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)2CH2CH3、-CH(CH3)CH(CH3)2-、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)CH2CH3、-CH2C(CH3)3、-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3、-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)、-C(CH3)2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-C(CH3)(CH2CH3)2、-CH(CH2CH3)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH(CH3)2、-CH(CH3)C(CH3)3、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基、環(huán)丁基甲基、1-環(huán)丙基-1-乙基、2-環(huán)丙基-1-乙基、環(huán)己基、環(huán)戊基甲基、1-環(huán)丁基-1-乙基、2-環(huán)丁基-1-乙基、1-環(huán)丙基-1-丙基、2-環(huán)丙基-1-丙基、3-環(huán)丙基-1-丙基、2-環(huán)丙基-2-丙基和1-環(huán)丙基-2-丙基。
在本文中，除非有相反的說明，“烷氧化物”是指與氧原子連接的烴，所述烴是本文中就烷基所定義的含1、2、3、4、5或6個碳原子的烴。其例子有-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2CH3、-OCH(CH3)2、-OCH2CH2CH2CH3、-OCH2CH(CH3)2、-OCH(CH3)CH2CH3、-OC(CH3)3、-OCH2CH2CH2CH2CH3、-OCH(CH3)CH2CH2CH3、-OCH(CH2CH3)2、-OC(CH3)2CH2CH3、-OCH(CH3)CH(CH3)2、-OCH2CH2CH(CH3)2、-OCH2CH(CH3)CH2CH3、-OCH2C(CH3)3、-OCH(CH3)(CH2)3CH3、-OC(CH3)2(CH2)2CH3、-OCH(C2H5)(CH2)2CH3、-OC(CH2)3CH(CH3)2、-O(CH2)2C(CH3)3、-OCH2CH(CH3)(CH2)2CH3和-OCH2CH2CH2CH2CH2CH3。
“三烷基胺”是指被三個C1-6烷基部分取代的氮原子，這些烷基部分是獨立選定的。其例子有被下述1、2或3個烷基部分取代的氮-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-C(CH3)3、-CH2CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH2CH3、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)2CH2CH3、-CH(CH3)CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)CH2CH3、-CH2C(CH3)3、-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3、-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)、-C(CH3)2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-C(CH3)(CH2CH3)2、-CH(CH2CH3)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH(CH3)2、或-CH(CH3)C(CH3)3。
在本文中，“雜芳基”例如包括(但不限于)Leo A.Paquette在Principles ofModern Heterocyclic Chemistry(組約州W.A.Beniamin公司1968年出版)，尤其是第1、3、4、6、7和9章；The Chemistry of Heterocyclic Compounds，A seriesof Monographs(紐約州Johm Wiley & Sons公司出版，1950年至現在)，尤其是第13、14、16、19和28卷；和J.Am.Chem.Soc.，(1960)825566中所述的那些雜環(huán)。
雜環(huán)的例子例如包括(但不限于)吡啶基、噻唑基、四氫噻吩基、硫氧化四氫噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫萘基、吲哚基、亞吲哚基(indolenyl)、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、八氫異喹啉基、吖辛因基、三嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、噻蒽基、噻蒽基、吡喃基、異苯并呋喃基、色烯基、呫噸基、吩噻嗯基(phenoxathinyl)、2H-吡咯基、異噻唑基、異唑基、吡嗪基、噠嗪基、中氮茚基、異氮雜茚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、2，3-二氮雜萘基、1，5-二氮雜萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、1，2-二氮雜萘基、蝶啶基、4aH-卡唑基、卡唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、呋咱基、吩嗪基、異苯并二氫吡喃基、苯并二氫吡喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、二氫吲哚基、異二氫氮雜茚基、奎寧環(huán)基、嗎啉基、唑烷基、苯并三唑基、苯并異唑基、羥吲哚基、苯并唑啉基和靛紅酰基(isatinoyl)。
下面是舉例說明而不是對本發(fā)明進行限定，碳結合的雜環(huán)在以下位置結合吡啶的2、3、4、5或6位，噠嗪的3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氫呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯的2、3、4或5位，唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，異唑、吡唑或異噻唑的3、4或5位，氮丙啶的2、3位，氮雜環(huán)丁烷的2、3或4位，喹啉的2、3、4、5、6、7或8位或異喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。更典型的是，碳結合的雜環(huán)包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-噠嗪基、4-噠嗪基、5-噠嗪基、6-噠嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
下面是舉例說明而不是對本發(fā)明進行限定，氮結合的雜環(huán)在以下位置結合氮丙啶、氮雜環(huán)丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氫吲哚、1H-吲唑的1位，異氮雜茚或異二氫氮雜茚的2位，嗎啉的4位，咔唑或β-咔啉的9位。更典型的是，氮結合的雜環(huán)包括1-氮丙啶基、1-氮雜環(huán)丁烷基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基和1-哌啶基。
在本文中，為“結晶物質”、“結晶”或“晶體”的AD是指基本上所有的成分分子以一定的三維立體型式(亦即晶格)有序排列的固體AD。結晶或晶體的AD可包含一種或多種類型的組成，如AD·富馬酸或AD·2H2O。結晶物質(亦即晶體)可以一種或多種結晶習性(如片晶、棒晶、板晶或針晶)出現。
除非明確說明或可根據上下文內容確定，在本文中，百分比(％)是指重量(w/w)百分比。因此，含至少約40％AD的溶液是指含至少約40％(w/w)AD的溶液。含0.1％水的固體AD是指固體中締合有0.1％(w/w)的水。
基本上沒有非結晶AD的結晶AD是指這樣一種固體組合物，在該組合物中，約60％以上的AD是以結晶物質的形式存在的。這樣的組合物一般至少含約80％(通常至少約90％)的一種或多種AD結晶形態(tài)，其余AD是非結晶AD。
本發(fā)明的組合物可視需要，含本文所述的化合物的鹽，這些鹽包括含例如非荷電部分或單價陰離子的藥用鹽。這些鹽還包括由合適陰離子(如無機酸或有機酸)的組合衍生出來的那些鹽。合適的酸包括具有足以形成穩(wěn)定鹽的酸度的那些酸，較好的是那些低毒性的酸。例如，可通過某些有機酸和無機酸(如HF、HCl、HBr、HI、H2SO4、H3PO4)或有機磺酸、有機羧酸與堿性中心(通常是胺)的酸加成而形成本發(fā)明的鹽。有機磺酸的例子包括C6-16芳基磺酸、C6-16雜芳基磺酸和C1-16烷基磺酸，如苯磺酸、α-萘磺酸、β-萘磺酸、(S)-樟腦磺酸、甲磺酸、乙磺酸、正丙磺酸、異丙磺酸、正丁磺酸、仲丁磺酸、異丁磺酸、叔丁磺酸、戊磺酸和己磺酸。有機羧酸的例子包括C1-16烷基、C6-16芳基羧酸和C4-16雜芳基羧酸，如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、戊二酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸和2-苯氧基苯甲酸。上述鹽還包括本發(fā)明化合物與一個或多個氨基酸的鹽。合適的氨基酸有許多，尤其是作為蛋白質組分而發(fā)現的天然氨基酸，雖然氨基酸通常具有含堿性或酸性基團(如賴氨酸、精氨酸或谷氨酸)、中性基團(如甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、異亮氨酸或亮氨酸)的側鏈。鹽通常是生物相容的或藥學上可接受的或非毒性的，尤其是對哺乳動物細胞無毒。具有生物毒性的鹽一般與本發(fā)明化合物的合成中間體一起使用。AD的鹽通常是結晶，如本文所述的形態(tài)4。
實例包括在實施本發(fā)明的方法或操作時瞬時出現的組合物。例如，在使醇鈉與9-(2-羥乙基)腺嘌呤溶液接觸時，混合開始時的組合物會含可忽略量的醇鈉。該組合物在進行足夠的攪拌以使溶液混合之前一般是以非均相混合物的形式存在的。這樣的組合物通常含可忽略量的反應產物并主要含反應物。同樣地，隨著反應進行，反應物、產物和副產物之間的比例會發(fā)生變化。這些瞬時組合物是處理過程中產生的中間體，它們作為本發(fā)明的實例而明確地包括在內。
本發(fā)明包括含二種或多種不同結晶類型(亦即形態(tài))的混合物(如形態(tài)1和形態(tài)2的結晶，形態(tài)1、形態(tài)2和形態(tài)4的結晶，或者形態(tài)2和形態(tài)4的結晶)的組合物。形態(tài)1和形態(tài)2的AD結晶的混合物可以在藥學配制或制造中存在，通常，這樣的混合物中，形態(tài)1的AD占至少約70％，通常至少占約90％，但在有些情況下，這樣的混合物中形態(tài)2和/或無定形的AD可高達約70％。
AD的結晶形態(tài)按Starrett等在J.Med.Chem.，(1994)191857-1864中所述的方法制備和回收的AD及用甲醇(約4％)與二氯甲烷(約96％)的混合液從硅膠柱上洗脫下來并在減壓下于約35℃旋轉蒸發(fā)而回收得到的AD以非結晶(亦即無定形)形式沉淀出來。
