專利名稱：：香豆草醚類化合物及其組合物的用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于藥物學領域，更具體地，本發(fā)明涉及一種香豆草醚類化合物、或者含有該化合物的組合物的新用途。
背景技術：
：人外周血白細胞計數(shù)持續(xù)低于正常值(4xio7U時稱為白細胞減少，最常見的為中性粒細胞減少。病人可無癥狀或有非特異性癥狀，如乏力、納差、體力減退，并有易感染傾向。病人是否產(chǎn)生合并感染視粒細胞減少程度而定。感染部位以肺、尿路、皮膚等多見。白細胞減少可分為遺傳性和獲得性兩種，其中獲得性占多數(shù)。藥物、放射線、感染、毒素等均可使白細胞減少，藥物引起者最常見。治療時應仔細査找引起白細胞減少的原因，根據(jù)病因選擇相應的治療措施。促白細胞生成的藥物種類較多，如利血生、康力龍、維生素B6等，但療效均欠佳，停藥后，白細胞往往會重新跌落。白細胞減少癥在中醫(yī)屬于"虛勞"或"眩暈"等范疇，有諸多癥狀的記載與本證相似。如《靈樞《海論》所述"髓海不足，則腦轉耳鳴，脛酸，眩，目無所見，懈怠安臥。"《理虛元鑒》提到"腿酸腳軟，蒸蒸內(nèi)熱，胸中邪氣隔緊，食不易饑。"現(xiàn)代中醫(yī)對本癥臨床研究的報道始見于60年代。1965年，有人用雞血藤制劑治療因放射線引起的白細胞減少癥。隨后，70-80年代大致從脾腎兩虛的角度進行論治，各家根據(jù)各自的臨床經(jīng)驗，側重有所不同。到了80年代初期，根據(jù)葉天士"初病在氣，久病入血"，"瘀血不去，新血不生"等理論，在補益脾腎或補益氣血的基礎上，選用少量活血藥物，從而提高了療效。目前，中醫(yī)中藥治療白細胞減少癥已經(jīng)積累了豐富經(jīng)驗，許多中藥被證實具有促進造血干細胞恢復，改善造血微環(huán)境及調整免疫功能紊亂的作用。墨旱蓮是一味傳統(tǒng)的中藥材，為菊科植物鱧腸(i5Wj'p"pro"rataLinn.)的全草，始載于《唐本草》。中醫(yī)認為墨旱蓮性甘酸、涼，入肝、腎經(jīng)，具有滋肝補血、涼血止血之功效，主治吐血、咳血、須發(fā)早白、淋濁、帶下等癥?，F(xiàn)代藥理學研究表明，墨旱蓮具有止血、擴血管、抗誘變、抗炎等方面的作用。本發(fā)明人經(jīng)過深入研究，發(fā)現(xiàn)中藥墨旱蓮中存在多種有效的化學成分黃酮、皂甙、香豆草醚類化合物等。對其含有的香豆草醚類化合物進行進一步的研究發(fā)現(xiàn)其具有調節(jié)免疫系統(tǒng)，治療類風濕性關節(jié)炎、哮喘、腫瘤、肝損傷等多種疾病的藥理作用，并已申請國家發(fā)明專利，專利申請?zhí)柗謩e為-200310124512、200510023677、200510112435、200710036458。然而，目前還沒有關于香豆草醚類化合物在治療白細胞減少方面的新用途的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種治療白細胞減少的香豆草醚類化合物。在本發(fā)明的第一方面，提供一種式I所示的香豆草醚類化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或者含式I所示的香豆草醚類化合物或其藥學上可接受的鹽或酯的提取物的用途，式中，!^代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、d-Cs烷基；R3和R4各自獨立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；其被用于制備預防或治療白細胞減少的藥物。在另一優(yōu)選例中，所述的藥學上可接受的鹽或酯是式I化合物與選自下組的酸所形成的鹽或酯氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羥乙磺酸；或者在另一優(yōu)選例中，所述的藥學上可接受的鹽是式I化合物與選自下組的堿金屬或堿土金屬所形成的鹽鈉、鉀、鈣、鎂等。在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物或所述的提取物是從菊科植物中提取的。在另一優(yōu)選例中，所述的菊科植物選自鱧腸(fch'pz^;ras^r"eLinn)、蟛蜞菊(FeoWiac力i/2e/2sis)。