專(zhuān)利名稱(chēng)：血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種殺滅釘螺的藥物，尤其是涉及一種生物堿——血根堿作為殺滅血吸蟲(chóng)中間宿主-釘螺的藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血吸蟲(chóng)病是流行于世界74個(gè)國(guó)家的人畜共患寄生蟲(chóng)病，據(jù)WHO估計(jì)，全世界有6億人處于感染血吸蟲(chóng)的危險(xiǎn)環(huán)境中，其中約2億人感染。我國(guó)的長(zhǎng)江流域及其以南的12個(gè)省、直轄市、自治區(qū)均有流行，全國(guó)有434個(gè)流行縣，受感染威脅的人口6600余萬(wàn)，慢性病人84萬(wàn)，推算年新感染或再感染人數(shù)約達(dá)20萬(wàn)，有血吸蟲(chóng)中間宿主-釘螺面積達(dá)384599.97hm2。消滅血吸蟲(chóng)中間宿主-釘螺，控制和阻斷血吸蟲(chóng)病的傳播是防治血吸蟲(chóng)病的重要對(duì)策。
釘螺的防治方法有改變環(huán)境滅螺、物理滅螺、生物滅螺及藥物滅螺等。
藥物滅螺效果比較持久，可因地域確定使用范圍，是滅螺中使用較多的方法。目前，國(guó)內(nèi)外常用的藥物滅螺方法為化學(xué)藥物滅螺。以往曾推廣使用的五氯酚鈉，殺螺效果好，價(jià)格低，但對(duì)人畜和水生動(dòng)植物有嚴(yán)重危害，環(huán)境污染嚴(yán)重，已被WHO禁止使用。氯硝柳胺是目前仍在使用的化學(xué)殺螺劑，藥效好，但釘螺接觸藥物后明顯離水上爬，降低了殺螺效果，且價(jià)格昂貴，對(duì)非靶生物毒性大，影響該藥的推廣和應(yīng)用。WHO及我國(guó)始終致力于滅螺藥物的研究，期望研制出殺螺效果好、毒性低、少污染、價(jià)低廉的殺螺劑。
植物殺螺劑因其來(lái)源廣、資源豐富、毒性低、易降解、污染小而備受關(guān)注。
研究表明，某些植物含有殺螺的化學(xué)成分。自1933年Archibald R.G首次報(bào)道Balanitaceae科的Balanites ageyptiace果實(shí)用以控制血吸蟲(chóng)病以來(lái)，植物殺螺劑的研究受到高度重視。迄今為止，全世界已對(duì)1000多種植物的殺螺作用進(jìn)行了測(cè)試，篩選出近百種對(duì)螺類(lèi)有殺滅和抑制作用的植物，并進(jìn)行了有效化學(xué)成分的分析。我國(guó)通過(guò)對(duì)500余種植物資源的研究，已發(fā)現(xiàn)數(shù)十種植物對(duì)釘螺有毒殺作用，諸如油茶(Camellia)、赤桉(Euealyptus camldultensis)、異葉心桉(E.cordataf)、商陸(Phytolacce candra)、黃果茄(Solanumxanthocarpum)、重樓(Rhigome paridis)、盾葉薯蕷(Dioscoreagingiberensis)、竹節(jié)香附(Anemone raddeana)、禾葉山麥冬(Liriopegraminisolia)、檳榔(Areca catechu L.)等。已闡明了植物殺螺藥主要有效成分為皂甙、鞣質(zhì)、萘醌、烯基酚、黃酮、一萜、倍半萜、生物堿及呋喃香豆素等類(lèi)化合物。含生物堿類(lèi)植物具有殺螺作用已引起關(guān)注。文獻(xiàn)已報(bào)道的具有殺螺作用的生物堿，有從黃果茄中提取的甾體生物堿、喹嗪生物堿，從豆科植物calparnia aurea中提取的灌豆堿，從檳榔種子中提取的檳榔堿，從烏頭中提取的二萜生物堿，從麻風(fēng)樹(shù)種子中提取的麻風(fēng)樹(shù)堿。
雖然植物殺螺劑資源豐富，具有可就地取材，易生物降解的優(yōu)點(diǎn)，使植物殺螺劑的研究備受關(guān)注，成為國(guó)內(nèi)外殺螺劑研究的重點(diǎn)之一，但到目前為止，尚未研究出一種較好的能推廣應(yīng)用的植物性滅螺藥物，植物殺螺劑的研究一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者探索的課題。
