專利名稱：：減肥降血脂的含兒茶素的組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及減肥降血脂，尤其涉及綠茶提取物在該領(lǐng)域的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：據(jù)調(diào)查我國至少有7000萬肥胖癥患者，而肥胖癥是導(dǎo)致高血壓、高血脂、糖尿病、冠心病、腦卒中等疾病的元兇，肥胖己越來越多受到普遍關(guān)注。近年來各種減肥品也相繼問世，面對眾多的減肥產(chǎn)品，消費(fèi)者往往無所適從，傳統(tǒng)的減肥產(chǎn)品一般通過腹瀉和抑制人體食欲等方式達(dá)到減肥目的，對人體有所傷害，易反彈，過度節(jié)食也易導(dǎo)致營養(yǎng)不良。因此，尋求開發(fā)新的安全的預(yù)防和治療肥胖的方法迫在眉捷。過氧化物增殖物激活受體(PPARs)家族(PPARa、y和S)屬于核受體超家族成員。PPARs家族的每個成員顯示了在脂質(zhì)代謝過程中重要的作用和組織特異選擇性。PPARa,在肝臟中主要表達(dá)，以促進(jìn)肝臟，腎臟，心和骨骼肌線粒體，過氧化物酶體P-氧化，而降低高脂血癥。PPARy主要調(diào)控成脂過程促進(jìn)脂肪細(xì)胞中脂肪儲存。PPARS主要在肌肉和棕色脂肪中表達(dá)，誘導(dǎo)脂肪酸氧化和能量消耗的基因表達(dá)可促使脂肪重新分配和減肥效應(yīng)。近期研究亦顯示糖尿病和肥胖患者不同組織中線粒體數(shù)目和功能明顯下降。高脂飲食可誘導(dǎo)骨骼肌中線粒體氧化磷酸化基因的下調(diào)。急性的脂質(zhì)輸注可導(dǎo)致人線粒體蛋白的下降。降低PGC-la(線粒體生成的調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子)與肥胖和糖尿病前期骨骼肌的病變有關(guān)。在病態(tài)的肥胖患者中的脂肪組織PGC-la表達(dá)下降。腺病毒感染正常大鼠所致的高瘦素血癥可降低體脂但并未引起游離脂肪酸和酮體的增高，顯示了脂肪細(xì)胞中儲存的脂肪被氧化。研究機(jī)理表明高瘦素可上調(diào)PGC-la(線粒體生成的調(diào)節(jié)者，在正常白色脂肪中并不表達(dá))繼而上調(diào)UCP-1和UCP-2,下調(diào)了脂質(zhì)合成的酶，上調(diào)了ACC和AMPK的表達(dá)(增加脂肪酸氧化相應(yīng)的激酶)。已有報(bào)道稱，綠茶中的成份多酚和苯氧乙酸類藥物非諾貝特可顯著上調(diào)H印G2細(xì)胞株中PPARa的表達(dá)(Jiao，H.L，Ye，P.&Zhao，B.L.(2003)FreeRac//c8/0/Med35，1121-8)。Lee等也報(bào)道綠茶中的主要成份EGCG可增加PPARa的活性(Lee，K.(2004)J/efSc/5，325-30)。兒茶酸也發(fā)現(xiàn)可抑制脂肪細(xì)胞分化，高濃度通過下調(diào)PPARy和C/EBPa的表達(dá)(超過lOuM)(Mori，M.&Hasegawa,N.(2003)P/7ytof/er尺es17，566-7禾口Furuyashiki,T.,Nagayasu,H.，Aoki,Y.，Bessho，H.,Hashimoto,T.，Kanazawa,K.&Ashida，H.(2004)8/osc/8/ofec/7n0/68,2353-9)。Ashida等報(bào)道綠茶在內(nèi)臟脂肪中通過抑制PPARy的表達(dá)，降低GLUT4的轉(zhuǎn)位和抑制SREBP-1的活化(Ashida,H.,Furuyashiki,T,,Nagayasu,H,,Bessho,H.，Sakakibara,H.,Hashimoto,T.&Kanazawa,K.(2004)8/ofecto廣s22，135-40)。但至今PPARs參與綠茶減肥效應(yīng)的機(jī)制仍然不明。而且目前相關(guān)研究大多僅限于綠茶粗提物或單一成份的應(yīng)用。因此，本領(lǐng)域迫切需要提供兒茶素四種高活性成分單體，表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)和/或表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的混合物根據(jù)較明確的作用機(jī)制進(jìn)行降血脂或減肥的應(yīng)用；從而得到效果佳、副作用小的降血脂或減肥產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種具有明顯降血脂或減肥功效的新物質(zhì)。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種兒茶素或含兒茶素的提取物的用途，所述的兒茶素或含兒茶素的提取物可用于制備促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體生成的組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物用于降血脂、治療肥胖、和/或預(yù)防肥胖。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還用于調(diào)節(jié)過氧化物增殖物激活受體(PPARs)通路；和/或促進(jìn)脂肪酸氧化。在另一優(yōu)選例中，所述的調(diào)節(jié)過氧化物增殖物激活受體(PPARs)通路包括升高肝臟中PPARa的表達(dá)、改變不同部位白色脂肪中PPARY的表達(dá)、和/或增加PPARS的表達(dá)。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。在另一優(yōu)選例中，組合物中EGCG的濃度為O.2-50"M;較佳地為O.5-25uM，更佳地為1-10uM。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還包括表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素(EGC)和/或表兒茶素沒食子酸酯(ECG)。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物是藥物組合物、食物組合物或保健品組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物含有(i)治療有效量的兒茶素，和(ii)藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物包括選自下組的額外組分M、天然辣椒素、L-肉堿、咖啡因、膳食纖維或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物選自(i)粉劑、顆粒劑、膠囊劑、注射劑、酊劑、口服液或片劑；(ii)飲料。在另一優(yōu)選例中，所述的含兒茶素的提取物包括綠茶提取物。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種兒茶素或含兒茶素的提取物在制備用于降血脂、治療和/或預(yù)防肥胖的組合物中的用途。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還可以用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體的生成。