本發(fā)明者已鑒別出幾種不同的結晶AD形態(tài)。本發(fā)明者已用幾種方法(通常是用XRD和DSC差示熱分析圖)對它們的特性進行表征。操作者一般使用XRD來表征晶體的組成或對其進行鑒定(例如參見《美國藥典》第23卷，1995年，方法941，第1843至1845頁，馬里蘭州Rockville市U.S.Pharmacopeial Convention公司出版；Stout等，X-Ray Structure Determination；A Practical Guide，紐約州紐約市MacMillan公司1968年出版)。由結晶化合物得到的衍射圖對于一給定的結晶形態(tài)往往是特征性的，雖然弱的或很弱的衍射峰在由連續(xù)批號的結晶得到的同樣的衍射圖中可能并不總是出現。尤其是在試樣中有顯著量的其它結晶形態(tài)(如形態(tài)1的結晶已部分地水合為形態(tài)2的結晶)的情況下。譜帶〔尤其是在低角度X射線入射值(低2θ)〕的相對強度可能會因為由例如結晶習性、粒徑和其它測定條件的差異而產生的優(yōu)勢取向效果而變化。因此，衍射峰的相對強度并非最后對所針對的結晶形態(tài)是特征性的。相反，更應該注意的是峰的相對位置而不是它們的幅度，以決定是否AD結晶是本文中所述的形態(tài)中的一種。不同試樣中的各XRD峰一般在為寬峰的約0.3-12θ度內。較寬的XRD峰可由緊靠在一起的二個或多個峰組成。對于孤立的尖峰，在連續(xù)的XRD分析中，通常在約0.12θ度內發(fā)現峰。假定在連續(xù)的XRD分析中用相同的儀器測定一種化合物的XRD光譜，則XRD峰位置的差異主要地是由于試樣制備過程中或試樣自身純度的差異所致。當我們在一給定的位置(例如約6.9)鑒定出一獨立的XRD尖峰時，這意味著該峰為6.9±0.1。當我們在位于一給定的2θ值的給定位置鑒定出一XRD寬峰時，這意味著該峰在該2θ值±0.3。
應指出的是，在本發(fā)明中，無需依賴在高度純化的對照試樣中觀察到的全部譜帶；甚至一條譜帶也可能對給定的AD結晶形態(tài)是特征性的，如6.9對于形態(tài)1而言。鑒定應集中在譜帶的位置和總體圖譜，尤其是選擇各種結晶形態(tài)所獨特的譜帶。
另外的可視需要用來鑒定結晶AD的診斷技術包括差示掃描量熱測定(DSC)、熔點測定和紅外吸收光譜測定(IR)。DSC測定當結晶由于其晶體結構發(fā)生變化或晶體熔融而吸收或釋放熱時的熱轉變溫度。在連續(xù)的分析中，熱轉變溫度和熔點典型地是在約2℃之內，通常在約1℃之內。當我們說一個化合物具有一給定值的DSC峰或熔點時，這是指該DSC峰或熔點在±2℃之內。DSC提供了一種辨別不同AD結晶形態(tài)的替代方法。不同的結晶形態(tài)可(至少是部分地)根據其不同的轉變溫度特性而加以識別。IR測定由與分子中對應于光而振動的基團相關的特定化學鍵引起的紅外光吸收。DSC和/或IR可由此而提供能用來描述AD結晶的理化信息。
形態(tài)1用單晶X射線結晶學來表征形態(tài)1的AD的特性。用在3.00＜2θ＜45.00°的范圍內I＞10σ的3242次反射的測定位置進行最小二乘法精化而得到的晶胞常數和取向矩陣具體如下a＝12.85，b＝24.50，c＝8.28，β＝100.2°，Z＝4，空間群Cc。
形態(tài)1的XRD圖通常在約6.9(典型地是在約6.9和約20.7，或者更典型地是在約6.9、約15.7和約20.7，一般，至少在約6.9、約11.8、約15.7和約20.7)有峰。典型地，在約6.9的XRD峰或者通常(1)該峰加上一個或二個另外的峰或者(2)在約6.9的峰加上一個或二個其它的峰加上差示掃描量熱測定數據或熔點數據足以將形態(tài)1的結晶與其它形態(tài)區(qū)分開來或者對形態(tài)1自身進行鑒定。形態(tài)1的光譜通常在約6.9、約11.8、約12.7、約15.7、約17.2、約20.7、約21.5、約22.5和約23.3有峰。形態(tài)1的XRD圖通常在約6.9和/或11.8和/或15.7和/或17.2和/或20.7和/或23.3中的任一個(或它們的組合)有峰。圖1是典型的形態(tài)1的結晶X射線衍射圖。但應理解，圖1-26僅是舉例說明，其它結晶AD制劑的特征性表示法可與上述描述不同。
形態(tài)1的AD是無水的，含很少或測不出的水。一般地，形態(tài)1的結晶一般含小于約1％(典型地小于約0.5％，通常小于約0.2％)的水。而且，形態(tài)1的結晶一般含小于約20％(典型地小于約10％，往往小于約1％，通常小于約0.1％)的非結晶AD。經常地，形態(tài)1的結晶不含非結晶AD，這可由DSC、XRD或放大100倍的偏振光顯微術測定出來。如果是從結晶化浴中適宜地回收出來的話，形態(tài)1的AD典型地基本上無結晶化溶劑，即，所含結晶化溶劑典型地小于約1％，通常小于約0.6％，并不含束縛于晶格的溶劑分子。
形態(tài)1結晶一般具有由光散射測得的約為25-150μm(通常約為30-80μm)的中值體積。形態(tài)1的制劑通常均含長度在約1-200μm之間的結晶，制劑中各結晶的典型的最大尺寸約為60-200μm。在一些形態(tài)1的制劑中，制劑中的約1-10％的結晶的最大尺寸在250μm以上。圖4-10所示的形態(tài)1的結晶典型地具有片晶、板晶、針晶或不規(guī)則習性。也出現形態(tài)1結晶的集合體，其典型的直徑范圍約為25-150μm。
形態(tài)1的結晶在約102℃有DSC吸熱轉變(參見圖2)，并具有基本上如圖3所示的IR光譜。不同的形態(tài)1結晶的制劑的堆積密度約為0.15-0.60g/mL，通常約為0.25-0.50g/mL，表面積約為0.10-2.20m2/g，通常約為0.20-0.60m2/g。由此，通過使用Cu-Kα輻射的，以在約6.9和/或約11.8和/或約15.7和/或約20.7中的任一個(或它們的組合)的度2θ表示的XRD光譜峰和由在102℃的差示掃描量熱測定測得的吸熱轉變對形態(tài)1的AD的特性進行表征。形態(tài)1的AD的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在約6.9±0.1、約11.8±0.1、約15.7±0.1、17.2±0.1、約20.7±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和由在102.0±0.2℃的差示掃描量熱測定測得的吸熱轉變峰和/或在99.8±0.2℃的吸熱開始溫度進行表征。
刑態(tài)2形態(tài)2的XRD圖(其實施例示于圖11)通常在約22.0(典型地是在約18.3和約22.0，或者更典型地是在約9.6、約18.3和約22.0，一般，至少在約9.6、約18.3、約22.0和約32.8)有峰。這4個XRD特征峰中的任何3個或4個，或者通常(1)4個峰或(2)這些峰中的2個或3個加上差示掃描量熱測定數據或熔點數據足以將形態(tài)2的結晶與其它形態(tài)區(qū)分開來或者對形態(tài)2自身進行鑒定。形態(tài)2的XRD圖通常在約8.7-8.9、約9.6、約16.3、約18.3、約18.9、約19.7、約21.0-21.3、約21.4、約22.0、約24.3、約27.9、約30.8和約32.8有峰。
形態(tài)2的結晶是AD二水合物，除了水之外，它們通?；旧喜缓蓹z測出的結晶化溶劑。形態(tài)2的結晶一般含小于約30％(典型地小于約10％，往往小于約1％，通常小于約0.1％)的非結晶AD。結晶一般不含非結晶AD，這可由DSC、XRD或放大100倍的偏振光顯微術測定出來。形態(tài)2的結晶通常具有由光散射測得的約為15-85μm(一般約為25-80μm)的中值體積。形態(tài)2的制劑通常均含長度在約1-300μm之間的結晶。形態(tài)2的結晶在約73℃有DSC吸熱轉變(參見圖12)和并具有基本上如圖13所示的IR光譜。
由此，通過使用Cu-Kα輻射的、以在約9.6和/或約18.3和/或約22.0和/或約32.8中的任一個(或它們的組合)的度2θ表示的XRD光譜峰和由在73℃的差示掃描量熱測定測得的吸熱轉變對形態(tài)2的AD的特性進行表征。形態(tài)2的AD的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在9.6±0.1、18.3±0.1、22.0±0.1、24.3±0.1和32.8±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和由在72.7±2℃的差示掃描量熱測定測得的吸熱轉變峰和/或在69.5±2℃的吸熱開始溫度進行表征。
形態(tài)3形態(tài)3的XRD圖(例如圖14所示的)通常在約8.1(典型地是在約8.1和約25.4，或者更典型地是在約8.1、約19.4和約25.4)有峰。典型地，這3個XRD特征峰中的任何1個或2個，或者通常(1)這些峰中的3個或4個或(2)這些峰中的2個或3個加上差示掃描量熱測定數據或熔點數據足以將形態(tài)3的結晶與其它形態(tài)區(qū)分開來或者對形態(tài)3自身進行鑒定。形態(tài)3的AD在約85℃具有由差示掃描量熱測定測得的吸熱轉變(圖15)。形態(tài)3的光譜通常在約8.1、約8.7、約14.1、約16.5、約17.0、約19.4、約21.1、約22.6、約23.4、約24.2、約25.4和約30.9有峰。
與形態(tài)1和2不同，形態(tài)3的結晶在晶格中約含1個當量的甲醇。甲醇通常來自結晶化溶劑。但形態(tài)3基本上不含其它了檢測出的溶劑或水。形態(tài)3的結晶一般含小于約20％(典型地小于約10％，往往小于約1％，通常小于約0.1％)的非結晶AD。結晶不含非結晶AD，這可由DSC、XRD或放大100倍的偏振光顯微術測定出來。形態(tài)3的結晶通常具有由光散射測得的約為20-150μm(一般約為30-120μm)的中值體積。形態(tài)3的制劑通常均含長度在約1-300μm之間的結晶。
形態(tài)4形態(tài)4的XRD圖(例如圖16所示的)通常在約26.3(典型地是在約26.3和約31.7，或者典型地是在約26.3、約31.7和約15.2，或者通常在約26.3、約31.7、約15.2和約21.0)有峰。通常，這4個XRD特征峰，或者通常(1)這些峰中的3個或(2)這些峰中的2個或3個加上差示掃描量熱測定數據或熔點數據足以將形態(tài)4的結晶與其它形態(tài)區(qū)分開來或者對形態(tài)4自身進行鑒定。形態(tài)4的AD在約121℃和約148℃具有由差示掃描量熱測定測得的吸熱轉變(圖17)。形態(tài)4的光譜通常在約9.8、約15.2、約15.7、約18.1、約18.3、約21.0、約26.3和約31.7中的任何一個(或它們的組合)有峰。由此，通過使用Cu-Kα輻射的、以在約15.2和/或約21.0和/或約26.3和/或約31.7中的任一個(或它們的組合)的度2θ表示的XRD光譜峰和由在約121.3℃和約148.4℃的差示掃描量熱測定測得的吸熱轉變對形態(tài)4的AD的特性進行表征。形態(tài)4的AD的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在9.8±0.1、18.1±0.1、21.0±0.1、26.3±0.1和31.7±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和由在121.3±2℃和148.4±2℃的差示掃描量熱測定測得的吸熱轉變峰進行表征。
有機酸和無機酸的結晶鹽圖18-26是由結晶鹽或AD與有機酸和無機酸的復合物得到的XRD譜。這些鹽是半硫酸鹽或復合物(圖18)、氫溴酸鹽或復合物(圖19)、硝酸鹽或復合物(圖20)、甲磺酸(CH3SO3H)鹽或復合物(圖21)、乙磺酸(C2H5SO3H)鹽或復合物(圖22)、β-萘磺酸鹽或復合物(圖23)，α-萘磺酸鹽或復合物(圖24)，(S)-樟腦磺酸鹽或復合物(圖25)和琥珀酸鹽或復合物(圖26)。這些XRS譜顯示了許多表征化合物特性的峰并使本領域的技術人員可將各化合物與其它結晶形態(tài)區(qū)分開來。
