專利名稱：：治療脂質相關病癥的方法和組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明大體來說涉及對諸如血脂異常和動脈粥樣硬化的脂質相關病癥的治療，且更具體來說，涉及治療脂質相關病癥的具有減弱的潮紅副作用的組合物和方法。背景技水動脈粥樣硬化為脂肪物質、膽固醇和其它物質的沉積物積聚于動脈內層中的過程。所述積聚物被稱為斑塊。破裂的斑塊會導致形成可阻斷血液流到心臟(心臟病發(fā)作)或腦部(中風)的血凝塊。在美國，心臟病發(fā)作是導致男性和女性死亡的首要原因，且中風是導致死亡的第三號原因[例如參看NatureMedicine,SpecialFocusonAtherosclerosis,(2002)8:1209-1262]。異常高水平的循環(huán)脂質是發(fā)展動脈粥樣硬化的主要誘發(fā)因素。高水平的低密度脂蛋白(LDL)膽固醇、高水平的甘油三酯或低水平的高密度脂蛋白(HDL)膽固醇獨立地為動脈粥樣硬化和相關病理學的風險因素。煙酸(即尼克酸，吡啶-3-甲酸，維生素B3)為人體健康、生長和繁殖必需的水溶性維生素。煙酸也是最早用于治療脂質相關病癥的藥物之一。其由于實質上有利地影響上文所列的所有脂質參數而成為有價值的藥物[GoodmanandGilman'sPharmacologicalBasisofTherapeutics,編者HarmonJG和LimbirdLE，第36章，MahleyRWandBersotTP(2001)第971-1002頁]。煙酸對于治療或預防動脈粥樣硬化性心血管疾病的益處已在六個主要臨床試驗中得以證實[GuytonJR(1998)AmJCardiol82:18U-23U]。煙酸類似物或個行生物的結構禾卩合成也在MerckIndex,AnEncyclopediaofChemicals,Drugs,andBiologicals,第10版(1983)中進行論述。不幸的是，改變血清脂質水平所需煙酸的劑量可能會相當大，而且這些劑量的副作用也會頻繁出現。副作用可包括胃腸紊亂、肝毒性和葡萄糖代謝破壞和尿酸水平混亂。然而，煙酸療法的最常見與最主要的副作用為強烈的潮紅，通常伴隨皮膚瘙癢、麻刺感和發(fā)熱。盡管潮紅反應一般無害，但患者順應性顯著降低也足以讓人感覺不快。通常，在開始治療后數天內，30-40%的患者會停止采用煙酸治療。已進行多種嘗試研發(fā)在維持治療功效的同時也使皮膚潮紅反應減到最小的煙酸類似物、劑型和治療方案。然而，截至目前，這些嘗試導致僅部分降低皮膚潮紅反應的化合物或方法。此外，這些化合物或方法可能會導致其它副作用。舉例來說，可在投與煙酸之前投與諸如阿斯匹靈(aspirin)的化合物以試圖減少潮紅。然而，阿斯匹靈充其量僅在部分患者中引起潮紅的部分減弱，且阿斯匹靈的胃腸副作用也會使其用途受限。此外，己研發(fā)出延長或持續(xù)釋放的煙酸調配物，據報導其具有較低的潮紅發(fā)生率。然而，也己證實，這些延長或持續(xù)釋放的調配物會導致肝毒性，這是比潮紅更為嚴重的副作用。因此，需要能夠抗脂解而不會引起在經煙酸治療后可見的潮紅水平的化合物和鑒別所述化合物的方法。本發(fā)明滿足這一需求并且還提供相關的優(yōu)勢。
發(fā)明內容申請者在本文中公開，煙酸受體調節(jié)劑活化細胞內MAP激酶路徑的能力是所述調節(jié)劑能否在活體內引起潮紅的前兆。具體來說，申請者公開，在低于煙酸的程度上活化絲裂素活化蛋白激酶(MAP激酶)的煙酸受體調節(jié)劑會在活體內產生比煙酸弱的潮紅反應。活體內潮紅檢定是一項勞動力密集、耗時且昂貴的檢定方法，因此使用有效的活體外基于細胞的檢定(諸如MAP激酶檢定)針對潮紅能力篩選調節(jié)劑的能力將極為有利。第一方面，本發(fā)明提供一種鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。在一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。在另一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為抗脂解化合物。在另一實施例中，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述煙酸受體調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。在一實施例中，所述由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性水平低至少兩個標準差。在另一實施例中，使用基于抗體的檢定測定所述MAP激酶活性。在另一實施例中，使用酶聯(lián)免疫吸收劑化驗(ELISA)測定所述MAP激酶活性。第二方面，本發(fā)明提供一種鑒別與煙酸相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。在一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。在另一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為抗脂解化合物。在另一實施例中，當與煙酸相比時，所述煙酸受體調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。在一實施例中，所述由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比由煙酸誘導的MAP激酶活性水平低至少兩個標準差。在另一實施例中，使用基于抗體的檢定測定所述MAP激酶活性。在另一實施例中，使用ELISA測定所述MAP激酶活性。第三方面，本發(fā)明提供一種鑒別與煙酸相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。在一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。在另一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為抗脂解化合物。在另一實施例中，當與煙酸相比時，所述煙酸受體調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。在一實施例中，所述由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比由煙酸誘導的MAP激酶活性水平低至少兩個標準差。在另一實施例中，使用基于抗體的檢定測定所述MAP激酶活性。在另一實施例中，使用ELISA測定所述MAP激酶活性。第四方面，本發(fā)明提供一種與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，其中根據第一方面的方法將所述調節(jié)劑鑒別為與煙酸或煙酸類似物相比具有減弱的潮紅作用的調節(jié)劑。在一實施例中，所述調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。在另一實施例中，所述調節(jié)劑為抗脂解化合物。在另一實施例中，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。第五方面，本發(fā)明提供一種制備組合物的方法，其包含鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，且隨后將所述調節(jié)劑與載劑混合，其中所述調節(jié)劑是經第一方面的方法鑒別。第六方面，本發(fā)明提供一種醫(yī)藥組合物，其包含第四方面的調節(jié)劑、基本上由第四方面的調節(jié)劑組成或由第四方面的調節(jié)劑組成。第七方面，本發(fā)明提供一種預防或治療個體的脂質相關病癥的方法，其包含向所述個體投與有效改變脂質的量的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中所述調節(jié)劑是經第一方面的方法鑒別。在一實施例中，所述脂質相關病癥為血脂異常、高脂血癥、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化、代謝綜合癥、心臟病、中風或外周血管疾病。在另一實施例中，所述脂質相關病癥為血脂異常。在另一實施例中，所述脂質相關病癥為動脈粥樣硬化。在一實施例中，第七方面的方法另外包含向所述個體投與有效量的用于治療肥胖癥或糖尿病的藥劑與有效量的煙酸受體調節(jié)劑的組合，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中所述調節(jié)劑是經第一方面的方法鑒別。在一實施例中，所述個體為哺乳動物，且在另一實施例中，所述個體為人類。第八方面，本發(fā)明提供一種降低有需要的個體體內的LDL水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的第四方面的調節(jié)劑。第九方面，本發(fā)明提供一種降低有需要的個體體內的甘油三酯水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的第四方面的調節(jié)劑。第十方面，本發(fā)明提供一種增加有需要的個體體內的HDL水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的第四方面的調節(jié)劑。第十一方面，本發(fā)明提供一種制備用作脂質改變劑的藥物的方法，所述藥物包含第四方面的調節(jié)劑。此外，第十一方面，本發(fā)明提供一種制備用于治療脂質相關病癥的藥物的方法，所述藥物包含第四方面的調節(jié)劑。圖1繪示通過ELISA和免疫印跡(WesternBlot)檢定的表達人類煙酸受體的CHO細胞中由煙酸誘導的MAP激酵活化。圖2繪示使用ELISA檢定的表達人類煙酸受體的CHO細胞中由煙酸和化合物8引起的MAP激酶活化。圖3繪示使用以下檢定比較煙酸(化合物1)和數種煙酸受體調節(jié)劑的表格小鼠體內進行的活體內潮紅檢定；表達人類煙酸受體的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中進行的cAMP檢定；和通過ELISA檢定表達人類煙酸受體的CHO細胞中的MAP激酶活化。最后一列展示MAP激酶EC50比cAMPIC5o的比率。圖4繪示表達人類煙酸受體的CHO細胞中數種煙酸受體調節(jié)劑的MAP激酶活化的曲線圖。暗箭頭表示已在小鼠中展示引起潮紅的化合物，而亮箭頭表示未在小鼠中引起潮紅的化合物。水平虛線表示低于煙酸2個標準差。圖5繪示由于其對CHO細胞中所表達的人類(左上圖)和小鼠(右上圖)煙酸受體上的MAP激酶的低水平活化而選擇的煙酸受體調節(jié)劑，即化合物ll。隨后繪示當與煙酸相比時所述化合物在小鼠體內未引起顯著潮紅(右下圖)且使小鼠體內的游離脂肪酸水平降低(左下圖)。圖6繪示煙酸類似物化合物、即化合物12在以CHO細胞中所表達的人類(左圖)和小鼠(右圖)煙酸受體進行的MAP激酶檢定中具有類似煙酸的作用。具體實施方式申請者已發(fā)現，煙酸受體調節(jié)劑活化細胞內MAP激酶路徑的能力與所述調節(jié)劑在活體內誘導潮紅的能力相關。如本文所示，煙酸與人類煙酸受體結合且活化這些細胞內的7MAP激酶(參看實例l和圖1)。使用兩類基于抗體的檢定(即ELISA和免疫印跡檢定)展示MAP激酶活化。如本文所公開，經證實，與在活體內不引起潮紅的調節(jié)劑相比，已知在活體內引起潮紅的煙酸受體調節(jié)劑具有較高的MAP激酶活化水平(參看實例2和圖3和4)。接著，申請者選擇具有未知的在活體內引起潮紅的能力的煙酸受體調節(jié)劑，且測試這些調節(jié)劑活化表達人類或小鼠煙酸受體的細胞中MAP激酶的能力(參看實例3)。圖5繪示己基于cAMP檢定選擇的代表性調節(jié)劑，即化合物11。接著在MAP激酶ELISA檢定中測試這一調節(jié)劑，且所述調節(jié)劑與煙酸相比，展示低水平的MAP激酶活化(參看上圖)。接下來測試化合物ll在活體內引起潮紅的能力。如圖5右下圖所示，化合物ll在小鼠活體內未引起任何顯著的潮紅反應。此外，如本文所公開，化合物11可抗脂解(參看左下圖)。申請者還在本文中公開，可使用在MAP激酶檢定中具有與煙酸類似的性質的煙酸類似物代替本發(fā)明方法中的煙酸。此類化合物(即化合物12)展示于圖6中。盡管多年來一直將煙酸用作脂質相關病癥的療法，但截止目前使煙酸起作用的受體尚未可知。最初，提出煙酸可經由特定GPCR起作用(LorenzenA等人(2001)MolecularPharmacology59:349-357)。最后，已將已知的孤兒GPCR(稱為HM74a)鑒別為尼克酸受體(例如參看美國申請案第10/314,048號)。人類煙酸受體的核苷酸序列可見于GenBank寄存編號第NM—177551號和本文的SEQIDNO:1。一般來說，當配體與其受體結合(通常稱為受體的"活化")時，引起受體構形的改變，其有助于胞內區(qū)域與胞內G-蛋白之間的偶合。盡管也存在其它G蛋白，但目前己鑒別出的G蛋白為Gq、Gs、Gi、Gz和Go。也存在似乎將數類GPCR與磷脂酶C路徑偶合的混雜G蛋白(諸如Gal5或Gal6)[Offermanns&Simon,JBiolChem(1995)270:15175-80],或經設計為使多種不同GPCR與相同路徑偶合的嵌合G蛋白[Milligan&Rees，TrendsinPharmaceuticalSciences(1999)20:118-24]。經配體活化的GPCR與G蛋白的偶合會引發(fā)信號級聯(lián)過程(稱為"信號轉導")。在正常條件下，信號轉導最終將導致細胞活化或細胞抑制。已知煙酸受體將與GiG蛋白偶合，因此煙酸受體的激動作用將使胞內cAMP水平降低。在脂肪細胞中，cAMP降低會導致激素敏感性脂肪酶活性的降低和游離脂肪酸釋放的減少。結果使游離脂肪酸減少兩倍。首先，其最終將降低LDL-膽固醇并且升高HDL-膽固醇水平，此為引起動脈粥樣硬化和相關病癥的獨立風險因素。其次，其將使患有胰島素抵抗或2型糖尿病的個體的胰島素敏感性增加。不幸的是，使用煙酸作為治療劑將因多種相關副作用(諸如潮紅)而部分受限制。申請者在本文中公開一種通過測定化合物的MAP激酶活性來鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的化合物的方法，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述化合物誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述化合物具有減弱的潮紅作用。舉例來說，申請者公開一種通過測定化合物的MAP激酶活性來預測所述化合物與煙酸或煙酸類似物相比，是否具有減弱的潮紅作用的方法，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述化合物誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述化合物具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明提供一種鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。在一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。在另一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為抗脂解化合物。