專利名稱：：用于與軟骨損傷有關(guān)的應(yīng)用的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥組合物以及所述組合物在治療、纟爰解和預(yù)防與專欠骨損傷相關(guān)的疾病和與它相關(guān)的疼痛、或者預(yù)防關(guān)節(jié)炎(artrose)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和與它相關(guān)的疼痛中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：在工業(yè)世界中三個(gè)成年人中多達(dá)一個(gè)可能目前患有慢性關(guān)節(jié)癥狀或關(guān)節(jié)炎。最常見的癥狀，持續(xù)的關(guān)節(jié)疼痛，可以表現(xiàn)為髖痛、膝痛、手痛或力宛痛、以及在身體的其它區(qū)i或中的關(guān)節(jié)疼痛。所述癥狀造成痛苦并在人們被迫停止工作或削減工作時(shí)間時(shí)造成經(jīng)濟(jì)損失。醫(yī)療護(hù)理也花費(fèi)不菲。顯然，需要用于緩解或治療關(guān)節(jié)癥狀和關(guān)節(jié)炎的經(jīng)濟(jì)有效的解決方案。
發(fā)明內(nèi)容的至少一個(gè)成員的物質(zhì)在制備用于治療或預(yù)防軟骨的炎性或非炎性損傷的疾病和與上述相關(guān)的疼痛的藥物制劑中的應(yīng)用a-酮戊二酸、谷氨酰胺、谷氨酸和這些酸的藥用鹽、a-酮戊二酸和氨基酸或二肽或三肽的酰胺、谷氨酰胺和其它氨基酸的二肽、谷氨酰胺和其它氨基S臾的三肽、谷氨酸(glutamineacid)和其它氨基酸的二肽、谷氨酸和其它氨基酸的三肽和所述二力太和三肽的藥用鹽、a-酮戊二酸或其藥用鹽與至少一種氨基酸的藥物學(xué)上可4妄受的物理狀態(tài)混合物(physicalmixture)。另外的具體實(shí)施方式包括如上所述在用于治療或預(yù)防artrose另外的具體實(shí)施方式包括如上所述在用于治療或預(yù)防在涉及重量減輕和/或受損的營養(yǎng)、或胃切除術(shù)、部分(局部)胃切除術(shù)或胃嚢帶術(shù)(胃束帶，gastricbanding)的情況下的軟骨損傷中的應(yīng)用。另外的具體實(shí)施方式包括如上所述在用于治療或預(yù)防在涉及營養(yǎng)不良的情況下的^:骨損傷中的應(yīng)用。另外的具體實(shí)施方式包括如上所述用于在上述條件下減輕與^:骨損傷相關(guān)的疼痛中的應(yīng)用。另外的具體實(shí)施方式包括如上所述在用于治療或預(yù)防與胃切除術(shù)相關(guān)的骨質(zhì)疏木〉癥中的應(yīng)用。通過下面的4昔助優(yōu)選的具體實(shí)施方式、實(shí)施例研究和附圖的描述將進(jìn)一步解釋本發(fā)明，附圖中圖1是描述了飲食a-酮戊二酸鹽和胃切除術(shù)對(duì)大鼠體重的影響的圖2示出了實(shí)驗(yàn)大鼠的顱骨(顱蓋)的上部的四張透視照片；圖3是示出了實(shí)驗(yàn)大鼠的顱蓋的透視照片上發(fā)現(xiàn)的陷窩面積(區(qū)i或，范圍，area)的圖。具體實(shí)施例方式因此，才艮據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了選自由下列物質(zhì)組成的組中的至少一個(gè)成員在制備用于治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎(artrose)、類風(fēng)劑中的新應(yīng)用，所述物質(zhì)為a-酉同戊二酸、谷氨酰胺、谷氨酸和這些酸的藥用鹽、a-酮戊二酸和氨基酸或者二肽或三肽的酰胺、谷氨酰胺和其它氨基酸的二肽、谷氨酰胺和其它氨基酸的三肽、谷氨酸和其它氨基酸的二肽、谷氨酸和其它氨基酸的三肽和所述二肽和三肽的藥用鹽、a-酮戊二酸或其藥用鹽與至少一種氨基酸的藥物學(xué)上可4姿受的物理4犬態(tài)混合物。才艮據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的具體實(shí)施方式，一使用a-酮戊二酸或其堿金屬或堿土金屬鹽或者它們的組合。優(yōu)選地，使用a-酮戊二酸鈉。