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物可調(diào)節(jié)過氧化物增殖物激活受體(PPARs)通路、和/或促進(jìn)脂肪酸氧化。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物可增加肝臟中PPARa的表達(dá)、改變不同部位白4色脂肪中PPARY的表達(dá)、和/或增加PPAR5的表達(dá)。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物可提高棕色脂肪的功能和/或促使白色脂肪向棕色脂肪分化。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物可刺激脂肪細(xì)胞分化，誘導(dǎo)分化成小脂肪細(xì)胞。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物可用于治療或預(yù)防脂肪肝。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物可用于治療或預(yù)防動脈粥樣硬化。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物可用于治療或預(yù)防II型糖尿病。在本發(fā)明的第三方面，提供了一種減肥方法，包括步驟給需要的對象施用茶提取物兒茶素。在本發(fā)明的第四方面，提供了一種降低血脂的方法，包括步驟給需要的對象施用茶提取物兒茶素。在本發(fā)明的第五方面，提供了一種改變過氧化物增殖物激活受體(PPARs)通路的方法，包括步驟給需要的對象施用茶提取物兒茶素。在本發(fā)明的第六方面，提供了一種促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體生成的方法，包括步驟給需要的對象施用茶提取物兒茶素。在本發(fā)明的第七方面，提供了一種促進(jìn)脂肪酸氧化的方法，包括步驟給需要的對象施用茶提取物兒茶素。在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明所述的施用對象是哺乳動物，更佳地為人。據(jù)此，本發(fā)明提供了兒茶素四種高活性成分單體，表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)和/或表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的混合物根據(jù)較明確的作用機(jī)制進(jìn)行降血脂或減肥的應(yīng)用；從而得到了效果佳、副作用小的降血脂或減肥產(chǎn)品。在各附圖中HF+GTCs表示高脂+GTCs組、HF表示高脂飲食對照組、CH0W+GTCs表示普通飲食+GTCs組、CHOW表示普通飲食組。圖l顯示了GTCs對于SD大鼠體重指數(shù)的效應(yīng)；其中A是高脂飲食組添加或不添加GTCs45天后的大鼠背部圖片，左為高脂飲食組添加GTCs，右為高脂飲食組不添加GTCs;-B是高脂飲食組添加或不添加GTCs45天后的大鼠肝組織圖片，左為高脂飲食組添加GTCs，右為高脂飲食組不添加GTCs;C，D表示當(dāng)GTCs的添加劑量為100mg/kg(體重)/天時，在干預(yù)30或45天天后，HF+GTCs、HF、CH0W+GTCs和CH0W所呈現(xiàn)的不同的體重，其中C中N=8，與高脂飲食組對照有差異(ttp〈0.05)，D中^8,與高脂飲食組對照有差異(ttp〈0.05)，與普通飲食組對照有差異(*々<0.05);E顯示GTCs降低了肝臟中甘油三脂的含量，#與HF組對照(p〈0.05)，*與CHOW組對照(P〈0.05);F顯示GTCs降低了肝臟/體重比，tt與HF組對照(P〈0.05)，*與CHOW組對照(p〈0.05);G顯示了GTCs降低了血甘油三脂的含量，#與HF組對照(p〈0.05),*與CHOW組對照(p<0.05);H顯示了GTCs降低了MDA(丙二醛)的水平，#與HF組對照(p<0.05)，*與CHOW組對照(P〈0.05)。圖2是免疫印跡分析結(jié)果，顯示了GTCs對于皮下和內(nèi)臟白色脂肪組織PPARY的表達(dá)(N-6)的影響，數(shù)值以相對于對照組的倍數(shù)表示，取3次試驗(yàn)的平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，肌動蛋白作為內(nèi)參。A是GTCs對皮下脂肪組織中PPARy(p<0.05)的表達(dá)的影響；B是GTCs對內(nèi)臟白色脂肪組織中PPARY(p〈0.05)的表達(dá)的影響。圖3是蛋白印跡和RT-PCR分析結(jié)果，顯示GTCs增加了脂肪組織PPARS的表達(dá)，激活了PPARS相關(guān)的脂肪酸氧化和解偶聯(lián)蛋白(N:6)，數(shù)值以相對于對照組的倍數(shù)表示，取3次試驗(yàn)的平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，其中A、B和C分別顯示GTCs增加了PPARS在棕色脂肪(A，p〈0.05)、在皮下白色脂肪(B，p<0.05)和在內(nèi)臟白色脂肪中(C，p〈0.05)的表達(dá)；D和E顯示了GTCs增加了皮下白色脂肪和內(nèi)臟白色脂肪中UCP1mRNA的表達(dá)；F、G和H顯示了GTCs增加了棕色脂肪CPT-l(F,p〈0.05)、AOX(G，p<0.05)和UCP-l(H，p〈0.05)mRNA的表達(dá)。圖4顯示了EGCG影響PPARy、C/EBPa、e和CHOP-10的表達(dá)，數(shù)值以相對于對照組的倍數(shù)表示，取3次試驗(yàn)的平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，其中A顯示EGCG處理或未處理的細(xì)胞油紅染色結(jié)果，Al作為對照是未經(jīng)EGCG處理的，A2是經(jīng)EGCG處理的；B顯示細(xì)胞中甘油三酯含量分析結(jié)果；C顯示上清中甘油含量分析結(jié)果；D顯示游離脂肪酸含量分析結(jié)果；E顯示EGCG干預(yù)或未干預(yù)組的Hoechst33258核染色結(jié)果，El作為對照是未經(jīng)EGCG干預(yù)的，E2是經(jīng)2.5uMEGCG處理的，E3是經(jīng)25uMEGCG處理的，E4是經(jīng)50nMEGCG處理的，E5是經(jīng)100iiMEGCG處理的；F顯示EGCG干預(yù)或未干預(yù)組C/EBPa、C/EBPp、PPARy、CHOP-10禾nPPAR5蛋白免疫印跡分析結(jié)果；G、H、I，J和K為上述蛋白印跡灰度分析結(jié)果；L顯示EGCG干預(yù)或未干預(yù)組組織中AOX，UCP-1,FAS和FATRT-PCR的分析結(jié)果；M、N，0和P顯示EGCG干預(yù)或未干預(yù)組關(guān)于AOX、UCP-1、FAS和FATRT-PCR灰圖5顯示了EGCG刺激3T3-L1脂肪細(xì)胞線粒體生成的結(jié)果，數(shù)值以相對于對照組的倍數(shù)表示，取3次試驗(yàn)的平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，其中A是線粒體體積應(yīng)用MitoTracker染色進(jìn)行分析的結(jié)果；B是線粒體耗氧的測定結(jié)果；C是線粒體蛋白表達(dá)分析結(jié)果；D是線粒體DNA含量分析結(jié)果E是免疫蛋白印跡分析PGC-la的表達(dá)的結(jié)果。