在另一實施例中，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述煙酸受體調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。在一實施例中，所述由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性水平低至少兩個標準差。在另一實施例中，使用基于抗體的檢定測定所述MAP激酶活性。在另一實施例中，使用ELISA測定所述MAP激酶活性。本發(fā)明還提供一種鑒別與煙酸相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。在一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。在另一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為抗脂解化合物。在另一實施例中，當與煙酸相比時，所述煙酸受體調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。在一實施例中，所述由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比由煙酸誘導的MAP激酶活性水平低至少兩個標準差。在另一實施例中，使用基于抗體的檢定測定所述MAP激酶活性。在另一實施例中，使用ELISA測定所述MAP激酶活性。申請者在本文中公開一種通過以下步驟鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的化合物的方法a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述化合物的MAP激酶活性；其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述化合物誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述化合物具有減弱的潮紅作用。舉例來說，申請者公開一種通過以下步驟預測化合物與煙酸或煙酸類似物相比時，是否具有減弱的潮紅作用的方法a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑和b)測定所述化合物的MAP激酶活性；其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述化合物誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述化合物具有減弱的潮紅作用。申請者公開一種通過以下步驟鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性；其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明另外提供一種鑒別與煙酸相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性；其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。在一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。在另一實施例中，所述煙酸受體調節(jié)劑為抗脂解化合物。在另一實施例中，當與煙酸相比時，所述煙酸受體調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。在一實施例中，所述由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比由煙酸誘導的MAP激酶活性水平低至少兩個標準差。在另一實施例中，使用基于抗體的檢定測定所述MAP激酶活性。在另一實施例中，使用EUSA測定所述MAP激酶活性。如本文所使用的術語"潮紅"意謂可檢測的皮膚血管舒張反應。舉例來說，潮紅可由投與煙酸受體激動劑(諸如煙酸或煙酸類似物)引起。據悉，煙酸誘導的潮紅是由前列腺素(諸如前列腺素D2(PGD2))所介導。潮紅反應以皮膚發(fā)紅為特征，并且還可包括其它癥狀，例如皮膚瘙癢、麻刺感、發(fā)熱感或頭痛。潮紅反應可發(fā)生在皮膚的任何部位，例如臉上、脖子上或軀干上；并且可在一個地方或一個以上的地方發(fā)生。就人類來說，潮紅反應可持續(xù)數分鐘到數小時。一般來說，就人類來說，由經口投與足夠劑量的煙酸或煙酸類似物所引起的潮紅反應可在任何部位持續(xù)20分鐘到8小時或更長時間。就小鼠或大鼠來說，潮紅反應通常在投與煙酸(注射投與)后約3分鐘時達到最高峰，而在約30分鐘后顯著下降。產生可檢測的潮紅反應所需的煙酸或煙酸類似物的量視多個變數而定，例如化合物調配物和個體個體。具體來說，產生可檢測的潮紅反應所需的煙酸或煙酸類似物的量可視例如個體的體重、個體的遺傳組成或個體的一般健康狀況而定。可在人體內引起潮紅反應的煙酸或煙酸類似物的量可低于降低與動脈粥樣硬化相關的血清脂質的量所需的煙酸或煙酸類似物的量，且可例如包括每天至少175mg、每天至少200mg、每天至少250mg、每天至少500mg、每天至少750mg、每天至少1g、每天至少1.5g、每天至少2g、每天至少2.5g、每天至少3g、每天至少3.5g、每天至少4g、每天至少4.5g、每天至少5g、每天至少5.5g、每天至少6g、每天至少6.5g、每天至少7g、每天至少7.5g、每天至少8g或更多。舉例來說，每天500mg到2g或更多量煙酸可在大部分人中引起潮紅反應。如本文所使用的"煙酸"意謂具有以下化學式的尼克酸術語煙酸還包括與游離酸形式的煙酸具有類似特性的煙酸的醫(yī)藥學上可接受的鹽和溶劑化物。如所屬領域技術人員所了解，煙酸可與其它化合物一起調配從而改變其藥理學特性。舉例來說，可視加到煙酸中的其它化合物而將煙酸調配為快速釋放(IR)的形式或延長或持續(xù)釋放(SR)的形式。延長或持續(xù)釋放調配物經設計以將活性成分自片劑或膠囊中緩慢釋放，這使得給藥頻率相對于與常規(guī)或快速劑型相關的典型給藥頻率有所降低。緩慢藥物釋放經設計以降低并延長血液中藥物的水平，且因此使與常規(guī)或快速釋放煙酸產品相關的潮紅副作用最小化或減少。然而，在患有脂質相關病癥的患者中的研究己證實，某些延長或持續(xù)釋放產品不具有與快速釋放煙酸相同的有利脂質改變作用，且事實上與快速釋放產品相比具有更不利的副作用概況。舉例來說，如Henken等人AmJMed，91:1991(1991)和Dalton等人AmJMed，93:102(1992)中所述，已知延長或持續(xù)釋放的煙酸調配物會引起更高的肝毒性發(fā)生率。已研發(fā)出延長或持續(xù)釋放的煙酸調配物，諸如Nicobid.RTM.膠囊(Rhone-PoulencRorer)、Endur-acin.RTM.(InnoviteCorporation)和美國專利第5,126,145號和第5,268,181號中所述的調配物，所述專利中描述含有兩種不同類型羥丙基甲基纖維素和疏水性組分的持續(xù)釋放煙酸調配物。如本文所使用的"煙酸類似物"意謂在結構上或功能上與煙酸相關的化合物，其與煙酸具有類似的MAP激酶概況和潮紅作用。煙酸類似物的實例為化合物12(參看圖6)。這一化合物在結構上與煙酸相關且其與煙酸的不同之處在于其含有四唑基團。此外，由于這一化合物結合煙酸受體，故其在功能上也與煙酸相關。另外，這一化合物具有與煙酸類似的MAP激酶概況(參看圖6)和潮紅作用。因此，可將這一化合物作為代替煙酸的參照物用于本發(fā)明的方法中。其它所述煙酸類似物將為所屬領域技術人員顯而易見。此項技術中己知數種煙酸的結構類似物。在一些實施例中，煙酸的結構類似物含有至少一個酸性官能團，諸如羧基、四唑基等。在一些實施例中，煙酸的結構類似物含有至少一個氮環(huán)原子，諸如吡啶基、吡唑基、異噁唑基等基團中存在的氮。在一些實施例中，煙酸的結構類似物含有至少一個酸性官能團和至少一個氮環(huán)原子。這些基團包括在活體內例如通過血液水解而轉化得到酸性官能團或環(huán)氮的前藥基團。詳細論述提供于A.C.S.SymposiumSeries,T.Higuchi和V.Stella,"Pro-drugsasNovelDeliverySystems,"第14巻和"BioreversibleCarriersinDrugDesign,"EdwardB.Roche編輯，AmericanPharmaceuticalAssociationandPergamonPress,1987中，所述兩份參考文獻都以引用的方式并入本文中。煙酸類似物可在功能上與煙酸相關，例如，煙酸類似物可具有煙酸的功能，諸如與煙酸受體特異性結合，或當與煙酸受體結合時起反應而引發(fā)胞內信號。舉例來說，煙酸類似物可為煙酸受體激動劑。此項技術中己知數種煙酸類似物或衍生物，且可例如見于MerckIndex,AnEncyclopediaofChemicals,Drugs,andBiologicals，第10版(1983)。如上文關于煙酸所述，可以不同方式調配煙酸類似物以改變其藥理學特性。"煙酸受體調節(jié)劑"為當與煙酸受體結合時調節(jié)或改變胞內反應的物質，例如配體或化合物。例如，胞內反應可為GTP與膜的結合的改變或第二信使(諸如cAMP)的水平的調節(jié)。"激動劑"為當與受體結合時活化胞內反應的物質，例如配體或化合物。例如，胞內反應可為GTP與膜的結合的增強或第二信使(諸如cAMP)的水平的調節(jié)。在一些實施例中，激動劑為先前未知的當與受體結合時活化胞內反應的物質(例如，增強GTPYS與膜的結合或降低胞內cAMP水平)。"部分激動劑"為當與受體結合時以比完全激動劑低的程度或范圍活化胞內反應的物質，例如配體或化合物。如本文所使用的"煙酸受體部分激動劑"為當與煙酸受體結合時以比作為煙酸受體完全激動劑的煙酸低的程度活化胞內反應的物質。技術上，由于與完全激動劑相比，部分激動劑僅產生部分反應，故術語部分激動劑是一個相對術語。由于隨著時間的推移，新的化合物被發(fā)現，故完全激動劑可改變，并且以前的完全激動劑可變?yōu)椴糠旨觿?。為清楚起見，將如本文所使用的煙酸受體部分激動劑與作為完全激動劑的煙酸相比較。煙酸受體部分激動劑與煙酸相比，具有可檢測的較低的活化胞內反應的程度，亦即，煙酸受體部分激動劑引起比最大反應低的反應。因此，煙酸受體部分激動劑具有比煙酸低的功效。舉例來說，煙酸受體部分激動劑與煙酸相比，具有90%或更低的功效；與煙酸相比，具有85%或更低的功效；與煙酸相比，具有80%或更低的功效；與煙酸相比，具有75%或更低的功效；與煙酸相比，具有70%或更低的功效；與煙酸相比，具有65%或更低的功效；與煙酸相比，具有60%或更低的功效；與煙酸相比，具有55%或更低的功效；與煙酸相比，具有50%或更低的功效；與煙酸相比，具有45%或更低的功效；與煙酸相比，具有40%或更低的功效；與煙酸相比，具有35%或更低的功效；與煙酸相比，具有30%或更低的功效；與煙酸相比，具有25%或更低的功效；與煙酸相比，具有20%或更低的功效；與煙酸相比，具有15%或更低的功效或與煙酸相比，具有10%或更低的功效。舉例來說，煙酸受體部分激動劑與煙酸相比，可具有10%到90%的功效；與煙酸相比，可具有20%到80%的功效；與煙酸相比，可具有30%到70%的功效；與煙酸相比，可具有40%到60%的功效或與煙酸相比，可具有45%到55免的功效。功效與效力不同，功效為經測量的反應的量度，而效力為引起預定反應所采用的化合物的量。因此，當與激動劑、拮抗劑或反向激動劑相比時，煙酸受體部分激動劑可具有較高、較低或相當的效力?？墒褂么隧椉夹g中眾所周知的檢定法測定煙酸受體部分激動劑。舉例來說，可使用cAMP檢定測定煙酸受體部分激動劑。就煙酸受體來說，此項技術中已知多個煙酸受體序列。舉例來說，人類煙酸受體核苷酸序列可見于GenBank寄存編號第NM—177551號且其在本文中列為SEQIDNO:1。還應了解，可在不破壞煙酸受體結合煙酸的能力的情況下對煙酸受體進行有限的修飾。舉例來說，預期煙酸受體包括其它煙酸受體多肽，例如人類煙酸受體多肽(SEQIDNO:2)的物種同源物。數據庫中存在人類煙酸受體的物種同源物的序列，例如煙酸受體的大鼠同源物可見于GenBank中寄存編號第BAC58009號。此外，煙酸受體包括實質上保持完整煙酸受體多肽的煙酸受體功能的煙酸受體剪接變異體和等位基因變異體。另外，煙酸受體可含有相對于野生型受體的氨基酸改變(例如保守氨基酸改變)，只要突變受體實質上保持野生型煙酸受體多肽的煙酸受體功能即可?？墒褂每捎盟惴ê统绦?諸如基本局部比對搜索工具(BasicLocalAlignmentSearchTool,"BLAST"))使用默認設置將氨基酸序列的保守和非保守氨基酸改變、缺失和插入與參考序列相比較(例如參看Karlin和Altschul,ProcNatlAcadSciUSA(1990)87:2264-8;Altschul等人，JMolBiol(1990)215:403-410;Altschul等人，NatureGenetics(1993)3:266-72;和Altschul等人,NucleicAcidsRes(1997)25:3389-3402)。煙酸受體與煙酸特異性結合。預期術語特異性結合意謂所述多肽將對目標多肽具有親和性，所述親和性將顯著高于其對不相關多肽的親和性。此項技術中眾所周知檢測或測量受體結合的若干方法，例如放射性配體結合檢定，或具有功能性讀出的檢定(諸如FLIPR檢定)。應了解，可使用實質上保持完整多肽的煙酸受體功能的煙酸受體片段代替完整多肽。舉例來說，可使用煙酸受體的配體結合域代替完整多肽，以便測定部分激動劑與煙酸受體的結合。"減弱"意謂可測量的數量或特定活性的降低，且其與術語"降低"、"減少"、"減小"和"減少"同義。關于潮紅的量，減少的潮紅反應可例如為潮紅嚴重程度的降低和/或比將另外出現的潮紅事件(潮紅發(fā)生率降低)少的潮紅事件。舉例來說，潮紅的嚴重程度和/或發(fā)生率可降低至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。此外，潮紅可減少100%或消除從而無任何可檢測的顯著潮紅。在一實施例中，潮紅強度減少至少約80%。在另一實施例中，潮紅減少為潮紅的完全減少或消除?？墒褂枚喾N方法檢測并量化潮紅。舉例來說，可經視覺檢測并量化潮紅。一種用于檢測并量化潮紅的方法為例如使用PirimedPimII激光多普勒儀(LaserDopler)進行的激光多普勒法。此外，可對個體進行調査以評定潮紅和可能與潮紅相關的癥狀(諸如麻剌感或發(fā)熱感)的嚴重程度。另一種用于檢測并量化潮紅的方法可包括測量來自個體的生物樣本(諸如血液或尿液)中前列腺素D2(PGD2)或前列腺素F2(PGF2)的水平。此外，例如可由個體的尿液測量PGD-M(即PGD2的主要尿代謝物)的水平。用于測量前列腺素水平的檢定在市面有售，例如PGD2的酶免疫檢定可購自CaymanChemical(AnnArbor,MI)。在一實施例中，在本發(fā)明的方法中，由所述化合物或所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性水平低至少兩個標準差。如圖4所示，低于煙酸誘導的MAP激酶活性水平至少兩個標準差的MAP激酶活性的降低鑒別由亮箭頭所示的所有已知不引起潮紅的化合物。如所屬領域技術人員所了解，可視所屬領域技術人員的要求而選擇不同的臨界值。舉例來說，如果想確保俘獲每一種不引起潮紅的化合物，那么由于當在活體內進行測試時一些化合物不會使潮紅反應減弱停止，故可能選擇偏向協(xié)助鑒別大部分化合物。在這種情況下，可將臨界點設置在與煙酸或煙酸類似物的兩個標準差以上，例如比煙酸或煙酸類似物低1.5個標準差。