圖18是在約8.0、約9.5、約12.0、約14.6、約16.4、約17.0、約17.5-17.7、約18.3、約19.0、約20.2、約22.7、約24.1和約28.2中的任一個(或它們的組合)的度29具有特有的XRD峰的半硫酸鹽或復合物。該鹽或復合物有約131-134℃的熔點。它可由在約12.0、約14.6、約16.4、約17.5-17.7有4個特征峰得到表征。由此，其特性可進一步表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并具有約131-134℃的熔點。該AD半硫酸鹽的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在8.0±0.1、12.0±0.1、14.6±0.1、16.4±0.1和17.5-17.7±0.3的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和131-134±2℃的熔點進行表征。
圖19是在約13.2、約14.3、約15.9、約17.8、約20.7、約21.8、約27.2和約28.1中的任一個(或它們的組合)的度2θ具有特有的XRD峰的氫溴酸鹽或復合物。該鹽或復合物在約196-199℃加熱后分解。由此，其特性可表征為在約13.2、約14.3、約17.8和約28.1具有4個特有的XRD峰。本領域的技術人員可進一步地將該化合物表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并在約196-199℃加熱后分解。該AD氫溴化物也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在13.2±0.1、14.3±0.1、17.8±0.1、20.7±0.1和27.2±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和196-199±2.0℃的分解點進行表征。
圖20是在約8.0、約9.7、約14.1、約15.2、約16.7、約17.1、約18.3、約18.9、約19.4、約20.0、約21.2、約22.3、約23.2、約24.9、約27.6、約28.2、約29.4和約32.6中的任一個(或它們的組合)的度2θ具有特有的XRD峰的硝酸鹽或復合物。該鹽或復合物在約135-136℃加熱后分解。由此，其特性可表征為在約14.1、約23.2、約29.4和約32.6具有4個特有的XRD峰。本領域的技術人員可進一步地將該化合物表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并具有約131-134℃的熔點。該AD硝酸鹽的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在8.0±0.1、14.1±0.1、23.2±0.1、29.4±0.1和32.6±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和135-136±2℃的分解點進行表征。
圖21是在約4.8、約15.5、約16.2、約17.5、約18.5、約20.2、約24.8、約25.4和約29.5中的任一個(或它們的組合)的度2θ具有特有的XRD峰的甲磺酸鹽或復合物。該鹽或復合物的熔點約為138-139℃。由此，其特性可表征為在約4.8、約15.5、約20.2和約24.8具有4個特有的XRD峰。本領域的技術人員可進一步地將該化合物表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并具有約138-139℃的熔點。該AD甲磺酸鹽的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在4.8±0.1、15.5±0.1、16.2±0.1、20.2±0.1和24.8±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和138-139±2℃的熔點進行表征。
圖22是在約4.4、約8.8、約18.8、約23.0-23.3和約27.3中的任一個(或它們的組合)的度2θ具有特有的XRD峰的乙磺酸鹽或復合物。該鹽或復合物的熔點約為132-133℃。由此，其特性可表征為在約4.4、約8.8、約18.8和約27.3具有4個特有的XRD峰。本領域的技術人員可進一步地將該化合物表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并具有約132-133℃的熔點。該AD乙磺酸鹽的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在4.4±0.1、8.8±0.1、18.8±0.1、23.0-23.3±0.3和27.3±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和132-133±2℃的熔點進行表征。
圖23是在約9.8、約13.1、約16.3、約17.4、約19.6、約21.6-22.3、約23.4、約24.1-24.5和約26.6中的任一個(或它們的組合)的度2θ具有特有的XRD峰的β-萘磺酸鹽或復合物。該鹽或復合物的熔點約為156-157℃。由此，其特性可表征為在約13.1、約17.4、約23.4和約26.2具有4個特有的XRD峰。本領域的技術人員可進一步地將該化合物表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并具有約156-157℃的熔點。該AD的β-萘磺酸鹽的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在9.8±0.1、13.1±0.1、17.4±0.1、23.4±0.1和26.2±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和156-157±2℃的熔點進行表征。
圖24是在約8.3、約9.8、約11.5、約15.6、約16.3、約16.7-17.4、約19.6、約21.0、約22.9、約23.7、約25.0和約26.1中的任一個(或它們的組合)的度2θ具有特有的XRD峰的α-萘磺酸鹽或復合物。該鹽或復合物的熔點約為122-128℃。由此，其特性可表征為在約9.8、約15.6、約19.6和約26.1具有4個特有的XRD峰。本領域的技術人員可進一步地將該化合物表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并具有約122-128℃的熔點。該AD的α-萘磺酸鹽的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在9.8±0.1、15.6±0.1、19.6±0.1、21.0±0.1和26.1±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和122-128±2℃的熔點進行表征。
圖25是在約5.4、約6.5、約13.7、約15.5、約16.8-17.2、約19.6、約20.4-20.7、約21.2、約23.1、約26.1、約27.5、約28.4、約31.3和約32.2中的任一個(或它們的組合)的度2θ具有特有的XRD峰的(S)-樟腦磺酸鹽或復合物。該鹽或復合物的熔點約為160-161℃。由此，其特性可表征為在約5.4、約6.5、約13.7和約16.8-17.2具有4個特有的XRD峰。本領域的技術人員可進一步地將該化合物表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并具有約160-161℃的熔點。該AD的(S)-樟腦磺酸鹽的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在5.4±0.1、6.5±0.1、13.7±0.1、16.8-17.2±0.3和19.6±0.1的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和160-161±2℃的熔點進行表征。
圖26是在約4.7、約9.5、約10.6、約14.9、約16.3、約17.4、約17.9、約19.9、約20.8、約22.1、約23.9-24.2、約26.5、約27.6和約28.2中的任一個(或它們的組合)的度2θ具有特有的XRD峰的琥珀酸鹽或復合物。該鹽或復合物的熔點約為122-124℃。由此，其特性可表征為在約4.7、約9.5、約14.9和約17.4具有4個特有的XRD峰。本領域的技術人員可進一步地將該化合物表征為具有這些XRD峰中的3個或4個并具有約122-124℃的熔點。該AD琥珀酸鹽的特性也可通過使用Cu-Kα輻射的、以在9.5±0.1、14.9±0.1、16.3±0.1、17.4±0.1和23.9-24.2±0.3的度2θ表示的明顯的XRD光譜峰和122-124±2℃的熔點進行表征。
本發(fā)明的實例包括含結晶鹽(如AD的上面表征的鹽)和藥用賦形劑的組合物。其它實例包括通過將結晶鹽(如AD的上面表征的鹽)與藥用賦形劑接觸來制備藥用組合物的方法。其它實例包括由將結晶鹽(如AD的上面表征的鹽)與藥用賦形劑接觸的方法而產生的產物。
合成AD的方法下面的簡圖A是制備AD和形態(tài)1的AD結晶的代表性的工藝流程圖。
簡圖A 視需要，本領域技術人員可增大或減小簡圖A中所示且在下面描述的工藝步驟的規(guī)模。
合成對甲苯磺酰氧基甲膦酸二乙酯的方法在一個實例中，描述了按以下方法進行的簡圖A的步驟1所示的對甲苯磺酰氧基甲膦酸二乙酯的合成。在具有惰性氣氛(如氮氣)的反應器中將亞磷酸二乙酯(0.8kg)、仲甲醛(0.22kg)與三乙胺(0.006kg)在甲苯(2.69kg)中的混合液加熱至87℃(84-110℃)并在攪拌下持續(xù)2小時，然后加熱至回流并維持回流1小時，直至反應完畢。用TLC(可檢測是否有痕量的亞磷酸二乙酯)監(jiān)測反應是否完畢并通過1H-NMR譜中在δ8.4-8.6ppm處是否有大于1％的亞磷酸二乙酯峰來加以確認。將上述溶液冷卻至約1℃(-2℃至4℃)并加入對甲苯磺酰氯(1.0kg)，然后在10℃以下徐徐加入三乙胺(0.82kg)(在發(fā)熱反應中用約3-6小時)。將所得混合液溫熱至22℃(19-25℃)并攪拌至少5小時(典型地約為16-24小時)，直至反應完畢。用TLC(可檢測是否有痕量的對甲苯磺酰氯)監(jiān)測反應是否完畢并通過1H-NMR(不再檢測出在δ7.9ppm的對甲苯磺酰氯雙峰)加以確認。濾去固體并用甲苯(0.34kg)進行沖洗。將洗液和濾液合并并用水(每次1.15kg)洗滌2次，或者視需要用水(1.15kg)、5％碳酸鈉水溶液(3.38kg)依次洗滌并用水(每次1.15kg)洗滌2次。若出現乳化，可往該第一有機/水混合液中加入鹽水。將有機相在50℃以下真空蒸餾〔干燥損失(LOD)不超過10％，用卡爾-費歇爾滴定測得的水含量不超過0.5％〕，得到約85-95％純的不含甲苯的油狀標題化合物。冷卻后，該油狀化合物變得粘稠。
合成9-(2-羥乙基)腺嘌呤的方法在一個實例中，描述了按以下方法進行的簡圖A的步驟2所示的9-(2-羥乙基)腺嘌呤的合成。在具有惰性氣氛(如氮氣)的反應器中將氫氧化鈉(6g)加入到腺嘌呤(1.0kg)與熔融的碳酸亞乙酯(0.72kg，m.p.37-39℃)在DMF(2.5kg)中的料漿中，攪拌下將混合物加熱至125℃(95℃至回流)，直至反應完畢(若混合液溫度在110℃至回流，則約為3-9小時，若混合物溫度在95-110℃，則約為15-48小時)。用HPLC監(jiān)測反應是否完畢(殘留的腺嘌呤不超過0.5％)。將混合物冷卻至50℃以下并用甲苯(3.2kg)稀釋。將得到的槳料冷卻至3℃(0-6℃)，并攪拌至少2小時。將料漿進行過濾，并將濾餅用冷(0-5℃)甲苯(每次0.6kg)洗滌2次。將濾餅在35-70℃真空干燥(由1H-NMR或LOD測得的甲苯不超過2％)，視需要，可磨碎，由此得到為白色至灰白色粉末狀固體的標題化合物。