具體實(shí)施例方式發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)EGCG、或兒茶素、或含有兒茶素的提取物可以有效地降血脂和減肥。它可以通過刺激線粒體生成而降低脂肪的異常堆積;具體地，它調(diào)節(jié)PPAR的通路、和/或促進(jìn)脂肪酸的氧化。術(shù)語如本文所用，術(shù)語"含有"或"包括"包括了"包含"、"基本上由……構(gòu)成"、和"由構(gòu)成"。如本文所用，術(shù)語"基本上由……構(gòu)成"指在組合物中，除了含有必要成分或必要組份之外，還可含有少量的且不影響有效成分的次要成分和/或雜質(zhì)。例如，可以含有甜味劑以改善口味、抗氧化劑以防止氧化，以及其他本領(lǐng)域常用的添加劑。如本文所用，"茶提取物兒茶素"或"茶兒茶素"或"兒茶素"是指包含黃垸醇類的一種或多種兒茶素(catechins)的混合物。以兒茶素總量計(jì)，它含有30-100%的EGCG;較佳地，含有50-100%EGCG，更佳地，含有60_100%EGCG。它還可以含有EGC、ECG、中的一種或其組合；較佳地，含有10_40%ECG、10-35%EGC，和/或3-20%EC;更佳地，含有15-30%ECG、12-25%EGC，和/或6_15%EC。其中優(yōu)選綠茶兒茶素(GreenTeaCatechins，簡稱G丁Cs)。如本文所用，術(shù)語"必要成分"指作為活性成分的必要的化學(xué)物質(zhì)，即EGCG、EGC、ECG和EC等兒茶素。如本文所用，術(shù)語"組合物"或"本發(fā)明的組合物"或"本發(fā)明提供的組合物"包括藥物組合物、食物組合物、保健品和/或膳食添加劑，只要它們含有或基本上由兒茶素組成。如本文所用，術(shù)語"組合物"或"本發(fā)明的組合物"或"本發(fā)明提供的組合物"包括(a)降低血脂的組合物，(b)治療、預(yù)防肥胖的組合物，(c)通過調(diào)節(jié)PPAR通路的組合物，(d)促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體生成的組合物，和/或(e)促進(jìn)脂肪酸氧化的組合物。如本文所用，茶(Ca/e^j'aw'"e"w's".J,朋&e)指山茶科(T/eaceae)茶(Ca歷W〃3)屬植物?？捎糜诒景l(fā)明的茶包括綠茶、黃茶、白茶、青茶、黑茶和紅茶，更佳地為綠茶。本發(fā)明提供的兒茶素可以用本領(lǐng)域熟知的方法從茶中提取，其提取純度為50-98%，較佳地為80-98%,更佳地為90-98%。7如本文所用，術(shù)語"有效量"是指可對人和/或動物產(chǎn)生功能或活性的且可被人和/或動物所接受的量。如本文所用，術(shù)語"藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體"指用于治療劑給藥或保健品食用的載體，包括各種賦形劑和稀釋劑。該術(shù)語指這樣一些載體它們本身并不是必要的活性成分，且施用后沒有過分的毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.，N.J.1991)中可找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的賦形劑的充分討論。在組合物中藥學(xué)上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖物質(zhì)等。來自于EGCG、EGC、ECG和EC等兒茶素之外的非必要成分，以及其他非必要成分(例如其他輔助性藥材或食材)，也包括在藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體的定義中。用途本發(fā)明提供的兒茶素可用于制備治療高脂血癥的藥物。本發(fā)明提供的兒茶素可用于制備治療或預(yù)防肥胖的藥物。發(fā)明人通過應(yīng)用高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠模型和3T3-L1脂肪細(xì)胞的模型，從大鼠體重及血脂的改變；脂肪細(xì)胞線粒體生成及功能的變化，發(fā)現(xiàn)兒茶素具有使大鼠減肥、降脂的作用；還具有調(diào)節(jié)PPARs通路，改變細(xì)胞線粒體形態(tài)，數(shù)目及功能的作用。一、兒茶素具有減肥和降血脂的效應(yīng)應(yīng)用大鼠模型，發(fā)現(xiàn)兒茶素可以使大鼠體重顯著降低，還可以顯著降低肝重，肝臟甘油三脂和血甘油三脂。血和肝臟中的脂肪與脂肪肝和動脈粥樣硬化的發(fā)病有關(guān)，本發(fā)明提供的兒茶素還可以用于制備治療或預(yù)防脂肪肝和/或動脈粥樣硬化。二、兒茶素刺激3T3-L1脂肪細(xì)胞線粒體的生成EGCG刺激了脂肪細(xì)胞線粒體的體積。EGCG在2.0和5.0uM時，顯著刺激了線粒體體積的增加。EGCG在1.0-5.OwM顯著增加了脂肪細(xì)胞的耗氧。EGCG增加了脂肪細(xì)胞線粒體復(fù)合物蛋白I，II，V的表達(dá)。EGCG還增加了線粒體D-loop區(qū)DNA的拷貝數(shù)，D-loop區(qū)是啟動線粒體DNA重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)錄的起始部位。EGCG增加了脂肪細(xì)胞中PGC-la(過氧化物增殖物激活受體y輔激活蛋白-1a，peroxisomeproliferatoractivated-receptorycoactivator-la)蛋白zR平的表達(dá)。三、兒茶素在皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪中顯示了對PPARy表達(dá)的不同效應(yīng)兒茶素增加了皮下白色脂肪組織PPARY的表達(dá)，而降低了PPARy在內(nèi)臟白色脂肪(腸系膜)中的表達(dá)。兒茶素可減少內(nèi)臟、肝臟和血液中的脂肪，還可用于制備治療II型糖尿病的藥物。四、兒茶素上調(diào)脂肪組織中PPARS及其下游基因的表達(dá)兒茶素可增加內(nèi)臟白色脂肪組織和棕色脂肪組織中PPARS的表達(dá)。兒茶素還可使PPARS的下游基因靶基因，包括CPT-l(肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶-l，carnitinepalmitoyltransferases-1)，AOX(乙酰輔酶A氧化酶，acyl-CoAoxidase)和UCP-1(解耦聯(lián)蛋白，unco叩lingprotein)在皮下和內(nèi)臟白色脂肪組織中表達(dá)，這進(jìn)一步確定了兒茶素使PPAR5上調(diào)的效應(yīng)；而UCP-1是棕色脂肪組織的特征性標(biāo)記表達(dá)。五、兒茶素改善了3T3-L1脂肪細(xì)胞中PPARy,C/EBPq、p(CCAAT/增強(qiáng)結(jié)合蛋白a、P，CCAAT/enhancer-bindingproteina、e)和CH0P-10(C/EBP同源蛋白-IO，C/EBP-homologousprotein-10)的表達(dá)，通過PPARS的通路改善了脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)氧化EGCG(l-5nM)顯著降低了3T3-LI脂肪細(xì)胞的甘油三脂的含量。