在另一優(yōu)選例中，所述的式I所示化合物是式II所示的蟛蜞菊內(nèi)酯H3C-0、OH-II、OH在另一優(yōu)選例中，所述的白細胞減少選自下組白細胞減少癥、粒細胞減少癥。在另一優(yōu)選例中，所述的粒細胞減少癥選自下組慢性粒細胞減少癥、周期性粒細胞減少癥。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物還用于預防或治療免疫抑制。在本發(fā)明的第二方面，提供一種組合物，所述的組合物含有(a)作為主要活性成分的0.05-99w"/。的式I所示化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或者含式I所示化合物或其藥學上可接受的鹽或酯的提取物式中，K代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C,-C8垸基;R3和R4各自獨立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；(b)有效量的選自下組的一種或多種輔助活性成分維生素B4、輔酶A、脫氧核糖核酸、鯊肝醇、集落刺激因子、重組人類粒細胞集落刺激因子(GCSF)、粒細胞一巨噬細胞集落刺激因子(CNCSF);(c)藥學上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述組合物中，輔助活性成分的含量是0.0001-20wt%。在另一優(yōu)選例中，所述組合物的劑型選自注射劑、注射用無菌粉末、片劑、膠囊、醑劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、酊劑、氣霧劑、粉霧劑、栓劑。另一方面，本發(fā)明還提供一種能有效升高白細胞的方法，所述方法包括，給予需要的患者有效量的式I所示的香豆草醚類化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或者含式I的香豆草醚類化合物或其藥學上可接受的鹽或酯的提取物式中，R,代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、d-G烷基；R3和R4各自獨立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基。具體實施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)香豆草醚類化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或者含有該化合物的植物提取物具有明顯的升高白細胞的作用，因而可用于治療各種原因引起的白細胞減少，特別是有效改善放療、化療后病人白細胞減少的癥狀，有效對抗化療藥物引起的免疫抑制，提高機體的免疫反應。在此基礎上完成了本發(fā)明。如本文所用，本發(fā)明化合物指式I化合物:R2-0其中，^代表氫原子、羥基、甲氧基-，R2代表氫原子、羥基、G-Cs烷基；R廠R4各自獨立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基。如本文所用，所述的"烷基"是指具有18個碳原子的直鏈或支鏈的垸基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。優(yōu)選具有14個碳原子的直鏈或支鏈的烷基。最優(yōu)選甲基。式I化合物可由植物中提取獲得，或者可通過化學合成、半合成、生物轉化的方式獲得，例如從菊科植物鱧腸Cch》taprostataLinn)、蟛蜞菊(/fet/ehacM/7e/7^'s)等植物中提取。該化合物在菊科植物中的提取部位為植物的枝、葉、花或果實部位?？蓪⒑惺絀化合物的植物提取物直接給藥；或者可將式I化合物的植物提取物進行提純和加工，制成純凈形式的式I化合物、或各種形式的式I化合物的制劑后，用于給藥。本發(fā)明的化合物可以以藥學或生理學上可接受的鹽或酯的形式使用。這些鹽或酯包括(但不限于)與如下酸形成的鹽或酯氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、羥乙磺酸。