才艮據(jù)本發(fā)明的另一方面，才是供了一種用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物(包括人)中選自包括artrose的組的至少一個(gè)成員的增加的疼痛的疾病的方法，該方法包4舌給予需要這樣的治療或預(yù)防的受治療者有效疼痛量的選自由下列物質(zhì)組成的組中的至少一種成員，所述物質(zhì)為a-酮戊二酸、谷氨酰胺、谷氨酸和這些酸的藥用鹽、a-酮戊二酸和氨基酸或者二肽或三肽的酰胺、谷氨酰胺和其它氨基酸的二肽、谷氨酰胺和其它氨基酸的三肽、谷氨酸和其它氨基酸的二肽、谷氨酸和其它氨基酸的三肽和所述二肽和三肽的藥用鹽、a-酮戊二酸或其藥用鹽與至少一種氨基酸的藥物學(xué)上可接受的物理狀態(tài)混合物。根據(jù)這些方面的優(yōu)選具體實(shí)施方式，給予a-酮戊二酸或其石咸金屬或石咸土金屬鹽或者它們的組合。最優(yōu)選地，纟合予a-酮戊二酸鈉。才艮據(jù)本發(fā)明所用的活性成分(有效成分，activeprinciple)或組分(成分)的藥物制劑可以給予脊推動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物和鳥類，如嚙齒動(dòng)物，如小鼠、大鼠、豚鼠、或兔；鳥，如火雞、母雞或小雞和其它雛雞以及自由行走的動(dòng)物；牛、馬、豬或小豬以及其它農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、狗、貓和其它寵物，尤其是人。可以以不同的方式進(jìn)4亍給藥，取決于要治療的脊推動(dòng)物是什么種類、需要所述方法的脊推動(dòng)物的疾病、以及要治療的特異性適應(yīng)癥(specificindication)。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，給藥作為食物或詞料添加劑進(jìn)行，如々欠食添加劑和/或固體食物形式的成分和/或々i^牛。另外的具體實(shí)施方式可以在懸浮液或溶液中，如下面進(jìn)一步描述的^r大料。此外，形式可以為月交嚢或片劑，3口可口且嚼或可溶的，如泡騰片劑，以及4分劑和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它干燥形式，如丸劑，如小丸、和顆粒。給藥可以作為腸胃外、直腸或經(jīng)口食物或飼4牛添加劑，如上所揭示的。腸道外載體包括氯化鈉溶液、林格(Ringer's)右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸林格(Ringer's)或固定油(不揮發(fā)性油)。食物和飼津牛添加劑還可以;故乳化。一種或多種活性治療成分隨后可以與賦形劑混合，賦形劑是藥物學(xué)上可接受的并且與活性成分是相容的。合適的賦形劑是，例如，水、鹽、右旋糖、甘油、乙醇等以及它們的組合。此外，如果需要，該組合物可以包含少量的輔助物質(zhì)，如濕潤劑或乳化劑、pH、緩沖劑，其提高了活性成分的效能?？梢怨?yīng)不同形式的親本(parental)食物或飼壽牛添加劑，如固體食物、液體或凍干或以其他方式干燥的制劑。它可以包括各種緩沖劑(如，Tris-HCl、乙酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強(qiáng)度的稀釋劑、添加劑如白蛋白或凝膠(明膠)以防止吸收到表面、去垢劑(如吐溫20、吐溫80、PluronicF68(聚丙二醇與環(huán)氧乙烷的加聚物F68)、膽汁酸鹽)、增溶劑(如甘油、聚乙二醇)、抗氧化劑(如抗壞血酸、焦亞石克酸鈉)、防腐劑(如石克柳汞(工汞石克^水楊酸鈉，Thimerosal)、苯甲醇、對(duì)羥基苯曱酸酯類(parabens))、膨月長物質(zhì)(bulkingsubstance)或張性改性劑(如乳糖、甘露醇)、聚合物如聚乙二醇到組合物的共價(jià)連接、與金屬離子絡(luò)合、或物質(zhì)進(jìn)入或到達(dá)聚合化合物(如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝膠等)的孩史粒制劑的并入、或物質(zhì)到達(dá)脂質(zhì)體、微乳、膠束、單層或多層泡嚢、紅細(xì)胞影(erythrocyteghost)、或球形體。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的方法的任何一個(gè)中，食物或祠料添加劑以^L料或它們的干燥組合物的形式給予。飲料包括有效量的活性成分或其成分，以及營養(yǎng)上可接受的水溶性載體，如礦物、維生素、碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)。