EGCG增加了上清中甘油的分泌但沒有增加脂肪酸的含量。EGCG上調(diào)了C/EBPa和C/EBPI3的表達(dá)，同時降低了CHOP-10的表達(dá)。生理劑量的EGCG上調(diào)了PPARS的表達(dá)和涉及到能量消耗的酶包括A0X和UCP-1的表達(dá)。EGCG增加了FAT(脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體，fattyacidtransporter)的表達(dá)。組合物在本發(fā)明中，各種組合物可以通過常規(guī)方法制成任何常規(guī)的制劑形式，可以將活性成分與常規(guī)的賦形劑、調(diào)味劑、崩解劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、溶劑、增稠劑或增溶劑等藥物輔料混合，制成任何一種適合于臨床使用的劑型，如粉劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑、口服液體制劑等，優(yōu)選緩釋劑型，可以使必要成分緩慢而穩(wěn)定、持續(xù)地釋放。所述的緩釋劑型可以通過常規(guī)的方法制得。所述的組合物可以是保健飲料等。本發(fā)明提供的用作治療或預(yù)防肥胖的組合物以其中所含的活性成分(兒茶素)計(jì)，其有效劑量為每日0.01-5克/60千克體重，更佳地為O.1-2.0克/60千克體重。本發(fā)明提供的用于降低血脂的組合物中還可包括但并不限于下述一種或多種代表性的降血脂物質(zhì)蘆薈、天然辣椒素、L-肉堿、咖啡因、膳食纖維或其組合。本發(fā)明提供的用于預(yù)防和/或治療肥胖的組合物中還可包括但并不限于下述一種或多種代表性的減肥物質(zhì)蘆薈、天然辣椒素、L-肉堿、咖啡因、膳食纖維或其組合。本發(fā)明提供的促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體生成的組合物中還可包括但并不限于下述一種或多種代表性的減肥物質(zhì)蘆薈、天然辣椒素、L-肉堿、咖啡因、膳食纖維或其組合。本發(fā)明提供的調(diào)節(jié)PPARs通路的組合物中還可包括但并不限于下述一種或多種代表性的減肥物質(zhì)蘆薈、天然辣椒素、L-肉堿、咖啡因、膳食纖維或其組合。本發(fā)明提供的促進(jìn)脂肪酸氧化的組合物中還可包括但并不限于下述一種或多種代表性的減肥物質(zhì)蘆薈、天然辣椒素、L-肉堿、咖啡因、膳食纖維或其組合。當(dāng)用于制備藥物組合物或食物組合物時，所用的兒茶素的有效劑量可隨施用的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。在本發(fā)明的另一優(yōu)選方式中，所述的組合物作為一種膳食添加劑，添加到水、飲料、固體食品、烹飪菜肴中。在本發(fā)明的另一優(yōu)選方式中，所述的食品上學(xué)可接受的載體或賦形劑選自填充劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、泡騰劑、矯味劑、包覆材料、膳食制品、或緩/控釋劑。應(yīng)理解，本發(fā)明的組合物中還可含有其它人體所必需的或?qū)θ梭w有益但不影響或不產(chǎn)生直接的藥效的成分。本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于1、兒茶素具有明顯的減肥功效；2、兒茶素具有明顯降血脂功效；3、兒茶素具有明顯刺激線粒體生成的功能；4、兒茶素具有有效調(diào)節(jié)PPARs通路的功能；5、兒茶素具有有效促進(jìn)脂肪酸氧化的功能；6、兒茶素是天然產(chǎn)物沒有副作用。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分比和份數(shù)按重量計(jì)。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。實(shí)施例l一、材料動物30天雄性Sprague-Dawley大鼠重量180-200克(購自VitalActive公司)。飼養(yǎng)條件SPF級，環(huán)境溫度22°C，12小時晝夜交替。藥品綠茶兒茶素(GreenTeaCatechins，簡稱GTCs)純度為98%，含50%EGCG;22%ECG;18。/。EGC和10%EC(HPLC分析)；GTCs購自Fullgreen生物公司(中國四川綿陽)。其它材料PGC-1a(sc-5816)，PPAR-Y-2(sc-7273)，PPARS(sc-7197),PPARy(sc-7196),PPARa(sc-1985)，CHOP-10(sc-7351)，C/EBPa(sc-61),C/EBPp(sc-150)和/3-Actin(fi-肌動蛋白)(sc-1616-R)的抗體購自SantaCruz公司；Tubulin(微管蛋白)和EGCG的抗體購自Sigma公司；Mito-TrackerGreenFM(線粒體綠色示蹤劑)，complexI，II，III，和V(線粒體電子傳遞鏈復(fù)合物I,II，III，和V)的抗體購自Invitrogen公司；SYBRGREENPCRMasterMix購自ABI(Warrington,UK)公司;BDOxygenBiosensorSystemplate購自BDBiosciences公司(California,USA);線粒體D-loopand18SRNA引物購自賽百盛公司；其他細(xì)胞培養(yǎng)試劑均購自于Invitrogen公司。二、方法動物喂養(yǎng)及分組所有動物適應(yīng)性喂養(yǎng)三天后隨機(jī)分為兩組。一組應(yīng)用普通飲食；另一組應(yīng)用高脂飲食(含15%飽和脂肪，1%膽固醇)。大鼠高脂喂養(yǎng)30天后稱重確定肥胖模型，再隨機(jī)分為普通飲食對照組，高脂飲食組，普通飲食+GTCs組和高脂飲食+GTCs組(每組10只)。GTCs的劑量為20mg/kg體重/天。每天觀察大鼠體重和記錄每天的消耗食物量。添加GTCs喂養(yǎng)后30或45天，大鼠被處死，肝臟和脂肪組織被收集并保存在-75°C。細(xì)胞培養(yǎng)3T3-Ll前脂肪細(xì)胞用完全培養(yǎng)液(DMEM+10y。FBS+100u/ml青、鏈霉素)，在37°C孵箱(5%二氧化碳，95%空氣)中培養(yǎng)，每2天換液1次。待細(xì)胞生長至完全融合后2天(第0天)，開始誘導(dǎo)分化。具體步驟為將培養(yǎng)液換成含0.5mM異丁基甲基黃嘌呤(IBMX)、0.25yM地塞米松和lnM胰島素的完全培養(yǎng)液48h后，撤去IBMX和地塞米松，使完全培養(yǎng)液中只含有1UM胰島素；2天后換液，撤去胰島素，使用不含有任何誘導(dǎo)劑的完全培養(yǎng)基；以后每2天換液1次，直至第8天95%以上細(xì)胞已分化為成熟的脂肪細(xì)胞。EGCG溶解于PBS(PH7.4)中，所用實(shí)驗(yàn)中EGCG再溶解于培養(yǎng)基中。甘油三脂測定甘油三脂和甘油的測定按照Shimabukuro等報(bào)道的方法(Shimabukuro,M,，Koyama，K,，Chen，G.,Wang，M.Y.，Trieu,F.,Lee，Y.，Newgard,C.B.&Unger,R,H.(1997)ProcA/af//\cac/Sc/L/S/\94，4637-41)。50mg肝組織勻漿后加入lml細(xì)胞裂解液(含5%)TritonX-100。