專(zhuān)利名稱：：防治更年期綜合癥和骨質(zhì)疏松癥的組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種防治更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松癥的藥用組合物、提取物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：更年期綜合征是一種發(fā)病率高、危害性大的常見(jiàn)病。在我國(guó)更年期人口中，更年期精神神經(jīng)癥狀發(fā)生率高達(dá)75.1%,在絕經(jīng)前己達(dá)高峰，持續(xù)7年左右；血管舒縮功能失調(diào)發(fā)生率為40.9%,高峰年齡50歲以后，持續(xù)6年左右。目前研究的資料表明，99%的婦女在更年期及更年期后可出現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥，也稱為原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。該癥是一種以骨量減少、骨組織微細(xì)結(jié)構(gòu)退化為特征的，致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的全身性的骨骼疾病。隨著世界人口趨于老齡化，骨質(zhì)疏松癥及骨質(zhì)疏松性骨折的發(fā)病人口呈迅速上升的趨勢(shì)。根據(jù)我國(guó)2000年人口普查的結(jié)果，預(yù)測(cè)我國(guó)患原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的人數(shù)約為0.88億，約占全國(guó)總?cè)丝诘?.97%,預(yù)計(jì)到2010年將達(dá)到1.14億，占總?cè)丝诘陌俜謹(jǐn)?shù)8.2%。雌激素替代療法(HormoneReplacementTherapy,HRT)是目前治療更年期綜合癥及骨質(zhì)疏松的主要手段，療效較好，但臨床結(jié)果表明，患者長(zhǎng)期應(yīng)用雌激素替代療法后會(huì)引起嚴(yán)重的副作用，包括子宮出血，刺激乳腺細(xì)胞、子宮內(nèi)膜增生，增加乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率等嚴(yán)重不良反應(yīng)。防治更年期綜合癥及骨質(zhì)疏松已成為當(dāng)代醫(yī)藥學(xué)研究的重點(diǎn)和熱門(mén)領(lǐng)i或之一。
發(fā)明內(nèi)容中醫(yī)理論認(rèn)為，更年期癥狀主要是由于腎氣漸衰，沖任二脈虛憊，導(dǎo)致陰陽(yáng)失調(diào)，氣血兩虛而引起，表現(xiàn)為頭昏耳鳴、心悸失眠、煩躁易怒或抑郁焦慮，潮熱汗出等癥狀。本發(fā)明用于防治更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松癥，由傳統(tǒng)復(fù)方當(dāng)歸補(bǔ)血湯加p未而成。當(dāng)歸補(bǔ)血湯是中醫(yī)臨床常用的補(bǔ)益氣血的方劑，由金元四大家之一李東垣創(chuàng)立，首載于其醫(yī)學(xué)名著《內(nèi)外傷辯惑論》(公元1247年)，其功能是補(bǔ)氣生血，廣泛用于氣血兩虛之低熱、面赤、面色萎黃、神疲乏力等癥。李東垣道"該方可為益氣生血之劑，稱之有形之血，生于無(wú)形之氣"?，F(xiàn)代臨床及藥理研究表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)心、肝等機(jī)體損傷有保護(hù)作用，能增強(qiáng)肌體免疫功能、抗貧血、改善血液流變學(xué)、提高機(jī)體應(yīng)激水平等，用于免疫性全血細(xì)胞減少癥、再生障礙性貧血、過(guò)敏性紫癜、血管神經(jīng)性頭痛、血虛便秘等，但迄今未見(jiàn)單用該方預(yù)防和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松癥的研究報(bào)道和臨床應(yīng)用實(shí)例。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在傳統(tǒng)組合物當(dāng)歸補(bǔ)血湯的基礎(chǔ)上，選用中藥淫羊藎與當(dāng)歸補(bǔ)血湯組方，在預(yù)防和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松癥方面效果優(yōu)異，可以有效促進(jìn)MG-63骨細(xì)胞的增殖、分化，增加受雌激素影響的基因在MCF-7細(xì)胞的表達(dá)水平，且不刺激乳癌細(xì)胞的增殖。此外，中藥淫羊藿與當(dāng)歸補(bǔ)血湯組方，經(jīng)過(guò)優(yōu)化提取、濃縮、精制后，相比傳統(tǒng)組合物，預(yù)防和治療更年期綜合癥作用顯著增強(qiáng)，作用機(jī)制明確，且具有劑型先進(jìn)，給藥劑量小，患者適應(yīng)性好等特點(diǎn)。本發(fā)明的目的是利用我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論和中藥材，研制開(kāi)發(fā)一種療效確切，副作用小，適合更年期婦女預(yù)防和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松癥的藥用組合物及其提取物。一、藥材成分與配比(重量)本發(fā)明涉及一種預(yù)防和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松癥的藥用組合物，其特征在于制成該組合物所含藥效成分的原料由當(dāng)歸、黃芪和淫羊藿組成，其重量比為當(dāng)歸150份，黃芪1~100份，淫羊藿O.l-lOO份。其中所用當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸(Angelicasinensis(Oliv.)Diels)的干燥根。黃芪為豆科植物蒙古黃芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜莢黃芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根。淫羊藿為小檗科(Berberidaceae)才直物淫羊菱(￡^z>we<^WA77Zrevz'corwwwMaxim.)、箭葉淫羊藿(￡^/me<iz'wmsegzYtofww(Sitb.etZucc.)Maxim.)、柔毛淫羊藿(EpimediumpubescensMaxim.)、巫山淫羊藿(EpimediumwushanenseMaxim.)或朝鮮淫羊藿(EpimediumkoreammNakai)的干燥地上部分。有關(guān)傘形科、豆科、小檗科的科學(xué)定義和范疇，參見(jiàn)《中國(guó)高等植物科屬詞典》(修訂版)(侯寬昭編，北京科學(xué)出版社，1984.12)。按照中醫(yī)傳統(tǒng)用藥習(xí)慣，這些材料還包括經(jīng)過(guò)酒制、蜜制等炮制方法制成的各種炮制品。除當(dāng)歸、黃荒、淫羊藿外，本發(fā)明的藥用組合物還可以包含選自生地黃、葛根、赤芍和骨碎補(bǔ)等不影響療效的其他成分。優(yōu)選地，本發(fā)明的藥用組合物由當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿組成。優(yōu)選地，本發(fā)明的藥用組合物中當(dāng)歸、黃芪和淫羊愛(ài)的重量比為當(dāng)歸120份，黃芪20~100份，淫羊藿1100份。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明的藥用組合物中所述原料的重量比為當(dāng)歸10份，黃芪50份，淫羊藿50份。