相反，可能需要避免任何具有潮紅活性的化合物，且因此可將臨界點設置在與煙酸或煙酸類似物的兩個標準差以下，例如比煙酸或煙酸類似物低2.5個標準差。在本發(fā)明的不同實施例中，由調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性水平低至少l、1.2、1.4、1.6、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.2、3.4、3.6、3.8、4.0、4.2、4.4、4.6、4.8或5.0個標準差。也可將臨界值表示成范圍，例如由調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低可例如比由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性水平低1與至少4個之間、2與至少3個之間或2.5與至少3個之間的標準差?？蓪y定MAP激酶活性的任何檢定用于本發(fā)明的方法中。舉例來說，可將底物活性檢定(諸如使用作為MAP激酶底物的髓鞘堿性蛋白進行的檢定)用于本發(fā)明的方法中。在一實施例中，可使用基于抗體的檢定測定MAP激酶活性。此項技術中眾所周知此類檢定，且其例如包括免疫印跡、ELISA、免疫沉淀、熒光偏振檢定(FPA)、Biacore檢定等。在一實施例中，用于測定MAP激酶活性的檢定為ELISA。在一實施例中，在本發(fā)明的方法中用于測定MAP激酶活性的檢定使用人類煙酸受體。本發(fā)明還提供一種與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，其中根據以下方法將所述調節(jié)劑鑒別為與煙酸或煙酸類似物相比具有減弱的潮紅作用的調節(jié)劑測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。舉例來說，本發(fā)明提供一種與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，其中根據以下方法將所述調節(jié)劑鑒別為與煙酸或煙酸類似物相比具有減弱的潮紅作用的調節(jié)劑測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。此外，本發(fā)明公開一種與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，其中根據以下方法將所述調節(jié)劑鑒別為與煙酸或煙酸類似物相比具有減弱的潮紅作用的調節(jié)劑a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。在一實施例中，所述調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。在另一實施例中，所述調節(jié)劑為抗脂解化合物。在另一實施例中，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。本發(fā)明另外提供一種制備組合物的方法，其包含鑒別與煙酸或煙酸類似物相比具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，且隨后將所述調節(jié)劑與載劑混合，其中所述調節(jié)劑是通過測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性來鑒別，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。此外，本發(fā)明公開一種制備組合物的方法，其包含鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，且隨后將所述調節(jié)劑與載劑混合，其中所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明還提供一種醫(yī)藥組合物，其包含與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑、基本上由或由所述煙酸受體調節(jié)劑組成，其中根據以下方法將所述調節(jié)劑鑒別為與煙酸或煙酸類似物相比具有減弱的潮紅作用的調節(jié)劑測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明還公開一種醫(yī)藥組合物，其包含與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑、基本上由或由所述煙酸受體調節(jié)劑組成，其中根據以下方法將所述調節(jié)劑鑒別為與煙酸或煙酸類似物相比具有減弱的潮紅作用的調節(jié)劑a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。如本文所使用的"組合物"意謂包含至少一種組分的物質。醫(yī)藥組合物為組合物的實例。醫(yī)藥組合物意謂包含至少一種活性成分的組合物，借此所述組合物適合于研究個體(例如人類)中的特定、有效的結果。所屬領域技術人員將了解和理解適合于基于所16屬領域技術人員的需求測定活性成分是否具有所需有效結果的技術。本文所述的組合物可包括醫(yī)藥學或生理學上可接受的載劑。適當的醫(yī)藥學上可接受的載劑可為所屬領域技術者所利用；例如參看Remington:TheScienceandPracticeorPharmacy,第20版，2000,Lippincott，Williams&Wilkons，(Gennaro等人編)。盡管對用于預防或治療而言，在替代使用中可能以化學原料或純化學物質形式投與本發(fā)明化合物，但以醫(yī)藥調配物或組合物形式提供化合物或活性成分也是需要的。因此，本發(fā)明另外提供醫(yī)藥調配物，其包含本發(fā)明的化合物或其醫(yī)藥學上可接受的鹽或衍生物，連同一種或一種以上其醫(yī)藥學上可接受的載劑和/或預防成分。在載劑可與調配物中的其它成分相容且不會對其接受者過度有害的意義上來說，載劑是"可接受的"。醫(yī)藥調配物包括適于經口、經直腸、經鼻、局部(包括口腔和舌下)、經陰道或不經腸(包括肌內、皮下和靜脈內)投與或適于通過吸入或吹入投與的形式的醫(yī)藥調配物?？蓪⒈景l(fā)明的化合物連同常規(guī)佐劑、載劑或稀釋劑一起放置成醫(yī)藥調配物和其單位劑量的形式，且在所述形式中其可以下列形式使用經口使用的固體形式(諸如片劑或填充膠囊)或液體形式(諸如溶液、懸浮液、乳液、酏劑、凝膠或填充有所述物質的膠囊)；經直腸投藥的栓劑形式；供局部使用的液體、凝膠、洗液或油膏形式；或供不經腸(包括皮下)使用的無菌注射溶液形式。在有或沒有其它活性化合物或成分的情況下，這些醫(yī)藥組合物和其單位劑型都可包含常規(guī)比例的常規(guī)成分，且所述單位劑型可含有與打算使用的每日劑量范圍相稱的任何適當有效量的活性成分。對于由本發(fā)明的化合物制備醫(yī)藥組合物而言，醫(yī)藥學上可接受的載劑可為固體或液體。固體形式的制劑包括散劑、片劑、丸劑、膠囊、扁囊劑、栓劑和可分散顆粒劑。固體載劑可為一種或一種以上也可充當稀釋劑、調味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、防腐劑、片劑崩解劑或封裝材料的物質。對于散劑而言，載劑可為與細粉狀活性組分混合的細粉狀固體。對于片劑而言，可將活性組分與具有必需粘合能力的載劑以適當比例混合，并壓制成所需形狀和尺寸。散劑和片劑可含有不同百分比數量的活性化合物。散劑或片劑中的代表性量可含有0.5%到約90%活性化合物；然而，所屬領域技術人員將了解何時需要所述范圍以外的量。散劑和片劑的適當載劑為碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂等。術語"制劑"旨在包括活性化合物與作為載劑的封裝材料的調配物，從而提供其中含有或不含載劑的活性組分由載劑包圍且因此互相締合的膠囊。類似地，包括扁囊劑和糖錠。片劑、散劑、膠囊、丸劑、扁囊劑和糖錠都可用作適于經口投與的固體形式。對于制備栓劑而言，首先將低熔點蠟(諸如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物)熔融，并通過攪袢使活性組分均勻分散于其中。隨后，可將熔融的均勻混合物倒入適宜尺寸的模具中，使其冷卻，并由此使其固化。適于經陰道投與的調配物可以子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊狀物、泡沬或噴霧形式提供，除活性成分外其還含有諸如所屬領域中己知適當的載劑。液體形式的制劑包括溶液、懸浮液和乳液，例如水或水-丙二醇溶液。舉例來說，可將不經腸注射用液體制劑調配成聚乙二醇水溶液中的溶液。可根據已知技術使用適當的分散劑或潤濕劑和懸浮劑調配可注射制劑，例如無菌可注射水性或油性懸浮液。無菌可注射制劑也可為無毒不經腸可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如1,3-丁二醇中的溶液?？墒褂玫目山邮艿拿絼┖腿軇樗?、林格氏溶液(Ringer'ssolution)和等滲氯化鈉溶液。此外，通常將無菌的不揮發(fā)性油用作溶劑或懸浮介質。出于這一目的，可使用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成甘油單酯或甘油二酯。此外，諸如油酸的脂肪酸也可用于制備可注射物。因此，可調配用于不經腸投與(即，通過注射，例如團注或連續(xù)輸注)的本發(fā)明的組合物，且其可以添加有防腐劑的安瓿、預填充注射器、小容量輸注液或多劑量容器中的單位劑型提供。所述組合物可采用諸如油性或水性媒劑中的懸浮液、溶液或乳液的形式，且可含有諸如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑的調配劑?；蛘?，活性成分可為通過無菌分離無菌固體或通過由溶液凍干而獲得的粉末形式，其在使用前用適當媒劑(例如無菌無熱原質水)復水。適于經口使用的水溶液可通過將活性組分溶解于水中并視需要加入適當著色劑、調味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑來制備。適于經口使用的水性懸浮液可通過將細粉狀活性組分分散于含有粘性材料的水中而制得，所述粘性材料諸如為天然或合成樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉或其它眾所周知的懸浮劑。還包括打算在即將使用前轉化成用于經口投與的液體形式制劑的固體形式制劑。所述液體形式包括溶液、懸浮液和乳液。這些制劑除活性組分外還可含有著色劑、調味劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、人工和天然甜味劑、分散劑、增稠劑、增溶劑等。對于向表皮局部投藥而言，可將本發(fā)明的組合物調配成油膏、乳膏或洗液，或調配成經皮貼片。舉例來說，可以水性或油性基質調配油膏和乳膏，同時加入適當的增稠劑和/或膠凝劑?？梢运曰蛴托曰|調配洗液，且其通常也含有一種或一種以上的乳化劑、穩(wěn)定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑或著色劑。適于在口中局部投與的調配物包括糖錠，其包含調味基質(通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠)中的活性劑；錠劑，其包含惰性基質(諸如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠)中的活性成分；和漱口液，其包含適當液體載劑中的活性成分。溶液或懸浮液是通過常規(guī)方式、例如用滴管、吸液管或噴霧器直接施加到鼻腔中。調配物可以單劑量或多劑量形式提供。在用滴管或吸液管的后一情況下，這可通過個別投與適當的預定體積的溶液或懸浮液實現。在噴霧器的情況下，這可例如借助于計量霧化噴霧泵實現。也可借助于在具有適當推進劑的加壓包裝中提供活性成分的氣霧劑調配物實現向呼吸道投藥。如果以氣霧劑形式(例如鼻氣霧劑)或通過吸入投與醫(yī)藥組合物，那么這可例如使用噴霧器、霧化器、霧化泵(pumpnebulizer)、吸入設備、計量式吸入器(meteredinhaler)或干粉吸入器進行?？赏ㄟ^所屬領域技術人員眾所周知的方法制備用于投與本發(fā)明組合物的醫(yī)藥形式(如氣霧劑形式)。就其制備而言，例如，本發(fā)明化合物于水、水/醇混合物或適當食鹽水溶液中的溶液或分散液中可使用常用添加劑(例如苯甲醇)或其它適當的防腐劑、用于增加生物利用度的吸收增強劑、增溶劑、分散劑等，且適當時可使用常用推進劑，其例如包括二氧化碳、CFC(諸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲垸或二氯四氟乙烷)等。氣霧劑也可適宜地含有表面活性劑，諸如卵磷脂。藥物的劑量可通過提供量閥進行控制。在打算用于向呼吸道投與的調配物(包括鼻內調配物)中，化合物一般將具有例如約10微米或IO微米以下的小粒度。可通過此項技術中已知的方式、例如通過微粉化獲得所述粒度。需要時，可使用適于提供活性成分的持續(xù)釋放的調配物?；蛘撸钚猿煞挚梢愿煞坌问教峁?，例如化合物于適當粉末基質中的粉末混合物，所述粉末基質諸如為乳糖、淀粉、淀粉衍生物(諸如羥丙基甲基纖維素)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。適宜地，粉末載劑可于鼻腔內形成凝膠。粉末組合物可以單位劑型提供，例如明膠膠囊或藥包或可借助于吸入器從其中投與粉末的發(fā)泡包裝。除上文所述的調配物外，還可將化合物調配為儲槽式制劑(depotpreparation)。此類長效調配物可通過植入(例如經皮下或經肌內植入)或通過肌內注射投與。因此，例如可將化合物與適當聚合或疏水材料(例如，調配為可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂一起調配，或調配為難溶衍生物，例如難溶鹽。此外，可通過控制釋放系統(tǒng)(諸如泵)傳遞組合物。另外，可使用持續(xù)釋放系統(tǒng)(諸如含有治療劑的固態(tài)疏水性聚合物的半滲透性基質)傳遞組合物。已產生多種持續(xù)釋放材料且為所屬領域技術人員眾所周知。持續(xù)釋放膠囊可視其化學性質而經數周到100多天的時間釋放化合物。視治療試劑的化學性質和生物穩(wěn)定性而定，可使用使調節(jié)劑穩(wěn)定的其它策略。向個體投藥的適當途徑包括使用此項技術中已知的方法經口、局部、經鼻、經直腸、經粘膜或經腸投與；不經腸傳遞，包括肌內、皮下、髓內注射，和鞘內、直接心室內、靜脈內、腹膜內、鼻內、肺內(吸入)或眼內注射。其它投藥途徑為氣霧劑和儲槽式調配物。在一實施例，投藥途徑為口服。本發(fā)明提供一種預防或治療個體中脂質相關病癥的方法，其包含向所述個體投與有效改變脂質的量的經以下方法鑒別的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。舉例來說，本發(fā)明提供一種預防或治療個體中脂質相關病癥的方法，其包含向所述個體投與有效改變脂質的量的經以下方法鑒別的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸相比，具有減弱的潮紅作用測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明還公開一種預防或治療個體中脂質相關病癥的方法，其包含向所述個體投與有效改變脂質的量的經以下方法鑒別的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。