專利名稱：一種脂質(zhì)微球組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品，特別是涉及一種可以安全的用于人或其他動物體內(nèi)的含有疫苗的脂質(zhì)微球組合物，作為新型的疫苗佐劑和輸送系統(tǒng)，特別重要的是本發(fā)明所述脂質(zhì)微球組合物能很好地增強人體對各種抗原的免疫應(yīng)答，具備優(yōu)良的免疫調(diào)節(jié)功能從而達到交叉保護的效果，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
據(jù)2010年1月20日的《科學(xué)-轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)》雜志報道說，目前在歐洲版本的針對大流行性的Hmi流感疫苗中所應(yīng)用的疫苗可徹底地改變身體對流感疫苗的免疫反應(yīng)，并增強身體產(chǎn)生對多種類型流感的抗體反應(yīng)的能力。佐劑是人們經(jīng)常加入到疫苗之中以增強免疫反應(yīng)的物質(zhì)，但它們本身則沒有功效；這種現(xiàn)象的確切原因仍然讓科學(xué)家們感到困惑。通過增強免疫反應(yīng)，佐劑可讓人們僅用較低劑量的疫苗，而疫苗供應(yīng)在有的時候可能會是非常稀缺的，就像是在2009年秋季所看到的季節(jié)性流感疫苗的短缺。這些發(fā)現(xiàn)提示，某些佐劑可極大地改善大規(guī)模疫苗接種的效果，并對有關(guān)的流感病毒產(chǎn)生交叉性的保護。在這項研究中，Surender Khurana及其同僚對機體在加有或沒有加MF59佐劑的情況下對某種禽流感疫苗所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)做了精密的比較。他們發(fā)現(xiàn)，將佐劑與疫苗進行混合之后可產(chǎn)生能夠識別范圍更為廣泛的不同流感抗原的抗體，其中包括某些已知的可滅活禽流感病毒的抗體。具體地說，MF59可增加抗禽流感的抗體量，同時也會增加抗體類型的多樣性。預(yù)計這些多樣化的抗體可對多種類型的流感產(chǎn)生涵蓋面廣泛的保護作用。目前人們正在研發(fā)許多新型的疫苗佐劑。通過查明佐劑在疫苗中的作用，這些結(jié)果可能會幫助疫苗制造商選擇那些最有可能對流感提供更好保護作用的疫苗。佐劑是非特異性免疫增強劑，當(dāng)與抗原一起注射或預(yù)先注入機體時，可增強機體對抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型。由于流感病毒很容易變異，近年來各國政府和相關(guān)企業(yè)不得不疲于開發(fā)新疫苗， 并為民眾同時注射新疫苗和季節(jié)性流感疫苗。美國藥管局的新研究表明，接種含有佐劑的單一流感疫苗有可能使接種者對多種流感病毒產(chǎn)生免疫力。疫苗佐劑在歐盟國家和加拿大被廣泛使用。此前有研究顯示，佐劑可以延長疫苗的有效作用時間。美國政府已購買了價值近7億美元的佐劑，美提供6000萬美元資金，供企業(yè)和研究人員研制新型佐劑。2007年在第九屆國際呼吸道病毒感染研討會上披露的兩項臨床研究數(shù)據(jù)首次顯示，配方以葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司(GSK)專利佐劑系統(tǒng)的大流行強裂解抗原 H5N1疫苗，可以提供對預(yù)防H5W型毒株足夠水平的交叉免疫力，從而在H5W型病毒引發(fā)人類大流行時，保護接種過疫苗的人群。第一項研究數(shù)據(jù)顯示，用GSK專利佐劑技術(shù)生產(chǎn)的大流行前流感疫苗中，僅含有非常低水平的越南H5m型抗原，卻能夠在人體誘導(dǎo)強大的針對印度尼西亞病毒株交叉免疫中和抗體應(yīng)答。