合成9-〔2-(二乙基膦羧基甲氧基)乙基〕腺嘌呤的方法本化合物是用含醇鈉(C1-6烷基)和9-(2-羥乙基)腺嘌呤的組合物制備的。將醇鈉(典型地是叔丁醇鈉或異丙醇鈉)與9-(2-羥乙基)腺嘌呤在溶劑(如DMF)中于約20-30℃接觸約1-4小時。用1摩爾當量的9-(2-羥乙基)腺嘌呤與約1.2-2.2摩爾當量的醇鈉進行的合成通常產生良好的結果。
在一個實例中，描述了按以下方法進行的簡圖A的步驟3所示的9-〔2-(二乙基膦羧基甲氧基)乙基〕腺嘌呤的合成。在具有惰性氣氛(如氮氣)的反應器中將9-(2-羥乙基)腺嘌呤(1.0kg)和DMF(4.79kg)的料漿加熱至約130℃(125-135℃)并持續(xù)30-60分鐘。劇烈攪拌下將反應器內容物迅速地冷卻至約25℃(20-30℃)，用約1-3小時分批加入叔丁醇鈉(0.939kg)，同時保持劇烈攪拌并將內容物溫度保持在約25℃(20-30℃)。當已加入了所有的叔丁醇鈉之后，進行攪拌并將該溫度維持約15-45分鐘。然后將反應器冷卻至約-10℃(-13℃至0℃)，用約5-10小時加入對甲苯磺酰氧基甲基膦酸二乙酯(根據純度計算，為2.25kg)在DMF(1.22kg)中的溶液。將混合物保持在約-5℃(-10℃至0℃)，直至反應完畢，反應完畢通常是在加入了最后一份的對甲苯磺酰氧基甲基膦酸二乙酯之后約0.5-2小時。用HPLC〔殘留的9-(2-羥乙基)腺嘌呤不超過3％〕監(jiān)測反應是否完畢。加入冰乙酸(0.67kg)，使反應鍋溫度控制在20℃以下。將混合物在約22℃(15-25℃)攪拌約15-45分鐘。將冷卻的混合物真空濃縮，直至蒸餾結束，然后將內容物冷卻至低于40℃。加入二氯甲烷(16.0kg)，將內容物在20℃(15-25℃)攪拌至少1小時。如DMF含量相對于總固體〔NaOTs(甲苯磺酸鈉)、NaOAc、Et2PMEA〕大于20％(用1H-NMR測得)，則將混合物真空濃縮，直至蒸餾結束，將內容物冷卻至低于40℃，加入二氯甲烷(16kg)，將反應器內容物在約20℃(15-25℃)攪拌至少1小時。加入硅藻土(0.5kg)并將約20℃(15-25℃)的內容物攪拌至少1小時。濾去固體，用二氯甲烷(每次1kg)沖洗3次。將不超過80℃的濾液和沖洗液真空濃縮，直至蒸餾結束，將反應器內容物冷卻至40℃，往殘余物中加入二氯甲烷(5.0kg)，將約25℃(20-40℃)的內容物攪拌至使固體溶解。將所得的不超過80℃的溶液真空濃縮，直至蒸餾結束。加入二氯甲烷(7.0kg)，將約25℃(20-40℃)的內容物攪拌至使固體溶解。如DMF含量與二乙基PMEA相比大于12％，則將不超過80℃的混合物真空濃縮，將內容物冷卻至低于40℃，加入二氯甲烷(7.0kg)，將約25℃(20-40℃)的內容物攪拌至使固體溶解。往混合物中加水(0.8kg)，并在約25℃(22-30℃)攪拌約15-45分鐘，由此對混合物進行洗滌。將混合物靜置4小時，使混合物分相，分出水相和有機相。按以下方法用二氯甲烷(每次1.5kg)反萃取水相2次攪拌15-45分鐘，使溶液保持在約25℃(22-30℃)，然后使相分離至少2小時。接著將不超過80℃的合并的有機相真空濃縮，直至蒸餾結束。加入甲苯(3.0kg)，在約25℃(22-30℃)攪拌約15-45分鐘，將所得的不超過80℃的混合液真空共沸。加入甲苯(3.0kg)，將混合液加熱至約80℃(75-85℃)，攪拌約15-45分鐘，用約60-90分鐘冷卻至低于30℃，然后冷卻至約0℃(-3℃至6℃)。在約0℃緩緩攪拌至少12小時之后，將所得料漿過濾，用冷(約0-6℃)甲苯(每次約0.2kg)漂洗濾餅3次。將濕濾餅在約50℃(35-65℃)真空干燥，并將干燥后的產物磨碎。根據除水情況(由卡爾-費歇爾滴定測得的水含量不超過0.3％)監(jiān)測產物的干燥。
在步驟3的整個過程中保持惰性氣氛。
合成PMEA的方法在一個實例中，描述了按以下方法進行的簡圖A的步驟4所示的PMEA的合成。在具有惰性氣氛(如氮氣)的反應器中將二乙基PMEA(1.00kg)、乙腈(2.00kg)和三甲基溴硅烷(1.63kg)的混合液加熱至回流溫度并在攪拌下維持約1-3小時，直至反應完畢。用31P-NMR或HPLC(未檢測到二乙基PMEA且檢測出的一乙基PMEA不超過2％)監(jiān)測反應是否完畢。將溶液在≤80℃真空蒸餾至半固體，然后將其放入水(2.00kg)中，溫熱至約55℃(52-58℃)并攪拌約30-60分鐘使所有的固體溶解。將所得混合液冷卻至約22℃(19-25℃)，用氫氧化鈉水溶液調節(jié)至pH3.2，將內容物加熱至約75℃(72-78℃)，直至稠度變小(約15-120分鐘)，冷卻至約3℃(0-6℃)，攪拌至少3小時(3-6小時)。將料漿進行過濾，用水(1.00kg)漂洗濾餅。將濕餅懸浮在水(3.75kg)中，并在劇烈攪拌下將懸浮液加熱至約75℃(72-78℃)。攪拌約2小時之后，將料漿冷卻至約3℃(0-6℃)，并再攪拌至少2小時。將料漿進行過濾，將濾餅用水(每次0.50kg)和丙酮(每次1.00kg)依次分別漂洗2次。將分離出來的固體在不超過約90℃的溫度下真空干燥至低含水量(由卡爾-費歇爾滴定測得的水含量不超過0.5％)，得到白色晶狀的PMEA。將產物磨至細顆粒大小。
合成AD的方法制備AD的代表性的方法包括將1摩爾當量的PMEA以約1∶5.68-56.8的體積之比懸浮在NMP中，然后在溫和至適度的攪拌下往溶液中加入約2-5摩爾當量(往往約2.5-3.5，通常約3摩爾當量)的三乙胺(“TEA”)。接著加入約3-6摩爾當量(往往約4.5-5.5摩爾當量，通常約5摩爾當量)的新戊酸氯甲酯，得到反應混合物。反應混合物的制備通常是在室溫下進行的。加熱反應混合物并維持在66℃以下的溫度(典型地約為28-65℃，通常是在約55-65℃)使反應進行約2-4小時。將反應混合物加熱至約28-65℃所需的時間不是嚴格的，可根據反應混合物的體積和用來加熱混合物的裝置的容量而變化。溫和至適度的攪拌使固體在反應過程中保持于懸浮液中，并使反應物在反應容器中的四處飛濺降低到最小程度。由本方法得到的產物含由使所列反應物(通常在給定的條件下)反應的方法產生的AD。
在一個實例中，描述了按以下方法進行的簡圖A的步驟5所示的PMEA向AD的轉化。在具有惰性氣氛(如氮氣)的反應器中將1-甲基-2-吡咯烷酮(3.15kg)、PMEA(1.00kg)、三乙胺(1.11kg)和新戊酸氯甲酯(2.76kg)的混合液加熱至約60±3℃(不超過66℃)并適度攪拌≤4小時(1-4小時)，直至31P-NMR或HPLC(單(POM)PMEA不超過15％)顯示反應完畢。用乙酸異丙酯(12.00kg)稀釋混合物并冷卻至25±3℃，攪拌約30分鐘。濾去固體，用乙酸異丙酯(5.0kg)洗滌。將有機相合并，用水(每次3.70kg)洗滌，其方法是，在25±3℃適度攪拌約15-45分鐘，重復2次。將水洗液合并，用乙酸異丙酯(每次4.00kg)進行反萃取，其方法是，在25±3℃攪拌15-45分鐘，重復2次。將合并的有機相在25±3℃用水(1.80kg)洗滌，其方法是，攪拌15-45分鐘，然后將有機相在約35±5℃(不超過40℃)真空濃縮至原體積的約40％。精煉過濾(1μm濾器)和用1.5kg乙酸異丙酯漂洗之后，將有機相在真空下于35±5℃(不超過50℃)繼續(xù)濃縮，直至得到蒼色油。該蒼色油通常含約6-45％(一般約為30-42％)的AD。
使AD結晶化的方法使AD從有機油中結晶出來通常采用以下方法進行的(1)在AD合成反應中使用與作為反應物的PMEA的量相比相對地小體積的NMP(即，小于約10mL/gPMEA)和/或(2)真空蒸餾進行足夠長時間(即，至少約4-6小時)，使真空蒸餾之后仍被束縛于有機油中的乙酸異丙酯的量減小到最低程度。反應起始物質(例如NMP或PMEA)在油中的聚集物可占結晶化溶液的約2-20％，但一般小于約1-2％。當從有機油中制備結晶時，在加入結晶化溶劑之前，在油中有約20-45％(往往約30-42％，通常約35-42％)的AD。
可視需要，從例如超飽和的溶液中使AD結晶出來。在這樣的超飽和溶液中會有晶核形成，并容易地導致結晶形成。晶核形成的速率通常會隨著超飽和度和溫度增大而增大。超飽和溶液通常通過改變溫度(通常使之降低)、溶劑蒸發(fā)或改變溶劑組成(如通過加入可混溶非溶劑或劣溶劑)來制備。將這些方法組合(如減壓蒸發(fā)，在增大溶質濃度的同時使溶液冷卻)也會產生超飽和AD溶液。
結晶AD的制備方法是，在AD組合物中形成AD結晶，通常是由在含至少約6％(典型地至少約30％，通常至少約35％)的AD的結晶化混合物中的AD溶液形成AD結晶。一般是通過制備含約6-45％AD和約55-94％結晶化溶劑的AD溶液進行結晶的。室溫下AD在大多數結晶化溶劑中的溶解度上限約為10-41％。AD不能自由地溶解在某些結晶化溶劑中，如AD在二正丁基醚中的溶解度小于約0.3mg/mL，在AD溶液中加入這些溶劑可增加溶液的飽和度或超飽和度。通常使用含一定量的AD的有機溶液，所述一定量接近AD在結晶化溶劑中的溶解度上限。下限量(約6％)是連續(xù)產生結晶的溶液中所需的AD的最小量。某些溶劑(如甲醇或二氯甲烷)可含約50％以上的AD。
結晶化溫度不是嚴格的，可隨著結晶化過程通常在一溫度范圍內自發(fā)地進行而變化。在約35℃(尤其是約45-50℃)以上結晶可能會導致產率下降和/或與結晶相關的雜質增多。結晶化通常在約-5℃至約50℃(往往約0-35℃，通常約4-23℃)進行?？梢曅枰诘陀诩s-5℃下進行以提高結晶產率或提高結晶形成速率，但結晶化溫度低可能會使副產物增加。因此，一般地，較方便和經濟的方法是，使用接近環(huán)境溫度(約15-23℃)的溶劑或大多數冷卻裝置或方法可容易地達到的典型的冷卻溫度(0-4℃)的溶劑。當溶液含較低濃度(即，約10-20％)的AD時，在較低溫度(即，約0-15℃)的結晶往往會提高結晶產率。
將含AD和結晶化溶劑的溶液加熱至室溫以上(較好的是約35℃)似乎有助于結晶，可能是提高了晶核形成速率所致。將結晶化混合物加熱至約35℃的時間不是嚴格的，可根據所用裝置的容量而變化，一般在約20-45分鐘之間。然后停止加熱，通過冷卻或讓溫度回落約10-120分鐘而使溫度降低。在此期間，結晶形成并在至少約4-36小時里繼續(xù)形成。結晶化通常在結晶化混合物達到35℃后立即或不久即開始。在溶液達到35℃之后讓溫度下降至0-23℃進行結晶。結晶化是在溫和至適度的攪拌下或無攪拌下進行的，典型地是在適度攪拌下進行的，一般會給出良好的結果。
不論所用的溶劑是什么，通常在約5分鐘至約72小時可發(fā)現有結晶生成，一般在約10-16小時會給出良好的結果。結晶化時間不是嚴格的，可進行變化，雖然結晶化時間較短(約30-90分鐘)會導致AD回收率下降。當往含其它有機溶劑(如NMP)的反應混合液中加入結晶化溶劑時，結晶通常在溫度達到約35℃或更低時立刻開始，且溶液變得混濁。
結晶在常用的實驗室或制造車間用的裝置(如圓底燒瓶、錐瓶、不銹鋼反應器或搪玻璃反應器)中進行。結晶時通常使用標準的實驗室規(guī)?；蛏虡I(yè)制造規(guī)模的機械攪拌和溫度控制裝置。
當使用含二個不同溶劑的結晶化體系時，一般先將極性最大的溶劑加入到AD中，然后加入極性最小的溶劑。如有不溶解的組分，可視需要在已加入了第一結晶化溶劑之后例如通過過濾或離心的方法將其從溶液中除去。例如，當使用丙酮和二正丁基醚由含AD和來自AD合成反應的其它組分的有機溶液中制備形態(tài)1的結晶時，通常先加入丙酮。同樣地，可在加入二正丁基醚之前加入正丁醇或者在二正丁基醚之前加入乙酸乙酯。含第一極性溶劑的溶液會由于可能存在的單(POM)PMEA的沉淀而變得混濁。接著，可通過標準的物理方法(如過濾或離心)將單(POM)PMEA從溶液中除去，然后加入第二溶劑，如二正丁基醚。