在一實施例中，所述脂質相關病癥為血脂異常、高脂血癥、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化、代謝綜合癥、心臟病、中風或外周血管疾病。在另一實施例中，所述脂質相關病癥為血脂異常。在另一實施例中，所述脂質相關病癥為動脈粥樣硬化。如本文關于病癥所使用的術語"治療"意謂一種或一種以上與特定病癥相關的癥狀的嚴重程度的降低。因此，治療病癥未必意謂與病癥相關的所有癥狀的嚴重程度的降低，且未必意謂一種或一種以上與病癥相關的癥狀的嚴重程度的完全降低。類似地，術語"預防"意謂預防一種或一種以上與特定病癥相關的癥狀的出現或發(fā)作且未必意謂對于病癥的完全預防。本發(fā)明的方法可用于治療煙酸反應性病癥，包括例如如本文所述的脂質相關病癥。如本文所使用的"個體"意謂任何動物，包括哺乳動物，例如小鼠、大鼠、其它嚙齒動物、兔、狗、貓、豬、牛、羊、馬或靈長類動物(例如人類)。在一實施例中，個體為哺乳動物。在另一實施例中，個體為人類。如本文關于煙酸受體調節(jié)劑的量所使用的術語"有效改變脂質的量"意謂足以可檢測地改變個體體內與動脈粥樣硬化相關的血清脂質的量的調節(jié)劑的量，所述改變例如為減少LDL-膽固醇、VLDL-膽固醇、血清脂蛋白(a)(Lp(a))或甘油三酯的量，或增加HDL-膽固醇的量。舉例來說，有效改變脂質的量的煙酸調節(jié)劑可增加HDL-膽固醇的量或減少LDL-膽固醇的量。此外，例如，有效改變脂質的量的煙酸調節(jié)劑可同時增加HDL-膽固醇的量和減少LDL-膽固醇的量。此項技術中眾所周知用于測量血液中這些脂質的量的標準實驗室檢定。膽固醇在血液中是通過脂蛋白復合物轉運，所述脂蛋白復合物諸如VLDL-膽固醇、LDL-膽固醇和高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-膽固醇)。LDL將血液中的膽固醇載運到血管壁的內皮下間隙中。認為血管壁內皮下間隙內LDL-膽固醇的過氧化將導致形成動脈粥樣硬化斑塊。另一方面，認為HDL-膽固醇抵抗斑塊形成并且延緩或防止心血管疾病和動脈粥樣硬化癥狀的發(fā)作。迄今為止，已鑒別出數種HDL-膽固醇亞類，諸如HDLr膽固醇、HDL2-膽固醇和HDL3-膽固醇。HDL可阻止動脈粥樣硬化發(fā)展可存在多種機制?；铙w外研究證實，HDL能夠將膽固醇自細胞中移除[Picardo等人，(1986)Arteriosclerosis,6,434-441]。有關這一性質的數據表明，HDL的一個抗導致動脈粥樣硬化的特性可歸因于其使具有過量游離膽固醇的組織衰竭且最終引起此膽固醇傳遞到肝中的能力[Glomset,(1968)J.LipidRes.，9,155-167]。這已得到證實膽固醇由HDL有效轉移到肝中的實驗的支持[Glass等人，(1983)J.Biol.Chem.，2587161-7167;McKinnon等人，(1986)J.Biol.Chem.，26,2548-2552〗。此外，HDL可用作快速代謝富集甘油三酯的脂蛋白所必需的載脂蛋白循環(huán)中的儲集器[Grow和Fried,(1978)J.Biol.Chem.,253,1834-1841;Lagocki和Scanu，(1980)J.Biol.Chem.，255,3701-3706;Schaefer等人，J.LipidRes"(1982)23,1259-1273]。一般來說，總膽固醇/HDL-膽固醇(即TC/HDL)比率可表示關于個體發(fā)展諸如動脈粥樣硬化、代謝綜合癥、心臟病或中風的病況的風險的有用預測因子。目前有關血漿脂質水平的分類展示于表B中，但這些類別可隨新穎風險數據分析的改變而改變表B<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>來自2001NationalCholesterolEducationProgramGuidelines因此，總膽固醇/HDL-C(即TC/HDL)的推薦比率表明，小于或等于3.5的比率是理想的，且大于4.5的比率被認為是"危險"的。在個體呈現"正常"LDL和總膽固醇但具有低HDL-膽固醇的情況下，測定TC/HDL比率的價值是極為明顯的?；贚DL和總膽固醇，個體可能不適合于進行治療，然而，當對HDL-膽固醇水平進行因子分解時，可獲得更為精確的風險評定。因此，如果個體的HDL-膽固醇水平使得所述比率大于4.5,那么就可有理由采用治療或預防干預。對于LDL-膽固醇水平而言，美國心臟協(xié)會(AmericanHeartAssociation)認為，LDL-膽固醇水平小于100mg/dL是最佳的，100-129mg/dL較為理想，130-159mg/dL為邊際值，160-189mg/dL較高且190mg/dL被認為是極高的LDL-膽固醇水平。對于甘油三酯水平而言，美國心臟協(xié)會認為，低于150mg/L為正常，150-199mg/dL為邊際值，200-499mg/dL較高且500mg/dL被認為是極高的甘油三酯水平。改變與動脈粥樣硬化相關的血清脂質的量所需的煙酸調節(jié)劑的量將隨化合物調配物和個體的變化而變化。具體來說，改變與動脈粥樣硬化相關的血清脂質的量所需的煙酸調節(jié)劑的量可例如視個體的體重、個體的遺傳組成或個體的一般健康狀況而定。可改變與動脈粥樣硬化相關的血清脂質的量的煙酸調節(jié)劑的量可例如包括每天至少500mg、每天至少750mg、每天至少1g、每天至少1.5g、每天至少2g、每天至少2.5g、每天至少3g、每天至少3.5g、每天至少4g、每天至少4.5g、每天至少5g、每天至少5.5g、每天至少6g、每天至少6.5g、每天至少7g、每天至少7.5g、每天至少8g或更多。在一實施例中，所述改變脂質的煙酸調節(jié)劑的量為每天至少500mg。在另一實施例中，所述改變脂質的煙酸調節(jié)劑的量為每天1到3克。如本文所使用的術語"脂質相關病癥"意謂個體中與動脈粥樣硬化相關血清脂質(例如，LDL-膽固醇、VLDL-膽固醇、HDL-膽固醇、Lp(a)或甘油三酯)的非最佳水平相關的任何病癥。因此，脂質相關病癥可例如為高LDL-膽固醇水平、低HDL-膽固醇水平，或至少部分由動脈粥樣硬化相關血清脂質的非最佳水平引起的病癥，諸如動脈粥樣硬化、代謝綜合癥、心臟病發(fā)作(心肌梗死)或中風。上文已對動脈粥樣硬化相關血清脂質的最佳水平進行論述，且認為非最佳水平的這些脂質或低于最佳比率的這些脂質都將引起脂質相關病癥。動脈粥樣硬化是指血管疾病的一種形式，其以大尺寸和中等尺寸動脈壁最內層上沉積含有膽固醇和脂質的動脈粥樣化斑塊為特征。動脈粥樣硬化涵蓋從業(yè)于相關醫(yī)藥領域的醫(yī)師所認知和了解的血管疾病和病況。動脈粥樣硬化性心血管疾病(包括血管再形成術后再狹窄、冠狀動脈性心臟病)、腦血管疾病(包括多發(fā)性梗死性癡呆)和外周血管疾病(包括勃起功能障礙)為動脈粥樣硬化的所有臨床表現，且因此涵蓋在術語動脈粥樣硬化中。血脂異常為用于異常血清脂質濃度的通用術語，所述血清脂質諸如HDL(低)、LDL(高)、VLDL(高)、甘油三酯(高)、脂蛋白(a)(高)、游離脂肪酸(高)和其它血清脂質或其組合。舉例來說，患有血脂異常的個體與最佳總膽固醇水平相比，具有較高的總膽固醇水平(高膽固醇血癥)。此外，例如，患有血脂異常的個體可具有高的血清脂質(諸如低密度脂蛋白(LDL)或甘油三酯)水平(高甘油三酯血癥)。另外，例如，患有血脂異常的個體可具有低的血清脂質(諸如高密度脂蛋白(HDL))水平。患有血脂異常的個體中一種或一種以上血清脂質(諸如，總膽固醇、LDL、甘油三酯或HDL)的水平可變化。高脂血癥是血漿中任何脂質或所有脂質(諸如膽固醇、甘油三酯和脂蛋白)的濃度升高的通用術語，其也是一種脂質相關病癥。高脂血癥可為后天性的或可為先天性的。高脂血癥的特定形式可例如包括高膽固醇血癥、家族性異常P脂蛋白血癥、糖尿病性血脂異常、腎病性血脂異常和家族性混合型高脂血癥。高膽固醇血癥是以血清低密度脂蛋白-膽固醇和血清總膽固醇升高為特征。家族性異常p脂蛋白血癥(也稱為III型高脂血癥)是以血清中積累極低密度脂蛋白-膽固醇(VLDL-膽固醇)顆粒(稱為P-VLDL)為特征。正常載脂蛋白E3經異常同功異型載脂蛋白E2替換也與這一病況有關。糖尿病性血脂異常是以多種脂蛋白異常(諸如，VLDL-膽固醇過量產生、異常VLDL甘油三酯脂解、LDL-膽固醇受體活性降低且有時III型高脂血癥)為特征。腎病性血脂異常極難治療且通常包括高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥。家族性混合型高脂血癥是以多種顯型高脂血癥(即IIa型、IIb型、IV型、V型或高載脂蛋白p脂蛋白血癥)為特征。脂質相關病癥的定義中還包括至少部分由動脈粥樣硬化相關血清脂質的非最佳水平引起的病癥。這些病癥例如包括冠狀動脈疾病(CAD)或冠狀動脈性心臟病、充血性心力衰竭、絞痛、動脈瘤、缺血性心臟病、心肌梗死和中風。脂質相關病癥可包括心臟病，諸如冠狀動脈性心臟病，其為包含將血液供應到心臟的小血管變窄和心臟喪失其有效泵送血液的能力的充血性心力衰竭的病癥。脂質相關病癥可包括因血管部分或完全堵塞而使流到組織或器官的血液減少所引起的病癥。這些病癥例如包括絞痛、缺血性心臟病、心肌梗死和中風。脂質相關病癥可包括由變弱的血管所引起的病癥，諸如動脈瘤，其為血管中通常由動脈粥樣硬化引起的變弱區(qū)域。心臟病包括(但不限于)心機能不全、冠狀動脈機能不全、冠狀動脈疾病和高血壓。外周血管疾病是指心臟和腦部外側血管的疾病。器質性外周血管疾病是由血管結構改變(諸如發(fā)炎和組織損傷)引起。外周動脈疾病為一個實例。外周動脈疾病(PAD)是與冠狀動脈疾病和頸動脈疾病類似的病況。在PAD中，脂肪沉積物沿動脈壁積聚，并且影響血液循環(huán)，主要影響通向腿和腳的動脈中的血液循環(huán)。在PAD早期，常見癥狀為活動時腿和臀部抽筋或疲勞。當人站立不動時，所述抽筋癥狀將減退。這被稱為"間歇性跛行(intermittentclaudication)"?；加蠵AD的人具有較高的因中風和心臟病發(fā)作而死亡的風險，這是因為形成血凝塊的風險。代謝綜合癥(也稱為綜合癥X)是以一個人體內的一組代謝風險因素為特征。這些風險因素包括中心性肥胖(腹部中和腹部周圍脂肪組織過多)、致動脈粥樣硬化的血脂異常(血清脂質病癥，主要是高甘油三酯和低HDL膽固醇)、血壓升高(130/85mmHg或更高)、胰島素抵抗或葡萄糖不耐受、血栓前狀態(tài)(prothromboticstate)(例如，血液中高水平的血纖維蛋白原或血纖維蛋白溶酶原活化因子抑制劑)和促發(fā)炎狀態(tài)(proinflammatorystate)(例如，血液中高敏感性C反應蛋白水平升高)。本發(fā)明的方法和組合物可用于預防或治療個體的脂質相關病癥。當用于預防脂質相關病癥時，個體可具有最佳脂質水平，但可能出于另一原因(例如脂質相關病癥的家族史)而有患脂質相關病癥的風險?？深A防性地使用本發(fā)明的方法和組合物預防處于任何年齡的個體(例如患有肥胖癥或糖尿病的兒童或成人，所述肥胖癥或糖尿病為發(fā)展脂質相關病癥的風險因素)的脂質相關病癥。本發(fā)明提供一種降低有需要的個體體內LDL水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別-測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明公開一種降低有需要的個體體內LDL水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明還提供一種降低有需要的個體體內甘油三酯水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明還公開一種降低有需要的個體體內甘油三酯水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明另外提供一種增加有需要的個體體內HDL水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明另外公開一種增加有需要的個體體內HDL水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明提供一種制備用作脂質改變劑的包含煙酸受體調節(jié)劑的藥物的方法，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明公開一種制備用作脂質改變劑的包含煙酸受體調節(jié)劑的藥物的方法，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明還提供一種制備用于治療脂質相關病癥的包含煙酸受體調節(jié)劑的藥物的方法，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明還公開一種制備用于治療脂質相關病癥的包含煙酸受體調節(jié)劑的藥物的方法，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的所述調節(jié)劑是根據以下方法鑒別a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑；和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明，當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明還公開組合治療方法，其包括除煙酸受體調節(jié)劑外的另一治療化合物或其它治療化合物。其它治療化合物可例如包括可用于進一步減少潮紅的化合物，或可用于進一步減少個體的動脈粥樣硬化相關血清脂質的量的化合物。可與煙酸受體調節(jié)劑組合的治療化合物可(例如)包括降低前列腺素合成(諸如PGD2合成)的化合物。這類化合物可(例如)包括特異性PGD2拮抗劑，或更常見的藥劑，諸如非甾族消炎藥(NSAID)。NSAID的實例包括阿斯匹靈、水楊酸鹽(salicylatesalts)、吲哚美辛(indomethacin)、萘普生(naproxen)、萘普生鈉(sodiumnaproxen)、酮洛芬(ketoprofen)、非諾洛芬(fenoprofen)、奧沙普秦(oxaprozin)、舒林酸(sulindac)、氟洛芬(flurbiprofen)、依托度酸(etodolac)、雙氯芬酸(diclofenac)、酮咯酸(ketorolac)、托美丁(tolmetin)、萘丁美酮(nabumetone)、舒洛芬(suprofen)、苯噁洛芬(benoxaprofen)、卡洛芬(carprofen)、阿芬那酸(aclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、佐美酸(zomepirac)、甲氯芬那酸鹽(meclofenamate)、甲芬那酸(mefanamicacid)、羥基保泰松(oxyphenbutazone)、保泰松(phenylbutazone)和吡羅昔康(piroxicam)。P余與COX-l抑制劑組合外，治療化合物還可與選擇性COX-2抑制劑(諸如塞來昔布(Celecoxib)或羅非昔布(Rofecoxib))組合。可與煙酸受體調節(jié)劑組合的治療化合物可例如包括降低個體體內動脈粥樣硬化相關血清脂質的量的化合物。