和注射不含佐劑疫苗所得到的實驗數(shù)據(jù)相比，如果在疫苗中添加了佐劑， 在第42天的中和性抗體血清陽轉(zhuǎn)率是前者的25倍。這說明，添加了佐劑的疫苗敏感度要大大高于不添加佐劑的疫苗。第二項研究數(shù)據(jù)表明，同樣在抗原使用量非常低的情況下，GSK專利佐劑大流行前疫苗可以抵抗兩種H5m型流感毒株。臨床前的體內(nèi)研究數(shù)據(jù)表明，含有越南H5m毒株的 GSK佐劑疫苗，不僅可以抵抗疫苗毒株的攻擊，而且可以對發(fā)生抗原性漂移的印度尼西亞 H5N1毒株的致死性攻擊提供96%的交叉保護。這提示給予額外的加強免疫，可以期望接種此種流感疫苗，能夠作為流感大流行前的一項應(yīng)對措施。歐洲專家表示，在世界各種鳥類中呈地方性流行的禽H5W病毒，最有可能成為大流行的毒株。目前GSK專利佐劑系統(tǒng)的大流行強裂解抗原H5m疫苗，已在歐洲生產(chǎn)和使用。復(fù)立達(英文商品名Fluad)是諾華(Novartis)疫苗公司生產(chǎn)的含創(chuàng)新佐劑MF59 的亞單位流感疫苗。MF59是一種水包油的乳劑，包含鯊烯，0. 5% Tween80和0. 5%三油酸聚山梨脂的水包油乳液。被用于諾華公司的流感疫苗復(fù)立達中，在歐洲它是第一個被批準(zhǔn)的添加佐劑的流感疫苗。經(jīng)我國藥品食品監(jiān)督管理局(SFDA)批準(zhǔn)，2009年，復(fù)立達流感佐劑亞單位疫苗已經(jīng)被允許上市，成為我國目前唯一的老年專用流感疫苗。最早用于人類的鋁佐劑，使用研究已經(jīng)有近八十年的歷史，盡管人們?yōu)檠芯啃碌淖魟┡浞礁冻鼍薮笈?，但具有生產(chǎn)許可的新疫苗佐劑依然很少。1999年ECPI世界疫苗大會認為，“WHO或其他衛(wèi)生權(quán)威部門試圖夸大疫苗的絕對安全性的做法是不妥的，任何醫(yī)藥制品的使用都具有危險性，即使是最后的兒童疫苗也可能產(chǎn)生嚴重的個體與疫苗之間的相互作用”。但無論怎樣，如果沒有嚴格的毒性檢測，佐劑疫苗是不會被批準(zhǔn)使用的，這一原則將始終遵循。美國生物制品評價與研究中心期望繼續(xù)對佐劑本身、也對佐劑疫苗混合物的毒性進行研究和評價。原因很簡單，因為人類將繼續(xù)面對新感染疾病的危機；面對那些因人類遷移和氣候變化帶來的原有疾病的威脅；現(xiàn)代人類的旅行活動會向新環(huán)境傳播疾病。目前，已有大量關(guān)于佐劑選擇的研究，但人們?nèi)韵Ｍ嗟淖魟┖洼斔拖到y(tǒng)的研究能夠盡早成功，并用于開發(fā)有效的疫苗。已經(jīng)公開的數(shù)十篇外企在華申請的佐劑相關(guān)專利，分析其權(quán)利范圍，多數(shù)以礦物油、角鯊烯和角鯊?fù)闉橛托曰|(zhì)制成的為水包油型的乳化液。其中CN127083.8A， CN1852735、CN10184501和CN101184501專利描述所用的油均為礦物油，這種油注射后，不能被動物經(jīng)體內(nèi)代謝和消除，以致它殘留下來作為嚴重的慢性炎癥和結(jié)癡的來源，因此也絕非能用于制造人類的疫苗佐劑中的組成物；CN1153064、CN10217977A、CN101365485和 CN101678096A主要采用了角鯊烯和角鯊?fù)闉橛托曰|(zhì)，該油是可代謝的，具備可允許用于注射藥品的品質(zhì)，為了乳化完全由C、H兩種元素組成的烷/烯烴類油脂，使用了親水類和親油類2種不同的非離子型表面活性劑乳化制成。MF59與AS03乳狀液是目前最成功的疫苗佐劑，然而在使用上仍有其副作用。事實上，MF59與AS03所選用的核心油脂角鯊烯，長久以來即有引起慢性發(fā)炎以及自身免疫破壞性疾病的疑慮，例如波灣戰(zhàn)爭綜合病征(Gulf War Syndrome，GWS)，致使美國FDA至今遲遲未核準(zhǔn)含有角鯊烯成分的疫苗上市；此外，這些疫苗所選用的乳化劑Span 85與Tween 80， 雖然俱備安全性高的特性，且已被長久使用于食品、化妝品或作為體內(nèi)注射使用，但是此類型乳化劑皆屬于多元醇類非離子型界面活性劑，無法有效刺激免疫細胞。因此，經(jīng)由此制備而得的MF59、AS03均屬于疫苗輸送系統(tǒng)，雖然可以利用其抗原控制釋放的能力來增強由病毒抗原所誘導(dǎo)引發(fā)的適應(yīng)性免疫反應(yīng)，達到對抗該病毒的效果，卻因為缺乏免疫調(diào)節(jié)功能， 無法達到交叉保護的效果。表1 MF59和AS03乳化佐劑的比較