如果飲料以干燥形式提供，則所有這些組分以干燥形式供應(yīng)。所提供的準(zhǔn)備用于消費(fèi)的飲料還包括水。最終的飲料溶液還可以具有受控的張性(tonicity)和酸度，如根據(jù)上面段落中的一般建議作為緩沖溶液。pH優(yōu)選在約2-5的范圍內(nèi)，尤其是約2-4,以防止細(xì)菌和真菌生長。也可以4吏用無菌衫3牛，其中pH為約6-8?！┐蠖?可以單獨(dú)供應(yīng)或與一種或多種治療有歲文的組合物結(jié)合供應(yīng)。才艮據(jù)另外的具體實(shí)施方式，作為用于口服和直腸應(yīng)用的藥物的藥物制劑可以為片劑、錠劑、膠嚢、粉劑、水或油狀混懸劑、糖漿、酏劑、水溶液等的形式，包括活性成分或多種成分，混合有藥用載體和/或添加劑，如稀釋劑、防腐劑、增:容劑、乳化劑、佐劑和/或載體，在本發(fā)明4皮露的方法和應(yīng)用中是有用的。此外，本文所用的"藥用載體"是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且可以包4舌，^f旦不限于，0.01-0.05M石粦酉臾鹽《爰沖液或0.8。/。鹽7jc。此夕卜，這樣的藥用載體可以為含水或非水溶液、懸浮液、以及乳濁液。非水溶劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油、以及可注射的有機(jī)酯如油酸乙酯。含水載體包括水、醇/水溶液、乳濁液或懸浮液、包括鹽水和緩沖介質(zhì)。腸胃外載體包括氯化鈉溶液、林格右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸林格或固定油。防腐劑和其它添加劑也可以存在，如，例如，抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。形成具有a-酮戊二酸的酰胺或具有谷氨酰胺或谷氨酸的二肽或具有谷氨酰胺和/或谷氨酸的三肽的部分的氨基酸可以為自然界中作為肽中成分存在的任何氨基酸。同樣的應(yīng)用于a-酮戊二酸或其鹽與至少一個(gè)氨基酸的藥學(xué)上可接受的物理狀態(tài)混合物。優(yōu)選地，所述氨基酸或酸選自由精氨酸、鳥氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和賴氨酸組成的組。所述氨基酸優(yōu)選以它們的L-構(gòu)型使用。a-酮戊二酸與氨基酸或二肽或三肽的酰胺的實(shí)例包括，^旦不限于，a-酮戊二酸與選自由下列物質(zhì)組成的組中的氨基酸的酰胺谷氨酰胺、谷氨酸、精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、脯氨酸、異亮氨酸和亮氨酸以及a-酮戊二酸與二肽的酰胺，其中所述二肽為谷氨酰胺與谷氨酸、4fr氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、脯氨酸、異亮氨酸和亮氨酸的任何一個(gè)的二肽，以及谷氨酸與精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、脯氨酸、異亮氨酸和亮氨酸的任何一個(gè)的二肽。谷氨酰胺和谷氨酸與其它氨基酸的二肽和肽的實(shí)例包括上述那些，與a-酮戊二酸與二肽或三肽的酰胺有關(guān)。a-酮戊二酸或其鹽與至少一種氨基酸的物理狀態(tài)混合物的實(shí)例包括，^f旦不限于，選自由a-酮戊二酸和其鈉、鉀、鈣和鎂鹽組成的組中的至少一個(gè)成員與谷氨酰胺、谷氨酸、精氨酸、鳥氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸和脯氨酸以及所述氨基酸的任何組合中的任4可一個(gè)的物理^犬態(tài)〉'昆合物。a-酮戊二酸或其鹽與所述物理狀態(tài)混合物的氨基酸或多個(gè)氨基酸的摩爾比一力殳在1:0.01至1:2的限度內(nèi)，優(yōu)選為1:0.1至1:1.5，并且最4尤選為1:0.2至1:1.0。待給予的劑量將^^艮據(jù)待所用的活性成分或成分、待治療的疾病、待治療的患者的年齡、性別、體重等而變化，但一般在1至1000mg/kg體重/天的范圍內(nèi)，或從10至400mg/kg體重/天，優(yōu)選/人10至100mg/kg體重/天。現(xiàn)在，將通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步示出本發(fā)明，該實(shí)施例不應(yīng)被視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例手術(shù)去除胃(胃切除術(shù)，Gx)導(dǎo)致動(dòng)物和人類中骨質(zhì)疏松癥。