此類化合物例如包括a-葡糖苷酶抑制劑、醛糖還原酶抑制劑、雙胍、HMG-CoA還原酶抑制劑、角鯊烯合成抑制劑、貝特類(fibrate)、LDL分解代謝增強劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、胰島素分泌增強劑和噻唑烷二酮。a-葡糖苷酶抑制劑屬于競爭性抑制胰腺和/或小腸內的消化酶的一類藥物，所述消化酶諸如為a-淀粉酶、麥芽糖酶、a-糊精酶、蔗糖酶等。a-葡糖苷酶抑制劑的可逆抑制將通過延緩淀粉和糖的消化來阻礙、減少或降低血糖水平。a-葡糖苷酶抑制劑的一些代表性實例包括阿卡波糖(acarbose)、N-(l，3-二羥基-2-丙基)井崗霉醇胺(通用名伏格列波糖(voglibose))、米格列醇(miglitol)和所屬領域中已知的a-葡糖苷酶抑制劑。醛糖還原酶抑制劑為抑制多元醇路徑中的第一階段限速酶的藥物。醛糖還原酶抑制劑的實例包括托勒司他(tolurestat)、依帕司他(印alrestat)、3,4-二氫-2,8-二異丙基-3-硫代-2H-l，4-苯并噁嗪-4-乙酸、2,7-二氟螺(9樂芴-9，4'-咪唑烷)-2'，5'-二酮(通用名咪瑞司他(imirestat))、3-[(4-溴-2-氟苯基)甲基]-7-氯-3,4-二氫-2，4-二氧代-l(27)-喹唑啉乙酸(通用名折那司他(zenarestat))、6-氟-2，3-二氫-2',5'-二氧代-螺[4/M-苯并吡喃-4,4'-咪唑烷]-2-甲酰胺(SNK掘)、唑泊司他(zopolrestat)、索比尼爾(sorbinil)和1-[(3-溴-2-苯并呋喃基)磺?；鵠-2，4-咪唑烷二酮(M-16209)和所屬領域中已知的醛糖還原酶抑制劑。雙胍為刺激無氧糖酵解、增加周圍組織對胰島素的敏感性、抑制葡萄糖從腸的吸收、抑制肝糖原異生和抑制脂肪酸氧化的一類藥物。雙胍的實例包括苯乙雙胍(phenformin)、美氟明(metformin),丁福明(buformin)和所屬領域中已知的雙胍。他汀(statin)化合物屬于通過抑制羥甲基戊二酰基輔酶A(HMG-CoA)還原酶來降低血液膽固醇水平的一類藥物。HMG-CoA還原酶為膽固醇生物合成中的限速酶。抑制27這種還原酶的他汀通過上調LDL受體活性和負責將LDL從血液中清除來降低血清LDL濃度。他汀化合物的實例包括羅蘇伐他汀(rosuvastatin)、普伐他汀(pravastatin)和其鈉鹽、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、P可伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)和所屬領域中已知的HMG-CoA還原酶抑制劑。角鯊烯合成抑制劑屬于通過抑制角鯊烯合成來降低血液膽固醇水平的一類藥物。角鯊烯合成抑制劑的實例包括(S)-a-[雙[2,2-二甲基-l-氧代丙氧基)甲氧基]氧膦基(phosphinyl)]-3-苯氧基苯丁垸磺酸單鉀鹽(BMS-188494)和所屬領域中已知的角鯊烯合成抑制劑。貝特類化合物屬于通過抑制肝臟中甘油三酯合成和分泌并活化脂蛋白脂肪酶來降低血液膽固醇水平的一類藥物。已知貝特類活化過氧化物酶體增殖物活化受體(peroxisomeproliferators-activatedreceptor)并誘導脂蛋白脂肪酶的表達。貝特類化合物的實例包括苯扎貝特(bezafibrate)、貝羅貝特(beclobrate)、比尼貝特(binifibrate)、西羅貝特(ciplofibrate)、克利貝特(clinofibrate)、氯貝特(clofibrate)、氯貝酸(clofibricacid)、依托貝特(etofibrate)、非諾貝特(fenofibrate)、吉非貝齊(gemfibrozil)、尼可貝特(nicofibrate)、吡貝特(pirifibrate)、氯煙貝特(ronifibrate)、雙貝特(simfibrate)、益多脂(theofibrate)和所屬領域中已知的貝特類。LDL(低密度脂蛋白)分解代謝增強劑屬于通過增加LDL受體的數量來降低血液膽固醇水平的一類藥物，實例包括所屬領域中已知的LDL分解代謝增強劑。血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑屬于通過抑制血管收縮素轉化酶來部分降低血糖水平同時降低血壓的一類藥物。血管收縮素轉化酶抑制劑的實例包括卡托普利(capt叩ril)、依那普利(enalapril)、阿拉普利(alacepril)、地拉普利(delapril)、雷米普利(ramipril)、賴諾普利(lisinopriL)、咪噠普利(imidapril)、貝那普利(benazepril)、西羅普利(ce腿pril)、西拉普利(cilazapril)、依那普利拉(enalaprilat)、福辛普利(fosinopril)、莫夫普利(moveltopril)、培多普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、螺普利(spirapril)、替莫普利(temocapril)、雷多普利(randolapril)和所屬領域中已知的血管收縮素轉化酶抑制劑。本發(fā)明提供一種預防或治療個體中脂質相關病癥的方法，其包含向所述個體投與有效改變脂質的量的煙酸受體調節(jié)劑，經以下方法鑒別，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，所述方法另外包含向所述個體投與有效量的用于治療肥胖癥或糖尿病的藥劑與有效量煙酸受體調節(jié)劑的組合，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用。脂肪酶抑制劑例如包括抗肥胖化合物，諸如奧利司他(Orlistat)(XENICALTM)。奧利司他直接抑制脂肪吸收，并且還傾向于產生高發(fā)生率的使胃部不適的副作用，諸如腹瀉和腸胃脹氣。另一類抗肥胖藥物包括血清素和/或去甲腎上腺素釋放劑或再攝取抑制劑。舉例來說，西布曲明(sibutramine)(Meridia)為混合5-HT/去甲腎上腺素再攝取抑制劑。西布曲明的主要副作用可為使一些患者的血壓和心率增加。已報導血清素釋放劑/再攝取抑制劑芬氟拉明(fenfluramine)(Pondimin)和右旋氟苯丙胺(dexfenfluramine)(ReduxTM)可長時間(大于6個月)降低食物攝入和體重。然而，在報導與使用這兩種產品有關的心臟瓣膜畸形的初步證據后，已不再使用這兩種產品。胰島素分泌增強劑屬于具有促進胰腺e細胞分泌胰島素的特性的一類藥物。胰島素分泌增強劑的實例包括磺酰脲(SU)?；酋ｋ?SU)為通過經由細胞膜中的SU受體傳輸胰島素分泌信號來促進胰腺P細胞分泌胰島素的藥物?；酋ｋ宓膶嵗妆交嵌‰?tolbutamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、乙酸磺環(huán)己脲(acetohexamide)、4-氯-N-[(l-吡咯烷基氨基)羰基]-苯磺酰胺(通用名格列克比脲(glycopyramide))或其銨鹽、格列本脲(glibenclamide)(格列本脲(glyburide))、格列齊特(gliclazide)、l-丁基-3-間氨基苯磺酰脲、氨磺丁脲(carbutamide)、格列波脲(glibonuride)、格列吡嗪(glipizide)、格列喹酮(gliquidone)、格列派特(glisoxepid)、格列噻唑(glybuthiazole)、格列布唑(glibuzole)、格列己脲(glyhexamide)、格列嘧啶(glymidine)、格列平脲(glypinamide)、苯磺丁脲.(phenbutamide)、甲磺環(huán)己脲(tolcyclamide)、格列美脲(glimepiride)和所屬領域中已知的其它胰島素分泌增強劑。其它胰島素分泌增強劑包括N-[[4-(l-甲基乙基)環(huán)己基)羰基]-D-苯丙氨酸(那格列奈(Nateglinide))、(2S)-2-苯甲基-3-(順-六氫-2-異吲哚啉基羰基)丙酸鈣二水合物(米格列奈(Mitiglinide)，KAD-1229)和所屬領域中已知的其它胰島素分泌增強劑。噻唑烷二酮屬于更常稱為TZD的一類藥物。噻唑烷二酮的實例包括羅格列酮(rosiglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)和所屬領域中已知的噻唑烷二酮。此外，可向個體投與煙酸受體調節(jié)劑，例如以便預防或治療煙酸反應性病癥。煙酸反應性病癥為可通過受體調節(jié)劑預防或治療的病癥或疾病。煙酸反應性病癥可例如包括如本文所述的脂質相關病癥。舉例來說，脂質相關病癥可為低的高密度脂蛋白(HDL)-膽固醇量、高的低密度脂蛋白(LDL)-膽固醇量、高的甘油三酯量，或至少部分由動脈粥樣硬化相關血清脂質的非最佳水平引起的病癥，諸如動脈粥樣硬化、心臟病或中風。煙酸反應性病癥的另一實例為痛經。在一項報導中，使一組80名經受痛經折磨的女性每天兩次補充100mg煙酸，開始為月經開始前7到IO天補充，且隨后在痛經期間每隔2至lj3小時補充煙酸[Hudgins,(1952)AmPractDigTreat3:892-893;Hudgins(1954)WestJSurgObstetGynecol62:610-611]。約90%的個體的癥狀明顯減輕。痛經期間所需的劑量(每隔2到3小時lOOmg)足夠高從而在某些女性中引起潮紅。在這種情況下，本發(fā)明的方法和組合物可用于治療煙酸反應性病癥而不會引起潮紅副作用。本發(fā)明公開供消費者使用以預防或治療脂質相關病癥的試劑盒。試劑盒可包含本發(fā)明的醫(yī)藥組合物和描述使用所述醫(yī)藥組合物預防或治療脂質相關病癥的方法的說明。舉例來說，試劑盒可含有至少一個劑量單位與煙酸或煙酸類似物相比具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑。此外，試劑盒可包括與本發(fā)明組合物組合使用的其它治療劑。本發(fā)明的組合物可以多種經口、局部或不經腸劑型投與。所屬領域技術人員將了解，所述劑型可包含本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物的醫(yī)藥學上可接受的鹽作為活性組分。預防或治療用所需的活性成分或其活性鹽或衍生物的劑量不僅將隨所選擇的特定鹽變化，而且也隨投藥途徑、所治療的病況的性質和個體的年齡和情況變化，且最終將取決于主治醫(yī)師或臨床醫(yī)師的判斷。一般來說，所屬領域技術人員了解怎樣由模型系統(tǒng)、通常為動物模型中獲得的活體內數據外推至另一模型，諸如人類。在一些情況下，這些外推可僅基于動物模型與另一動物模型(諸如哺乳動物，例如人類)的體重比較，然而，更常見的是，這些外推并非簡單地基于體重，而是并入多種因素。代表性因素包括個體的類型、年齡、體重、性別、飲食和健康情況、疾病的嚴重程度、投藥途徑、所使用的特定化合物的藥理學考慮(諸如活性、功效、藥物動力學和毒理學概況)、是否利用藥物傳遞系統(tǒng)、進行治療或預防的病狀為急性或慢性或是否使用組合療法。用本發(fā)明的化合物和/或組合物預防或治療疾病病況的劑量方案是根據上文所述的多種因素選擇。因此，所用的實際劑量方案可廣泛變化，且因此可偏離優(yōu)選劑量方案，且所屬領域技術人員將認識到可對這些典型范圍以外的劑量和劑量方案進行測試，且適當時，可將其用于本發(fā)明的方法中。所需劑量可方便地以單劑量形式或以經適當間隔投與的分劑量形式(例如，每天2次、3次、4次或更多分劑量)提供。舉例而言，分劑量本身可進一步細分成多個不連續(xù)的松散間隔的投藥。尤其當認為投與相對大量適當時，可將每日劑量細分成若千份投藥，例如2、3或4份。適當時，視個體行為而定，可能需要自所指定的每日劑量上調或下調。試劑盒可包括容納本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的容器，且還可包括分開的容器，諸如分開的瓶子或分開的箔包裝。所述容器可為所屬領域中已知的任何常規(guī)形狀或形式，其是由醫(yī)藥學上可接受的材料制成，例如紙盒或硬紙盒、玻璃或塑料瓶或廣口瓶、可再密封的袋子(例如，用于保存放入不同容器中的片劑"新填充物")，或具有個別劑量以根據治療時間表壓出包裝外的發(fā)泡包裝。所使用的容器可視所涉及的確切劑型而定，例如常規(guī)硬紙盒一般不用于保存液體懸浮液?？稍趩我话b中同時使用一個以上容器來銷售單一劑型是可行的。舉例來說，可將片劑裝于瓶中，接著將所述瓶裝于盒內。所述試劑盒的實例為所謂的發(fā)泡包裝。包裝工業(yè)中眾所周知發(fā)泡包裝，且其廣泛用于包裝醫(yī)藥單位劑型(片劑、膠囊等)。發(fā)泡包裝一般是由經優(yōu)選透明塑料材料的箔覆蓋的相對堅硬材料的薄片組成。在包裝過程中，塑料箔中形成凹槽。所述凹槽具有個別待包裝片劑或膠囊的尺寸和形狀，或可具有容納多個待包裝片劑和/或膠囊的尺寸和形狀。接下來，將片劑或膠囊相應地放入凹槽中，并且在面向塑料箔(與形成凹槽的方向相對)處對所述箔密封所述相對堅硬的材料薄片。結果，視需要將片劑或膠囊獨立地密封或整體地密封于塑料箔與薄片之間的凹槽中。一般來說，所述薄片的強度為可通過人工向凹槽施加壓力由此在薄片中凹槽位置處形成開口從而將片劑或膠囊自發(fā)泡包裝中移出的強度。隨后可經由所述開口將片劑或膠囊移出?？珊弦獾靥峁嬗洃涊o助物，其中所述書面記憶輔助物為例如以數字形式注于片劑或膠囊附近的含有用于醫(yī)師、藥師或個體的信息和/或說明的類型(其中所述數字與應攝取指定片劑或膠囊的方案的天數相對應)，或含有同類信息的卡片。所述記憶輔助物的另一實例為印刷于卡片上的日歷，例如，如下所述"第一周，星期一、星期二"等，"第二周，星期一、星期二"等。記憶輔助物的其它變化形式將易于了解。試劑盒的另一特定實施例為經設計以一次分配一劑每日劑量的分配器。所述分配器可裝備有記憶輔助物，從而進一步便利與方案相符。所述記憶輔助物的實例為指示已分配的每日劑量數的機械計數器。所述記憶輔助物的另一實例為與液晶讀出器或可聞提示信號耦合的電池供電微芯片記憶體，所述液晶讀出器或可聞提示信號例如會讀出已服用前一次每日劑量的日期和/或對何時服用下一劑作出提示。本發(fā)明一方面涉及一種用于通過療法治療人體或動物體的方法中的如本文所述的煙酸受體調節(jié)劑。本發(fā)明另一方面涉及一種如本文所述的與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，其是用于通過療法治療人體或動物體的脂質相關病癥的方法中。本發(fā)明另一方面涉及一種治療脂質相關病癥的方法，其包含向受所述病況折磨的個體投與治療有效量的如本文所述的優(yōu)選為醫(yī)藥組合物形式的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明一方面涉及一種治療脂質相關病癥的方法，其包含向受所述病況折磨的個體投與治療有效量的如本文所述的優(yōu)選為醫(yī)藥組合物形式的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用。本發(fā)明另一方面涉及一種如本文所述的與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，其是用于通過療法治療人體或動物體的脂質相關病癥的方法中。本申請案中所示的化合物為市售或可使用此項技術中已知的方法合成，例如，如vanHerk等人.JMedChem.46:3945-3951(2003)或PCT/US2004/038920中所述的方法。實例出于說明而非限制的目的提供以下實例。所屬領域技術人員將能夠基于本文的公開內容設計相當的檢定和方法，其都形成本發(fā)明的部分。實例1用于測定MAP激酶誘導作用的某于抗體的檢定本實例展示可用于測定由煙酸(參看圖1)或煙酸和煙酸受體調節(jié)劑化合物8(參看圖2)所誘導的MAP激酶活性的ELISA和免疫印跡檢定。