用來制備形態(tài)1的結晶的結晶化溶劑一般含小于約0.2％的水。當結晶化溶劑中有顯著量(即，約1-2％)的水時，結晶過程中會產生不同量的形態(tài)2的結晶，這些形態(tài)2的結晶也與形態(tài)1的結晶一起被回收。視需要，可用傳統(tǒng)的方法(包括使用無水試劑或用分子篩或其它已知的干燥劑將溶劑干燥)降低結晶化反應中的水的量。視需要，可降低含AD(如得自含副產物和上述有機油等溶劑的AD合成反應)的有機溶液中可能存在的水的量，其方法可以是在加入結晶化溶劑之前使用共沸助溶劑(如乙酸異丙酯)來減少水。
在一個實例中，描述了按以下方法進行的簡圖A的步驟6所示的形態(tài)1的AD的結晶。將含上述AD的蒼色油溶解在丙酮(1.0kg)中并加熱至35±3℃，用二正丁基醚(5.00kg)分約4份進行稀釋，并同時維持約32-38℃的溫度和適度攪拌。用約30-60分鐘(不超過90分鐘)將透明的溶液冷卻至約25-30℃，用小量形態(tài)1的AD結晶(約5g)作為晶種加入到溶液中，然后用30-60分鐘(不超過90分鐘)將溶液冷卻至22±3℃并同時保持適度攪拌。在22±3℃繼續(xù)適度攪拌至少約15小時。將所得料漿過濾，用丙酮(0.27kg)在二正丁基醚(2.4kg)(1∶9v/v)中的預混合液洗滌濾餅。視需要，可加入預混合的丙酮(0.57kg)和二正丁基醚(4.92kg)并在攪拌下將濕固體的溫度在22±3℃維持約15-24小時，使?jié)窆腆w進一步純化。然后將固體濾出，用預混合的丙酮(0.27kg)和二正丁基醚(2.4kg)洗滌濾餅。將維持在≤35℃(約25-35℃)的濾餅真空干燥約1-3日(LOD不超過0.5％)，得到白色至灰白色粉末狀固體的形態(tài)1的AD。將干燥過的產物磨碎。
本發(fā)明包括制備形態(tài)2的結晶的方法。形態(tài)2的結晶可方便地通過將形態(tài)1的結晶水合而制得，雖然水合物可通過使AD從含一定量的水的結晶化溶劑中結晶出來而得到。所述一定量是指不干擾結晶化但能提供水合所需的水的量。水可以以冰、液體水或水汽的形式存在。通常，將水在形成形態(tài)2的結晶的條件下與形態(tài)1的結晶物理接觸。視需要，可將形態(tài)1的結晶與相對濕度至少約為75％的氣體(如空氣、二氧化碳或氮氣)中的水汽接觸，使形態(tài)1的結晶完全轉化成形態(tài)2的結晶。將形態(tài)1的結晶通常與相對濕度至少約為75％的空氣在約18-30℃(或典型地在室溫)接觸約1-10日，使其完全轉化成形態(tài)2。然而，室溫下，形態(tài)1的結晶在相對濕度為54％的空氣中基本上是非收濕性的，放置13日后，其水含量未見增大。
將形態(tài)1的結晶水合成形態(tài)2的結晶的過程會產生含形態(tài)1與形態(tài)2的AD結晶的混合物的組合物，其中，形態(tài)1的AD結晶的比例為約100％至0％，其余的AD是形態(tài)2的結晶。因此，在轉化過程中，形態(tài)2的結晶的比例從0％增加到100％。這些組合物可包括各種制劑(如片劑)。
如上面所指出的，形態(tài)2的結晶也可用以下方法制備在水的存在下(如在可用來制備形態(tài)1的結晶的結晶化溶劑中有約2-5％的水)使AD結晶。與前面的形態(tài)1的結晶相同，結晶的形成基本上在例如約0-23℃需約4-36小時。這樣的制劑可含一些形態(tài)1的結晶，但視需要，如上面所述的，可通過暴露于水汽中或通過往結晶化溶劑中再加入足夠的水而將任何殘余的形態(tài)1的結晶轉化成形態(tài)2的結晶。
制備形態(tài)3的結晶的方法通常是讓結晶在AD的無水甲醇溶液中生長。得到在甲醇中的AD的方法可以是，室溫下將足夠的非結晶或結晶AD在甲醇中混合約10-15分鐘或視需要將固體AD溶解，得到至少約為100-150mgAD/mL甲醇的溶液。室溫下AD在甲醇中的溶解度大于600mg/mL。然后，在約-5℃至約25℃(通常在約0-23℃)結晶化進行約4-48小時。
用乙酸異丙酯作為唯一的結晶化溶劑而得到的結晶通常主要是棒晶并有少許針晶，這些棒晶可較長，即，長度可達約500μm。圖8是通過在約15℃于乙酸異丙酯中結晶而得到的長度約為20-500μm的棒晶。
視需要，可通過往溶液中加入AD種晶(但添加種晶不是強制性的)來促進或加快由超飽和及飽和或某些不飽和AD溶液進行的結晶化。例如，形態(tài)1的AD可通過往上述有機溶液(例如，有機油，其中，已往該油中加入了結晶化溶劑)中添加小量的結晶形態(tài)1的AD但不加熱至35℃而得到。作為種晶而加入的結晶可促進形態(tài)1的結晶的形成。類似地，形態(tài)2和形態(tài)3的結晶可通過往具有各種結晶形態(tài)的合適的溶液中加入種晶而得到，例如，可由含乙酸乙酯和約2％水的有機溶液得到形態(tài)2的結晶，或者，可由AD在無水甲醇中的飽和溶液得到形態(tài)3的結晶。用作種晶的結晶量可視需要進行變化，以得到最佳結果。一般地，往每升AD重結晶溶液中加入約0.1-1.0g結晶就足夠了。
視需要(例如為了提高結晶的純度)，可將結晶AD重結晶。
例如，用與上述用來制備形態(tài)1的結晶的方法基本相同的方法將形態(tài)1的AD重結晶。例如，用丙酮和二正丁基醚進行重結晶的方法是，在約20-35℃以約0.2-0.4g/mL的比率將結晶AD溶解在丙酮中，然后視需要，例如通過將溶液(它通常是混濁的)過濾或離心的方法除去不溶解的組分。不溶解的組分通常是單(POM)PMEA。接著，將溶液溫熱至約35-40℃并相對于每0.2-0.4g結晶(這些結晶最初是用于重結晶的)加入約5.2-6.2mL(通常約為5.7mL)的溫(約35-40℃)二正丁基醚。然后，用約4-4.5小時讓重結晶混合物冷卻至室溫。若所用體積較小(例如約為1-3L)，重結晶混合液將迅速地冷卻至室溫。冷卻混合液的時間不是嚴格的，可變化。
重結晶一般在加入二正丁基醚并完成混合后即立刻開始，接著，可讓重結晶進行約4-36小時(通常約6-24小時)。在室溫重結晶約4-36小時之后再將重結晶混合液冷卻至約4-10℃并讓混合物在該降低的溫度下放置約1-6小時通?？稍俚玫揭恍┙Y晶。通常，重結晶中使用的AD量將足以形成飽和的或接近飽和的溶液，即，溶劑為丙酮時約為0.4g/mL。在適度攪拌下，AD在約2-8分鐘內即完全溶解在丙酮中。將在該最初的混合期之后仍不溶解的物質除去和舍棄，然后往含第一結晶化溶劑的混合液中加入溶劑對中的第二個極性較小的溶劑。
視需要，可用單一溶劑(如丙酮)將形態(tài)1的結晶重結晶。在該實例中，將足夠的結晶在室溫下溶解在溶劑中，得到飽和的或接近飽和的溶液，然后除去不溶解組分。接著，與前面使用丙酮和二正丁基醚溶劑進行的重結晶相同，將混合液溫熱至35℃并讓其冷卻。
形態(tài)2的結晶的重結晶將按與形態(tài)1的結晶的重結晶相同的方式進行，但將使用溶解在重結晶溶劑中的形態(tài)2的結晶。視需要，與本文所述的將形態(tài)1的結晶轉化成形態(tài)2的結晶一樣，可將由重結晶而得到的形態(tài)1的結晶轉化成形態(tài)2的結晶。也可將形態(tài)2的結晶重結晶成形態(tài)1的結晶。在這種情況下，視需要，可使用分子篩或其它溶劑干燥方式以限制形態(tài)2的結晶溶解在第一溶劑中之后和重結晶過程中存在的水的量。也可用含約1-2％水的溶劑將形態(tài)2的結晶重結晶，以直接得到形態(tài)2的結晶。
按與本文中所述的形態(tài)3的結晶的制備方法相同的方法將形態(tài)3的結晶在甲醇中重結晶。用AD的飽和的或接近飽和的(即，至少約為0.6g/ml)甲醇溶液制備結晶。
視需要，可通過某些有機酸和無機酸與AD的腺嘌呤中的堿性中心進行酸加成而制備鹽。酸加成鹽的制備一般采用標準方法，包括將AD游離堿溶解在含選定的酸或酸的抗衡離子的水溶液、水-醇溶液或水-有機溶液中，視需要，可將其結晶，且視需要，可同時將溶液蒸發(fā)、攪拌或冷卻。通常使游離堿在含酸或抗衡離子的有機溶液中反應，在這種情況下，鹽通常直接分離出來，或者可用結晶作為種晶加入到溶液中或濃縮溶液，以促進鹽沉淀。實例包括含AD、溶劑(通常是結晶化溶劑)和磺酸(如C6-16芳基磺酸、C4-16雜芳基磺酸或C1-16烷基磺酸)的溶液。實例還包括含AD、溶劑(通常是結晶化溶劑)和羧酸(如三元羧酸、二元羧酸、一元羧酸，含約1-12個碳原子的這些羧酸中的任一個)的溶液。
藥學制劑和給藥途徑含結晶AD(通常是形態(tài)1的結晶，以下稱活性成分)的本發(fā)明的組合物是通過任何適合所治療的疾病的途徑給藥的，合適的途徑包括經口、直腸、經鼻、局部(包括眼睛、口腔和舌下)、陰道和胃腸外(包括皮下、肌肉、靜脈內、皮內、鞘內和硬腦膜外)給藥。一般地，本發(fā)明的組合物經口給藥，但含結晶AD的組合物可通過上述其它方法中的任一種進行給藥。
雖然AD可以純化合物的形式給藥，但以藥學制劑的形式為佳。本發(fā)明的制劑包含AD及一種或多種藥用賦形劑或載體(“合乎要求的賦形劑”)，視需要，還可含其它治療成分。賦形劑必須在與制劑的其它成分相容和對患者無害方面“合乎要求”。
制劑可以是那些適合局部或全身給藥的制劑，例如那些適合經口、直腸、經鼻、口腔、舌下、陰道或胃腸外(包括皮下、肌肉、靜脈內、皮內、鞘內和硬腦膜外)給藥的制劑。制劑是單元劑量形式的，由制藥領域周知的方法中的任一種制得。這些方法包括將活性成分與構成一種或多種輔助成分的載體或賦形劑混合的步驟。一般地，制備制劑的方法是，將活性成分均勻和緊密地與液體載體或磨細的固體載體或它們的兩者混合，接著，視需要，將所得產物干燥或成形。
本發(fā)明的適合口服的制劑可以以下形式提供分散的單元，如各含預定量的活性成分的香囊、偏囊劑或片劑；粉劑或顆粒劑；在水性液體或非水性液體中的溶液或懸浮液；或水包油型液體乳液或油包水型液體乳液。活性成分也可以大丸劑、舐劑或糊劑的形式提供。
本發(fā)明的制劑包括含AD和合乎要求的賦形劑的組合物。這些賦形劑包括粘合劑、稀釋劑、崩解劑、防腐劑、分散劑、助流劑(抗粘附劑)和潤滑劑。視需要，這些組合物還可含單元藥劑，它包括片劑和膠囊。視需要，這些組合物可以是含約5-250mg(通常約為5-150mg)AD的片劑，包括每片含約60或120mgAD的片劑。視需要，這些片劑可含約約1-10％粘合劑、約0.5-10％崩解劑、約50-60％稀釋劑或約0.25-5％潤滑劑。這些組合物還可以是含液體(例如水)、AD和一種或多種合乎要求的賦形劑的濕顆粒，所述合乎要求的賦形劑選自粘合劑、稀釋劑、分散劑和崩解劑。
片劑可通過任選地與一種或多種輔助成分或賦形劑一起壓縮或模壓而成。片劑一般每片含約5-250mg(通常約30-120mg)AD(通常主要是形態(tài)1的AD)，例如每片含約60mg或120mg形態(tài)1的AD，其中，僅有限量(通常小于約20％)的形態(tài)2的結晶、其它結晶類型或非結晶的AD存在。壓縮片劑可通過將自由流動形態(tài)(如粉末或顆粒)的AD(視需要，可與粘合劑、崩解劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合)在合適的機器上壓縮而成。模壓片劑可通過將通常用液體稀釋劑潤濕的粉末狀化合物的混合物在合適的機器上模壓而成。視需要，可以對片劑進行包衣和印涂、壓花或刻痕，并可配制成能使所含的活性成分緩釋或控釋。實例包括用以下方法制得的產物將含結晶AD(通常是形態(tài)1或形態(tài)2的結晶)和合乎要求的賦形劑(例如干燥過的濕顆粒，這些干燥過的濕顆粒含例如乳糖、預糊化淀粉、交聯羧甲基纖維素鈉、滑石粉和硬脂酸鎂)的混合物壓縮。
含結晶AD和賦形劑的組合物還可含L-肉堿或L-肉堿的鹽(例如L-肉堿-L-酒石酸鹽(2∶1))。新戊酸在體內從AD的新戊酰氧基甲基部分的釋放似乎使L-肉堿在患者體內的濃度下降。含L-肉堿-L-酒石酸鹽和AD的片劑可降低新戊酸在減少服用AD患者體內的L-肉堿方面的作用。臨床醫(yī)生在考慮了患者體內L-肉堿的耗減程度之后會明白需添加的L-肉堿的量。