權(quán)利要求
1.一種脂質(zhì)微球組合物，其特征在于包括有脂質(zhì)微球乳劑和免疫原性組合物兩部分， 脂質(zhì)微球乳劑與免疫原性組合物的比例為10 1至1 10之間，其中脂質(zhì)微球乳劑重量的1 30% (w/w)為醫(yī)藥級油脂，脂質(zhì)微球乳劑重量的0. 1 10% (w/w)為兩性離子/非離子表面活性劑組合，脂質(zhì)微球乳劑重量的0.01 5% (w/w)為穩(wěn)定劑，余量為水性溶液；免疫原性組合物是單價至多價，通常為3價組合物，其中包含來自一種或一種以上與大流行流感爆發(fā)相關(guān)或具有與大流行流感爆發(fā)相關(guān)的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述脂質(zhì)微球乳劑為外觀帶有淡藍色乳光或乳白狀液體并均勻分散于水性介質(zhì)中，平均粒徑為50 500nm。
3.權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述的液體，進一步通過固化技術(shù)， 制成干燥的粉末或塊狀的脂質(zhì)微球乳劑，臨用前用水性溶液復(fù)性瞬即形成乳化液，平均粒徑為50 500nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述醫(yī)藥級油脂為至少為經(jīng)過精制的植物油和動物油、天然或人工修飾/全合成的油中的一種，優(yōu)選大豆油、中鏈甘油三酯、橄欖油、維生素E中的1種或2種以上的特征組合；所述兩性離子/非離子表面活性劑組合，包含天然或人工修飾/全合成的，優(yōu)選大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及其衍生物、天然的D(L)-維生素E琥珀酸脂聚乙二醇衍生物(TPGS)、聚乙二醇660-12-羥基硬脂酸酯(HS-15)、Poloxamer (188)、聚山梨酯類(Tween-80)的1種或2種以上的特征組合；所述穩(wěn)定劑，優(yōu)選油酸、膽酸或脫氧膽酸及其鈉鹽，甘膽酸鈉中的1種或2種以上的特征組合；所述水性溶液，是免疫原性組合物溶液，或純化水、注射用水、甘油水溶液、緩沖鹽水溶液的1種或2種以上的組合，或臨床上可用的輸液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于含有下列所述a d中的一種或2種以上的特征組合a、乳化液滲透壓在200m0sm/kg-400m Osm/kg之間，優(yōu)選M0-360m0sm/kg之間；b、pH為3 10，優(yōu)選pH為5 8；c、脂質(zhì)微球的平均粒徑在50 500nm之間，優(yōu)選100 300nm之間；d、含有單糖、二糖及多糖、甘露醇作為固化脂質(zhì)微球工藝過程的保護劑，優(yōu)選二糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述免疫原性組合物包含來自至少三種季節(jié)性流感病毒株的病毒抗原或抗原性制劑，并且任選包含至少一種與大流行流感爆發(fā)相關(guān)或具有與大流行流感爆發(fā)相關(guān)的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述大流行流感病毒株選自人類流感病毒中 A、B、C 型，包含 