胃切除術(shù)主要影響小梁骨的結(jié)構(gòu)。不清楚Gx是否也不利地影響骶板。飲食a-酮戊二酸(AKG)是羥脯氨酸(羥基脯氨酸)的前體-骨和軟骨前膠原中最豐富的氨基酸。研究的目的是突出AKG對(duì)胃切除術(shù)依賴性骨/軟骨損失的作用。才法；利用40只雌性Sprague-Dawley大鼠。將20只大鼠胃切除并分成2組Gx+AKG和Gx+安慰劑。對(duì)另外20只大鼠進(jìn)行假手術(shù)(sham-operate)并分成另外的2組Sham(，支手術(shù))+AKG和ShamH艮手術(shù))+安慰劑。在8周后，處死動(dòng)物，收集顱蓋、股骨和脛骨。估計(jì)右股骨和脛骨中的骨質(zhì)量密度(BMD)和骨礦物濃度(BMC),并估計(jì)來自左骨的組織形態(tài)計(jì)量學(xué)(組織形態(tài)測(cè)量學(xué)，histomorphometry)。還進(jìn)4亍了盧貞蓋的透碎見法觀'J量。潛^;飲食a-酮戊二酸揭示了對(duì)胃切除的大鼠的顱蓋骨損失的強(qiáng)保護(hù)作用。AKG表現(xiàn)了對(duì)胃切除大鼠的骺板細(xì)胞、小梁骨體積和小梁形狀的強(qiáng)抗-破壞作用。潛論；AKG最小化大鼠胃切除術(shù)后發(fā)展的骨和軟骨破壞。手術(shù)去除胃導(dǎo)致人類、大鼠和其它實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中骨質(zhì)減少和關(guān)節(jié)炎。胃切除術(shù)與人類中的骨質(zhì)減少有關(guān)。胃功能障礙也有助于老年人中骨質(zhì)減少的發(fā)展。因此，大多數(shù)研究涉及在胃切除后對(duì)患者的骨疾病處理。胃切除術(shù)主要影響小梁骨、有時(shí)也影響皮質(zhì)骨(骨皮質(zhì))、引起顱蓋骨破壞的顯著作用。胃切除術(shù)后皮質(zhì)和小梁骨質(zhì)量的減少已經(jīng)在兩種人類性別中報(bào)道。在胃切除術(shù)16周后脛骨和股骨中的小梁骨體積減少60%。骨損失增加了胃切除術(shù)患者中髖、推骨和其它部位的骨折風(fēng)險(xiǎn)，其是當(dāng)今嚴(yán)重的問題。假定胃切除患者中的骨損失不是飲食不足(如鈣)或缺乏胃酸或維生素D的結(jié)果。胃切除術(shù)后引發(fā)的骨質(zhì)疏松癥的機(jī)制仍是未知的。然而，假定，骨質(zhì)疏松癥的主要原因是骨膠原在被破骨細(xì)胞大量破壞后不能重新合成。骨前膠原的主要成分是脯氨酸-在胃腸道中經(jīng)由谷氨酸鹽(谷氨酸)并經(jīng)由脯氨酸從AKG合成的氨基酸，其又在AKG、維生素C和Fe2+的存在下在骨前膠原中轉(zhuǎn)化為羥(基)月甫氨酸。最近顯示AKG可以有^:防止卵巢切除的大鼠和火雞中切除神經(jīng)的骨中的骨損失。考慮到上述全部，所述研究的主要目的是研究飲食AKG是否可以防止胃切除的大鼠中的骨和軟骨損失。動(dòng)務(wù)和手術(shù)過程將40只雌性Sprague-Dawley大鼠，10周大(220-230g)，容納在Macrolon⑧籠中(每個(gè)籠中2只大鼠)，并給予標(biāo)準(zhǔn)大鼠食物顆粒的々大食(Lactamin,Vadstena，Sweden)和隨意溶解在7JC中的載體或AKG(表1)。該研究持續(xù)8周。對(duì)大鼠每周進(jìn)行稱重。大鼠每天々欠水25至50毫升。原則上，可以i人為大鼠々大水在體重的10至20%之間。AKG組大鼠每天飲用約25ml的AKG飲品(drink)。在25ml的々大品中，存在0.36g的AKG，其給了約1至1.4g的AKG/kg大鼠體重/天。安慰劑(對(duì)照)組大鼠每天飲用約50ml的安慰劑飲品。手術(shù)20只大鼠被胃切除并分成2組Gx+AKG和Gx+安慰劑(每組10只大鼠)。胃的&泉部分(即，產(chǎn)酸部分、胃底和幽門竇)纟皮切除，之后非腺體部分(前胃)與十二指腸首尾相連的連接。20只大鼠被假手術(shù)并分成2組Sham(假手術(shù))+AKG和Sham(假手術(shù))+安慰劑(每組10只大鼠)。布i手術(shù)涉及中線剖腹術(shù)、胃處理和切口閉合。通過皮下；主射Ketalar(50mg/kg;Parke畫Davis，MorrisPlains,NJ，U.S.A)和Stresnil(40mg/kg;Janssen-CilagPharma,Vienna,Austria)實(shí)J見麻醉。