用于片劑或相關劑型的典型的制劑成分包括一種或多種粘合劑、稀釋劑、崩解劑或潤滑劑。這些賦形劑可增加制劑的穩(wěn)定性、有助于制造過程中的片劑壓縮或有助于制劑在被攝取之后的崩解。片劑通常是用以下方法制備的將一種或多種賦形劑與AD混合并濕法制粒，然后將所得顆粒濕磨并進行干燥，使干燥失重在約3％以下。視需要，可以有約1-10％的粘合劑(如能提高片劑的加工性能的預糊化淀粉或聚乙烯吡咯酮)。視需要，可以有約0.5-5％的崩解劑(如微晶纖維素或交聯羧甲基纖維素鈉等交聯纖維素)以促進片劑溶解。視需要，可以有約40-60％的稀釋劑(如單糖或二糖)以掩飾AD的物理性能或促進片劑溶解。視需要，可以有約0.25-10％的潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化硅)以促進片劑在制造過程中吐出。視需要，片劑可含清除劑(如賴氨酸或明膠)以捕捉AD貯存過程中可能釋放的甲醛。賦形劑在例如美國藥學協會所編的Handbook of Pharmaceutical Excipients(1994年第2版)中的以下章節(jié)中已有描述“預糊化淀粉”篇(第491-493頁)、“交聯羧甲基纖維素鈉”篇(第141-142頁)、“乳糖一水合物”篇(第252-261頁)、“滑石粉”篇(第519-521頁)、“硬脂酸鎂”篇(第280-282頁)。
貯存形態(tài)1的AD制劑的典型的容器會限制容器中的水的量。典型的單元制劑或藥劑中包裝有干燥劑(如硅膠或活性炭或它們兩者)。容器通常是感應密封的。僅封入硅膠即足以使含AD的片劑在環(huán)境溫度下貯存時保持干燥。一個分子的AD中有二個新戊酰氧基甲基部分。因此，硅膠適合作為含一個或多個新戊酰氧基甲基部分的治療劑等化合物的單一干燥劑。容器的透水性在例如馬里蘭州Rockville市美國藥典公約公司的美國藥典第23章“容器-滲透”中已有描述。
對于眼或其它外部組織(如口和皮膚)的感染，較好的是，將制劑以局部用藥膏或霜劑的形式給藥，所述藥膏或霜劑含例如0.01-10重量％的活性成分(包括活性成分的量在0.1-5％之間，以0.1重量％，如0.6重量％、0.7重量％等增量)，較好的是，所含活性成分為0.2-3重量％，最好為0.5-2重量％。當配制成藥膏時，可將活性成分與石蠟或可與水混溶的藥膏基一起使用?；蛘撸蓪⒒钚猿煞峙c水包油型霜劑基一起配制成霜劑。
視需要，霜劑基的水相可包括例如至少30重量％的多元醇〔即，具有二個或多個羥基的醇，如丙二醇、1，3-丁二醇、甘露醇、山梨糖醇、丙三醇和聚乙二醇(包括PEG400)和它們的混合物〕。局部用制劑可適宜地含能促進活性成分吸收或透過皮膚或其它作用部位的化合物。這些透皮促進劑的例子包括二甲亞砜和相關的類似物。
本發(fā)明的乳劑的油相可以已知方式由已知成分構成。雖然油相可僅由乳化劑構成，但宜由至少一種乳化劑與脂肪或油或它們的兩者的混合物構成。較好的是，油相含親水性乳化劑和作為穩(wěn)定劑的親脂性乳化劑。含油和脂肪兩者也是較佳的。同時，有或沒有穩(wěn)定劑的乳化劑構成乳化的蠟，同時具有油和脂肪的蠟構成乳化的藥膏基，而乳化的藥膏基形成霜劑的油性分散相。
適用于本發(fā)明的制劑的乳化劑和乳液穩(wěn)定劑包括Tween60、Span80、十八醇十六醇混合物、芐醇、十四醇、單硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸鈉。
適用于制劑的的油或脂肪是根據是否能得到所需化妝性能而進行選擇的。因此，較好的是，霜劑應是非油脂的、不污染的和可洗產品，并具有合適的稠度，以避免從藥管或其它容器中滲漏。可使用直鏈或支鏈的、一元或二元烷基酯，如di-isoadipate、異鯨蠟醇硬脂酸酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯，肉豆蔻酸異丙酯、油酸壬酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯或稱為Crodamol CAP的支鏈酯的摻合物，優(yōu)選最后的三個酯。它們可單獨使用或合用，取決于所需的性能。或者，可使用高熔點的油脂，如白軟石蠟和/或液體石蠟或其它礦物油。
適用于向眼睛局部給藥的制劑還包括滴眼劑，其中，活性成分溶解或懸浮在合適的載體(尤其是適合活性成分的水性溶劑)中。活性成分在這些制劑中的濃度宜為0.01-20％，在一些實例中，為0.1-10％，在另一些實例中，約為1.0重量％。
適合在口中局部給藥的制劑包括含在調味過的基料(通常是蔗糖和阿拉伯樹膠或黃蓍膠)中的活性成分的糖錠；含在惰性基料(如明膠與甘油，或蔗糖與阿拉伯樹膠)中的活性成分的錠劑；和含在合適的液體載體中的活性成分的漱口劑。
用于直腸給藥的制劑可用合適的含例如可可脂或水楊酸酯的基料制成栓劑。
載體是固體的、適合經鼻或吸入給藥的制劑包括粒徑例如在1-500μm之間(包括粒徑在20-500μm之間，以5μm，如30μm、35μm等增量)的粉劑。載體是液體的、適合以例如噴鼻劑或滴鼻劑的形式給藥的制劑包括活性成分的水性或油性溶液。適合氣霧劑給藥的制劑可用傳統(tǒng)的方法制備，可與其它治療劑一起給藥。吸入型治療劑可容易地通過定量劑量吸入器進行給藥。
適合陰道給藥的制劑可以是含活性成分和本領域已知的合適載體的陰道栓劑、塞子、霜劑、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧劑的形式。
適合胃腸外給藥的制劑是無菌的，包括水性的和非水性的注射液，注射液可含抗氧化劑、緩沖液、制菌劑和使制劑與擬用的接受者的血液等滲的溶質；水性的和非水性的無菌懸浮液，這些懸浮液可含懸浮劑和增稠劑。制劑可以是單元劑量或多元劑量容器的形式，例如密封的安瓿和有彈性塞子的小瓶，可貯存在凍干條件下，僅需在臨用之前添加無菌液體載體(例如注射用水)。臨時的注射液和懸浮液可用先前所述種類的無菌粉劑、顆粒劑和片劑制備。較佳的單元劑量制劑是那些含活性成分的日劑量或單元日分劑量(前面已描述過)或者含其合適的一部分的制劑。
除前面具體述及的成分之外，本發(fā)明的制劑可包含其它本領域常用的與正討論的制劑的類型相關的藥劑，例如，適合口服的制劑可包含調味劑。
本發(fā)明還提供含至少一種上面定義過的活性成分和獸藥用載體的獸藥組合物。
獸藥用載體是可用于向貓、狗、馬、兔和其它動物施用組合物目的的物質，它們可以是惰性或合乎獸藥領域要求的且與活性成分相容的固體、液體或氣體。這些獸藥組合物可經口、胃腸外或任何其它所希望的途徑給藥。
本發(fā)明的化合物可用來提供含基質或吸收劑材料和作為活性成分的一種或多種本發(fā)明的化合物的控釋藥學制劑，其中，活性成分的釋放是可控制和調節(jié)的，以減少用藥頻率或為了改善化合物的藥理動力學或毒性特性。適合口服的控釋制劑(其中，分散的單元含一種或多種本發(fā)明的化合物)可用傳統(tǒng)方法制備。
本文中引用的所有文獻其內容在本文中引作參考。
實施例下面的實施例是對本發(fā)明的進一步的舉例說明而不是限定。
實施例1形態(tài)1的結晶的制備往裝有磁力攪拌棒的500mL單頸圓底燒瓶中加入PMEA(27.3g，100mmol)。在氮氣氛下再加入N-甲基吡咯烷酮(109.3mL)和三乙胺(50.6g，69.8mL，500mmol)，將所得懸浮液劇烈攪拌。加入新戊酸氯甲酯(75.2g，72.0mL，500mmol)并將攪拌著的懸浮液在45℃油浴中放置18.5小時。將所得的稠厚的、淡黃色懸浮液用乙酸異丙酯(1.0L)進行稀釋并攪拌1小時。通過過濾(“C”號Kimax燒結玻板漏斗)濾去固體，再用乙酸異丙酯(250mL)洗滌。合并洗液與濾液，將所得有機相用水(200mL×2)萃取。將水萃取液合并，用乙酸異丙酯(250mL×2)反萃取。將所有的有機相合并，得到1975mL。加入乙酸異丙酯，使有機相的總體積達到2.0L。為對本實驗進行內部對照，將有機相分成二個1.0L等份。在對其中的一份進行處理時，用鹽水洗滌并用硫酸鈉進行處理，而對另一份的處理則沒有這些步驟(見下面)。
直接使用標準(Büchi)旋轉蒸發(fā)器將用于該新處理方法的1.0L有機相試樣濃縮成油狀物，在整個處理過程中，浴溫為45℃，真空度為50-70mmHg。油狀物的重量為32.4g，它完全透明，看不到有鹽存在。將該油狀物用丙酮(25mL)進行稀釋，得到完全透明的溶液而看不到沉淀的鹽出現。在室溫下放置約3小時之后，該溶液仍是完全透明的。將該溶液置于設為45℃的油浴中，徐徐加入二正丁基醚(140mL)，將內部溫度保持在40℃附近。然后將燒瓶從油浴中移出，讓其冷卻至室溫并在室溫攪拌約16小時，結果，沉淀出形態(tài)1的AD。將該固體產物通過過濾(“M”號Kimax燒結玻板漏斗)收集起來。并將該固體用10％丙酮在90％二正丁基醚中的溶液(v/v，40mL)洗滌并在真空干燥箱(環(huán)境溫度，氮氣吹掃，28”真空)中干燥。得到12.2g(以50mmol反應規(guī)模計，為理論得率的48.8％)白色固體，以外標物為基準，用HPLC確定所得AD的純度為99.8％。
將剩余的1.0L有機相用作上述結果的對照，并用下述方法進行處理。將該有機相用鹽水(25mL)洗滌，用硫酸鈉(25g，干燥時間為12小時)干燥，并按前述方法進行濃縮。得到27.4g油狀物，將該油狀物按前述方法用丙酮(25mL)和丁醚(135mL)進行結晶。通過過濾收集所得固體，并按前述方法進行干燥，得到12.3g(為理論得率的48.9％)白色固體，以外標物為基準，用HPLC確定所得AD的純度為98.7％。
實施例2形態(tài)1的結晶的制備室溫下，往30加侖的搪瓷鋼反應容器(紐約州Rochester市Pfaudler公司產品，型號No.P20-30-150-115)中的3kgPMEA中加入9.7kg NMP，然后適度攪拌混合物。所用的適度攪拌足以使固體PMEA保持于懸浮液中并防止反應器內容物在飛濺在器壁上。接著加入5.6kg TEA，并再加入8.3kg新戊酸氯甲酯。然后，再加入2.7kg NMP，對來自向反應器送料的傳輸線的殘留物質進行洗滌。將溫度調節(jié)至約48℃，并在適度攪拌下將溫度在38-48℃維持18小時。待反應完畢之后，室溫下往反應器中加入48kg乙酸異丙酯并在通過過濾(TyvekTM濾器，直徑15.5”，紐約州Wall市Kavon Filter Products公司產品，型號No.1058-D)除去固體之前將所得混合物在適度攪拌下在43-48℃維持1小時。再用12kg乙酸異丙酯將反應器中的內容物洗出并過濾。將濾液移至50加侖搪瓷鋼反應容器(Pfaudler公司產品，型號No.P24-50-150-115)中并同時將反應容器的溫度維持在43-48℃。在其后的步驟中，讓溫度回落至環(huán)境溫度。
然后用22kg水洗滌混合物并劇烈攪拌約1.5-2分鐘。停止攪拌，讓相完全分離(約10分鐘)。將下層的水相(約26L)移至30加侖的搪瓷鋼反應容器中。再往留在50加侖的反應器中的有機相中加入22kg水，將反應器內容物劇烈攪拌約1.5-2分鐘。停止攪拌，讓相完全分離(約1小時40分鐘)。將下層的水相移至30加侖的搪瓷鋼反應容器中，這樣，該容器中有二份水洗液。往30加侖的反應器中的水洗液中加入24kg乙酸異丙酯，并將反應器內容物劇烈攪拌約1.5-2分鐘，然后停止攪拌足夠的時間以使相完全分離(約10分鐘)。保留上層的有機相并將其與先前保留在50加侖反應器中的有機相混合。往30加侖反應器中的水洗液中加入24kg乙酸異丙酯，并將反應器內容物劇烈攪拌約1.5-2分鐘，然后停止攪拌足夠的時間以使相完全分離(約20分鐘)。保留上層的有機相丙將其與先前保留在50加侖反應器中的有機相混合。將有機相合并，然后用鹽水溶液(7kg水，3.9kg NaCl)洗滌并劇烈攪拌約1.5-2分鐘，接著停止攪拌以使相完全分離(約5分鐘)。將鹽水相舍棄。往反應器中加入18kg硫酸鈉并將混合物劇烈攪拌約1.5-2分鐘，然后讓其靜置約1小時。此時，有機相的重量為98.5kg。