從1993年開(kāi)始，本發(fā)明者對(duì)血水草的殺滅釘螺及日本血吸蟲(chóng)尾蚴的作用進(jìn)行了研究。血水草(Eomecon chionantha Hance)為罌粟科(Papaveraceae)白屈菜族(Chelidonium)血水草屬(Eomecon)植物，別名水黃蓮、廣扁線(xiàn)、捆仙繩、牛黃等，系多年生草本植物，是我國(guó)獨(dú)屬、獨(dú)種的特有物種，資源十分豐富，廣泛分布于我國(guó)長(zhǎng)江流域、華南、華東、西南地區(qū)，西北秦嶺也有分布，特別是在長(zhǎng)江中下游血吸蟲(chóng)疫區(qū)分布廣泛，生長(zhǎng)在山野、路旁、溪邊、林邊等較潮濕的泥土內(nèi)，取材容易。具有多種藥理作用，民間用于治療毒蛇咬傷、瘡癤、無(wú)名腫毒、急性結(jié)膜炎等。從血水草及其根莖中提取的生物堿，稱(chēng)血水草生物堿(Eomecon chiorantha Alkaloids，簡(jiǎn)稱(chēng)ECA)。研究發(fā)現(xiàn)，ECA具有殺滅釘螺及日本血吸蟲(chóng)尾蚴的作用，能抑制釘螺上爬，對(duì)魚(yú)類(lèi)毒性較低。血水草生物堿(ECA)為多種苯駢菲啶(Benzophenanthrdine)型生物堿的混合物，主要成分包括白屈菜紅堿(Chelerythrine)、血根堿(Sanguinarine)、原阿片堿(Protopine)、α-別隱品堿(α-allocyptopine)。。
從血水草生物堿中分離出的血根堿也存在于其它罌粟科植物中。
有文獻(xiàn)報(bào)道，純品血根堿對(duì)治療哮喘、支氣管炎、痢疾、某些腫瘤等疾病有較好效果，但尚未發(fā)現(xiàn)它有其它用途的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種來(lái)源廣泛，價(jià)格較低，對(duì)人畜和水生動(dòng)植物毒性低，對(duì)環(huán)境污染少，殺螺效果好的殺滅釘螺的藥物。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的(一)ECA的提取秋季采新鮮血水草及根莖洗凈晾干，完全干燥后碾成粗末，采用乙醇滲漉，減壓濃縮，鹽析法提取血水草生物堿。
(二)血根堿的分離血水草生物堿包含以下化學(xué)成分白屈菜紅堿、血根堿、原阿片堿、α-別隱品堿、氧化血根堿(oxysanguinarine)，白屈菜紅默堿(Chelerythridimerine)和羽扇豆醇乙酯(Lupenylacetate)。其中前四種生物堿為主要成分。通過(guò)氯仿萃取、反復(fù)柱色譜分離及用薄層層析法及高效液相色譜(HPLC)分離出血根堿，并進(jìn)行含量測(cè)定。
所述血根堿的結(jié)構(gòu)式為 分子式為C20H14NO4。
試驗(yàn)用血根堿樣品含血根堿98％。
其它罌粟科植物，例如博落回，也含有血根堿，因而血根堿也可從血水草之外的其它罌粟科植物中提取。
(三)血根堿殺滅釘螺方法以50mg/L為最高濃度，然后按倍比稀釋配置成9種不同濃度的血根堿水溶液，按照WHO“殺螺劑實(shí)驗(yàn)室終篩方法”規(guī)定的浸泡法，對(duì)血根堿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室殺滅釘螺試驗(yàn)，設(shè)去氯水作空白對(duì)照。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，將釘螺用血根堿配制成濃度0.20-50.0mg/L的水溶液浸泡96h，對(duì)釘螺的殺滅率可達(dá)42-100％；當(dāng)濃度為0.40mg/L時(shí)，殺螺率≥88％；當(dāng)濃度為0.80mg/L時(shí)，殺滅率≥92％；當(dāng)濃度為1.5mg/L時(shí)，殺滅率≥98％，當(dāng)濃度為3.0mg/L時(shí)，殺滅率≥98％；當(dāng)濃度＝12.5mg/L時(shí)，殺滅率即可達(dá)100％。當(dāng)血根堿濃度為50mg/L時(shí)，釘螺浸泡72h，殺滅率即達(dá)100％。
本發(fā)明有益效果血根堿來(lái)源廣泛，價(jià)格較低，在低濃度下就有明顯殺滅釘螺的作用，而對(duì)人畜和水生植物及其它水生動(dòng)物毒性低，對(duì)環(huán)境污染少。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。這些實(shí)施例不得用于解釋對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。