鹵化物的鹽同樣適用。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以及以其他常規(guī)的"前體藥物"形式存在的鹽(當以這種形式給藥時，在體內(nèi)可轉化成活性部分)。含有式I化合物的提取物也可用于本發(fā)明。一種優(yōu)選的提取方法如上所述。通常，在提取物中式I化合物的純度按重量計應在0.01%-99.9%，更佳地為20-98%。用途和組合物本發(fā)明的香豆草醚類化合物或含有該化合物的提取物可用于治療白細胞減少。所用的活性成分的有效劑量可隨給藥模式和待治療疾病的嚴重程度而變化。然而，通常當本發(fā)明的化合物每天以約O.5-500mg/kg動物體重的劑量給予時，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以2-4次分開的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對大部分大型哺乳動物而言，每天的總劑量約為l-100mg。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學上可接受的載體混合的約0.5-500mg的活性化合物。可調節(jié)此治療方案以達到最佳治療效果。例如，可根據(jù)治療狀況的需要，每天若干次分開給藥，或將劑量按比例減少。通常，成人口服臨床劑量的范圍為1-1000rag/日，優(yōu)選為10-200mg/日，成人非口服的劑量為0.l-100mg/日，優(yōu)選1-100rag/曰。在使用本發(fā)明化合物或含有該化合物的提取物治療白細胞減少時，還可與其他治療劑聯(lián)用。例如與選自下組的一種或多種輔助活性成分聯(lián)用維生素B4、輔酶A、脫氧核糖核酸、鯊肝醇、集落刺激因子、重組人類粒細胞集落刺激因子(GCSF)、粒細胞一巨噬細胞集落刺激因子(CNCSF)。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，香豆草醚類化合物或其藥學上可接受的鹽或酯與這些輔助性活性成分聯(lián)用可顯著提高療效。本發(fā)明還包括治療白細胞減少的方法，它包括給哺乳動物施用藥物有效量的本發(fā)明化合物。"藥學上可接受的"成分是適用于人和/或動物而無過度不良副反應(如毒性、刺激和變態(tài)反應)即有合理的效益/風險比的物質。"藥學上可接受的載體"是用于將本發(fā)明的香豆草醚類化合物或其生理上可接受的鹽傳送給動物或人的藥學上或食品上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑。載體可以是液體或固體。通常，當本發(fā)明化合物用于上述用途時，它們可與一種或多種藥學上可接受的載體或賦形劑混合制成不同給藥途徑的藥物劑型，如注射劑、注射用無菌粉末、片劑、膠囊、醑劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、酊劑、氣霧劑、粉霧劑、栓劑等。上述劑型中可經(jīng)口服給藥的劑型為片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、醑劑。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸氫鈣、微晶纖維素、蔗糖、白陶土、微粉硅膠、滑石粉、低取代羥丙基纖維素、羧甲基淀粉鈉、聚乙烯吡咯垸酮。而液態(tài)載體包括無菌水、乙醇、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制備藥物組合物的過程中通常使用的佐劑包括調味劑、著色劑、防腐劑(如羥苯烷基丁酯、苯甲酸鈉、山梨酸)和抗氧化劑(如維生素E、維生素C、焦亞硫酸鈉和二丁基羥基甲苯)。上述劑型中可用于注射途徑給藥的劑型包括注射劑、注射用無菌粉末，它們是將藥物與一種或多種藥學上可接受的賦形劑混合制成以供注射給藥的形式。溶劑包括無菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，還需加入抑菌劑(如苯甲醇、羥苯丁酯、硫柳汞)、等滲調節(jié)劑(如氯化鈉、葡萄糖)、助懸劑(如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素)、增溶劑(吐溫-80、卵磷酯)、抗氧化劑(如維生素E、維生素C、焦亞硫酸鈉)和填充劑(如乳糖、甘露醇)。