通過皮下注射Temgesic(0.18mg/kg;Schering-Plough,Kenilworth，NJ，U.S.A)實(shí)現(xiàn)鎮(zhèn)痛。處理開始于用載體處理Sham(布i手術(shù))+安慰、劑和Gx+安^i劑組，同時(shí)用AKG處理Sham(4叚手術(shù))+AKG和Gx+AKG。通過肌肉內(nèi)途徑每隔一周(開始于術(shù)后第一周)給Gx大鼠注射0.4mg/kg的維生素B12(Betolvex1mg/ml,Dumex,Copenhagen,Denmark)以補(bǔ)充內(nèi)因子的損失，其對(duì)于氫氧化4失聚麥芽糖復(fù)合體(Ferrum50mgFe3+/ml，Vifor(International)Inc.,St.Gallen/Switzerland)(作為用于由于胃酸損失的預(yù)期的4失的不良吸收的補(bǔ)充)的維生素B^和20mgFe3+/kg的吸收是重要的。這些補(bǔ)充對(duì)于沒有經(jīng)歷手術(shù)過^E的大鼠的體重發(fā)展沒有影響。在實(shí)驗(yàn)過程中8只動(dòng)物死亡。動(dòng)物的最終數(shù)量(n)在Sham(假手術(shù))+安慰劑中為7只，在Sham(假手術(shù))+八1^0中為10只，在Gx+安慰劑中為8只，以及在Gx+AKG組中為7只。在如上所述麻醉下通過/人腹主動(dòng)"永》文血處死全部大鼠。研究通過了瑞典蘭德當(dāng)?shù)貏?dòng)物福利委員會(huì)(AnimalWelfareCommittee,Lund,Sweden)的水匕〉偉。紐織僅襄和分浙從每個(gè)大鼠切下顱蓋并通過仔細(xì)去除骨膜清除軟組織。通過用浸透鹽水的紗布覆蓋每個(gè)顱蓋避免干燥，并將它們存儲(chǔ)在+4匸的密封容器中直到檢查。每個(gè)顱蓋被置于光源頂端的玻璃板上(商業(yè)熒光管)，發(fā)出恒定強(qiáng)度的光。通過利用連接于操作顯微鏡(放大率xi6)的相機(jī)，為所獲得的透視圖像照相。將圖像進(jìn)行由ImageJv.1.33a實(shí)施的纟且織形態(tài)計(jì)量學(xué)(histomorphometric)計(jì)算才幾分才斤。估計(jì)骨損失(作為觀察的陷窩面積)的百分比。收集股骨和脛骨并儲(chǔ)存在70%的乙醇中直到進(jìn)一步分析。對(duì)右股骨和脛骨進(jìn)行PIXIMUS⑧分析，其給出了BMD(以g/cm2表示)和BMC(以g/cm3表示)。將乙醇固定的左股骨和脛骨在7%的硝酸(nitrogenacid)中脫釣48小時(shí)。遠(yuǎn)端股骨和近端脛骨樣品(包括具有8mm的干骶端部分的骺)用于進(jìn)一步組織學(xué)處理。將該樣品浸入到石蠟中。股骨和脛骨樣品的縱切片(6|am厚)通過自動(dòng)切片機(jī)MicromHM360切割。從1個(gè)個(gè)體的每1塊骨切割20張切片(每5張后具有20|am的間隔)。在標(biāo)準(zhǔn)條件下用蘇木精/伊紅(曙紅)將切片染色。從每個(gè)染色的切片獲取顯微鏡圖像。用于評(píng)估小梁骨的圖片利用NikonEclipseE800-光學(xué)顯孩M竟(》文大率x40)和NikonD70-凄t字照相機(jī)采集。對(duì)股骨和脛骨的切片的顯微鏡圖像進(jìn)行組織形態(tài)計(jì)量學(xué)計(jì)算才幾分析。利用ImageJv.1.33a分析小梁。用于評(píng)估骺板的圖片通5Pascal激光掃描頭，Zeiss,i文大率x100，具有514nm氬5敫光波長)收集。利用Analysisv.3.0分沖斤雜氺反。利用AXIOVERT200M(裝備有LSM5Pascal激光掃描頭，Zeiss,放大率x100，具有514nm氬激光波長)的焚光模式捕獲關(guān)節(jié)軟骨圖像。關(guān)節(jié)軟骨的圖片通過ZeissLSM圖像斥僉查儀v.3.1.0.99評(píng)估。與骺板下面的小梁相關(guān)的考慮參數(shù)為測(cè)量的小梁骨體積(BV/TV%)以獲得網(wǎng)狀骨的特征、以及小梁分形維數(shù)(BoxCountingMethod)。關(guān)于骶板的參數(shù)為在包括靜止區(qū)、增殖區(qū)和肥厚性軟骨區(qū)的ROI(感興趣區(qū)域)內(nèi)的軟骨細(xì)胞的數(shù)量。