甘油三脂的含量應(yīng)用測定樣品中甘油的方法(Shimabukuro,M.，Koyama，K.,Chen，G.，Wang,M.Y.,Trieu,F.,Lee，Y.，Newgard，C.B.&Unger，R.H.(1997)PracA/a"yAcaafSc,L/S/\94，4637-41)。血甘油三脂的含量應(yīng)用日立自動生化分析儀測定。3T3-Lll脂肪細(xì)胞中甘油三脂的含量應(yīng)用甘油三脂的測定試劑盒測定(GP0-Trinder;購自Sigma。蛋白定量應(yīng)用BCA蛋白分析試劑盒(購自PIERCE,USA)。脂肪酸和甘油的測定成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞應(yīng)用不同濃度的EGCG孵育48小時后，應(yīng)用含1%BSAD-Hank氏液洗兩次。測定上清中甘油和脂肪酸的含量(購自Roche的試劑盒)。RT-PCR大鼠脂肪組織和3T3-Ll脂肪細(xì)胞中RNA應(yīng)用TRIzol試劑進(jìn)行抽提(購自Invitrogen，USA)。應(yīng)用SuperscriptFirst-StrandSynthesisSystem逆轉(zhuǎn)錄酶為CDNA。引物和基因Gene-bank的序列號具體如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>RT反應(yīng)lug總RNA合成cDNA?？傮w積20ul，42。C反應(yīng)60min,95。C反應(yīng)5min。合成的cDNA，使用Takara公司的麗305AExT叫(Hotstartversion)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增反應(yīng)總體積50ul,變性95°C,lmin;退火58。Clmin;延伸72。Clmin;共進(jìn)行27次循環(huán)，末次循環(huán)后延伸8min。取擴(kuò)增反應(yīng)液10ul進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳，紫外檢測儀下觀察并拍照記錄。Westernblot大鼠脂肪組織勻漿應(yīng)用裂解液(含有l(wèi)OOmMNaCl,10mMTrisCl,lmMEDTA,pH8.0,l^g/ml抑蛋白酶肽(Aprotinnin)，100Pg/ml苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonylfluoride,PMSF)，lO^g/ml亮抑酶肽(leupeptin)12000g4'C離心5分鐘收集上清。應(yīng)用BCA方法(購自Pierce,USA)測定蛋白濃度。細(xì)胞各種處理因素作用后，棄去培養(yǎng)液，用PBS充分清洗，加入細(xì)胞裂解液，用細(xì)胞刮匙刮下細(xì)胞，冰上孵育30分鐘，13000r/min4'C離心10分鐘，收集上清即為細(xì)胞蛋白提取液。應(yīng)用Bradford法進(jìn)行總蛋白定量，-8(TC保存。蛋白用SDS聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳分離后，轉(zhuǎn)移至固相支持體硝酸纖維素膜上，室溫下封閉1小時，加入一抗PPARS(1:500),PPARa(1:500)，CHOP-10(1:400)，C/EBPa(l:500)，C/EBPJ3(1:500),PPARY(1:1000)，PGC-1a(1:1000),J3-Actin(1:500)，a-tubulin(1:10000)，復(fù)合物I(Complexl)(1:2000)，復(fù)合物II(ComplexII)(1:2000),復(fù)合物III(ComplexIII)(1:2000)和復(fù)合物V(ComplexV)(1:2000)，4'C孵育過夜，洗膜，加入二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體)，室溫孵育1小時，ECL發(fā)光，X線膠片感光。應(yīng)用NIHImage圖像分析軟件對蛋白條帶的密度進(jìn)行半定量分析。油紅染色成熟脂肪細(xì)胞的油紅染色方法見報(bào)道(Balasubramanian,S.&Eckert，R.L.(2004)J8/0/C/em279,24007-14)。細(xì)胞應(yīng)用PBS洗三次再用含10%甲醛的PBS固定30分鐘。固定后，細(xì)胞應(yīng)用油紅染液染30分鐘接著移去過多的染液，顯微鏡觀察僅有分化成熟的脂肪細(xì)胞甘油三脂著色。過飽和前脂肪細(xì)胞經(jīng)應(yīng)用分化誘導(dǎo)劑剌激48小時后，5一EGCG添加入培養(yǎng)基中孵育8天，第10天油紅染色。僅分化的脂肪細(xì)胞被著色，完全成熟的脂肪細(xì)胞應(yīng)用EGCG孵育48小時，應(yīng)用甘油三脂的定量試劑盒進(jìn)行定量分析。Hoechest33258核染色細(xì)胞應(yīng)用EGCG處理48小時后用Carnoy's固定液固定。固定后的細(xì)胞應(yīng)用DNA的熒光染料Hoechst33258(3yg/ml)(購自北京鼎國公司)染30分鐘。核的形態(tài)應(yīng)用熒光顯微鏡觀察。鏡下觀察到細(xì)胞核明顯縮小，染色質(zhì)固縮，核碎裂判斷為凋亡細(xì)胞。丙二醛(MDA)的檢測肝臟脂質(zhì)過氧化水平測定TBARS。肝臟勻漿液與lml20%三氯乙酸混合，0.8ml水，lml0.67%(w/v)2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituricacid)和0.lml0.2%(w/v)丁基化羥基甲苯(butylatedhydroxytoluene，BHT)。混旋后加熱至100°C60分鐘。TBARS應(yīng)用3ml正丁醇抽提，離心4400XgIO分鐘。丁醇層的吸光度波長532nm讀取，值以MDAnmol數(shù)/g組織濕重表示。水解的1，1，3，3-四乙氧基丙烷(Hydrolyzed1，1，3，3-tetraethoxypropane)作為MDA的標(biāo)準(zhǔn)。線粒體體積的測定熒光探針Mito-TrackerGreenFM(線粒體綠色示蹤劑)可以特異性用于線粒體的染色，測定線粒體的體積。脂肪細(xì)胞應(yīng)用EGCG作用24小時，胰酶消化，收集細(xì)胞，重懸于KRB緩沖液，再于Mito-TrackerGreenFM(100nM)孵育30分鐘，離心收集細(xì)胞，懸于KRB緩沖液中，流式細(xì)胞儀(購自FACSCaliburBectonDickinson)分析熒光強(qiáng)度。(Goss,G.G.,Adamia，S.&Galvez，F(xiàn).(2001)AmJP/7ys/0/尺egu//ntegrCompP—'o/281，R1718-25)。線粒體呼吸耗氧的測定完整細(xì)胞的耗氧指標(biāo)反映線粒體的呼吸功能。BDOxygenBiosensorSystem是氧敏感的熒光探針(三氯1，7-二苯-1,10-菲咯啉釕)氧能夠滅活該探針的熒光呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)。熒光的強(qiáng)度直接反映了氧消耗的速率，間接反映了細(xì)胞的耗氧。這種獨(dú)特的技術(shù)能夠反映瞬間氧的水平。