MAP激酶ELISA:根據以下方案使用來自Biosource的試劑盒(磷酸化ERK1/2pT185pY187ELISA，目錄號KHO-0091)。在用化合物刺激細胞之前，使細胞血清饑餓整夜。1.化合物制備和細胞處理A.將化合物溶解于DMSO中。由于較高的DMSO濃度將使細胞應激并活化MAPK，故不應超過l免DMSO。將PMA(100ng/ml)用作陽性對照。B.將細胞盤從恒溫箱中取出，并且將其放在設置為輕微震蕩(設置為速度4)的震蕩器上。小心加入化合物，并且將細胞放回到恒溫箱中培育5分鐘。4.5分鐘時，從盤中抽吸培養(yǎng)基以便加入化合物。接著，加入2ml冷PBS并且通過輕微旋轉移除過量培養(yǎng)基。抽吸PBS并且加入1mlPBS(對于長滿的6cm培養(yǎng)皿而言為1ml)。2.細胞收集和提取冰上A.用橡膠鏟將細胞自盤中刮下，并且將其轉移到微量離心管中，隨后在4'C下以3000rpm離心5分鐘。B.抽吸PBS并且在以10分鐘為間隔進行渦旋的同時于冰上歷時30分鐘將細胞小球溶解于細胞提取緩沖液(0.1%SDS)(對于長滿的6cm培養(yǎng)皿而言為250-300pl)中。C.隨后在4'C下以最大速度(16,000xG)離心混合物15分鐘。D.將經凈化的溶解產物轉移到新的微量離心管中并測量蛋白質濃度。為測量蛋白質，用細胞提取緩沖液將樣本稀釋到lmg/ml的濃度，且隨后將其煮沸5分鐘。冷卻后，在室溫下以最大速度將其離心5分鐘。用標準稀釋劑緩沖液以1:10的比率將溶解產物稀釋到0.1mg/ml(最終0.01%SDS)的濃度，并一式兩份將100pl所述溶解產物裝載于樣本孔(每孔10微克)中?？稍?8(TC下儲存溶解產物。3.試劑制備和儲存-A.磷酸化ERK1/2標準品的復水和稀釋1.用1.2ml標準稀釋劑緩沖液使磷酸化ERKl/2標準品復水，小心混合并使其靜置IO分鐘以確保完全復水。這一儲備液為100U/ml。2.—式兩份，將125nl標準稀釋劑緩沖液加到母板(非ELISA板)的孔B-H中。將250pl100U/ml儲備液加到孔A中。3.通過將125nl100U/ml儲備液由孔A中轉移到孔B中，混合且將125pl孔B中的物質轉移到孔C中，如此反復直到轉移到孔G，來進行連續(xù)稀釋(1:2)?？譎未經稀釋(OU/ml)。B.a兔IgGHRP的儲存和最終稀釋1.使a兔IgGHRP濃縮物達到室溫并小心混合。隨后，將10pl濃縮物與1mlHRP稀釋劑混合以用于檢定中所使用的各8孔條帶。C.洗滌緩沖液的稀釋1.使25x洗滌緩沖液濃縮物達到室溫并混合以確保完全復水。用去離子水(40ml25X/960mlH2O)稀釋洗滌緩沖液濃縮物。4.檢定方法程序和計算標準品和樣本應用A.所有試劑都處于室溫下并且在使用前混合。B.在打開箔袋之前微量滴定盤處于室溫下。確定檢定所需的8孔條帶的數量，并且將袋密封并使其返回到4'C。C.一式兩份(2個8孔條帶)加入100pl標準品(3A2中所制備)。D.使兩個孔保持空置以用作色原空白。E.—式兩份將100^樣本加到樣本孔中。F.用培養(yǎng)板蓋覆蓋培養(yǎng)板并且小心輕敲培養(yǎng)板側以進行混合。G.在室溫下培育培養(yǎng)板2小時。(可在4'C下培育培養(yǎng)板整夜)。洗滌A.用吸出器將液體自孔中吸出。B.用200pl經稀釋的洗滌緩沖液填充各孔。培育30秒后，抽吸液體。重復這一操作4次。檢測抗體A.將100pla磷酸化ERKl/2溶液移液到各孔中，但色原空白除外。更換板蓋并小心輕敲以進行混合。B.在室溫下培育1小時。洗漆A.如上所述洗滌各孔4次。a兔IgGHRPA.將100ixla兔IgGHRP工作溶液加到各孔中，但色原空白除外。更換板蓋并小心輕敲以進行混合。B.在室溫下培育30分鐘。洗滌A.如上所述洗滌各孔4次。色原A.將100jil穩(wěn)定色原加到各孔中。B.在室溫下于暗處培育20分鐘。(不要使用箔或金屬。)終止溶液A.將100pi終止溶液加到各孔中并輕敲以混合培養(yǎng)板。讀取培養(yǎng)板A.在450nm的吸光率下讀取培養(yǎng)板。細胞提取緩沖液10mMTrispH7.45ml(1M)100mMNaCl10ml(5M)1mMEDTApH8.020mMNa4P2071ml(0.5M)100ml(100mM)5ml(100%)1%TX-10010%甘油50ml(100%)0.1%SDS5ml(10%)0.5%脫氧膽酸鹽500ml最終體積加入新制的:2mMNa3V041ml(100mM)250pi(200mM)125^(10,)125pi(10^/ml)50ml最終體積1mMPMSF25ug/ml亮抑酶肽(Leupeptin)25ug/ml抑肽酶(Aprotinin)MAP激酶免疫印跡1.樣本制備A.以下步驟是在冰上進行。將培養(yǎng)基從細胞中吸出并且用PBS沖洗細胞。B.以適當體積的1%NP-40溶解緩沖液(體積視培養(yǎng)皿尺寸、細胞密度等而定)采集細胞。通常，對長滿的6cm培養(yǎng)皿而言使用500pl體積。C.將溶解產物轉移到微量離心管中。渦旋所述管并且在冰上培育30分鐘，隨后在4'C下以最大速度離心10分鐘。2.蛋白質檢定A.以每微升水1.41pi制備儲備蛋白標準品BSA。B.將14.2nl儲備標準品加到485.8jil水中達到40ug/ml的濃度。C.將200pi40pg/ml的標準品加到孔9A和9B中。D.將100pi水加到第A和B行1-8中。E.通過加入100pi40jig/ml以使各孔達到20嗎/ml，混合并將100pi轉移到下一孔中來進行連續(xù)稀釋直到各孔達到0.31pg/ml。將來自0.31pg/ml孔的最后100pi丟棄。F.將99pl加到尚未命名的孔中。G.—式三份將1pl未知樣本加到各孔中。H.將25pi5xBradford染料試劑加到標準品和未知物中。I.在室溫下培育至少5分鐘。J.在595X下讀取吸光率。3.供裝載的樣本的稀釋和制備-A.用水或溶解緩沖液將樣本稀釋到1pg/nl的最終濃度。B.加入5xLaemmli樣本緩沖液，并且使樣本渦旋并煮沸5分鐘。4.NOVEX凝膠的制備A.將凝膠底部的白色膠帶撕下。B.小心將梳狀物拉出。C.用水沖洗凝膠并將其放入凝膠盒中。D.用跑膠緩沖液填充內部儲集器，并且在凝膠開口上方(白色膠帶所在之處)填充外部儲集器。E.用注射器吹拂各孔。5.裝載樣本-A.裝載樣本，但應小心不要使其溢流到相鄰孔中。B.裝載標準標記且用lx樣本緩沖液裝載空置的孔。6.跑膠A.在150V下跑膠1.5小時。7.轉移到硝化纖維素(0.2pm孔徑)A.制備lx轉移緩沖液。B.將凝膠、海綿、Whatman紙和硝化纖維素膜浸入轉移緩沖液中。C.以下列次序進行分層正電極、海綿、膜、凝膠、海綿、負電極。D.用轉移緩沖液填充外部腔室和內部腔室。E.在25V下轉移1.5小時。8.膜的阻斷A.拆去轉移機。B.將硝化纖維素膜放入BLOCKO中，并且在4'C下于震蕩器中培育整夜。9.初級抗體A.在震蕩器中，用TBS/tween洗滌膜1次歷時IO分鐘。B.在BLOCKO中稀釋初級抗體。C.室溫下，在震蕩器中培育2小時。10.次級抗體A.在震蕩器中用TBS/tween洗滌膜2次，每次歷時15分鐘。B.在TBS/tween中稀釋次級抗體。C.室溫下，在震蕩器中培育l小時。11.檢測A.在震蕩器中用TBS/tween洗滌膜3次，每次歷時15分鐘。B.用水沖洗膜l次。C.加入化學發(fā)光檢測試劑(每片膜10mlECL試劑+5nlH202(30%))并且震蕩2分鐘。D.將膜放入塑料板保護器中并擠出過量的檢測試劑和氣泡。E.將膜暴露至薄膜。1%NP-40溶解緩沖液1%NP-4020mMTris(pH8.0)100niMNaCl1mMEDTA1mMPMSF200|iMNa3V0410U/ml抑肽酶10fig/ml亮抑酶肽5xLaemmli樣本緩沖液300mMTrispH6.825%甘油腦SDS0.05%溴酚藍每毫升最終體積120^儲備液2-PMESDS-PAGE跑膠緩沖液14.4g甘氨酸3.03gTris堿1g或5ml(20%)SDS用水補足到1升lOx轉移緩沖液0.2MTris堿1.92M甘氨酸lx轉移緩沖液100ml10x轉移緩沖液200mlMeOH700ml水10xTBS:60.5gTris堿87.5gNaCl用水補足到1升TBS/Tween:100ml10xTBS900ml水500nlTween20(100%)BLOCKO:TBS/Tween中的4%BSA實例2MAP激酶活性與煙酸受體調節(jié)劑的活體內潮紅作用之間的相關性本實例證實，在活體內具有已知的潮紅作用的化合物比已知未在活體內引起顯著潮紅的化合物具有更高的MAP激酶活性水平(參看圖3和圖4)。應注意圖3中的化合物1為煙酸。對于圖3中的表格而言，基本上測量活體內潮紅和cAMP如下。使用實例1中的ELISA方案測量MAP激酶。使用激光多普勒儀測量小鼠的潮紅反應使用10mg/ml/kg戊巴比妥鈉(Nembutalsodium)(Abbottlabs)使雄性C57B16小鼠(約25g)麻醉。10分鐘后，將動物放于激光下并且將耳朵折疊以暴露腹側。將激光定位于耳朵中間并且集中至8.4-9.0V的強度(一般在耳朵上方約4.5cm處)。在3分鐘內記錄基線讀數。以15乘15的影像格式、自動間隔、60幀影像和20秒的時間延遲和中等分辨率起始數據獲取。第10幀影像后，通過注射將測試化合物投與腹膜間隙中。認為影像l-10為動物的基線，并且將數據標準化為基線平均強度的平均值。所使用的激光多普勒儀為PirimedPimII。環(huán)AMP檢定使用來自PerkinElmer的96孔腺苷?；h(huán)化酶活化試劑盒(目錄編號SMP004B)。用于CHO細胞的細胞培養(yǎng)基為具有10%胎牛血清、2mML-谷氨酰胺、1mM丙酮酸鈉和400pg/mlG418的F-12凱基氏經修飾細胞培養(yǎng)基(F-12Kaighn'sModifiedCellCultureMedium)。翩繼〇制成50/50檢定緩沖液(刺激緩沖液/PBS;應注意刺激緩沖液包括于Flashplate試劑盒中)。O制成PBS中的2%DMSO。〇通過將1瓶cAMP粉末溶解于1mL刺激緩沖液中來制成10000pmol/ml(10jiM)cAMP標準儲備溶液。如下表所述進行連續(xù)稀釋以產生八種標準濃度移液10cAMP儲備液(ml)來自各管力口入PBS中的2%DMSO(ml)加入各管中濃度(pmol/ml)(nM)最終(皮摩爾/孔)1儲備液4A2000502A2B1000252B2C50012.52C3D20052D2E1002.52E2F501.252F3G200.5O通過在刺激緩沖液中以1:500稀釋lOmM儲備液(冷凍儲存)來制成20^iM弗斯可林(forskolin)。O在2%DMSO/PBS中制成40|xM煙酸。制備化合物的連續(xù)5倍稀釋液(在96孔板中)O將5nL20mM化合物放入第2列的100免DMSO中，一塊培養(yǎng)板最多可具有8種化合物。〇將245jdPBS加到含有化合物的第2列孔中并且通過向上/向下移液進行混合。將200nl2%DMSO/PBS放入各列(第3列到第11列)中。〇將來自第2列的50pl化合物轉移到第3列中，如上所述進行混合，并重復連續(xù)稀釋直到第11列(對每次稀釋都更換移液管頭)?，F第2列到第11列都具有濃度在2%DMSO中400jxM到204.8pM范圍內(其為4X最終檢定濃度100/iM到51.2pM)的化39合物。采集細胞O自T-185細胞培養(yǎng)瓶中抽吸培養(yǎng)基。用10mLPBS洗滌細胞1次，并且每瓶加入5mL溫(37°C)細胞解離溶液。分離細胞后，將5mL溫(37°C)50/50緩沖液加到各瓶中，并且將細胞從瓶中轉移到50mL錐形管中。〇在室溫下以1100rpm離心細胞6分鐘。抽吸上清液并且將細胞再懸浮于50/50檢定緩沖液中。對細胞進行計數并且用溫(37°C)50/50檢定緩沖液將其稀釋到每毫升1x106個細胞的密度。加入試劑〇將200pL2%DMSO/PBS加到第1列前4行中，將200fiL40pM煙酸加到第1列后4行中，并且將cAMP標準品加到化合物板上第12列中。〇將25pL從化合物板轉移到三個單獨檢定板的所有孔中。〇將50^50/50(剌激緩沖液/PBS)加到檢定板第12列中。〇將50nL細胞加到第1-11列中，最終密度為每孔50,000個細胞。O將25^tl20pM弗斯可林加到(最終濃度5^M)含有表達煙酸受體的細胞的所有孔中，且由于第1列含有表達陰性對照受體的細胞，故除第1列第E-H行外其余所有孔都加有25pl剌激緩沖液。〇在室溫下，將培養(yǎng)板放于振蕩器上歷時l小時，用箔覆蓋培養(yǎng)板的頂部。〇用11ml檢測緩沖液稀釋50pi[125I]-cAMP(在試劑盒中)并且將100pl經稀釋的示蹤劑加到各孔中。O用塑料蓋覆蓋培養(yǎng)板并且在室溫下將其放到振蕩器中歷時2小時。〇以WallacMicrobeta計數器1450通過1251FlashPlate方案檢測1251來對培養(yǎng)板進行計數。實例3MAP激酶檢定的預測能力本實例展示，測試基于cAMP檢定所選擇的化合物相比煙酸誘導MAP激酶的能力，所述化合物在活體內引起潮紅的能力尚未可知。已發(fā)現，化合物(化合物ll)與煙酸相比，具有降低的誘導MAP激酶的能力，且因此使用實例2中所述的激光多普勒檢定在小鼠中測試其活體內潮紅活性。如本發(fā)明的方法所預測，所述化合物不會在活體內引起潮紅。因此，MAP激酶檢定能夠預測當在活體內進行測試時，所述化合物是否會引起潮紅。此外，還測試化合物減少游離脂肪酸(FFA)的能力。在本實例中，使用實例1所述的MAP激酶ELISA測量MAP激酶活性。使用ELISA檢定，所述檢定使用表達人類煙酸受體(參看圖5，左上圖)或小鼠煙酸受體(參看右上圖)的CHO細胞。于小鼠中進行的激光多普勒儀潮紅檢定的結果展示于圖5右下圖中。如下文所述進行游離脂肪酸釋放檢定。使小鼠服用媒劑或各種劑量的化合物ll。IO分鐘后，對小鼠實施安樂死并且收集血液。處理血液樣本并使用非酯化脂肪酸(NEFA)檢定(來自WacoChemicalsUSA,Richmond,VA的NEFA-C檢定試劑盒)測試其游離脂肪酸的釋放情況。遵照制造商所提出的方案進行NEFA檢定。所測量的媒劑樣本中游離脂肪酸的濃度比化合物11中的濃度高，這表明用化合物11進行治療將引起游離脂肪酸釋放減少。因此，可認為化合物11為抗脂解化合物。實例4化合物12，煙酸類似物本實例展示例如可用于替代本發(fā)明方法中的煙酸的煙酸類似物(化合物12)的實例。在本實例中，使用實例1所述的MAP激酶ELISA測量化合物12的MAP激酶活性。使用ELISA檢定，所述檢定使用表達人類煙酸受體(參看圖6，左圖)或小鼠煙酸受體(參看右圖)的CHO細胞。如圖6所示，在MAP激酶活化檢定中，化合物12與煙酸曲線密切匹配。實例5*,膽雄,奸隨飾入碰腦{&權,本實例展示可對大鼠體內的游離脂肪酸水平進行測量。本實例還展示可對人類脂肪細胞中游離脂肪酸水平進行測量。大鼠檢定經手術將導管植入雄性SpragueDawley大鼠的頸靜脈中。使大鼠在數天內從導管植入手術中恢復，且隨后在次日使大鼠禁食，并于約16小時后經腹膜內(DP)注射媒劑或每千克體重15毫克、30毫克或45毫克煙酸[NA]。可以類似方式測試煙酸類似物。在各個時間點時抽取血液(約200ml)并于離心后分離血漿。隨后，根據制造商的說明書經由NEFA-C試劑盒(WakoChemicalsUSA，Inc)測量血漿FFA。從ZenBio(ResearchTriangle,NorthCarolina)獲得脂肪細胞，并且根據制造商的方案進行脂解檢定。使用憑經驗確定的濃度的異丙腎上腺素和時間實現胞內cAMP水平的升高和通過激素敏感性脂肪酶進行的脂解的伴隨活化。在存在或不存在相關化合物(例如，煙酸或煙酸類似物)的情況下持續(xù)脂解一段所需的時間。