借助LSM5Pascal激光掃描頭檢測(cè)器12位(bit)灰度級(jí)作為測(cè)量規(guī)模，通過在隨機(jī)選擇ROI(對(duì)于每個(gè)切片相同的面積-6個(gè)圓圏，每個(gè)直徑為83jam,沿著關(guān)節(jié)軟骨)中的伊紅染色的膠原熒光強(qiáng)度測(cè)量進(jìn)行關(guān)節(jié)軟骨的相對(duì)膠原含量的估計(jì)。對(duì)于每個(gè)切片在嚴(yán)格相同的標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行測(cè)量。鍵#將數(shù)據(jù)與單因素方差分析(ANOVA)、學(xué)生(student's)t檢驗(yàn)進(jìn)4亍比4交，并且p<0.05^皮i人為統(tǒng)計(jì)上顯著。潛果在實(shí)-驗(yàn)的最后，手術(shù)處理的動(dòng)物的身體質(zhì)量(bodymass)比假-手術(shù)的動(dòng)物少8%。在組之間沒有統(tǒng)計(jì)上的顯著性差異(圖1)。的邊說顱蓋的透視表明與Sham(假手術(shù))+安慰劑和Sham(假手術(shù))+AKG大鼠相比，Gx+安慰劑和Gx+AKG大鼠中骨陷窩的百分?jǐn)?shù)的顯著增長(圖2)。與Gx+安慰劑組相比，Gx+AKG大鼠也表現(xiàn)出陷窩的顯著較低的百分?jǐn)?shù)。p-0.031)(圖3)。Sham(假手術(shù))+安慰劑和Sham(假手術(shù))+AKG之間的差異在統(tǒng)計(jì)上不顯著。應(yīng)#和應(yīng)矛中的#礦#密產(chǎn)"MDJ和#礦務(wù)舍量"MCJ與Sham(作l手術(shù))+安慰劑和Sham(，i手術(shù))+AKG大鼠相比，Gx+安慰劑和Gx+AKG大鼠中BMD和BMC較低(數(shù)據(jù)未示出)。然而，Gx+AKG中的BMD傾向于比Gx+安慰劑組大(p=0.19)。^織形,悉^量夢(mèng)^，軟矛分浙Gx+AKG組中的軟骨膠原的量類似于對(duì)照(假手術(shù))組中的量并且與Gx+安慰劑組相比明顯較高(表2)。絲為、浙骺生長板細(xì)胞的定量分析表明與Gx+安慰劑相比，Gx+AKG組(均在股骨和脛骨中)中的細(xì)月包凄t量增加。此外，Gx+AKG組中的軟骨細(xì)胞的數(shù)量顯著大于兩個(gè)Sham(假手術(shù))組(表3、4)。V、菜矛為、^f與Sham(假手術(shù))+安慰劑和Sham(假手術(shù))+AKG大鼠相比，Gx+安慰劑和Gx+AKG大鼠中的小梁骨體積減少。然而，Gx+AKG中小梁的面積減少小于Gx+安慰劑組(表5、6)。索V、菜的分形舉數(shù)Gx+AKG中的分形維lt類似于對(duì)照組并且高于Gx+安慰劑(表7、8)。討論實(shí)驗(yàn)的目的是評(píng)估飲食a-酮戊二酸對(duì)由胃切除術(shù)引起的骨損失的影響。獲得的數(shù)據(jù)i正明假設(shè)。確實(shí)，々欠食AKG防止胃切除的大鼠中的骨和軟骨損失。我們的結(jié)果與最近的實(shí)驗(yàn)一致，表明AKG防止卵巢切除的大鼠和絕經(jīng)期后的婦女中骨質(zhì)疏松癥的發(fā)展。胃切除術(shù)在Gx+安慰劑中引起軟骨膠原和軟骨細(xì)胞損失，但是在Gx+AKG大鼠中沒有引起。證明在Gx+AKG中的軟骨細(xì)胞比Gx+安慰劑中多22%。這表明AKG在防止胃切除后的大鼠中的軟骨細(xì)胞的損失中是有效的。分析表明AKG對(duì)骨和軟骨膠原的保護(hù)作用。Gx+AKG組中月交原的量在用于實(shí)-驗(yàn)的對(duì)照組的范圍內(nèi)，并且比Gx+安慰、劑大鼠中高約18%。觀察到AKG對(duì)胃切除的大鼠中顱蓋骨的保護(hù)性作用。來自Gx+AKG大鼠的顱蓋表現(xiàn)出比來自Gx+安慰劑大鼠的顱蓋的損傷少20%。BMD和BMC值表明胃切除術(shù)引起Gx+安慰劑和Gx+AKG大鼠中的骨質(zhì)減少，這與其它實(shí)-驗(yàn)一致。然而，利用更敏感的組織形態(tài)計(jì)量學(xué)方法，我們表明AKG在防止GX大鼠中的骨質(zhì)減少方面可能有歲文。此外，表明與Gx+安慰劑動(dòng)物相比，檢查的小梁骨體積在Gx+AKG大鼠中減少小于38%。此夕卜，Gx+AKG組中小梁的分形維凄t表現(xiàn)出與々支手術(shù)組中幾乎相同的水平。因此，a-酮戊二酸確實(shí)對(duì)骨小梁的結(jié)構(gòu)的重新構(gòu)建具有很大影響。胃切除術(shù)對(duì)骨骼具有強(qiáng)大的破壞作用，引起骨質(zhì)減少和關(guān)節(jié)病。