上述劑型中可經(jīng)胃腸道外途徑給藥的有氣霧劑、粉霧劑、栓劑。粉霧劑中適合的載體實例包括乳糖、葡聚糖、阿拉伯膠、甘露、葡萄糖和十二烷基硫酸鈉。氣霧劑中適合的溶劑為無菌水、乙醇、植物油、油酸。適合的拋射劑為三氯一氟甲垸、二氯二氟甲垸、丙烷、異丁垸、二氧化碳、氮氣。栓劑的制備可將藥物與一種適合的無刺激性賦形劑混合而成，賦形劑包括可可脂、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羥苯乙酯、甘油。從易于制備和給藥的立場看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊。優(yōu)選口服給藥。本發(fā)明的主要優(yōu)點在于(1)首次揭示香豆草醚類化合物具有明顯的升高白細胞的作用，因而可用于治療各種原因引起的白細胞減少，特別是有效改善放療、化療后病人白細胞減少的癥狀，有效對抗化療藥物引起的免疫抑制，提高機體的免疫反應。(2)所述的香豆草醚類化合物可以從天然植物中獲得，對人體沒有毒副作用。下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分比和份數(shù)按重量計。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。實施例1旱蓮草(五ch'p"^&)中提取化合物蟛蜞菊內(nèi)酯(1)浸泡及過濾旱蓮草全草300kg，完全浸入0.75噸乙醇(濃度95%)中一浸泡過夜(10小時)一粗濾，從而除去全草殘渣(保留)一凈濾(抽濾)或高速離心(10000rpm，10分鐘)，從而除去灰塵及細渣一綠色澄清濾液。(2)乙醇回收蒸餾回收乙醇，溫度不超過60。C—每次回餾2小時，將反應釜中的浸膏移出至收集桶中(浸膏呈深墨綠色，略粘稠狀)一重復上述步驟，直至回收全部乙醇。(3)二次浸泡及回餾回收乙醇0.75噸，重新浸泡全草殘渣一浸泡過夜，粗濾、凈濾及蒸餾回收要求同前。得到浸膏。(4)乙酸乙酯萃取取上述浸膏50-80°C(更佳地60-7(TC)加熱水振蕩混勻，熱水加量為浸膏體積的50倍，抽濾得到熱水相液。按照水相酯相體積比為l:l的比例加入萃取用的乙酸乙酯，充分混勻震蕩后，靜置，待水相/酯相分層。移出乙酸乙酯層，5(TC真空減壓蒸餾至干燥，加入少量乙醇溶解，置于燒杯中于4。C保存過夜，底部出現(xiàn)沉淀。減壓抽濾獲得沉淀，5(TC烘箱干燥，得到粗品。(5)產(chǎn)品的分離精制取粗品5g，拌樣于10g200300目硅膠，進行硅膠柱層析(200g，200-300目)，用石油醚-丙酮梯度洗脫，每IOOmL收集一次，分別得到不同極性部位，合并(TLC石油醚-丙酮1:1，Rf=1/3)的斑點。將合并的組份濃縮后，再拌樣于硅膠進行柱層析，用二氯甲垸-丙酮梯度洗脫，每50mL收集一次，分別得到不同極性部位，合并(TLC二氯甲垸-丙酮3:l，Rf^/6)的斑點。將合并的組份濃縮后，再拌樣于硅膠進行柱層析，用甲苯-丙酮-甲酸梯度洗脫，每50mL收集一次，分別得到不同極性部位，合并(TLC甲苯-丙酮-甲酸10:10:1,Rf=l/2)的斑點。將合并的組份濃縮后，再拌樣于硅膠進行柱層析，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，每25mL收集一次，分別得到不同極性部位，合并(TLC二氯甲垸-甲醇20:l，Rf^/6)的斑點。得到純度〉90%的產(chǎn)品，收率約1%。(6)標準品精制將純度〉90%的樣品30mg溶于7(m甲醇中，用Lichropr印RP-18(4063p)柱進行反相洗脫，用TLC檢測，收集70%洗脫下來的樣品，合并得到純度〉98%的標準品。收率約90%。標準品的性狀、分子式、熔點和IR，EIMS，'H應R，"CNMR峰的歸屬如下灰白色粉末，分子式C6H,。07，mp315。C(分解)，UVXmax(MeOH，nm):211.5(4.65)，247(4.40)，304(4.01)(sh)，350(4.48)。IR(KBr)cnf13300，1715，1640，1620，1445，1415，1320,1205,1155，1070。