本發(fā)明還涉及上述藥用組合物的提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿粉碎成粉末；(2)稱取當(dāng)歸、黃芪，以4~12倍水或4壬意比例乙醇水溶液提取1~3次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏I;(3)稱取淫羊藿，以4~12倍5095°/。乙醇水溶液提取1~3次，每次0.5~2小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏II;(4)取浸膏I、II,合并，混勻，干燥，得到所述藥用組合物的提取物。本發(fā)明也涉及藥用組合物的提取物的另一種制備方法，其特征在于步驟如下(1)取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿粉碎成粉末；(2)稱取當(dāng)歸、黃芪，淫羊藿，混合均勻，以412倍水或任意比例乙醇水溶液提取13次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮得到浸膏；(3)取浸膏混勻，干燥，得到所述藥用組合物的提取物。本發(fā)明還涉及藥用組合物在制備一種藥物中的應(yīng)用，所述藥物可以有效促進(jìn)MG-63人成骨細(xì)胞的增殖、分4t,增加受雌激素影響的基因在MCF-7細(xì)胞的表達(dá)水平，且不刺激乳癌細(xì)胞的增殖。本發(fā)明還涉及用本發(fā)明的方法制備的提取物在制備一種藥物中的應(yīng)用，所述藥物可以有效促進(jìn)MG-63人成骨細(xì)胞的增殖、分化，增加受雌激素影響的基因在MCF-7細(xì)胞的表達(dá)水平，且不刺激乳癌細(xì)胞的增殖。本發(fā)明還涉及藥用組合物在制備用于預(yù)防和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述藥物為膠嚢、片劑或軟膠嚢劑型。本發(fā)明還涉及一種預(yù)防和治療更年期綜合癥的藥用組合物，其特征在于該藥用組合物由當(dāng)歸、黃茂和淫羊藿提取物組成，其重量比為當(dāng)歸多糖120%;黃芪多糖20~60%;黃芪乙醇提取物卜20%;淫羊藿提取物20~80%。優(yōu)選地，各組分的重量配比為當(dāng)歸多糖8%;黃芪多糖46%;黃芪乙醇提取物6%;淫羊藿提取物40%。本發(fā)明還涉及一種藥用組合物的制備方法，其包括混合當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物。優(yōu)選地，其中當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的重量比為當(dāng)歸多糖120%;黃芪多糖20~60%;黃芙乙醇提取物1~20%;淫羊藿提取物20~80%。進(jìn)一步優(yōu)選地，其中當(dāng)歸多糖、黃荒多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的重量比為8%:46%:6%:40%。在上述制備方法中，當(dāng)歸多糖的制備方法為取當(dāng)歸粉碎成粉末，以水提取，減壓濃縮，將濃縮液加入乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到當(dāng)歸多糖；黃芪多糖和黃芪乙醇提取物的制備方法為取黃荒粉碎成粉末，以水提取，減壓濃縮，將濃縮液加入乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到黃芪多糖；剩余醇液揮干乙醇后以水重新溶解，過(guò)大孔樹(shù)脂柱，水洗，再用乙醇洗脫，收集醇洗脫液，濃縮干燥后得到黃芪乙醇提取物；淫羊愛(ài)提取物的制備方法為取淫羊藿粉粹成粉末，以乙醇水溶液提取，，濃縮干燥后得淫羊藿提取物。本發(fā)明還涉及一種組合物，它包含淫羊藿提取物與當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物，用于預(yù)防和治療更年期綜合癥，有效增加受雌激素影響的基因在MCF-7細(xì)胞的表達(dá)水平、或者提高免疫水平。本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述藥用組合物在制備用于預(yù)防和治療更年期綜合癥藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述藥物為膠嚢、片劑或其他劑型。二、制備方法1.組合物提取物的制備按照上述材料和配伍比例組成的當(dāng)歸補(bǔ)血湯及衍生方用于預(yù)防和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏術(shù)>癥的目的時(shí)，可以直接用水煎法或酒浸法制成湯劑或酒劑直接服用，也可以先用水或用含量為1%~100%的醇類(lèi)(曱醇、乙醇等)、酮類(lèi)(丙酮等)或酯類(lèi)(乙酸乙酯等)提取后，或以超臨界C02流體萃取法提取后，再混入水或酒提物中，將其制成浸膏、膏滋、顆粒劑或膠嚢等制劑后服用。其中最優(yōu)選的提取方法是水提取。具體方法如下(1)取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿粉碎成粉末；(2)稱取當(dāng)歸、黃芪，以412倍水或任意比例乙醇水溶液提取13次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏I;(3)稱取淫羊藿，以4~12倍30~95%乙醇水溶液提取1~3次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏II;(4)取浸膏I、II，合并，混勻，干燥，得本發(fā)明提取物?；?1)取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿粉碎成粉末；(2)稱取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿粉末，混合均勻，以412倍水或任意比例乙醇水溶液提取13次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸骨；(3)取浸膏混勻，千燥，得本發(fā)明提取物。2.當(dāng)歸多糖的制備取當(dāng)歸藥材粉碎成粉末，以4~12倍水提取1~3次，每次0.5~2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮。將濃縮液加入2~6倍50~95%乙醇，收集所得沉淀，千燥后得到當(dāng)歸多糖。優(yōu)選地，取當(dāng)歸藥材lkg粉碎成粉末，以8倍水提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮，將濃縮液加入4倍95%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到當(dāng)歸多糖。3.當(dāng)歸乙醇提取物取當(dāng)歸藥材粉碎成粉末，以95%乙醇浸泡過(guò)夜，使其充分溶脹，再以95%乙醇滲漉至洗脫液無(wú)明顯顏色(約3~6倍保留體積)，滲漉液減壓濃縮后得當(dāng)歸乙醇提取物。4.黃芪多糖黃芪乙醇提取物的制備取黃芪藥材粉石年成粉末，以412倍水或提取13次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮。將濃縮液加入2~6倍5095%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到黃芪多糖，產(chǎn)率大約9.2%。剩余醇液揮干乙醇后以水重新溶解，過(guò)大孔樹(shù)脂柱。水洗約24倍柱體積，再用50%~95%乙醇洗脫24倍柱體積，收集醇洗脫液，濃縮干燥后得到黃芪乙醇提取物。優(yōu)選地，取黃芪藥材lkg粉碎成粉末，以8倍水或提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮，將濃縮液加入4倍95%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到黃芪多糖；剩余醇液揮干乙醇后以水重新溶解，過(guò)大孔初t脂柱，水洗約3倍柱體積，再用70%乙醇洗脫3倍柱體積，收集醇洗脫液，濃縮干燥后得到黃芪乙醇提取物。