(1)將血根堿配制成濃度為50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125、0.390625、0.1953125mg/L的水溶液9組，去氯水空白對(duì)照1組。每組2000ml。
(2)前1日從血吸蟲(chóng)病流行疫區(qū)采回釘螺，試驗(yàn)當(dāng)日選用活釘螺，按50只為一組裝入專(zhuān)用尼龍袋中。
(3)每500ml溶液中投入釘螺1袋(即1只釘螺/10ml藥液)，每組濃度樣品溶液放入釘螺4袋，置25℃恒溫下進(jìn)行試驗(yàn)，浸泡24h、48h、72h、96h；每組各取出1袋螺，用去氯水清洗2次，置室溫下72h后測(cè)釘螺死活。
(4)用水測(cè)法及敲擊法鑒定每只釘螺的死活，并記錄，計(jì)算每組釘螺的死亡率。
滅螺試驗(yàn)結(jié)果如下表所示血根堿浸殺釘螺試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

注1、每組釘螺數(shù)均為50只；2、“釘螺死亡數(shù)及死亡率”欄中，每一小欄的左側(cè)數(shù)字為釘螺死亡絕對(duì)數(shù)，右側(cè)數(shù)字為死亡百分?jǐn)?shù)。
應(yīng)用BL-New Century(USB版本)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，使用Bliss法計(jì)算得出釘螺浸泡48h，LC50為1.419393mg/L，95％可信限為1.045692-1.926643mg/L；釘螺浸泡72h，LC50為0.330738mg/L，95％可信限為0.219364-0.498657mg/L；釘螺浸泡96h，LC50為0.158233mg/L，95％可信限為0.100593-0.248898mg/L。
試驗(yàn)結(jié)果表明，血根堿在低濃度下有明顯殺滅釘螺的作用。當(dāng)濃度達(dá)到12.5mg/L時(shí)，釘螺浸泡96h，殺滅率即可達(dá)100％。
血根堿存在于多種罌粟科植物中，資源豐富，其殺滅釘螺用途的發(fā)現(xiàn)，有利于血水草及其他罌粟科植物的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述血根堿殺滅釘螺的水溶液濃度≥0.4mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述血根堿殺滅釘螺的水溶液濃度≥0.8mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述血根堿殺滅釘螺的水溶液濃度≥1.5mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述血根堿殺滅釘螺的水溶液濃度≥6.25mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述血根堿殺滅釘螺的水溶液濃度≥12.5mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述血根堿殺滅釘螺的水溶液濃度≥25mg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述血根堿殺滅釘螺的水溶液濃度≥50mg/L。
全文摘要
血根堿作為殺滅釘螺藥物的應(yīng)用。將釘螺用血根堿配制成濃度0.18－50.0mg/L的水溶液浸泡96h，對(duì)釘螺的殺滅率可達(dá)40－100％；當(dāng)濃度為0.390mg/L時(shí)，殺滅率≥88％；當(dāng)濃度為0.8mg/L時(shí)，殺滅率≥92％；當(dāng)濃度為3.0mg/L時(shí)，殺滅率≥98％；當(dāng)濃度為12.5mg/L時(shí)，殺滅率即可達(dá)100％。當(dāng)血根堿濃度＝50mg/L時(shí)，釘螺浸泡72h，殺滅率即達(dá)100％。本發(fā)明有益效果血根堿來(lái)源廣泛，價(jià)格較低，在低濃度下就有明顯殺滅釘螺的作用，而對(duì)人畜和水生植物及其它水生動(dòng)物毒性低，對(duì)環(huán)境污染少。
文檔編號(hào)A61P33/12GK101073570SQ20071003496
公開(kāi)日2007年11月21日 申請(qǐng)日期2007年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月21日
發(fā)明者黃瓊瑤, 劉銘, 彭飛, 劉年猛, 孫慧, 楊華中 申請(qǐng)人:湖南師范大學(xué)