EGCG刺激后，脂肪細(xì)胞被接種在BDOxygenBiosensorSystem96孔板內(nèi)，應(yīng)用熒光酶標(biāo)儀讀值，激發(fā)波長為485nm，發(fā)射波長為630nm，60分鐘觀察，間隔1分鐘讀值(Wilson-Fritch，L.，Nicoloro,S.,Chouinard，M.，Lazar，M.A.,Chui,P.C.,Leszyk,丄，Straubhaar,丄，Czech,M.P.&Corvera，S.(2004)JC〃"/"i/esM14,1281-9)。線粒體DNA含量的測定細(xì)胞DNA使用ABI公司的SYBR-GreenMasterMix,進(jìn)行PCR擴(kuò)增(Stratagene定量PCR儀)。PCR產(chǎn)物通過SYBRGreenI染料熒光檢測定量。引物序列的設(shè)計(jì)參考文獻(xiàn)，引物由上海賽百盛公司合成。引物序列為線粒體mitochondrialD-loop上游，5'-AATCTACCATCCTCCGTG-3'，下游5'-GACTAATGATTCTTCACCGT;18SRNA上游5'-CATTCGAACGTCTGCCCTATC-3'和下游5'-CCTGCTGCCTTCCTTGGA-3'。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以線粒體D-lo叩相對于18sRNA基因的比值表示(Kuroda，Y.，Mitsui,T"Kunishige,M.,Shono，M.，Akaike，M.，Azuma，H.&Matsumoto,T.(2006)〃wmMo/Genef15，883-95.)。三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理兩組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)采用AN0VA作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果用平均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P<0.05表示差異顯著性。四、結(jié)果GTCs具有減肥和降血脂的效應(yīng)高脂飲食的大鼠體重較普通飲食的大鼠體重有顯著性差異。GTCs添加組體重顯著性降低(見圖1A);添加GTCs組30天大鼠體重較對照組明顯降低(分別降低約9.4%和6.3%)(見圖IC)。此種效應(yīng)在應(yīng)用GTCs喂養(yǎng)45天后更加顯著(分別下降約11.8%和8.2%)(見圖ID)。GTCs添加組顯著降低了肝重/體重％(見圖1B，F(xiàn))，肝臟甘油三脂和血甘油三脂(見圖1E，G)。GTCs添加組顯著降低了肝臟中MDA的含量(見圖IH)。結(jié)果表明，長期應(yīng)用GTCs會更加降低體重。短期內(nèi)GTCs的添加能使超重的體重得到控制，將有助于改善2型糖尿病的預(yù)后。另外，GTCs不僅降低體重而且可降低血和肝臟中的脂肪，二者與脂肪肝和動脈粥樣硬化發(fā)病有關(guān)。通過服用GTCs可以降低肝臟中的儲存脂肪和循環(huán)中的脂肪可能抑制這類疾病的進(jìn)程。GTCs在皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪中顯示了對PPARY表達(dá)的不同效應(yīng)GTCs對于不同部位的脂肪組織PPAR丫的表達(dá)顯示出不同的效應(yīng)。GTCs增加了皮下白色脂肪組織PPAR丫的表達(dá)，較普通飲食組增加約39.8%(見圖2A);較高脂飲食組增加約50.2%(見圖2A)。GTCs降低了PPARy在內(nèi)臟白色脂肪(腸系膜)中的表達(dá)，較高脂飲食組降低約23.1%(見圖2B);較普通飲食組降低約18.7%(見圖2B)。結(jié)果表明，GTCs參與PPARs的調(diào)控是GTCs減肥的機(jī)制。在脂肪組織中GTCs顯示其獨(dú)特的效應(yīng)。GTCs增加了大鼠腹壁白色脂肪組織PPARY的水平，而降低了內(nèi)臟白色脂肪組織PPARY的水平。在內(nèi)臟白色脂肪組織中降低的PPARy的水平和脂肪組織的重量，表明應(yīng)用GTCs治療可以抑制脂肪在該部位的異常堆積。在腹壁白色脂肪組織，增加的PPARy的水平促使了成脂過程和促進(jìn)脂肪在腹壁沉積，減少在內(nèi)臟和肝臟和血液中。提升腹壁白色脂肪組織中脂質(zhì)的代謝功能是治療2型糖尿病的重要策略，因此，應(yīng)用綠茶或添加GTCs有助于改善疾病。GTCs上調(diào)了脂肪組織中PPARS及其下游基因的表達(dá)GTCs添加組增加了大鼠脂肪組織中PPARS的表達(dá)。棕色脂肪組織中，GTCs添加組較高脂飲食組增加約23.2%;較普通飲食組增加約19.7%(見圖3A)。皮下白色脂肪組織中，GTCs添加組較高脂飲食組增加約80.1%;較普通飲食組增加約39.6%(見圖3B)。內(nèi)臟白色脂肪組織中，GTCs添加組較高脂飲食組增加約52.4%;較普通飲食組增加約37.3%(見圖3C)。棕色脂肪組織的特征性表達(dá)UCP-1蛋白標(biāo)記，在GTCs添加組的皮下(見圖3D)及內(nèi)臟(見圖3E)白色脂肪組織中均有表達(dá)。結(jié)果表明，GTCs對PPARS的上調(diào)效應(yīng)。在棕色脂肪中，GTCs添加組顯著增加了CPT-1的表達(dá)，較高脂飲食組增加約27.4%;較普通飲食組增加約50.8%(見圖3F)。在棕色脂肪中，GTCs添加組顯著增加了A0X的表達(dá)，較高脂飲食組增加約42.7。/。；較普通飲食組增加約62.9%(見圖3G)。在棕色脂肪中，GTCs添加組顯著增加了UCP-1的表達(dá)，較高脂飲食組增加約19.7%;較普通飲食組增加約21.1%(見圖3H)。結(jié)果表明，GTCs添加組調(diào)整不同脂肪組織中脂肪的分布和整個體脂的水平。它增加了白色和棕色脂肪組織中PPARS的表達(dá)。特別是增加了PPARS下游的基因AOX，CPT-1和UCP-1的表達(dá)。棕色脂肪是機(jī)體產(chǎn)熱的主要組織(Lowell,B.B.&Spiegelman,B.M.(2000)A/a"re404，652-60),由GTCs誘導(dǎo)棕色脂肪組織中PPARS蛋白水平的表達(dá)提升了棕色脂肪氧化的功能。UCP-1是棕色脂肪組織中特征性的標(biāo)記，結(jié)果表明，應(yīng)用GTCs可促進(jìn)腹壁脂肪和內(nèi)臟脂肪組織中UCP1的表達(dá)，使得白色脂肪細(xì)胞具有棕色脂肪的特點(diǎn)。當(dāng)白色脂肪具有棕色脂肪的特征時，增加了白色脂肪的脂肪酸氧化和解耦聯(lián)。結(jié)果表明，GTCs治療可以增加整個機(jī)體能量的消耗和減少脂肪的體積是由于提高了棕色脂肪的功能和促使白色脂肪向棕色脂肪分化。EGCG改善了3T3-Ll脂肪細(xì)胞中PPARy,C/EBPa，P和CHOP-10的表達(dá)應(yīng)用油紅染色顯示，EGCG(1-5nM)顯著降低了3T3-L1脂肪細(xì)胞的甘油三脂的含量(見圖4A)。甘油三脂的定量分析顯示EGCG降低3T3-L1脂肪細(xì)胞甘油的沉積呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系(分別在l一時使降低約8%，在2pM時使降低約20%，和在5pM時使降低約35%(見圖4B)。EGCG增加了上清中甘油的分泌(見圖4C),但沒有增加脂肪酸的含量(見圖4D)。15EGCG僅在lOO(aM濃度時引起細(xì)胞凋亡(見圖4E)。