5.淫羊藿提取物的制備取淫羊藿藥材4分粹成4分末，以412倍3095%乙醇水溶液提取1~3次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮干燥后得淫羊藿提取物。優(yōu)選地，取淫羊藿藥材lkg粉粹成粉末，以8倍70。/。乙醇水溶液提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮干燥后得淫羊愛(ài)提取物。為得到優(yōu)化后的提取物配比，根據(jù)更年期綜合癥特點(diǎn)，選擇雌激素樣作用和免疫活性兩個(gè)藥理指標(biāo)，采用如下藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩選和活性才全測(cè)，包括測(cè)量MCF-7細(xì)胞ERE-Luc活性，測(cè)量T細(xì)胞增殖與巨謹(jǐn)細(xì)胞免疫活性等。圖1顯示黃芪和當(dāng)歸的組合物對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。圖2顯示當(dāng)歸、黃芪和淫羊藿的組合物對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。圖3顯示黃芙和當(dāng)歸的組合物對(duì)MG-63細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。圖4顯示當(dāng)歸、黃芪和淫羊藿的組合物對(duì)MG-63細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。圖5顯示當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的正交試驗(yàn)結(jié)果。圖6顯示加入不同量淫羊藿后對(duì)9號(hào)組合物的雌激素樣作用的結(jié)果。圖7顯示含有當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的組合物的T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)的結(jié)果。圖8顯示含有當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的組合物的巨噬細(xì)胞吞噬活性試馬僉結(jié)果。具體實(shí)施方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)的描述實(shí)施例1:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸200g黃芪1000g淫羊藿1000g制法以上3味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪兩p未，置于20L提取器中，加水16kg,充分?jǐn)嚢杞?，加熱提取l小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?kg水加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液濃縮至1.05~1.1比重的稠浸膏，得浸膏I。再取淫羊藿粗粉1000g，置于10L提取器中，加入70。/。乙醇8L，充分浸泡后加熱回流提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?L70%乙醇加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液60。C減壓回收濃縮至1.05-1.1比重的稠浸膏，得浸膏II。取浸膏I、II，合并，充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物l。實(shí)施例2:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸200g黃芪1000g淫羊藿1000g制法以上3味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿三味藥材，混合均勻，置于20L提取器中，加水17.6kg，充分?jǐn)嚢杈鶆?，加熱提取l小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?1kg水回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液濃縮為1.05-1.1比重的稠浸膏，取浸膏充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物2。實(shí)施例3:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸200g黃芪1000g淫羊藿1000g制法以上3味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿三味藥材，混合均勻，置于20L提取器中，加70%乙醇17.6kg,充分?jǐn)嚢杈鶆颍訜峄亓魈崛小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?1kg乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為1.05-1.1比重的稠浸膏，取浸膏充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物3。實(shí)施例4:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸200g黃芪1000g淫羊藿lg制法以上3味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿三味藥材，混合均勻，置于10L提取器中，加水7.2kg,充分?jǐn)嚢杈鶆颍訜崽崛?小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?kg水加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收得稠浸膏，取浸膏充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物4。實(shí)施例5:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸10g黃芪1000g淫羊愛(ài)1000g制法以上3味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿三味藥材，混合均勻，置于20L提取器中，加70%乙醇15L，充分?jǐn)嚢杈鶆?，加熱回流提?小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?0L乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為稠浸膏，取浸膏充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物5。實(shí)施例6:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸50g黃芪100g淫羊藿1000g制法以上3味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊愛(ài)三味藥材，混合均勻，置于50L提取器中，加70%乙醇24L,充分撹拌均勻，加熱回流提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?5L乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為稠浸膏，取浸膏充分混勻后噴霧干燥，得本發(fā)明提取物6。實(shí)施例7:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸100g黃芪500g淫羊藿500g制法以上3味，粉碎為粗粉。