輕輕地攪拌反應器內容物并用袋式濾器(American Felt and Filter公司產品，型號No.RM C S/S 122)過濾。將含AD的有機相移至干凈的50加侖反應器中并通過在33-41℃和26-30”Hg的真空進行真空蒸餾，以除去揮發(fā)性有機物直至收集到50-55L冷凝物。通過用具有棉紗纏繞的濾筒的筒式濾器(Memtec America公司產品，型號No.910044)進行真空過濾，將有機相從50加侖反應器移至干凈的30加侖反應器中并再用8.6kg乙酸異丙酯洗滌。將溶液在5℃保持過夜，然后在26-41℃真空濃縮3小時，得到約7-9L油狀物。往油狀物中加入5.4kg丙酮，得到透明溶液。接著攪拌該溶液，并溫熱至43℃，用約4分鐘加入27kg室溫的二正丁基醚，接著，將溶液重新溫熱至43℃。再用約4分鐘加入15kg二正丁基醚并使溶液溫度回到43-44℃，然后讓溫度用約7小時15分鐘回落至20℃。在此過程中，在反應器中有AD結晶形成。通過過濾(Nutche濾器)回收結晶并干燥。得到2.40kg AD(45.1％)。
實施例3形態(tài)1的結晶的制備室溫下，往12L的三頸圓底燒瓶中加入546.3g PMEA(2摩爾)，然后加入2.18L的NMP。開始緩慢的機械攪拌(足以使固體PMEA懸浮但不會使燒瓶內容物飛濺)，使PMEA懸浮，然后往燒瓶中加入1.39L的TEA，接著加入1.44L的新戊酰氧基甲基氯。用氮氣吹掃燒瓶并將反應物在30-45分鐘內加熱至60℃。將反應物保持在60℃并輕輕攪拌2-2.5小時。用HPLC確定反應是否完畢。當通過面積歸一法確定AD的產率達到65-68％時，往燒瓶中加入7.48L冷(0-3℃)乙酸異丙酯，使反應終止。將攪拌提升至適度攪拌(有適中的旋渦但內容物不飛濺)，并在適度攪拌下將混合物在室溫維持30分鐘，此時，有固體(例如TEA·HCl、單(POM)PMEA)從溶液中沉淀出來。
接著，用玻璃燒結漏斗(40-60μm)過濾反應混合物并在室溫下用2.51L乙酸異丙酯洗滌濾餅。
接著，室溫下用2.0L飲用水萃取濾液2次。將水相合并并用2.51L乙酸異丙酯反萃取2次(室溫)。將所有的有機相合并并用985mL飲用水萃取1次。分離出有機相，在35-39℃的溫度和約30mmHg的真空下進行濃縮，得到1.24kg黃色油狀物。
將油狀物移至12L的三頸燒瓶中，用約30分鐘冷卻至室溫。往燒瓶中加入628mL的室溫的丙酮，接著加入3.14L二正丁基醚。開始緩慢的攪拌并用約5-20分鐘將溶液加熱至35℃。當溫度達到35℃時，停止加熱，溫度未繼續(xù)升高。用約30分鐘將溶液冷卻至30℃以下(20-29℃)。在冷卻過程中，形態(tài)1的結晶在結晶化混合液中形成，與此同時，維持緩慢的攪拌，并在室溫繼續(xù)緩慢地攪拌14-20小時。接著將結晶濾出(TyvekTM濾器)，用2L的10％丙酮/90％二正丁基醚(v/v)溶液洗滌濾餅。室溫下將濾餅在氮氣吹掃著的干燥箱中干燥，直至其重量達到恒定(約2日)。
所得形態(tài)1的AD的得率為由PMEA算得的理論值的50-54％，根據面積歸一法用HPLC測得的純度為97-98.5％。
實施例4形態(tài)1的結晶的制備室溫下，往3L的三頸圓底燒瓶中加入273.14g PMEA(1摩爾)，然后加入1.09L的NMP。開始緩慢的機械攪拌(足以使固體PMEA懸浮但不會使燒瓶內容物飛濺)，使PMEA懸浮，然后往燒瓶中加入0.418L的TEA(3當量)，接著加入0.72L的新戊酰氧基甲基氯(5當量)。用氮氣吹掃燒瓶并在30-45分鐘內將反應物加熱至60℃。將反應物保持在60℃并輕輕攪拌2-2.5小時。用HPLC確定反應是否完畢。當通過面積歸一法確定AD的產率達到68-70％時，往燒瓶中加入3.74L冷(0-3℃)乙酸異丙酯，使反應終止。將攪拌提升至適度攪拌(有適中的旋渦但內容物不飛濺)，并在適度攪拌下讓混合物在室溫靜置30分鐘，此時，有固體(例如TEA·HCl、單(POM)PMEA)從溶液中沉淀出來。用玻璃燒結漏斗(40-60μm)過濾反應混合物并在室溫下用1.26L乙酸異丙酯洗滌濾餅。接著，室溫下用1.01L飲用水萃取濾液，進行2次。將水相合并并用1.26L乙酸異丙酯反萃取2次(室溫)。將所有的有機相合并并用492mL飲用水萃取1次。分離出有機相，在35-39℃的溫度和約30mmHg的真空下進行濃縮，得到0.6kg黃色油狀物。將油狀物移至3L的三頸燒瓶中，用約30分鐘冷卻至室溫。往燒瓶中加入314mL的丙酮(室溫)，接著加入1.57L二正丁基醚。開始緩慢的攪拌并用約5-20分鐘將溶液加熱至35℃。當溫度達到35℃時，停止加熱，溫度未繼續(xù)升高。用約30分鐘將溶液冷卻至30℃以下(20-29℃)。在冷卻過程中，形態(tài)1的結晶于結晶化混合液中形成，與此同時，維持緩慢的攪拌。再往結晶化混合液中加入1.15L二正丁基醚(室溫)。在室溫繼續(xù)緩慢地攪拌約16小時。將結晶濾出(TyvekTM濾器)，用1L的10％丙酮/90％二正丁基醚(v/v)溶液洗滌濾餅，然后濾去溶液。室溫下將濾餅在氮氣吹掃著的干燥箱中干燥，直至其重量達到恒定(約2日)。
所得形態(tài)1的AD的得率為由PMEA算得的理論值的55-58％，根據面積歸一法用HPLC測得的純度為99-100％。
實施例5用乙酸異丙酯作為結晶化溶劑制備AD結晶室溫下，在氮氣氛中往裝有攪拌裝置的500mL的三頸圓底燒瓶中的PMEA(10.93g)中加入43.7mL NMP。攪拌混合物以使PMEA懸浮。接著，室溫下加入TEA(27.9mL)，然后在室溫下加入新戊酰氧基甲基氯(28.9mL)。將溫度升至45℃并將懸浮液在45℃攪拌12小時。將所得稠厚的黃色懸浮液用乙酸異丙酯(150mL)在室溫進行稀釋并在室溫劇烈攪拌75分鐘。用“C”號燒結玻板漏斗濾取固體并在室溫用50mL乙酸異丙酯洗滌固體。將濾液合并，用去離子水洗滌2次，每次使用40mL去離子水。將合并的水洗液用40mL乙酸異丙酯反萃取，進行2次。將所有的有機相合并，用20mL去離子水洗滌1次，讓水相和有機相分離和在17℃接觸2小時。在此期間，在水相-有機相界面觀察到有長棒晶形成。用“M”燒結玻板漏斗濾集結晶并干燥，得到512mg長棒晶。
實施例6用HPLC分析AD
用HPLC分析結晶形態(tài)1的AD以測定其純度、分離或鑒定副產物以及舉例說明副產物作為AD參比標準物的應用。用面積歸一法分析所存在的化合物的水平。HPLC分析在標準品或試樣制備的12小時內進行。
使用裝有定容試樣注射器、可變波長吸收檢測器和電子積分器的液相色譜儀，所用的色譜柱是伊利諾伊斯州Deerfield市Alltech公司生產的Alltech MixedAnion ExchangeTMC8(7μm，孔徑100，250mm×內徑4.6mm)，所用的保護柱也是Alltech公司產品(20mm×內徑4.6mm，用Pellicular C8粒子干裝)。使用的水是色譜級的。使用的化學品是色譜級的乙腈(密執(zhí)安州Muskegon市Burdick & Jackson公司產品)、無水分析級磷酸一鉀(KH2PO4，肯塔基州Paris市Mallinckrodt公司產品)、無水分析級磷酸二鉀(K2HPO4，肯塔基州Paris市Mallinckrodt公司產品)和A.C.S.試劑級磷酸(肯塔基州Paris市Mallinckrodt公司產品)。在使用之前，將磷酸鉀水溶液過濾(0.45μm尼龍66膜濾器，麻薩諸塞州Woburn市Rainin公司產品)和脫氣。也可使用這些成分和化合物的等價物。還可使用等價的裝置和/或試劑以得到類似的結果。
移動相A由pH6.0的磷酸鉀緩沖液∶乙腈70∶30v/v組成，通過將1400mL的200mM磷酸鉀緩沖液(pH6.0)與600mL乙腈混合而制得。移動相B由pH6.0的磷酸鉀緩沖液∶乙腈50∶50v/v組成，通過將1000mL的200mM磷酸鉀緩沖液(pH6.0)與1000mL乙腈混合而制得。
在進行試樣分析之前，用移動相A以1.2mL/min的流速在室溫下使HPLC柱平衡1小時。以25分鐘為一個流程，對5μL含副產物的AD試樣(約1mg/mL溶液)進行分析，流速為1.2mL/min，在最初的1分鐘，使用移動相A，接著通過線性梯度，在19分鐘后轉換成100％移動相B。然后以100％移動相B將色譜柱保持5分鐘。
含AD的試樣通過準確地稱取約25mgAD試樣或制劑并將AD溶解在最終體積為25.0mL的試樣溶劑中而制得。試樣溶劑通過將200mL磷酸鉀緩沖液(3.40g磷酸一鉀/L水，用磷酸調節(jié)至pH3.0)與800mL乙腈混合并平衡至室溫而制得。化合物是根據其洗脫時間和/或保留時間加以鑒定的。在這樣的梯度溶劑體系中，AD通常在約9.8分鐘洗脫。單(POM)PMEA在約6.7分鐘洗脫，PMEA在約3.5分鐘洗脫。
實施例7形態(tài)1的結晶的物理特性表征通過XRD分析形態(tài)1的結晶，其方法是，將約100-150mg結晶加載到鋁架上，然后將該鋁架放置到在衍射計(GE型XRD-5，通過Nicolet自動單元實現自動化操作)中。以0.05°/1.5秒的掃描速率在4-35度2θ之間對形態(tài)1的結晶進行掃描，其方法是，將結晶暴露于X射線發(fā)生器，該X射線發(fā)生器在40KV和-20mA運作，使用帶石墨單色儀(ES Industries公司產品)和閃爍檢測器的標準聚焦銅X射線管(Varican CA-8)。計算所用的X射線波長的加權平均值為CuKα1.541838。形態(tài)1的AD結晶在約6.9、11.8、12.7、15.7、17.2、20.7、21.5、22.5和23.3有特征性XRD峰(以度2θ表示)。形態(tài)1的代表性的XRD圖見圖1。
還用差示掃描熱量計對形態(tài)1的結晶進行了分析，所得差示熱分析圖見圖2，其特征性吸熱轉變在約102.0℃，開始溫度約為99.8℃。差示熱分析圖是在氮氣氛下以10℃/min的掃描速率得到的。試樣不密封于DSC裝置中的容器中，而是在環(huán)境壓力下在DSC裝置中進行分析。用差示掃描熱量計(TA Instruments公司產品，帶2200型控制器的2910型DSC)得到熱量測定掃描。用約5mg的AD得到差示熱量分析圖。差示掃描熱量測定法已有描述(例如可參見馬里蘭州Rockville市U.S.Pharmacopeial Convention公司出版的《美國藥典》1995年第23卷方法891)。
用傳統(tǒng)的熔點分析法測得形態(tài)1的結晶的熔點。分析是用裝有FP81型測定池的Mettler FP90型中央處理器按照廠商的使用說明書進行的。試樣在初始溫度63℃平衡30秒鐘，然后溫度以1.0℃/min的速率上升。形態(tài)1的結晶在99.1-100.7℃之間熔化。
用Perkin-Elmer1650型FT-IR分光光度計按照廠商的使用說明書得到形態(tài)1的結晶的紅外吸收(IR)光譜。含約10重量％(5mg)的形態(tài)1的結晶和約90重量％(50mg)的干燥(真空下在60℃干燥過夜)過的溴化鉀(Aldrich公司產品，IR級)的半透明的丸片通過將二種粉末在一起研磨以得到細粉而得到。IR光譜學已有描述(例如可參見馬里蘭州Rockville市U.S.PharmacopeialConvention公司出版的《美國藥典》1995年第23卷方法197；R.T.Morrison等，Organic Chemistry第3版第405-412頁，Boston市Allyn and Bacon公司1973年出版)。在對試樣進行掃描之前，將分光光度計試樣室用高純度的約6磅/英寸2的氮氣吹掃至少5分鐘，以使二氧化碳在本底掃描中的吸收干擾降低至≤3％。形態(tài)1的結晶的紅外吸收光譜(KBr，cm-1)在約3325-3275、3050、2800-1750、1700、1625、1575-1525、1200-1150、1075和875有特征性譜帶。形態(tài)1的代表性的紅外吸收光譜見圖3。
形態(tài)1的結晶通常在干燥時呈不透明的白色或灰白色粉末。由給定的制劑得到的結晶通常是多分散性的且具有包括片晶、針晶、板晶以及片晶、針晶和板晶的集合體在內的結晶習性。形態(tài)1的結晶通常長約1-300μm，為不規(guī)則的片形，有破邊或角邊。在低溫(通常約2-4℃)用丙酮和二正丁基醚作為結晶化溶劑由制劑得到的形態(tài)1的結晶通常是含大部分針晶和一些板晶的集合體。圖4-7是通過在15℃以上的溫度于丙酮和二正丁基醚中結晶而得到的形態(tài)1的結晶的照片。這些照片顯示，片晶或板形和針形結晶的長度在約10-250μm之間。圖9是在約2-4℃于丙酮和二正丁基醚中結晶而得到的形態(tài)1的結晶。照片顯示，板形和針形結晶集合體的直徑在約30-120μm之間。集合體中的各結晶具有角邊。