F顯示C/EBPa，C/EBP(3，PPAR丫，CHOP-10和PPARS蛋白免疫印跡圖；L顯示了AOX,UCP-1，F(xiàn)AS和FAT的RT-PCR圖；EGCG上調(diào)了C/EBPa(見圖4G)和C/EBP(3(見圖4H)的表達(dá)，同時降低了CHOP-IO(見圖4J)的表達(dá)。EGCG也上調(diào)了轉(zhuǎn)錄因子PPARy的表達(dá)。(見圖41).EGCG上調(diào)了PPARS(見圖4K)的表達(dá)和涉及到能量消耗的酶包括AOX(見圖4M)和UCP-l(圖4N)。EGCG增加了脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(fattyacidtransporter,FAT)(見圖40)的表達(dá)，在較低的濃度也降低了游離脂肪酸(freefattyacids,FAS)(見圖4P)的表達(dá)。結(jié)果表明，EGCG通過PPAR5的通路改善了脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)氧化。EGCG可以顯著降低3T3-LI脂肪細(xì)胞中脂肪的堆積。低劑量EGCG甚至1uM也能夠提高脂肪細(xì)胞的功能。EGCG降血脂的主要原因上調(diào)成熟脂肪細(xì)胞PPARy、轉(zhuǎn)錄因子C/EBPa和e的表達(dá)，促進(jìn)脂肪酸的代謝和能量的消耗。EGCG可以通過抑制CHOP-10的表達(dá)上調(diào)PPAR"y，C/EBPp和C/EBPa的表達(dá)。生理劑量EGCG不但不抑制，而且還能夠提高脂肪細(xì)胞的功能。EGCG可以刺激脂肪細(xì)胞分化，誘導(dǎo)分化成小脂肪細(xì)胞。特別是EGCG可以增加線粒體的生成，增加脂肪酸氧化，以抵消脂肪細(xì)胞的肥大。只有濃度超過lOOixM時，EGCG能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。這個濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過生理劑量的EGCG。EGCG通過抑制脂肪細(xì)胞脂質(zhì)的堆積而不是誘導(dǎo)凋亡。胞漿內(nèi)的甘油三脂濃度直接與脂肪細(xì)胞的體積有關(guān)。結(jié)果表明，成熟脂肪細(xì)胞經(jīng)EGCG處理后可降低甘油三脂的含量。顯示EGCG能提高脂肪分解或脂質(zhì)氧化，減少脂肪細(xì)胞中的脂滴是由于促使了脂質(zhì)氧化。EGCG刺激3T3-Ll脂肪細(xì)胞線粒體的生成應(yīng)用不同濃度的EGCG0.1，1.0,2.0,5.0和10.0uM剌激脂肪細(xì)胞，結(jié)果顯示處理48小時后導(dǎo)致mito-trackergreen染色的熒光強(qiáng)度的增加(見圖5A)。EGCG在2.0和5.0iiM時，顯著刺激了線粒體體積的增加。脂肪細(xì)胞經(jīng)EGCG處理后，在1.0-5.0yM顯著增加了脂肪細(xì)胞的耗氧(見圖5B)。EGCG增加了脂肪細(xì)胞線粒體復(fù)合物蛋白I，II,V的表達(dá)(見圖5C)，EGCG在5.OnM時增加了復(fù)合物蛋白I的表達(dá)(131土5.9呢，p〈0.05相對于對照組)，增加了復(fù)合物蛋白II的表達(dá)(172±14%，口〈0.05相對于對照組)和復(fù)合物蛋白V(276土8.5%,p〈0.01相對于對照組)。EGCG在lO.OuM時增加了復(fù)合物蛋白V的表達(dá)(227土9.0%,p<0.01相對于對照組)。EGCG對復(fù)合物蛋白III的表達(dá)并無影響。EGCG增加了線粒體D-loop區(qū)DNA的拷貝數(shù)，D-lo叩區(qū)是啟動線粒體DNA重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)錄的起始部位。應(yīng)用EGCG處理后mtD-loop/18SRNA的比例在2.0-5.0ixM時顯著增加(見圖5D)。EGCG增加了脂肪細(xì)胞中PGC-la蛋白水平的表達(dá)(見圖5E)。EGCG在0.1-10.OyM濃度時增加PGC-la蛋白呈現(xiàn)鐘形曲線，在2.0nM時(154土9.6%，p<0.05vs.control)有顯著性差異。結(jié)果表明，EGCG在2-5wM可以顯著增加線粒體的體積，可以促使線粒體生成，增加了線粒體耗氧，增加了線粒體復(fù)合物蛋白I,II，V的表達(dá)和增加了線粒體DNA的表達(dá)。結(jié)果顯示EGCG能夠通過調(diào)控與肥胖有關(guān)的線粒體重塑，增加脂肪酸氧化以保護(hù)脂肪細(xì)胞避免由PPARs激活導(dǎo)致脂肪酸由血或其他臟器的再分布。EGCG可能通過提高PPARS和PGC-1a的相互作用而提高脂質(zhì)的氧化。討論P(yáng)PARa提升了肝臟組織中脂質(zhì)的消耗是通過提高了與e-氧化氧化基因的表達(dá)。先前的研究表明GTCs可增加C0S-1細(xì)胞株表達(dá)PPARa(Lee,K.(2004)JVefSc/'5，325-30)。本發(fā)明的結(jié)果表明應(yīng)用GTCs治療大鼠組與對照組相比PPARa在肝臟中表達(dá)下降。PPARa的下降與GTCs治療大鼠組脂肪下降有關(guān)。肥胖與脂肪細(xì)胞數(shù)目和體積相關(guān)，依賴于脂質(zhì)合成和脂質(zhì)分解(Spiegelman，B.M.&Flier，丄S.(1996)Ce//87，377-89)。PPAR-y導(dǎo)致循環(huán)中和其他器官中的脂肪酸進(jìn)入脂肪細(xì)胞。盡管其他報(bào)道指出EGCG能夠抑制前脂肪細(xì)胞的分化，但通常是在EGCG的濃度超過10uM(Ashida,H.，F(xiàn)uruyashiki,T.，Nagayasu，H.,Bessho，H.,Sakakibara，H.，Hashimoto,T.&Kanazawa，K.(2004)22，135-40,Mori，M.&Hasegawa,N.(2003)P/7y,erRes17，566-7，F(xiàn)uruyashiki,T,,Nagayasu，H.，Aoki，Y.，Bessho,H.，Hashimoto,T.，Kanazawa,K.&Ashida,H.(2004)8/osc/B/'o〖ec/no/8Zoc/em68，2353-9)。飲茶后，血中EGCG的濃度不超過2.5wM(l_ee，M.丄，Maliakal,P.,Chen，L.,Meng,X"Bondoc,F.Y.,Prabhu,S.,Lambert,G.,Mohr，S.&Yang,C.S.(2002)Cance廠￡p/c(em/o/8/onw/fe/"sPre/11，1025-32)。本發(fā)明的結(jié)果顯示在生理劑量EGCG不但不抑制，而且還能夠提高脂肪細(xì)胞的功能。治療2型糖尿病的藥物噻唑皖二酮類(thiazolidinediones，TZDs)，據(jù)報(bào)道能夠激活腹壁白色脂肪組織PPAR-y的表達(dá)(Fonseca,V,(2003)AmJMecf115Suppl8A，42S-48S,Bogacka，I.,Xie,H,，Bray,G.A.&Smith,S.R.(2004)D/'aibefesCare27，1660-7)，因此腹壁白色脂肪組織能夠儲藏糖和脂肪。TZDs對于腹壁脂肪組織的效應(yīng)，同時能夠降低血脂和內(nèi)臟其他臟器脂肪的堆積(Bogacka，I"Xie，H.,Bray,G.A.&Smith,S.R.