分置于IOL提取器中，分加70%乙醇1，5,5升，加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆靡掖蓟亓骷訜崽崛?小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液濾液濃縮。三種提取物混合后干燥，得本發(fā)明提取物7。實(shí)施例8:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸100g黃茂500g淫羊藿提取物10g制法以上3味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪二味藥材，混合均勻，置于50L提取器中，加70%乙醇24L，充分?jǐn)嚢杈鶆?，加熱回流提?小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?5L乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為稠浸膏，取浸膏充分混勻后噴霧干燥，得當(dāng)歸黃芪提取物。另取淫羊愛(ài)提取物，加入當(dāng)歸黃芪提取物，混勻，得本發(fā)明提取物8。實(shí)施例9:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸100g黃芪500g淫羊藿苷l(shuí)g制法以上3味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃茂二味藥材，混合均勻，置于50L提取器中，加70%乙醇24L，充分?jǐn)嚢杈鶆颍訜峄亓魈崛?小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?5L乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為稠浸膏，取浸膏充分混勻后噴霧干燥，得當(dāng)歸黃芪提取物。另取淫羊藿苷，加入當(dāng)歸黃芪提取物，混勻，得本發(fā)明提取物9。實(shí)施例10:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸100g黃芪500g淫羊藿500g赤芍100g制法以上4味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿三味藥材,混合均勻，置于20L提取器中，加70%乙醇17.6kg,充分?jǐn)嚢杈鶆?，加熱回流提?小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?1kg乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為1.05-1.1比重的稠浸膏，取浸膏充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物10。實(shí)施例ll:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸100g黃芪500g淫羊藿500g葛根500g制法以上4味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿三味藥材，混合均勻，置于20L提取器中，加70%乙醇17.6kg,充分?jǐn)嚢杈鶆颍訜峄亓魈崛?小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?1kg乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為1.05-1.1比重的稠浸膏，取浸膏充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物11。實(shí)施例12:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸100g黃芪500g淫羊藿500g生地黃100g制法以上4味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿四味藥材，混合均勻，置于20L提取器中，加70%乙醇12kg,充分?jǐn)嚢杈鶆?，加熱回流提?小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?kg乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為1.05-1.1比重的稠浸膏，取浸膏充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物13。實(shí)施例13:組合物提取物的制備處方當(dāng)歸100g黃芪500g淫羊藿500g葛根500g赤芍100g生地黃100g骨碎補(bǔ)100g制法以上7味，粉碎為粗粉。取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿三味藥材，混合均勻，置于20L提取器中，加70%乙醇17.6kg,充分?jǐn)嚢杈鶆?，加熱回流提取l小時(shí)，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)儆?1kg乙醇回流加熱提取1小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓回收濃縮為1.05-1.1比重的稠浸膏，取浸膏充分混勻后干燥，得本發(fā)明提取物13。實(shí)施例14:組合物膠嚢的制備處方實(shí)施例1-13中組合物提取物300g制法上述組合物提取物加入淀粉等輔料，置于沸騰制粒機(jī)中混合、干燥、制粒，將所得顆粒裝入1號(hào)硬明膠膠嚢中，每粒0.3g,分裝100粒，即得。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國(guó)藥典2000年版膠嚢劑項(xiàng)下的有關(guān)^見(jiàn)定。實(shí)施例15:組合物片劑的制備處方實(shí)施例1-13中組合物提取物100g制法上述組合物提取物加入淀粉等輔料，置于沸騰制粒機(jī)中混合、干燥、制粒，將所得顆粒壓片，每片0.2g,分裝500片，即得。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國(guó)藥典2000年片劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。實(shí)施例16:組合物軟膠嚢的制備處方實(shí)施例1-13中組合物提取物100g制法上述組合物提取物粉未，加入植物油等輔料，混合、壓成軟膠嚢，每片0.5g,共分裝500粒，即得。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國(guó)藥典2000年軟膠嚢項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。實(shí)施例17:藥效學(xué)試馬全本發(fā)明用于防治更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松，進(jìn)行了如下藥效學(xué)試驗(yàn)，包括測(cè)量MCF-7細(xì)胞增殖和ERE-Luc活性，測(cè)量MG-63細(xì)胞增殖與分化等。一、組合物的雌激素樣作用1.細(xì)胞培養(yǎng)條件MCF-7(含有ERE基因)細(xì)胞培養(yǎng)在MEM培養(yǎng)基，含10%胎牛血清、青霉素50U/ml、慶大霉素50|ug/ml、O.lmM氨基酸和l.OmM丙酮酸鈉，培養(yǎng)箱溫度37°C,含5%C02,95%空氣。實(shí)驗(yàn)之前3天改變?yōu)闊o(wú)酚紅MEMa培養(yǎng)基，含2%活性炭/葡聚糖處理的胎牛血清。2.對(duì)MCF-7細(xì)月包生長(zhǎng)的影響細(xì)胞種在96孔板(Falcon,BDLabware,NJ,USA),細(xì)胞密度約lxl(^細(xì)胞/孔，過(guò)夜讓細(xì)胞貼壁，從第二天開(kāi)始加藥，每24小時(shí)加藥一次，加藥之前更換培養(yǎng)液。