由卡爾-費歇爾滴定發(fā)現形態(tài)1的結晶的含水量小于1％。本發(fā)明者基本上按現有技術所描述的方法(例如可參見馬里蘭州Rockyille市U.S.PharmacopeialConvention公司1990年出版的《美國藥典》第1619至1621頁)進行了含水量分析。
實施例8形態(tài)2的結晶的制備室溫下，通過在相對濕度為94％的大氣中培養(yǎng)3日，將形態(tài)1的結晶轉化成成形態(tài)2的二水合物。在從形態(tài)1轉化成形態(tài)2的過程中，得到形態(tài)1和形態(tài)2結晶的混合物。而在最初的形態(tài)1的制劑中沒有可檢測出的形態(tài)2。形態(tài)2的結晶隨著時間而增加。3日培養(yǎng)結束時，最終的形態(tài)2的制劑不含可檢測出的形態(tài)1的結晶。
實施例9形態(tài)2的結晶的物理特性表征用與形態(tài)1的相同的方法通過XRD分析形態(tài)2的結晶。形態(tài)2的AD結晶在約8.7-8.9、9.6、16.3、18.3、18.9、19.7、21.0、21.4、22.0、24.3、27.9、30.8和32.8有特征性XRD峰(以度2θ表示)。形態(tài)2的代表性的XRD圖見圖11。
還用與形態(tài)1的相同的方法通過差示掃描量熱測定對形態(tài)2的結晶進行了分析，所得差示熱分析圖見圖12，其特征性吸熱轉變在約72.2℃，開始溫度約為69.5℃。
用傳統(tǒng)的熔點分析法測得形態(tài)2的結晶的熔點。分析是用與形態(tài)1的相同的方法進行的。形態(tài)2的結晶在70.9-71.8℃之間熔化。
用與形態(tài)1的相同的方法得到形態(tài)2的IR光譜(見圖13)。該IR光譜(KBr，cm-1)在約3300-3350、3050、2800-1750、1700、1625、1575-1525、1200-1150、1075和875有特征性譜帶。這些譜帶與形態(tài)1的結晶的譜帶類似，但形態(tài)2在約3500另有一條與水相關的O-H鍵拉伸帶。
由卡爾-費歇爾滴定發(fā)現形態(tài)2的結晶的含水量為6.7％。本發(fā)明者基本上按現有技術所描述的方法(例如可參見馬里蘭州Rockville市U.S.PharmacopeialConvention公司1990年出版的《美國藥典》第1619至1621頁)進行了含水量分析。
實施例10形態(tài)3的結晶的制備室溫下，將足量的形態(tài)1的結晶(約250mg)溶解在無水甲醇(約2mL)中，得到溶液。該溶液通過混合約10-15分鐘直至結晶溶解而得到。讓溶液不加攪拌地靜置約10-48小時，然后從溶液中回收形態(tài)3的結晶。
實施例11形態(tài)3的結晶的物理特性表征用與形態(tài)1的相同的方法通過XRD分析形態(tài)3的結晶。將形態(tài)3的AD結晶表征為基本上在約8.1、8.7、14.1、16.5、17.0、19.4、21.1、22.6、23.4、24.2、25.4和30.9具有以度2θ表示的XRD峰。形態(tài)3的代表性的XRD圖見圖14。
實施例12PMEA的合成和純化將用于AD合成和結晶的PMEA進行純化，以提高產物產率和純度。室溫下，往含548.8g二乙基PMEA的12L三頸圓底燒瓶中加入637.5mL乙腈。通過適度攪拌將(有適中的旋渦但燒瓶內容物不飛濺或基本不飛濺)使二乙基PMEA溶解。用氮氣吹掃燒瓶并徐徐(約2-5分鐘)加入803.8g三甲基溴硅烷。將燒瓶內容物在回流溫度(65℃)加熱2小時，直至根據面積歸一法用HPLC測得殘余的單乙基PMEA≤1％。在≤80℃和-20mmHg餾去揮發(fā)物質。然后往燒瓶中加入1500mL水(室溫)。接著，用25％w/v氫氧化鈉將溶液的pH調節(jié)至3.2。再將燒瓶內容物在75℃加熱2小時，然后用15-20分鐘將內容物冷卻至3-4℃并在3-4℃保持3-3.5小時。接著用燒結玻板濾器將燒瓶內容物進行過濾，用150mL冷(3-4℃)水洗滌濾餅。將洗滌過的濾餅移至干凈的12L三頸燒瓶中，往燒瓶中加入2025mL水并將燒瓶加熱至75℃并在該溫度保持2小時。停止加熱，將燒瓶冷卻并在3-4℃保持3-3.5小時。然后用燒結玻板濾器將燒瓶內容物過濾并用150mL冷(3-4℃)水洗滌濾餅，接著用1050mL丙酮(室溫)洗滌。在-20mmHg的條件下，將濾餅在65-70℃加熱，使其重量達到恒定。用面積歸一法或外標標準HPLC分析測得PMEA產率為85.4％，純度為99％。
實施例13形態(tài)1的單晶X射線結晶分析將約200mg批號為840-D-1的AD藥物溶解在200mg丙酮中。將溶液加熱至約60℃。在60℃往溶液中徐徐加入二正丁基醚(環(huán)境溫度)，直至出現最初的痕量的沉淀。然后振蕩混合物并將其重新加熱至約60℃，形成透明和均一的溶液。讓該溶液靜置過夜，使其冷卻至環(huán)境溫度，并在環(huán)境溫度保持約2日。所得結晶是高度多分散性的，一些結晶長達1mm。潷出上清液，用總量約為1mL的二正丁基醚將殘留的結晶循環(huán)洗滌4次，以除去殘留的上清液。通過單晶X射線衍射法對大小約為150×200×320μm的結晶進行分析。
所有的測定是用帶石墨單色Mo-Kα輻射(λ＝0.71069)的Siemens SMART衍射儀進行的。用ParatoneNTM烴油將結晶固定在玻璃纖維上。在-135±1℃采集數據。用w掃描(0.3°/幀，每幀10秒鐘)收集倒晶格空間的任意半球的畫面。
將5967次積分反射(量出最大2θ為51.6°)進行平均，得到3205次Friedel唯一反射(Rint＝0.044)。用各向異性地精化過的非氫原子對結構進行解析。在理想位置導入氫原子。根據2438次觀察到的的反射(具有I＞3σ和306個可變參數)的全矩陣最小二乘法精化會聚在R＝0.048(Rw＝0.054)。
由最小二乘法精化(該最小二乘法精化使用在與C-中央單斜晶胞對應的3.00＜2θ＜45.00°的范圍內的I＞10σ的3242次反射的測定位置)得到的晶胞常數和取向矩陣具體如下a＝12.85，b＝24.50，c＝8.28，β＝100.2°，Z＝4，空間群Cc。
下面的表顯示由研究得到的數據。AD的圖象見圖27和28。
形態(tài)1的AD的部分原子坐標a
a括號中的數字表示末位有效數字的標準偏差形態(tài)1的AD的部分原子坐標a(續(xù))
a括號中的數字表示末位有效數字的標準偏差形態(tài)1的AD的部分原子坐標a(續(xù))
a括號中的數字表示末位有效數字的標準偏差圖29是形態(tài)1的AD的粉末X射線衍射圖(a)觀察值，(b)計算值。
實施例14形態(tài)4的結晶的制備將形態(tài)1的AD(10.05g)溶解在溫熱(約35℃)的異丙醇(50mL)中，然后用燒結玻板漏斗(M燒結玻板，ASTM 10-15μm)過濾。將濾液加入到攪拌中的含溶解的富馬酸(2.33g)的異丙醇溶液(35℃)中，讓所得混合液自然地冷卻至室溫。當AD溶液被加入到異丙醇溶液中之后不久，形態(tài)4的結晶〔即，AD·富馬酸(1∶1)〕即自然地形成于混合液中。讓結晶在室溫形成2日，通過過濾加以回收，并在室溫于氮氣氛中真空干燥。
實施例15形態(tài)4的結晶的制備將形態(tài)1的AD(1005.1g)溶解在溫熱(約45℃)的異丙醇(3.0L)中。在適度攪拌下，用約20分鐘將溫熱的AD溶液加入到含溶解的富馬酸(233.0g)的12L燒瓶中的攪拌中的的異丙醇(6.0L)溶液(約45℃)中。將混合液在40-45℃保持10分鐘，當有稠厚的沉淀物形成時停止溫熱。將AD溶液全部加入之后數分鐘，混合液變得混濁，幾分鐘之后，沉淀物變得稠厚，此時，停止攪拌(混合液溫度為42℃)。讓沉淀形成1小時。開始緩慢的攪拌并繼續(xù)約2小時，接著將12L燒瓶浸沒在室溫的水中，并緩慢攪拌過夜，以利于混合物冷卻。通過第一次過濾(TyvekTM濾器)和第二次過濾(M燒結玻板漏斗)回收沉淀物，將沉淀物在室溫于氮氣氛中真空干燥。
實施例16由有機酸和無機酸制備結晶AD將形態(tài)1的AD(500mg，1.0mmol)溶解在溫熱(＜40℃)的異丙醇(5mL)中。將溶解在2mL(或使酸溶解所需的更大體積的)異丙醇中的酸(1.0mmol)加入到AD溶液中。將溶液在室溫下貯存于蓋緊的閃爍管中。在有些情況下，將溶液封蓋后不久(約1分鐘)即可觀察到沉淀的鹽。對于其它鹽，在將溶液封蓋后達數個月，才開始有沉淀形成。所有13種鹽的熔點見下表。下表中還顯示了9種鹽的XRD數據(度2θ)。XRD數據顯示了這些鹽的最強峰的大部分。
*雙峰或肩峰**寬峰中有3-4個峰實施例17AD制劑按下述方法用幾種賦形劑將形態(tài)1的AD配制成每片含30、60或120mg AD的片劑。
1在制造過程中分2部分(顆粒內和顆粒外)摻入到劑型中。
2添加的水的量足以制造合適的濕顆粒。除去水，使之達到干燥損失(LOD)不超過3％的水平。
含形態(tài)1的AD的片劑的制造方法是將交聯羧甲基纖維素鈉、預糊化淀粉和乳糖一水合物在制粒機中摻合。加入水，將內容物在制粒機中混合直至形成合適的濕顆粒。將濕顆粒磨碎，在干燥器中干燥，使水分含量為干燥損失不超過3％，使干顆粒通過磨機。將磨細的顆粒與顆粒外賦形劑、乳糖一水合物、交聯羧甲基纖維素鈉和滑石粉混合，在摻合機中摻合，得到粉末摻合物。加入硬脂酸鎂，在摻合機中摻合，壓成片劑。將片劑與聚酯纖維包裝材料一起裝入高密度聚乙烯或玻璃瓶中(視需要，還可放入硅膠干燥劑)。
實施例18AD制劑按下述方法將AD與幾種賦形劑一起配制成各片重100mg和含25mg或50mgAD的片劑。按與前述類似方式通過濕法制粒制造片劑。
權利要求
1.阿德福韋酯的結晶鹽或復合物。
2.權利要求1的結晶鹽或復合物，其中該阿德福韋酯的結晶鹽或復合物是阿德福韋酯的結晶鹽。
3.權利要求1的結晶鹽或復合物，其中該結晶鹽或復合物是有機酸的鹽或復合物。
4.權利要求1的結晶鹽或復合物，其中該結晶鹽或復合物是無機酸的鹽或復合物。
5.權利要求1的結晶鹽或復合物，其中阿德福韋酯的結晶鹽或復合物是選自阿德福韋酯的半硫酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硝酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、β-萘磺酸鹽、α-萘磺酸鹽、(S)-樟腦磺酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、抗壞血酸鹽和煙酸鹽，或其復合物。
6.權利要求5的結晶鹽或復合物，其中阿德福韋酯的結晶鹽或復合物是阿德福韋酯的半硫酸鹽或復合物。
7.一種藥用組合物，包含權利要求1至6中任一項所述的阿德福韋酯結晶鹽或復合物和藥用賦形劑。
8.權利要求7的藥用組合物，其中所述組合物是片劑形式。
9.權利要求8的藥用組合物，其中所述片劑含有5-250mg的阿德福韋酯的結晶鹽或復合物。
全文摘要
本發(fā)明提供結晶形態(tài)的9－[2－[[(雙(新戊酰氧基)甲氧基)氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤(“阿德福韋酯(adefovir dipivoxil)”，簡稱“AD”)和制備這些結晶的方法。本發(fā)明的組合物和方法具有大規(guī)模合成結晶AD或配制AD治療劑所需的性能。本發(fā)明的組合物包含無水結晶型的AD。
文檔編號A61K31/675GK1900091SQ20061010000
公開日2007年1月24日 申請日期1998年7月23日 優(yōu)先權日1997年7月25日
發(fā)明者M·N·阿里米利, T·T·K·李, L·V·馬內斯, J·D·小芒格, E·J·普里斯博, L·M·舒爾茨, D·E·凱利 申請人:吉爾利德科學股份有限公司