(2004)D/'ajbetesCare27，1660-7，Mori,Y,，Murakawa,Y.,Okada，K.，Horikoshi,H.,Yokoyama,丄，Tajima,N.&lkeda,Y.(1999)D/abetesCare22，908-12)。因此，比較EGCG和TZDs藥物對于腹壁和內(nèi)臟脂肪組織產(chǎn)生相似的效果。但是這樣可能導(dǎo)致脂肪細(xì)胞體積的增大，但像EGCG可以刺激脂肪細(xì)胞分化，誘導(dǎo)分化成小脂肪細(xì)胞。特別是EGCG可以增加線粒體的生成，增加脂肪酸氧化，以抵消脂肪細(xì)胞的肥大。因此，關(guān)鍵點(diǎn)是脂肪細(xì)胞是否能夠?qū)⒀h(huán)中多余的脂肪燃燒，發(fā)明人進(jìn)一步來探討GTCs對于線粒體生成的作用。激活PPAsR通路的藥理效應(yīng)為促進(jìn)線粒體的生成，通過改善脂肪代謝或減少脂質(zhì)的堆積而治療肥胖及相關(guān)疾病。PGC-lct為調(diào)控線粒體生成，在肥胖癥患者的脂肪組織中下調(diào)(Semple，R.K.,Crowley，V.C.，Sewter,C.P.，Laudes，M.,Christodoulides,C.，Considine,R.V.，Vida卜Puig，A.&O'Rahilly,S.(2004)/nfJO/bes尺e/af/Wete/b0/sorrf28，176-9)。TZDs藥物如匹格列酮，能夠上調(diào)PGC-la的表達(dá)增加線粒體DNA的拷貝數(shù)，增加白色脂肪組織的氧化磷酸化從而增加胰島素的敏感性。(Wilson-Fritch，L.,Nicoloro,S.，Chouinard，M.，Lazar,M.A.,Chui,P.C.,Leszyk,丄，Straubhaar,丄，Czech,M.P.&Corvera,S.(2004)JC///1//wesf"4，1281-9，Bogacka,l,'Xie,H.，Bray，G.A.&Smith,S.R.(2005)D/aibefes54，1392-9)。海產(chǎn)品中多聚不飽和脂肪酸forskolin,PPARa和y的激動劑同樣被發(fā)現(xiàn)可以促進(jìn)線粒體生成和誘導(dǎo)脂肪酸氧化(Bogacka,l.，Ukropcova,B.，McNeil,M.，Gimble，丄M.&Smith,S.R.(2005)JC///1￡〃c/oc〃>7o/謝a/b90，6650-6，F(xiàn)lachs，P.,Horakova，O.，Brauner，P.,Rossmeisl，M.，Pecina，P.,Franssen-vanHal，N..(2005)D/'ajbefo/og/a48，2365-75)。發(fā)明人研究了EGCG對于3T3-L1脂肪細(xì)胞線粒體生成的作用顯示了EGCG在2-5uM可以顯著增加線粒體的體積表明可以促使線粒體生成，增加了線粒體耗氧，增加了線粒體復(fù)合物蛋白I，II,V的表達(dá)和增加了線粒體DNA的表達(dá)。結(jié)果顯示EGCG能夠通過調(diào)控與肥胖有關(guān)的線粒體重塑，增加脂肪酸氧化以保護(hù)脂肪細(xì)胞避免由PPARs激活導(dǎo)致脂肪酸由血或其他臟器的再分布。轉(zhuǎn)錄因子PGC-1a在脂肪組織和肌肉組織線粒體生成中扮演著重要的角色。PPARS和PGC-la的相互作用可以提高脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)的氧化(Wang,Y.X.,Lee，C.H.,Ti印，S.,Yu,R.T.，Ham，丄，Kang，H.&Evans,R.M.(2003)Ce〃113，159-70)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)EGCG能夠提高PGC-1a和PPAR5的表達(dá)，推測EGCG可能通過提高PPAR5和PGC-la的相互作用而提高脂質(zhì)的氧化。總之，GTCs的減肥效應(yīng)通過調(diào)控PPARs相關(guān)的通路，比如對于PPARy和的不同調(diào)控在棕色脂肪，腹壁脂肪，內(nèi)臟脂肪增加了由脂質(zhì)在脂肪細(xì)胞中的再分布及脂肪細(xì)胞中脂肪的氧化從而控制了體重。習(xí)慣性飲茶可能是控制肥胖與體重的很好的策略。由于是天然產(chǎn)物沒有副作用，對于肥胖患者來說GTCs可能成為更好的替代TZDs的藥品如匹格列酮。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。權(quán)利要求1.一種兒茶素或含兒茶素的提取物的用途，其特征在于，用于制備促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體生成的組合物。2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組合物用于降血脂、治療肥胖、和/或預(yù)防肥胖。3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組合物還用于調(diào)節(jié)過氧化物增殖物激活受體通路；和/或促進(jìn)脂肪酸氧化。4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的提取物包括綠茶提取物。5.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組合物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯。6.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述的組合物還包括表兒茶素、表沒食子兒茶素和/或表兒茶素沒食子酸酯。7.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組合物是藥物組合物、食物組合物或保健品組合物。8.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組合物含有(i)治療有效量的兒茶素，和(ii)藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體。9.一種兒茶素或含兒茶素的提取物在制備用于降血脂、治療和/或預(yù)防肥胖的組合物中的用途。10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述的組合物還可以用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體的生成。全文摘要本發(fā)明公開了兒茶素在降低血脂、治療、和/或預(yù)防肥胖中的應(yīng)用，它可通過促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體的生成來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明還公開了兒茶素在促進(jìn)脂肪細(xì)胞線粒體生成中的應(yīng)用，并由此產(chǎn)生降血脂、治療、和/或預(yù)防肥胖的功效。文檔編號A61P43/00GK101310718SQ20071004106公開日2008年11月26日申請日期2007年5月23日優(yōu)先權(quán)日2007年5月23日發(fā)明者劉健康,趙保路申請人:中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院