加藥三次后取樣，樣品進(jìn)行MTT測(cè)定。每孔加0.02mgMTT,37。C培養(yǎng)4小時(shí)，每孔加150|ilDMSO溶解形成的吹喃結(jié)晶，在570nm用OpsysMicroplateReader(ThermoLabsystems,MA,USA)測(cè)定光密度。實(shí)4僉資^f以三次實(shí)馬t的平均值，每次平刊-j故三個(gè)孔。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1、2。3.對(duì)雌激素反應(yīng)組件-熒光素酶(ERE-luciferase)活性的影響細(xì)胞接種在24孔板(Falcon，BDLabware,NJ,USA),細(xì)胞密度約5乂104細(xì)胞/孔，過(guò)夜讓細(xì)胞貼壁，從第二天開(kāi)始加藥，每24小時(shí)加藥一次，加藥之前更換培養(yǎng)液。加藥二次后取樣，樣品進(jìn)行熒光素酶活性測(cè)定(FluostarOptima,BMGLabtechnology)。實(shí)驗(yàn)資料以三次實(shí)驗(yàn)的平均值，每次平行做三個(gè)孔。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1、2。以上結(jié)果表明古方當(dāng)歸補(bǔ)血湯的雌激素樣活性在當(dāng)歸:黃芪=1:5時(shí)表現(xiàn)最佳，使ERE-Luc活性顯著增加(圖1)。在當(dāng)歸補(bǔ)血湯配伍淫羊藿后，其雌激素樣作用進(jìn)一步顯著加強(qiáng)，當(dāng)歸:黃芪:淫羊藿=1:5:5時(shí)效果與對(duì)照藥P-雌二醇接近；但與P-雌二醇顯著增加乳癌細(xì)胞增殖明顯不同，三味中藥配伍所得組合物對(duì)乳癌細(xì)胞幾乎沒(méi)有促增殖作用(圖2)。以當(dāng)歸:黃芪:淫羊藿=1:5:5配伍，表現(xiàn)出良好的雌激素樣活性和極低的癌細(xì)胞增殖副作用。二、組合物的抗骨質(zhì)疏松作用1.細(xì)胞培養(yǎng)條件MG-63細(xì)胞培養(yǎng)在MEM培養(yǎng)基，含10%熱失活牛血清、青霉素50U/ml、慶大霉素50|ug/ml、O.lmM氨基酸和1.0mM丙酮酸鈉，培養(yǎng)箱溫度37。C，含5%032,95%空氣。2.對(duì)MG-63細(xì)胞生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)方法同MCF-7細(xì)胞MTT試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3、4。3.MG-63細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性測(cè)定細(xì)胞接種在24孔板(Falcon,BDLabware,NJ,USA),細(xì)胞密度約3xlOS細(xì)胞/孔，過(guò)夜讓細(xì)胞貼壁，從第二天開(kāi)始加藥，加藥之前更換培養(yǎng)液。每加藥24小時(shí)后取樣，所有樣品用PBS洗二次，并保存在-80。C水箱。每孔在室溫加200fi1細(xì)胞裂解緩沖液(0.1%TritonX-100inPBS),水凍裂解，收集細(xì)胞裂解液，14，000rpm離心5min,上清液用來(lái)測(cè)定蛋白濃度以及進(jìn)行堿性磷酸酶活性測(cè)定。每100^1樣品加100nl磷酸對(duì)硝基苯酯(p-nitro-phenylphosphate)底物溶液，37。C孵育30min，力。100til2NNaOH終止反應(yīng)。在405nm用OpsysMicroplateReader(ThermoLabsystems,MA,USA)測(cè)定光密度。i式馬t結(jié)果見(jiàn)圖3、4:以上結(jié)果表明古方當(dāng)歸補(bǔ)血湯的促骨細(xì)胞增殖、分化作用在當(dāng)歸:黃芪=1:5時(shí)表現(xiàn)最佳，使MG-63細(xì)胞表現(xiàn)出顯著的增殖、分化作用(圖3)。在當(dāng)歸補(bǔ)血湯配伍淫羊藿后，其促進(jìn)骨細(xì)胞增殖分化作用進(jìn)一步顯著加強(qiáng)(圖4),當(dāng)歸:黃茂:淫羊藿=1:5:5時(shí)，在促進(jìn)骨細(xì)胞增殖、分化方面均與對(duì)照藥P-雌二醇接近，結(jié)果表明本組合物可以刺激骨細(xì)胞增殖和分化，而沒(méi)有引致乳癌細(xì)胞增殖，表現(xiàn)出良好的抗骨質(zhì)疏松作用。實(shí)施例18:含有當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的藥用組合物的制備U)當(dāng)歸多糖的制備取當(dāng)歸藥材lkg粉碎成粉末，以8倍水提取2次，每次l小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮。將濃縮液加入4倍95%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到當(dāng)歸多糖。(2)黃芪多糖黃芪乙醇提取物的制備取黃芪藥材lkg粉碎成粉末，以8倍水或提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮。將濃縮液加入4倍95%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到黃芘多糖。剩余醇液揮干乙醇后以水重新溶解，過(guò)大孔樹(shù)脂柱。水洗約3倍柱體積，再用70%乙醇洗脫3倍柱體積，收集醇洗脫液，濃縮干燥后得到黃芪乙醇提取物。(3)淫羊藿提取物的制備取淫羊藿藥材lkg粉粹成粉末，以8倍70%乙醇水溶液提取2次，每次l小時(shí)，合并提取液，濃縮干燥后得淫羊釐提取物。(4)分別取當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物，按照重量比8%:46%:6%:40%充分混勻后干燥，得含有當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的藥用組合物1。實(shí)施例19:含有當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊度的藥用組合物的制備按照實(shí)施例17所述方法分別提取當(dāng)歸多糖、黃荒多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿乙醇提取物，按照重量比1%:9%:20%:70%充分混勻后干燥，得含有當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的藥用組合物2。實(shí)施例20:藥用組合物膠嚢的制備取實(shí)施例17-18中組合物提取物300g,加入淀粉等輔料，置于沸騰制粒機(jī)中混合、千燥、制粒，將所得顆粒裝入1號(hào)硬明膠膠嚢中，每粒0.3g,分裝100粒，即得。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國(guó)藥典2000年版膠嚢劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。實(shí)施例21:藥用組合物片劑的制備取實(shí)施例1-2中組合物提取物100g，加入淀粉等輔料，置于沸騰制粒機(jī)中混合、干燥、制粒，將所得顆粒裝壓片，每片0.2g,分裝500片，即得。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國(guó)藥典2000年版片劑項(xiàng)下的有關(guān)M^定。實(shí)施例22:藥效學(xué)試驗(yàn)一、組合物的雌激素樣作用1.細(xì)胞培養(yǎng)條件MCF-7(含有ERE基因)細(xì)胞培養(yǎng)在MEM培養(yǎng)基，含10%胎牛血清、青霉素50U/ml、慶大霉素50嗎/ml、O.lmM氨基酸和l.OmM丙酮酸鈉，培養(yǎng)箱溫度37。