AKG不能完全停止這些損傷，但是它的確限制骨和軟骨中較大的石皮壞性胃切除術(shù)相關(guān)的變化并可能改善骨骼系統(tǒng)的重新構(gòu)建。這些觀察結(jié)果的含義對(duì)于人類中的臨床考慮可能是重要的，例如，其中部分胃切除術(shù)被推薦用于肥胖患者中的體重減輕。所有這些患者發(fā)展了骨質(zhì)減少和關(guān)節(jié)病。因此，技術(shù)人員可以推測(cè)對(duì)于這些患者飲食的AKG可以停止或限制這些破壞性骨變化。表1.AKG和安慰劑飲品的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>為實(shí)現(xiàn)每種溶液中pH相同的7jc平，安慰劑々大品用0.1MHC1滴定到pH4.6(AKG飲品的pH水平)。表2.AKG和胃切除術(shù)對(duì)關(guān)節(jié)軟骨膠原相對(duì)含量的作用處理熒光標(biāo)準(zhǔn)差(SD)Gx+AKG2363a623Gx+安慰劑1928b647Sham+AKG2475a457Sham+安慰劑2171a374伴隨欄中的結(jié)果給出的不同字母描述了當(dāng)p<0.05時(shí)的顯著性差異。在Gx+AKG中n=7,在Gx+安^S劑中n=8，在Sham(々i手術(shù))+八&0中11=10，在Sham(々i手術(shù))+安羅4劑中11=7。表3.AKG和胃切除術(shù)對(duì)股骨骺板軟骨細(xì)胞的數(shù)量的作用處理細(xì)胞的數(shù)量/mm2SDGx+AKG2220a490Gx+安慰劑1760b360Sham+AKG1890b330Sham+安慰劑1850b220伴隨欄中的結(jié)果給出的不同字母描述了當(dāng)p<0.05時(shí)的顯著性差異。在Gx+AKG中n=7，在Gx+安慰、劑中n=8，在Sham+AKG中n=10,在Sham+安慰劑中n=7。表4.AKG和胃切除術(shù)對(duì)脛骨骺板軟骨細(xì)胞的數(shù)量的作用處理細(xì)胞的數(shù)量/mm2SDGx+AKG2470a470Gx+安慰劑1950b330Sham+AKG1840b410Sham+安慰劑2110b340伴隨欄中的結(jié)果給出的不同字母描述了當(dāng)p<0.05時(shí)的顯著性差異。在Gx+AKG中n=7,在Gx+安^劑中n=8，在Sham+AKG中n=10,在Sham+安^E劑中n=7。表5.a-酮戊二酸和胃切除術(shù)對(duì)股骨小梁骨體積的作用處理小梁的面積(％)SDGx+AKG18.8a3.7Gx+安慰劑11.2b2.1Sham+AKG25.5C7.8Sham+安慰齊'J24.5C5.9伴隨欄中的結(jié)果鄉(xiāng)合出的不同字母描述了當(dāng)p<0.05時(shí)的顯著性差異。在Gx+AKG中n=7，在Gx+安慰、劑中n=8，在Sham+AKG中n=10,在Sham+安^劑中n=7。表6.a-酮戊二酸和胃切除術(shù)對(duì)脛骨'J、梁骨體積的作用處理小梁的面積(％)SDGx+AKG16.7a3.4Gx+安慰劑10.5b2.5Sham+AKG24.9C5.3Sham+安慰劑21.T5.7伴隨欄中的結(jié)果給出的不同字母描述了當(dāng)p<0.05時(shí)的顯著性差異。在Gx+AKG中n=7,在Gx+安^劑中n=8，在Sham+AKG中n=10，在Sham+安^:、劑中n=7。表7.a-酮戊二酸和胃切除術(shù)對(duì)股骨小梁的分形維^t的作用處理分形維數(shù)[D]SDGx+AKG1.22b0.02Gx+安慰劑1.19a0.03Sham+AKG1.24b0.04Sham+安慰劑1.25b0.03伴隨欄中的結(jié)果給出的不同字母描述了當(dāng)p<0.05時(shí)的顯著性差異。在Gx+AKG中n=7,在Gx+安慰劑中n=8,在Sham+AKG中n-10,在Sham+安慰齊'J中n=7。表8.a-酮戊二酸和胃切除術(shù)對(duì)脛骨小梁的分形維數(shù)的作用處理分形維ft[D]SDGx+AKG1.22b0.02Gx+安慰劑1.17a0.02Sham+AKG1.22b0.03Sham+安慰劑1.21b0.04伴隨欄中的結(jié)果給出的不同字母描述了當(dāng)p<0.05時(shí)的顯著性差異。在Gx+AKG中n=7,在Gx+安慰齊'J中n=8，在Sham+AKG中n=10,在Sham+安^^劑中n=7。圖的圖注圖1.々欠食a-酮戊二酸和胃切除術(shù)對(duì)大鼠體重的作用。