測試至少五種化合物濃度，以允許進行非線性回歸分析并測定EC5o值。以比色法測量甘油產量的百分比并將其與標準品(ZenBio)相比較。實例6小鼠動脈粥樣硬化模型己證實，通過基因敲除脂聯(lián)素基因所產生的脂聯(lián)素缺陷型小鼠易患動脈粥樣硬化和胰島素抵抗。所述小鼠也為缺血性心臟病的適當模型[Matsuda，M等人JBiolChem(2002)7月和其中所引用的參考文獻，所述文獻的公開內容是以其全文引用的方式并入本文]。在標準實驗室條件下，在22C和50%相對濕度下圈養(yǎng)脂聯(lián)素基因敲除小鼠(每籠7-9只小鼠)。通過使用異氟垸麻醉插入的微滲透壓泵對小鼠給藥以對所述小鼠皮下(s.c)提供本發(fā)明的化合物、食鹽水或不相關的化合物。測定以不同時間間隔處死的不同組小鼠的內膜增厚和缺血性心臟病情況。使用Studentt檢定評估各組(將本發(fā)明的化合物與食鹽水治療組相比較)之間的顯著差異。前述小鼠動脈粥樣硬化模型是出于說明而非限制的目的提供。舉例來說，也己證實，載脂蛋白E缺陷型小鼠易患動脈粥樣硬化[PlumpAS等人.，Cell(1992)71:343-353;所述文獻的公開內容是以其全文引用的方式并入本文]。可使用的另一模型為C57BL/6J小鼠(已知易于經飲食誘發(fā)形成動脈粥樣硬化病變的近交系)中飲食誘發(fā)的動脈粥樣硬化的模型。所屬領域技術人員眾所周知這一模型[KamadaN等人，JAtherosclerThromb(2001)8:1-6;GarberDW等人，JLipidRes(2001)42:545-52;SmithJD等人，JInternMed(1997)242:99-109;所述文獻中每一者的公開內容都是以其全文引用的方式并入本文]。實例7HDL-膽固醇和動脈粥樣硬化的活體內豬模型例如，通過活體內豬模型中本發(fā)明化合物降低總膽固醇比HDL-膽固醇的比率、升高HDL-膽固醇或預防動脈粥樣硬化的活性來證實本發(fā)明化合物作為醫(yī)藥劑預防或治療脂質相關病癥的效用。將豬用作動物模型，這是因為其比大部分其它動物模型更能夠反映人類生理學、尤其是脂質代謝情況。本文所呈現的活體內豬模型是出于說明而非限制的目的。在50天內，向約克夏白化豬(Yorkshirealbinopig)(體重25.5士4kg)喂以富含飽和脂肪酸和富含膽固醇(SFA-CHO)的食物(每35kg豬體重lkg食物)，所述食物是由補充有2%膽固醇和20呢牛脂的標準食物構成[RoyoT等人，EuropeanJournalofClinicalInvestigation(2000)30:843-52;所述公開內容是以其全文引用的方式并入本文]。將飽和比不飽和脂肪酸的比率從正常豬食物中的0.6改變成SFA-CHO飲食中的1.12。將動物分成2組，一組(n=8)喂以SFA-CHO飲食并且用安慰劑進行治療，且一組(n=8)喂以SFA-CHO飲食并且用調節(jié)劑(3.0mg/kg)治療。在50天的時間內向對照動物喂以標準食物。在基線時(動物接受后2天)和起始飲食后50天收集血液樣本。分析血脂。處死動物并驗尸?；蛘?，前述分析包含多個各自經不同劑量的相關化合物治療的組。劑量例如包括0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。或者，前述分析是在多個時間點時進行，例如10周、20周、30周、40周和50周。HDL-膽固醇將血液收集于檸檬酸三鈉(3.8%,1:10)中。離心后(1200gl5min)獲得血漿并立即進行處理。使用自動分析儀KodakEktachemDT系統(tǒng)(EastmanKodakCompany,Rochester,NY，USA)測量總膽固醇、HDL-膽固醇和LDL-膽固醇。用制造商提供的溶液稀釋參數值高于所述范圍的樣本且隨后再進行分析。測定總膽固醇/HDL-膽固醇比率。對各組之間HDL-膽固醇水平進行比較。對各組之間總膽固醇/HDL-膽固醇比率進行比較。將投與相關化合物時HDL-膽固醇的升高或總膽固醇/HDL-膽固醇比率的降低視作所述化合物具有前述效用的指示。動脈粥樣硬化沿腹面縱向打開，移出完整的胸腹部大動脈，并且在從胸腹部大動脈中的標準部位切除樣本之后將其固定于中性緩沖的福爾馬林(neutral-bufferedformalin)中，以用于組織學檢驗和脂質組成和合成研究。固定后，用蘇丹IV(SudanIV)對完整的大動脈進行染色且將其釘住放平，且用與計算機化影像分析系統(tǒng)(ImageProPlus;MediaCybernetics,SilverSpring,MD)連接的TV攝影機獲得數字影像以測定動脈粥樣硬化病變所涉及的大動脈表面百分比[GerrityRG等人，Diabetes(2001)50:1654-65;CornhillJF等人,Arteriosclerosis,Thrombosis,andVascularBiology(1985)5:415-26;所述公開內容是以其全文引用的方式并入本文]。對各組之間動脈粥樣硬化病變所涉及的大動脈表面百分比進行比較。將投與相關化合物時動脈粥樣硬化病變所涉及的大動脈表面百分比的降低視作化合物具有前述效用的指示。血漿游離脂肪酸所屬領域技術人員將顯而易見，易于對前述活體內豬模型進行修改以便確定(無限制性)所述化合物減少血漿游離脂肪酸的活性。實例8用于確定GPCR活化的檢定可用多種方法評定人類GPCR的活化。下文具有說明性；相信所屬領域技術人員將有能力確定那些優(yōu)選有益于技術人員的需要的技術。1.膜結合檢定["S]GTPYS檢定當G蛋白偶合受體處于其活性狀態(tài)時，由于配體結合或組成性活化，受體與G蛋白偶合并且刺激GDP釋放和隨后GTP與G蛋白的結合。G蛋白-受體復合物中的a亞單元充當GTP酶，并且緩慢地將GTP水解成GDP，此時受體通常失活?；罨荏w繼續(xù)以GTP交換GDP?？衫貌豢伤獾腉TP笑似物["S]GTPyS來證實["S]GTPyS與表達活化受體的膜的結合的增強。使用["S]GTPyS結合測量活化的優(yōu)勢在于u)其一般適用于所有G蛋白偶合受體；(b)其接近膜表面從而使其不太可能提取影響胞內級聯(lián)的分子。所述檢定利用G蛋白偶合受體刺激["S]GTPYS與表達相關受體的膜結合的能力。因此，所述檢定可用于直接鑒別方法中以篩選內源GPCR和非內源組成性活化GPCR的候選化合物。所述檢定為通用檢定，并且可用于有關所有G蛋白偶合受體的藥物發(fā)現中。將[35s]GTPyS檢定物于20mMHEPES和1mM與約20mM之間的MgCl2(為優(yōu)化結果，可對所述量進行調節(jié)，但優(yōu)選20mM)(pH7.4)、具有約0.3nM與約1.2nM之間的["S]GTPyS(為優(yōu)化結果，可對所述量進行調節(jié)，但優(yōu)選1.2nM)和12.5至75嗎膜蛋白(例如表達GPR35的293細胞；為優(yōu)化結果，可對所述量進行調節(jié))和10pMGDP(為優(yōu)化結果，可對所述量進行調節(jié))的結合緩沖液中培育1小時。隨后加入麥芽凝集素珠粒(25Amersham)并且在室溫下再培育混合物30分鐘。隨后在室溫下以1500xg使管離心5分鐘，且隨后于閃爍計數器中進行計數。2.腺苷?；h(huán)化酶可修飾針對基于細胞的檢定而設計的FlashPlateTM腺苷?；h(huán)化酶試劑盒(NewEnglandNuclear;目錄號SMP004A)以與粗原生質膜一起使用。FlashPlate的孔中可含有閃爍體涂層，所述涂層還含有識別cAMP的特異性抗體?？赏ㄟ^對放射性cAMP示蹤劑與CAMP抗體的結合的直接競爭來量化所述孔中所產生的cAMP。下文是用作有關測量表達受體的全細胞中cAMP水平改變的簡要方案。瞬時轉染后大約24小時，采集經轉染的細胞。小心抽吸培養(yǎng)基并丟棄。小心地將10mlPBS加入每一盤細胞中，隨后小心抽吸。將1mlSigma細胞解離緩沖液和3mlPBS加入每一培養(yǎng)板中。將細胞從培養(yǎng)板中吸出，并且將細胞懸浮液收集于50ml錐形離心管中。隨后在室溫下以1,100rpm離心細胞5分鐘。小心地將細胞小球再懸浮于適當體積的PBS(每培養(yǎng)板約3ml)中。隨后使用血球計對細胞進行計數，并且加入額外的PBS以得到適當數量的細胞(最終體積為每孔約50ftl)。根據制造商的說明制備cAMP標準品和檢測緩沖液(包含l^Ci示蹤劑[1251]cAMP(50pi)和11ml檢測緩沖液)并加以保存。新鮮制備檢定緩沖液以供篩選，且其含有50^刺激緩沖液、3pl候選化合物(12pM最終檢定濃度)和50nl細胞。將檢定緩沖液儲存于冰上待用。通過將50plcAMP標準品加入適當的孔中隨后將50piPBSA加入孔Hll和H12中來起始優(yōu)選在例如％孔板中進行的檢定。將50^刺激緩沖液加入所有孔中。使用能夠分配3nl化合物溶液的針頭工具(pintool)將DMSO(或所選候選化合物)加入適當孔中，其中具有12pM候選化合物的最終檢定濃度和lOOpl的總檢定體積。隨后將細胞加入孔中，并在室溫下培育60分鐘。隨后將100nl含有示蹤劑cAMP的檢測混合物加入孔中。然后再培育培養(yǎng)板2小時，隨后于WallacMicroBeta閃爍計數器中進行計數。接著由標準cAMP曲線外推每一檢定培養(yǎng)板中所含的每孔cAMP值。3.有關Gi偶合目標GPCR的基于細胞的cAMP檢定TSHR為活化時引起cAMP積累的Gs偶合GPCR?？赏ㄟ^使氨基酸殘基623突變(即，將丙氨酸殘基改變成異亮氨酸殘基)來組成性活化TSHR。預期Gi偶合受體將抑制腺苷?；h(huán)化酶，且因此降低cAMP產生水平，可由此對cAMP水平激發(fā)進行評定。通過使作為"信號增強子"的非內源組成性活化TSHR(TSHR-A623I)(或內源性組成性活性Gs偶合受體)與Gi連接的目標GPCR共轉染以建立cAMP的基線水平，來實現用于測量作為Gi偶合受體活化的指標的cAMP產量降低的有效技術。產生內源或非內源型式的Gi偶合受體后，然后使目標GPCR與信號增強子共轉染，并且可將所述材料用于篩選。在一些實施例中，優(yōu)選將這一方法用于直接鑒別Gi偶合受體的候選化合物。應注意，對于Gi偶合GPCR而言，當使用本方法時，目標GPCR的反向激動劑將增加cAMP信號，而激動劑將減少cAMP信號。第一天時，將培養(yǎng)板涂成每孔2x104個293細胞。第二天時，制備兩個反應管(每一管遵循的比例是對于每一培養(yǎng)板而言)管A是通過在1.2ml無血清DMEM(IrvineScientific,Irvine,CA)中混合2fig轉染到哺乳動物細胞中的每一受體的DNA(共4嗎DNA(例如，pCMV載體；具有突變THSR(TSHR-A623I)的pCMV載體；TSHR-A623I和GPCR等))來制備；管B是通過在1.2ml無血清DMEM中混合120piLipofectamine(GibcoBRL)來制備。隨后通過倒轉(數次)使管A和B混合，隨后在室溫下培育30-45分鐘。所述混合物被稱為"轉染混合物"。用lxPBS洗滌所接種的293細胞，隨后加入10ml無血清DMEM。然后將2.4ml轉染混合物加到細胞中，隨后在37°C/5%C02下培育4小時。然后通過抽吸移除轉染混合物，隨后加入25mlDMEM/10免胎牛血清。隨后在37'C/59fcC02下培育細胞。24小時培育后，采集細胞并將其用于分析。設計FlashPlateTM腺苷?；h(huán)化酶試劑盒(NewEnglandNuclear;目錄號SMP004A)以供基于細胞的檢定用，但視所屬領域技術人員的需要可對其進行修飾以與粗原生質膜一起使用。FlashPlate的孔中含有閃爍體涂層，所述涂層還含有識別cAMP的特異性抗體?？赏ㄟ^對放射性cAMP示蹤劑與cAMP抗體的結合的直接競爭來量化所述孔中所產生的cAMP。下文是用作有關測量表達相關受體的全細胞中cAMP水平改變的簡要方案。瞬時轉染后大約24小時，采集經轉染的細胞。小心抽吸培養(yǎng)基并丟棄。小心地將10mlPBS加入每一盤細胞中，隨后小心抽吸。將1mlSigma細胞解離緩沖液和3mlPBS加入每一培養(yǎng)板中。將細胞從培養(yǎng)板中吸出，并且將細胞懸浮液收集于50ml錐形離心管中。隨后在室溫下以1,100rpm離心細胞5分鐘。小心地將細胞小球再懸浮于適當體積的PBS(每培養(yǎng)板約3ml)中。隨后使用血球計對細胞進行計數，并且加入額外的PBS以得到適當數量的細胞(最終體積為每孔約50pl)。根據制造商的說明制備cAMP標準品和檢測緩沖液(包含lnCi示蹤劑[1251]cAMP(50pl)和11ml檢測緩沖液)并加以保存。應新鮮制備檢定緩沖液以供篩選，且其含有50pl刺激緩沖液、3nl候選化合物(12i!M最終檢定濃度)和50pl細胞。將檢定緩沖液儲存于冰上待用。可通過將50nlcAMP標準品加入適當孔中隨后將50^tlPBSA加入孔Hll和H12中來起始檢定。將50^d刺激緩沖液加入所有孔中。使用能夠分配3pl化合物溶液的針頭工具將所選化合物(例如TSH)加入適當孔中，其中具有12pM候選化合物的最終檢定濃度和100h1的總檢定體積。隨后將細胞加入孔中，并在室溫下培育60分鐘。隨后將100pl含有示蹤劑cAMP的檢測混合物加入孔中。隨后再培育培養(yǎng)板2小時，隨后于WallacMicroBeta閃爍計數器中進行計數。接著由標準cAMP曲線外推每一檢定培養(yǎng)板中所含的每孔cAMP值。4.基于報告基因的檢定a.CRE-LUC報告基因檢定(Gs相關受體)以每孔2x104個細胞的密度將293或293T細胞接種于96孔板上，并且根據制造商的說明于次日使用Lipofectamine試劑(BRL)進行轉染。如下制備用于每六孔轉染的DNA/脂質混合物小心地使100nlDMEM中的260ng質粒DNA與100|ilDMEM中的2pl脂質混合(260ng質粒DNA是由200ng8XCRE-Luc報告基因質粒、50ng包含內源受體或非內源受體的pCMV或單獨pCMV和10ngGPRS表達質粒(pcDNA3中的GPRS(Invitrogen))組成)。如下制備8XCRE-Luc報告基因質粒通過在ppgal-Basic載體(Clontech)中的BglV-HindIII位點處克隆大鼠生長激素抑制素啟動子(-71/+51)來獲得載體SRIF-p-gal。通過PCR由腺病毒模板AdpCF126CCRE8獲得八(8)個cAMP反應元件的拷貝(參看Suzuki等人.HumGeneTher7:1883-1893(1996)，其公開內容以全文引用的方式并入本文中)，并且將其克隆至SRIF-P-gal載體的Kpn-BglV位點處，從而產生8XCRE-p-gal報告基因載體。通過用自pGL3-basic載體(Promega)獲得的熒光素酶基因在HindIII-BamHI位點處置換8XCRE-p-gal報告基因載體中的P-半乳糖苷酶基因來產生8XCRE-Luc報告基因質粒。室溫下培育30分鐘后，用400plDMEM稀釋DNA/脂質混合物，并且將100pl經稀釋的混合物加入每一孔中。在細胞培養(yǎng)恒溫箱中培育4小時后，將100pl具有10%FCS的DMEM加入每一孔中。次日，用每孔200pl具有10%FCS的DMEM交換經轉染細胞。八(8)小時后，用PBS洗滌一次，隨后將孔換成每孔100pl無酚紅的DMEM。次日，遵循制造商的說明，使用LucLiteTM報告基因檢定試劑盒(Packard)測量熒光素酶活性，且于1450MicroBetaM閃爍和發(fā)光計數器(Wallac)上讀取。b.AP1報告基因檢定(Gq相關受體)檢測Gq刺激的方法取決于Gq依賴性磷脂酶C使在啟動子中含有API元件的基因活化的己知特性。