C,含5%C02，95%空氣。實(shí)驗(yàn)之前3天改變?yōu)闊o(wú)酚紅MEMa培養(yǎng)基，含2%活性炭/葡聚糖處理的胎牛血清。2.對(duì)雌激素反應(yīng)組件-熒光素酶(ERE-lucifemse)活性的影響細(xì)胞種在24孔板(Falcon,BDLabware,NJ,USA),細(xì)胞密度約5乂104細(xì)胞/孔，過(guò)夜讓細(xì)胞貼壁，從第二天開(kāi)始加藥，每24小時(shí)加藥一次，加藥之前更換培養(yǎng)液。加藥二次后取樣，樣品進(jìn)行熒光素酶活性測(cè)定(FluostarOptima,BMGLabtechnology)。實(shí)驗(yàn)資料以三次實(shí)驗(yàn)的平均值，每次平行做三個(gè)孔。3.正交試-驗(yàn)i殳計(jì)首先對(duì)當(dāng)歸補(bǔ)血湯四個(gè)組分進(jìn)行配伍考察，選擇L16一4一5正交表，首先對(duì)當(dāng)歸補(bǔ)血湯中當(dāng)歸多糖(DP),當(dāng)歸乙醇提取物(DE),黃芪多糖(HP),黃芪乙醇提取物(HE)四個(gè)因素進(jìn)行四水平考察。以當(dāng)歸補(bǔ)血湯原方當(dāng)歸黃芪1:5配伍時(shí)各組分含量為lx，四水平分別為0x,0.5x,lx，2x，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖5、表1和表2:表1.正交試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表2.方差分析結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>從直觀分析和方差分析結(jié)果中可以看出，黃荒乙醇提取物為影響當(dāng)歸補(bǔ)血湯活性最主要組分(p<0.05),對(duì)藥效有顯著影響，9號(hào)(當(dāng)歸多糖當(dāng)歸乙醇提取物黃芪多糖黃芪乙醇提取物淫羊藿提取物=":0x:lx:2x)和15號(hào)(當(dāng)歸多糖當(dāng)歸乙醇提取物黃芪多糖黃芪乙醇提取物淫羊藿提取物-2x:lx:0.5x:2x)組合物表現(xiàn)出最佳雌激素樣作用。二者相比，9號(hào)組合物各組分所需藥量更少，且根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論和文獻(xiàn)報(bào)道(Dongetat,2006)，當(dāng)歸乙醇提取物具有刺激作用，故選擇9號(hào)組合物作為最優(yōu)組合物進(jìn)行進(jìn)一步研究。5.淫羊藿用量選擇以藥材重量當(dāng)歸黃芪淫羊藿=1:5:1時(shí)提取各味藥材所得當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸乙醇提取物、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物、淫羊藿提取物含量為lx。9號(hào)組合物加入不同量淫羊楚后對(duì)雌激素樣作用結(jié)果如以下表3所示<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>以上結(jié)果表明古方當(dāng)歸補(bǔ)血湯的雌激素樣活性在當(dāng)歸多糖黃荒多糖黃芪乙醇提取物淫羊藿提取物=1:1:2:4時(shí)效果最佳，按此比例，根據(jù)各組分產(chǎn)率折合成重量比為當(dāng)歸多糖黃芪多糖黃芪乙醇提取物淫羊藿提取物=8%:46%:6%:40%。實(shí)施例23:提取物防治去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究l.材料1.1實(shí)4全動(dòng)物健康雌性SD大鼠卯只，4月齡，體重200-220g(由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)97A016)。隨機(jī)分為6組，每組15只，分別為空白對(duì)照組、模型組、提取物高劑量組、提取物中劑量組、提取物低劑量組、尼爾雌醇組。灌胃給藥容積為10ml/kg。1.2實(shí)驗(yàn)藥物提取物中各組分的重量配比為當(dāng)歸多糖8%;黃芪多糖46%;黃芪乙醇提取物6%;淫羊藿提取物40%。提取物的施用劑量為高劑量10g/kg體重，中劑量5g/kg體重，低劑量2.5g/kg體重，相當(dāng)于臨床劑量的20倍、10倍、5倍。藥物以蒸餾水定容至所需濃度。陰性對(duì)照品蒸餾水。陽(yáng)性對(duì)照藥尼爾雌醇(由上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，2mg/片，批號(hào)201001)。麻醉藥3%戊巴比妥鈉(佛山市化工實(shí)驗(yàn)廠生產(chǎn)，批號(hào)960001)。鹽酸四環(huán)素為萸光標(biāo)記物，上海新亞制藥廠生產(chǎn)，0.25g/支，批號(hào)99124-18。Calcein(USA):為熒光才示i己物。甲基丙烯酸甲酯北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)990117。2.方法2.1造模方法[l]用3%戊巴比妥鈉溶液按0.1ml/100g腹腔注射麻醉，空白對(duì)照組大白鼠行假手術(shù)，單純?nèi)”巢壳锌?，切除少量脂肪組織后立即關(guān)閉；其余各組大白鼠，均采用背側(cè)入路雙側(cè)卵巢摘除手術(shù)造模。2.2給藥方法術(shù)后第3天開(kāi)始給藥，連續(xù)給藥至術(shù)后3個(gè)月時(shí)處死全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。各組灌胃給藥，空白對(duì)照組、模型組灌服蒸餾水，給藥組灌服相應(yīng)藥物，每日一次；尼爾雌醇組[2]給予尼爾雌醇lmg/kg灌胃，使用前配成混懸液(濃度為0.167mg/ml),1次/周，其余時(shí)間給予蒸餾水10ml/kg灌胃。全部大鼠在處死前10天和2天分別于其背部皮下注射鹽酸四環(huán)素25mg/kg和Calcein5mg/kg。全部大鼠在處死前24小時(shí)禁食。2.3檢測(cè)指標(biāo)[3]實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組動(dòng)物均有不同程度的死亡，剩余動(dòng)物進(jìn)行以下指標(biāo)測(cè)定2.3.1骨密度測(cè)定術(shù)后3個(gè)月采用雙能X線骨密度測(cè)量?jī)x(美國(guó)HOLOGIC公司產(chǎn)品，QDR-2000型，變異系數(shù)(CV)0.1%)測(cè)定雙側(cè)脛骨干骺端骨密度。2.3.2骨生物力學(xué)測(cè)定術(shù)后3個(gè)月動(dòng)物處死后取雙側(cè)股骨測(cè)生物力學(xué)指針(第一軍醫(yī)大學(xué)生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)室協(xié)助。采用SWD-10型萬(wàn)能材料試驗(yàn)儀，長(zhǎng)春試驗(yàn)儀器研究所生產(chǎn))。2.3.3血清降鈣素(CT)、骨鈣素(BGP)測(cè)定分別于術(shù)前、術(shù)后3個(gè)月行眼底靜脈叢取血，采用》丈免法測(cè)定。2.3.4血清雌二酵(E2)測(cè)定取血同上，采用放免法測(cè)定。2.3.5血清鈣(Ca)、磷(P)、鎂(Mg)、堿性磷酸酶(ALP)測(cè)定取血同2.3.6子宮濕重測(cè)定術(shù)后3個(gè)月，采用頸推脫位快速處死后，取子宮稱重。3.結(jié)果3.1提取物對(duì)去勢(shì)大白鼠骨面密度(bonemineraldensity,BMD)(表4)、骨礦含量(bonemineralcontant,BMC)(表5)變化的影響。表4.提取物對(duì)去卵巢大鼠BMD變化的影響(x±s)(g/cm2)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>注與模型組比較，*P<0.05**P<0.01;與空白組比4交，#PO.05##P<0.01(下同)表5.