對(duì)照組SHAM+PLAC、GX+PLAC實(shí)-驗(yàn)組SHAM+AKG、GX+AKG(SHAM畫假手術(shù)的大鼠、GX-胃切除的大鼠)。圖2.測(cè)試的動(dòng)物的顱蓋的選4奪的照片。只t照組SHAM+PLAC、GX+PLAC實(shí)驗(yàn)組SHAM+AKG、GX+AKG(SHAM國假手術(shù)的大鼠、GX-胃切除的大鼠)。圖3.々欠食a-酮戊二酸和胃切除術(shù)對(duì)顱蓋的透3見的作用。對(duì)照組SHAM+PLAC、GX+PLAC實(shí)-驗(yàn)組SHAM+AKG、GX+AKG(SHAM-假手術(shù)的大鼠、GX-胃切除的大鼠)。權(quán)利要求1.包括選自由下列物質(zhì)組成的組中的至少一個(gè)成員的物質(zhì)在制備用于治療或預(yù)防軟骨或其它關(guān)節(jié)疾病的炎性或非炎性損傷的疾病的藥物制劑中的應(yīng)用，所述物質(zhì)為α-酮戊二酸、谷氨酰胺、谷氨酸和這些酸的藥用鹽、α-酮戊二酸和氨基酸或二肽或三肽的酰胺、谷氨酰胺和其它氨基酸的二肽、谷氨酰胺和其它氨基酸的三肽、谷氨酸和其它氨基酸的二肽、谷氨酸和其它氨基酸的三肽和所述二肽和三肽的藥用鹽、α-酮戊二酸或其藥用鹽與至少一種氨基酸的藥物學(xué)上可接受的物理狀態(tài)混合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述至少一個(gè)成員選自由a-酮戊二酸、a-酮戊二酸的鹽以及a-酮戊二酸的酰胺組成的組。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中，所述至少一個(gè)成員選自由a-酮戊二酸和a-酮戊二g臾的鹽《且成的纟且。4.才艮據(jù)權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，用于治療或預(yù)防artrose。5.根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，用于治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。6.根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，用于治療或預(yù)防在涉及重量減輕和/或受損的營養(yǎng)的情況下的軟骨損傷。7.根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，用于治療或預(yù)防在涉及胃切除術(shù)、部分胃切除術(shù)或胃嚢帶術(shù)的情況下的軟骨損傷。8.根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，用于治療或預(yù)防在涉及營養(yǎng)不良的情況下的軟骨損傷。9.根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，用于減輕與根據(jù)權(quán)利要求1-8的疾病坤目關(guān)的疼痛。10.才艮據(jù)前述4又利要求中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，給予患者的劑量在所述物質(zhì)的1至1000mg/kg體重/天的間隔內(nèi)。11.根據(jù)權(quán)利要求l-9所述的應(yīng)用，其中，給予患者的劑量在所述物質(zhì)的10至400mg/kg體重/天的間隔內(nèi)。12.根據(jù)權(quán)利要求l-9所述的應(yīng)用，其中，給予患者的劑量在所述物質(zhì)的10至100mg/kg體重/天的間隔內(nèi)。全文摘要用于治療醫(yī)學(xué)關(guān)節(jié)疾病如關(guān)節(jié)病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及軟骨損傷的物質(zhì)的應(yīng)用。該應(yīng)用包括α-酮戊二酸、谷氨酰胺或谷氨酸、以及所述物質(zhì)的鹽、酰胺、二肽或三肽的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K31/198GK101309678SQ200680042672公開日2008年11月19日申請(qǐng)日期2006年11月15日優(yōu)先權(quán)日2005年11月15日發(fā)明者斯特凡·皮爾齊諾斯基申請(qǐng)人:安特瑞斯公司