遵循上文關于CREB報告基因檢定所述的方案，可利用PathdetectTMAP-lcis報告系統(tǒng)(Stratagene,目錄號219073),但是磷酸轉沉淀物的組分為410ngpAPl-Luc、80ngpCMV受體表達質粒和20ngCMV-SEAP。c.SRF-LUC報告基因檢定(Gq相關受體)一種檢測Gq刺激的方法取決于Gq依賴性磷脂酶C使在啟動子中含有血清反應因子的基因活化的已知特性?？衫肞athdetectSKF-Luc-報告系統(tǒng)(Stratagene)分析例如COS7細胞中的Gq偶合活性。根據制造商的說明，使用MammalianTransfectionTM試劑盒(Stratagene，目錄號200285)以系統(tǒng)的質粒組分和編碼內源或非內源GPCR的指定表達質粒轉染細胞。簡言之，根據制造商的說明，使410ngSRF-Luc、80ngpCMV受體表達質粒和20ngCMV-SEAP(經分泌的堿性磷酸酶表達質粒；測量經轉染細胞的培養(yǎng)基中的堿性磷酸酶活性以控制樣本之間的轉染效率變化)組合于磷酸鈣沉淀物中。將一半沉淀物均等地分布于96孔板中的3個孔上，并且在無血清培養(yǎng)基中的細胞上保持24小時。在最后5小時將細胞與例如1^M候選化合物一起培育。隨后溶解細胞，并根據制造商的說明使用LucliteTM試劑盒(Packard,目錄號6016911)和"Trilux1450Microbeta，，液體閃爍和發(fā)光計數器(Wallac)檢定熒光素酶活性?？墒褂肎raphPadPrism2.0a(GraphPadSoftwareInc.)分析數據。d.胞內IP3積累檢定(Gq相關受體)第1天時，可將包含相關受體(內源或非內源)的細胞涂于24孔板上，通常為每孔1x105個細胞(但可以使這一數量優(yōu)化)。第2天時，通過首先使每孔50pl無血清DMEM中的25嗎DNA與每孔50^無血清DMEM中的2Lipofectamine混合來轉染細胞。小心地混合溶液，且在室溫下培育15-30分鐘。用0.5mlPBS洗滌細胞，并使400nl無血清培養(yǎng)基與轉染培養(yǎng)基混合，且將其加入細胞中。隨后在37'C/5%C02下培育細胞3-4小時，且隨后移除轉染培養(yǎng)基并以每孔1ml常規(guī)生長培養(yǎng)基替換。第3天時，以4-肌醇標記細胞。簡言之，移除培養(yǎng)基，并用0.5mlPBS洗滌細胞。隨后，每孔加入0.5ml無肌醇/無血清培養(yǎng)基(GIBCOBRL)和每孔0.25pC。H-肌醇，并且在37°C/5%032下培育細胞16-18小時整夜。第4天時，如果使用含有血清素受體的對照構筑體，那么用0.5mlPBS洗滌細胞，并加入0.45ml含有無肌醇/無血清培養(yǎng)基、10^iM帕吉林(pargyline)、10mM氯化鋰的檢定培養(yǎng)基，或0.4ml檢定培養(yǎng)基和50plIOX酮舍林(ketanserin，ket)至10pM的最終濃度。隨后在37'C下培育細胞30分鐘。隨后用0.5mlPBS洗滌細胞，并且每孔加入200pl新制/冰冷的終止溶液(1MKOH;18mM硼酸鈉；3.8mMEDTA)。在冰上保持溶液5-10分鐘或直到細胞溶解，且接著以200新制/冰冷的中和溶液(7.5%HC1)中和。隨后將溶解產物轉移到1.5mleppendorf管中，并且每管加入lml氯仿/甲醇(1:2)。渦旋溶液15秒，并將上層相施加至BioradAG1-X8tm明寓子交換樹脂(100-200目)中。首先，用水以1:1.25W/V洗滌樹脂，并將0.9ml上層相裝載于柱上。用10ml5mM肌醇和10ml5mM硼酸鈉/60mM甲酸鈉洗滌柱。將三磷酸肌醇洗提到含有10ml閃爍混合液(scintillationcocktail)的閃爍瓶中，所述閃爍混合液含有2ml0.1M甲酸/1M甲酸銨。通過用10ml0.1M甲酸/3M甲酸銨洗滌使柱再生，并48用雙蒸水沖洗兩次，并且在4'C下儲存于水中。e.測量胞內鈣濃度的熒光成像讀板儀(FLIPR)檢定將來自個別克隆系的經目標受體(實驗性)和pCMV(陰性對照)穩(wěn)定轉染的細胞以每孔5.5x104個細胞接種至經聚-0-賴氨酸預處理的具有完全培養(yǎng)基(具有10%FBS、2mML-谷氨酰胺、1mM丙酮酸鈉的DMEM)的96孔板(Becton-Dickinson，#356640)中。由于煙酸受體與Gi偶合，故包含煙酸受體的細胞可另外包含Gal5、Gal6或嵌合Gq/Gia亞單元。為制備Fluo4-AM(MolecularProbe，#F14202)培育緩沖液儲備液，將1mgFluo4陽AM溶解于467plDMSO和467pl泊洛尼克酸(Pluoronicacid)(MolecularProbe,#P3000)中以得到lmM儲備溶液，其可在-2(TC下儲存一個月。FIuo4-AM為熒光鈣指示劑染料。于洗滌緩沖液(1XHBSS/2.5mM丙磺舒(Probenicid)/20mMHEPES(pH7.4))中制備候選化合物。檢定時，將培養(yǎng)基從孔中移除，并以100nl的4)xMFluo4-AM/2.5mM丙磺舒(Sigma，#P8761)/20mMHEPES/完全培養(yǎng)基(pH7.4)裝載細胞。在37'C/5%0)2下進行培育60分鐘。培育1小時后，移除Fluo4-AM培育緩沖液，并用lOO]iil洗滌緩沖液洗滌細胞2次。于每一孔中留下100pi洗滌緩沖液。將培養(yǎng)板放回37°C/5%C02下的恒溫箱中培育60分鐘。對FLIPR(熒光成像讀板儀；MolecularDevice)設定程序以于第30秒時加入50pi候選化合物，并且記錄由候選化合物所引起的胞內鈣濃度([Ca2+])瞬時改變，再歷時150秒。使用FLIPR軟件，使用總熒光改變數來確定激動劑活性。儀器軟件使熒光讀數標準化以得到零點處的等效初始讀數。盡管上文提供使用經穩(wěn)定轉染的細胞進行的有關激動劑活性的FLIPR分析，但所屬領域技術人員將能夠容易地對所述分析進行修改以便表征拮抗劑活性。所述所屬領域技術人員也將容易地了解，可替代性地使用經瞬時轉染的細胞。實例9受體結合分析除本文所述的方法外，另一種用于評估候選化合物的方式是通過測定與煙酸受體的結合親和性。這類檢定一般需要煙酸受體的經放射性標記的配體。可在篩選分析中使用經放射性標記的化合物(諸如經放射性標記的煙酸)以鑒別/評估化合物。一般地說，可評估新近合成或鑒別的化合物(即，候選化合物)降低經放射性標記的煙酸與煙酸受體結合的能力。因此，與經放射性標記的煙酸競爭結合煙酸受體的能力與候選化合物與煙酸受體的結合親和性直接相關。有關測定煙酸受體的受體結合的檢定方案A.煙酸受體制備舉例來說，可用如本文所述的煙酸受體瞬時或穩(wěn)定轉染HEK293細胞(人腎細胞，ATCC)。舉例來說，可用10pg人類煙酸受體和60plLipofectamine(每15cm盤)瞬時轉染293細胞，并且隨著培養(yǎng)基的改變使其在所述盤中生長24小時(75%長滿)。用每盤10mlHepes-EDTA緩沖液(20mMHepes+10mMEDTA(pH7.4))移除細胞。隨后在BeckmanCoulter離心機中以17,000rpm(JA-25.50型轉子)離心細胞20分鐘。隨后將離心塊再懸浮于20mMHepes+1mMEDTA(pH7.4)中，并用50mlDounce勻漿器進行均質化且再次離心。移除上清液后，將離心塊儲存于-8CTC下直到用于結合檢定。當用于檢定時，于冰上解凍膜20分鐘，且隨后加入10mL培育緩沖液(20mMHepes、1mMMgCl2、100mMNaCl，pH7.4)。然后渦旋膜以再懸浮粗制膜離心塊，并用BrinkmannPT-3100Polytron勻漿器以設置6均質化15秒。使用BRLBradford蛋白檢定測定膜蛋白的濃度。B.結合檢定對于總結合而言，將50jil總體積的經適當稀釋的膜(在含有50mMTrisHC1(pH7.4)、10mMMgCl2和1mMEDTA的檢定緩沖液中進行稀釋；5-50嗎蛋白)加入96孔聚丙烯微量滴定盤中，隨后加入100pl檢定緩沖液和50iil經放射性標記的煙酸。對于非特異性結合而言，加入50pl而非lOOnl檢定緩沖液，并且再加入50pi10冷煙酸受體，隨后加入50pl經放射性標記的煙酸。然后在室溫下培育培養(yǎng)板60-120分鐘。通過使檢定板濾過具有Brandell96孔板收集器的MicroplateDevicesGF/CUnifilter過濾板來終止結合反應，隨后用含有0.9%NaCl的冷50mMTrisHC1(pH7.4)洗滌。然后密封過濾板底部，將50piOptiphaseSupermix加入每一孔中，密封板頂部，且于TriluxMicroBeta閃爍計數器中對板進行計數。對于化合物競爭研究而言，將100^d經適當稀釋的候選化合物加入適當孔中，而非加入lOOpl檢定緩沖液，隨后加入50pl經放射性標記的煙酸。C.計算起初檢定1iiM和0.1的候選化合物，且隨后檢定經選擇使得中間劑量引起對經放射性標記的煙酸結合約50%抑制(即，IC5C))的濃度范圍內的候選化合物。在不存在候選化合物的情況下特異性結合(Bo)為總結合(BT)減去非特異性結合(NSB)的差，且類似地，特異性結合(在存在候選化合物的情況下)(B)為移位結合(displacementbinding)(BD)減去非特異性結合(NSB)的差。由抑制反應曲線(即B/Bo免與候選化合物濃度的lOgit-log圖)確定IC5(j。Ki是通過Cheng和Prustoff轉換來計算Ki=IC50/(l+[L]/KD)，其中[L]為檢定中所使用的經放射性標記的煙酸的濃度，且KD為在相同結合條件下獨立測定的經放射性標記的煙酸的解離常數。申請者保留從本發(fā)明的任何實施例中排除任一種或一種以上化合物的權利。申請者還保留排除例如煙酸、煙酸類似物或煙酸受體激動劑的任何調配物或數量、任何煙酸受體部分激動劑或任何組合療法的權利。在本申請案中，引用多個公開案、專利和已公開的專利申請案。本申請案中所參考的這些公開案、專利和已公開的專利申請案的公開內容都是以全文引用的方式并入本發(fā)明中。公開案、專利或已公開的專利申請案的申請者在本文中所作的引用并不是所述公開案、專利或已公開的專利申請案的申請者對
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的認可。所屬領域技術人員的能力范圍內對所公開的本發(fā)明進行的修改和擴展涵蓋于上述公開內容和以下權利要求內。權利要求1.一種鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用(flushingeffect)的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。2.—種鑒別與煙酸相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。3.—種鑒別與煙酸相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑的方法，其包含a)鑒別煙酸受體調節(jié)劑，和b)測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明當與煙酸相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。4.根據權利要求l、2或3所述的方法，其中所述由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低比由煙酸誘導的MAP激酶活性水平低至少2個標準差。5.根據權利要求l、2或3所述的方法，其中使用基于抗體的檢定來測定所述MAP激酶活性。6.根據權利要求l、2或3所述的方法，其中使用ELISA來測定所述MAP激酶活性。7.—種煙酸受體調節(jié)劑，其與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用，其中所述調節(jié)劑是根據權利要求1所述的方法鑒別為與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的調節(jié)劑。8.根據權利要求l、2、3或7所述的調節(jié)劑，其中所述調節(jié)劑為煙酸受體激動劑或部分激動劑。9.根據權利要求l、2、3或7所述的調節(jié)劑，其中所述調節(jié)劑為抗脂解化合物。10.根據權利要求l、2、3或7所述的調節(jié)劑，其中當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑不具有顯著的潮紅作用。11.一種制備組合物的方法，其包含鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用的煙酸受體調節(jié)劑，和隨后將所述調節(jié)劑與載劑混合，其中所述調節(jié)劑是經權利要求l所述的方法鑒別。12.—種醫(yī)藥組合物，其包含權利要求7所述的調節(jié)劑、基本上由權利要求7所述的調節(jié)劑組成或由權利要求7所述的調節(jié)劑組成。13.—種預防或治療個體的脂質相關病癥的方法，其包含向所述個體投與有效改變脂質的量的經權利要求l所述的方法鑒別的煙酸受體調節(jié)劑，所述調節(jié)劑與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用。14.根據權利要求13所述的方法，其中所述脂質相關病癥為血脂異常、高脂血癥、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化、代謝綜合癥、心臟病、中風或外周血管疾病。15.根據權利要求13所述的方法，其中所述脂質相關病癥為血脂異常。16.根據權利要求13所述的方法，其中所述脂質相關病癥為動脈粥樣硬化。17.根據權利要求13所述的方法，其另外包含向所述個體投與有效量的用于治療肥胖癥或糖尿病的藥劑與有效量的煙酸受體調節(jié)劑的組合，所述調節(jié)劑是通過權利要求l所述的方法鑒別，與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用。18.根據權利要求13所述的方法，其中所述個體為哺乳動物。19.根據權利要求13所述的方法，其中所述個體為人類。20.—種降低有需要的個體的LDL水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的權利要求7所述的調節(jié)劑。21.—種降低有需要的個體的甘油三酯水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的權利要求7所述的調節(jié)劑。22.—種增加有需要的個體的HDL水平的方法，其包含向所述個體投與有效量的權利要求7所述的調節(jié)劑。23.—種制備用作脂質改變劑的藥物的方法，所述藥物包含權利要求7所述的調節(jié)劑。24.—種制備用于治療脂質相關病癥的藥物的方法，所述藥物包含權利要求7所述的調節(jié)劑。全文摘要本發(fā)明提供一種鑒別與煙酸或煙酸類似物相比，具有減弱的潮紅作用(flushingeffect)的煙酸受體調節(jié)劑的方法，所述方法包含測定所述調節(jié)劑的MAP激酶活性，其中與由煙酸或煙酸類似物誘導的MAP激酶活性相比，由所述調節(jié)劑誘導的MAP激酶活性的降低表明當與煙酸或煙酸類似物相比時，所述調節(jié)劑具有減弱的潮紅作用。文檔編號A61K31/4427GK101248353SQ200680005023公開日2008年8月20日申請日期2006年2月18日優(yōu)先權日2005年2月18日發(fā)明者丹尼爾·T·康諾利,多米尼克·馬切耶夫斯基-勒努瓦,杰里米·G·里奇曼,馬莎·金光-帕克斯申請人:艾尼納制藥公司