提取物對(duì)去卵巢大鼠BMC變化的影響(x±"(g)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表4、表5表明提取物灌胃3個(gè)月時(shí)各組大鼠在左、右側(cè)脛骨干骺端處的骨密度和骨礦含量均有顯著差別，其中模型組最低；提取物高劑量組明顯高于模型組，與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)顯著差異。說(shuō)明提取物和尼爾雌醇均可顯著提高脛骨干骺端處的BMD和BMC,二者作用相當(dāng)，說(shuō)明均能提高骨量。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表6表明提取物灌胃3個(gè)月時(shí)各組大鼠左側(cè)股骨扭轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)中最大扭矩(M)有明顯差異，但扭轉(zhuǎn)剛度(K)差異不顯著。提取物中、高劑量組最大扭矩明顯高于模型組，說(shuō)明提取物能促進(jìn)骨小梁重建，提高骨的力學(xué)性能，增加骨的韌度，使骨抗扭轉(zhuǎn)強(qiáng)度增高，其中又以提取物高劑量組效果最好。陽(yáng)性對(duì)照組M和K與模型組結(jié)果相似，僅略有增高，說(shuō)明尼爾雌醇對(duì)骨的力學(xué)性能無(wú)明顯影響，不能提高其抗骨折的效能。模型組扭轉(zhuǎn)剛度差異不明顯可能與實(shí)驗(yàn)時(shí)間較短，同時(shí)骨的類(lèi)骨質(zhì)增加較快，骨結(jié)構(gòu)修復(fù)較慢有關(guān)。3.3血CT(表7)、BGP(表8)測(cè)定表7表明術(shù)前各組大鼠血清CT含量無(wú)明顯差異；給藥3個(gè)月后各組大鼠血清CT含量有明顯差異，均明顯高于模型組，提取物高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均明顯高于空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組又明顯高于中藥治療組，說(shuō)明提取物能提高血中降鈣素的水平。表7.提取物對(duì)去卵巢大鼠降鈣素(CT)的影響?！?(ng/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表8.提取物對(duì)去卵巢大鼠骨鈣素(BGP)的影響?！?(ng/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表8表明術(shù)前各組大鼠血清BGP含量無(wú)明顯差別；給藥3個(gè)月后各組大鼠血清BGP含量有明顯差異，均明顯高于模型組，提取物高、中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均明顯高于空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組又明顯高于提取物各治療組，說(shuō)明提取物有提高血中骨釣素含量的作用。3.4血清E2測(cè)定(表9):表9.提取物對(duì)去卵巢大鼠血清雌二醇(E2)含量的影響(;"(pg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表9表明術(shù)前各組大鼠血清E2含量無(wú)明顯差異；給藥3個(gè)月后各組大鼠血清E2含量有顯著差異，均明顯高于模型組，提取物高、中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均明顯高于空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組又明顯高于中藥各組，說(shuō)明提取物能有效的提高體內(nèi)E2含量，但不及尼爾雌醇；中藥組中又以高劑量組E2含量最高，且有明顯量效關(guān)系。同時(shí)，我們采用放免法對(duì)高、中、低三種不同濃度的提取物進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)各種劑量提取物中均含有雌激素樣作用物質(zhì)，且呈量效關(guān)系。3.5血清Ca(表10)、P(表11)、Mg(表12)、ALP(表13)測(cè)定:表10.提取物對(duì)大鼠血清Ca含量的影響(""(mmol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表11.提取物對(duì)大鼠血清P含量的影響(；士"(mmol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表12.提取物對(duì)大鼠血清Mg含量的影響(^")(mmol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表13.提取物對(duì)大鼠血清ALP含量的影響?！繼)(U/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表10-13表明，各組大鼠在手術(shù)前、術(shù)后一周及給藥3個(gè)月時(shí)血清Ca、P、ALP、Mg的含量經(jīng)過(guò)組間和自身前后比較，發(fā)現(xiàn)均無(wú)顯著差異和變化。說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型是通過(guò)切除卵巢引起的原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥模型，而非由于其它原因影響骨代謝的疾病引起的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥模型。3.6子宮濕重測(cè)定表14.提取物對(duì)大鼠子宮濕重的影響(^土^(mg)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表14表明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于3個(gè)月后處死時(shí)各組大鼠子宮重量有明顯差異，其中模型組最低，空白對(duì)照組最高，提取物高、中、低劑量組均明顯高于模型組，但明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組。說(shuō)明切除卵巢后由于大鼠體內(nèi)雌激素水平下降，其對(duì)子宮內(nèi)膜的刺激作用下降，故模型組子宮內(nèi)膜明顯萎縮；尼爾雌醇和提取物均有不同程度提高血內(nèi)雌激素水平的作用，而使子宮內(nèi)膜增生。4.討論本研究通過(guò)切除卵巢誘發(fā)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的大鼠模型，運(yùn)用隨機(jī)對(duì)照分組原則，采用骨生物力學(xué)、DEXA掃描、放免、骨代謝等指標(biāo)觀察了提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響，并與尼爾雌醇進(jìn)行對(duì)照，旨在觀察提取物對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的療效。本次實(shí)^r結(jié)果表明提取物能顯著提高去勢(shì)大鼠骨礦含量及骨密度、骨抗扭轉(zhuǎn)力學(xué)性能，以及血清中E2、CT、BGP的含量。提取物可以提高血內(nèi)雌激素水平的作用，使子宮內(nèi)膜增生，減慢子宮萎縮。權(quán)利要求1.一種預(yù)防和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松癥的藥用組合物，其特征在于制成該組合物所含藥效成分的原料由當(dāng)歸、黃芪和淫羊藿組成，其重量比為當(dāng)歸1～50份，黃芪1～100份，淫羊藿0.1～100份。2.