HlNl，H2N2，H3N2,H5N1, H7N7，H1N2，H9N2，H7N3，H10N7 ；豬型流感病毒 HlNl，H1N2, H3N1, H3N2 ；以及狗或馬型流感病毒H7N7，H3N8 ；或禽流感病毒 H5N1，H7N2, H1N7, H7N3, H13N6, H5N9, H11N6, H3N8, H9N2, H5N2, H4N8,H10N7, H2N2, H8N4, H14N5, H6N5和H12N5中的一種或一種以上的流感病毒組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述流感病毒抗原或其抗原性制劑來自于在卵(雞胚)或細胞培養(yǎng)物上生長的流感病毒，或重組基因表達，合成的免疫原性組合物包括完整病毒、裂解病毒、病毒體或選自HA，NA, Ml, M2的一種或多種純化的抗原。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述的抗原包括但不限于人類抗原，非人類動物抗原，植物抗原，細菌抗原，真菌抗原，病毒抗原，寄生蟲抗原或是癌腫抗原。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述病毒抗原或抗原性制劑是每種流感病毒株每個人用劑量15 μ g或少于15 μ g HA，優(yōu)選每劑2 7. 5 μ g HA。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述免疫原組合物可獨立包裝，也可與乳化液混合后包裝或混合后進一步固化得到干燥的脂質(zhì)微球組合物。
12.權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物的用途，其特征在于含有免疫原性組合物的脂質(zhì)微球組合物的用途為作為疫苗的輸送系統(tǒng)使用，包括靜脈注射、脊椎腔注射、肌內(nèi)注射、 皮下注射、皮內(nèi)注射、經(jīng)呼吸道噴入或吸入、腹腔給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)眼給藥、經(jīng)口給藥、直腸給藥、陰道給藥、局部給藥、透皮給藥。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述疫苗的輸送系統(tǒng)，臨床用于預(yù)防人類宿主或人群的季節(jié)性或大流行流感感染之一或這兩者，所述人類宿主或人群年齡為65歲或以上的老年人、年齡為0 18歲的兒童及青少年，以及年齡為18歲以上的成年人。
全文摘要
一種脂質(zhì)微球組合物，其特點是包括脂質(zhì)微球乳劑和免疫原性組合物，其中脂質(zhì)微球乳劑重量的1～30％(w/w)為醫(yī)藥級油脂，脂質(zhì)微球乳劑重量的0.1～10％(w/w)為兩性離子/非離子表面活性劑組合，脂質(zhì)微球乳劑重量的0.01～5％(w/w)為穩(wěn)定劑，余量為水性溶液；免疫原性組合物是單價至多價，通常為3價組合物，其中包含來自一種或一種以上與大流行流感爆發(fā)相關(guān)或具有與大流行流感爆發(fā)相關(guān)的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制劑。本發(fā)明不僅可作為疫苗優(yōu)良佐劑，還可作為疫苗的輸送系統(tǒng)，適用于疫苗的不同給藥途徑，增加臨床應(yīng)用的順應(yīng)性、多樣性和選擇性，達到更加廣泛、安全、有效的免疫效果。
文檔編號A61K39/145GK102293743SQ20101020824
公開日2011年12月28日 申請日期2010年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月24日
發(fā)明者萬艾玲, 周荔葆, 李淑斌, 段鵬杰, 殷建文, 高軍, 魏曉瑩 申請人:遼寧成大生物股份有限公司