如權(quán)利要求l所述的藥用組合物，其中當(dāng)歸、黃芪和淫羊藿的重量比為當(dāng)歸120份，黃芪20100份，淫羊愛(ài)1100份。3.如權(quán)利要求l所述的藥用組合物，其特征在于所述原料的重量比為當(dāng)歸10份，黃芙50份，淫羊覆50份。4.如權(quán)利要求l所述的藥用組合物，所述組合物還包含選自生地黃、葛根、赤芍和骨碎補(bǔ)等其他成分。5.如權(quán)利要求l-4中任一項(xiàng)所述的藥用組合物的提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿粉碎成粉末；(2)稱取當(dāng)歸、黃芘，以412倍水或任意比例乙醇水溶液提取13次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏I;(3)稱取淫羊藿，以4~12倍5095%乙醇水溶液提取1~3次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮得浸膏II;(4)取浸膏I、II,合并，混勻，干燥，得到所述藥用組合物的提取物。6.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的藥用組合物的提取物的制備方法，其特征在于步驟如下(1)取當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿粉碎成粉末；(2)稱取當(dāng)歸、黃芪，淫羊藿，混合均勻，以412倍水或任意比例乙醇水溶液提取13次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，濃縮得到浸膏；(3)取浸膏混勻，干燥，得到所述藥用組合物的提取物。7.如權(quán)利要求l-4中任一項(xiàng)所述的藥用組合物在制備一種藥物中的應(yīng)用，所述藥物可以有效促進(jìn)MG-63人成骨細(xì)胞的增殖、分化，增加受雌激素影響的基因在MCF-7細(xì)胞的表達(dá)水平，且不刺激乳癌細(xì)胞的增殖。8.用權(quán)利要求5或6的方法制備的提取物在制備一種藥物中的應(yīng)用，所述藥物可以有效促進(jìn)MG-63人成骨細(xì)胞的增殖、分化，增加受雌激素影響的基因在MCF-7細(xì)胞的表達(dá)水平，且不刺激乳癌細(xì)胞的增殖。9.如權(quán)利要求l-4中任一項(xiàng)所述的藥用組合物在制備用于預(yù)防和治10.用權(quán)利要求5或6的方法制備的提取物在在制備用于預(yù)防和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。11.如權(quán)利要求7-10中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述藥物為膠嚢、片劑或軟膠嚢劑型。12.—種預(yù)防和治療更年期綜合癥的藥用組合物，其特征在于該藥用組合物由當(dāng)歸、黃芪和淫羊藿提取物組成，其重量比為當(dāng)歸多糖120%;黃芪多糖2060%;黃芪乙醇提取物120%;淫羊藿提取物2080%。13.如權(quán)利要求12所述的藥用組合物，其特征在于重量配比為當(dāng)歸多糖8%;黃芪多糖46%;黃芙乙醇提取物6%;淫羊藿提取物40%。14.如權(quán)利要求12或13所述的藥用組合物的制備方法，其包括混合當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芘乙醇提取物和淫羊藿提取物。15.權(quán)利要求14的制備方法，其中當(dāng)歸多糖、黃芘多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的重量比為當(dāng)歸多糖120%;黃茂多糖20~60%;黃芪乙醇提取物1~20%;淫羊藿提取物20~80%。16.權(quán)利要求13的制備方法，其中當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物的重量比為8。/Q:46%:6%:40%。17.權(quán)利要求13的制備方法，其中當(dāng)歸多糖的制備方法為取當(dāng)歸藥材粉碎成粉末，以412倍水提取13次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮。將濃縮液加入26倍50~95%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到當(dāng)歸多糖。18.權(quán)利要求17的制備方法，其中當(dāng)歸多糖的制備方法為取當(dāng)歸藥材lkg粉碎成粉末，以8倍水提取2次，每次l小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮，將濃縮液加入4倍95%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到當(dāng)歸多糖。19.權(quán)利要求13的制備方法，其中黃芘多糖和黃荒乙醇提取物的制備方法為取黃芪藥材粉碎成粉末，以412倍水或提取13次，每次0.52小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮；將濃縮液加入2~6倍50~95%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到黃芪多糖；剩余醇液揮干乙醇后以水重新溶解，過(guò)大孔樹(shù)脂柱，水洗約24倍柱體積，再用50%95%乙醇洗脫2~4倍柱體積，收集醇洗脫液，濃縮干燥后得到黃芘乙醇提取物。20.權(quán)利要求19的制備方法，其中黃芪多糖和黃芪乙醇提取物的制備方法為取黃芪藥材lkg粉碎成粉末，以8倍水或提取2次，每次l小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮，將濃縮液加入4倍95%乙醇，收集所得沉淀，干燥后得到黃芪多糖；剩余醇液揮干乙醇后以水重新溶解，過(guò)大孔樹(shù)脂柱，水洗約3倍柱體積，再用70%乙醇洗脫3倍柱體積，收集醇洗脫液，濃縮干燥后得到黃芪乙醇提取物。21.權(quán)利要求13的制備方法，其中淫羊藿提取物的制備方法為取淫羊藿藥材粉粹成粉末，以412倍3095%乙醇水溶液提取13次，每次0.5~2小時(shí)，合并提取液，濃縮干燥后得淫羊藿提取物。22.權(quán)利要求21的制備方法，其中淫羊藿提取物的制備方法為取淫羊藿藥材lkg粉粹成粉末，以8倍70%乙醇水溶液提取2次，每次l小時(shí)，合并提取液，濃縮干燥后得淫羊藿提取物。23.—種組合物，它包含淫羊藿提取物與當(dāng)歸多糖、黃芘多糖、黃芪乙醇提取物，用于預(yù)防和治療更年期綜合癥，有效增加受雌激素影響的基因在MCF-7細(xì)胞的表達(dá)水平、或者提高免疫水平。24.按照權(quán)利要求12或13所述藥用組合物在制備用于預(yù)防和治療更年期綜合癥藥物中的應(yīng)用，其中所迷藥物為膠嚢、片劑或其他劑型。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，提供了一種防治和治療更年期綜合癥和/或骨質(zhì)疏松癥的藥用組合物及其提取物的制備方法。所述組合物是由三味中藥當(dāng)歸、黃芪和淫羊藿按照一定比例煎煮提取而成。所述組合物也可以是由當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、黃芪乙醇提取物和淫羊藿提取物按照一定比例配伍而成。試驗(yàn)證明，所述組合物或提取物不僅具有良好的雌激素樣作用和促成骨細(xì)胞增殖、分化作用，且安全無(wú)明顯毒副作用，可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為防治更年期綜合癥和骨質(zhì)疏松的中藥新藥。文檔編號(hào)A61P19/10GK101129448SQ20061012623公開(kāi)日2008年2月27日申請(qǐng)日期2006年8月21日優(yōu)先權(quán)日2006年8月21日發(fā)明者董婷霞,詹華強(qiáng)申請(qǐng)人:香港科技大學(xué)