EIMS/z/z(%):314(M+，100)，313(22),299([M—CH3]，28)，285(5)，271([M—CH廠CO]，8)，243([M-CH3-CO-CO]，28)，187(17)，69(42)。力NMR(5):7.23(s)，7.14(s)，6.58(d，J=2.3Hz)，6.42(d,J=2.3Hz)，3.90(s)13園,158.0(C-1)，101.1(C-2)，159.6(C-3)，95.6(C-4)，99.3(C-5)，161,1(C—6)，95.0(C—7)，155.5(C—8)，155.0(C—9)，104.7(C—10)，145.2(C—11)，144.3(C—12)，99.0(C—13)，114.0(C—14)，148,7(C—15)，55.7(C-16)。結果表明，獲得的化合物是具有式II的蟛蜞菊內(nèi)酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>通過上述方法提取得到的蟛蜞菊內(nèi)酯(以下稱APL-l)，用于以下各實施例中。實施例2蟛蜞菊內(nèi)酯對環(huán)磷酰胺致小鼠白細胞減少的治療作用實驗動物雄性SPF級C57BL/6小鼠60只，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，體重為22-24g。SPF級動物房詞養(yǎng)，12h光照/12h黑暗，自由攝取飼料和水。實驗方法1、造模方法除正常對照組外，將其余的動物隨機分為5組，腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg連續(xù)3天造成白細胞減少癥模型；2、給藥情況(l)正常組，(2)模型組，(1)(2)組小鼠分別給予體積為0.lml/10g的生理鹽水；(3)(4)組分別為利可君高、低劑量組小鼠分別給予劑量為40mg/kg、10mg/kg的利可君；(5)(6)(7)組分別為APL-1高、中、低劑量組小鼠分別給予劑量為100mg/kg、25mg/kg、5mg/kg的APL-1。以上各組均為造模前提前3天灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。本實驗通過環(huán)磷酰胺造模前提前3天給藥，從而使藥物在血液中的濃度明顯升高，達到治療有效量。末次給藥24h后，摘眼球取血，檢測血中白細胞總數(shù)(WBC)，并計算升白率(升高白細胞的百分率)=[(給藥組白細胞數(shù)-模型組白細胞數(shù))/模型組白細胞數(shù)]乂100%，結果見表1。表l蟛蜞菊內(nèi)酯對環(huán)磷酰胺致小鼠白細胞減少的影響(X土SD，n=組別數(shù)量(只)劑量(mg/kg)wbc(xio7l)升白率(%)正常組10—7.80±1.52—模型組10—1.91±0.45A—利可君高劑量組10402.09±0.429.42利可君低劑量組10104.09±1.12*114.14APL-1高劑量組101004.51±1.11*136.13APL-l中劑量組10254.08±1.65*113.61APL-l低劑量組1053.36±1.1075.92求表示/X0.05，與模型組相比，有顯著性差異;a表示P〈0.05，與正常組相比，有顯著性差異。結果表明，模型組小鼠的白細胞數(shù)(1.91±0.45)與正常組(7.80±1.52)相比具有顯著差異0X0.05)，表明造模成功。APL-l高、中劑量組小鼠的白細胞數(shù)(4.51±1.11，4.08士1.65)明顯高于模型組(1.91士0.45)，差異有顯著性(p〈0.05)。而陽性藥-利可君低劑量組的藥效反而優(yōu)于高劑量組，說明其安全性有待進一步考察。以上實驗結果表明，蟛蜞菊內(nèi)酯對環(huán)磷酰胺所致外周血白細胞數(shù)減少有明顯的保護、治療作用，且未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用，安全性好。此外，本發(fā)明人的實驗還表明，在給予APL-1的同時給予白細胞減少的小鼠維生素B4、輔酶A、脫氧核糖核酸或鯊肝醇，可實現(xiàn)更好的升高白細胞效果。實施例3蟛蜞菊內(nèi)酯對6°Co-y所致小鼠骨髓損傷的保護作用實驗動物雄性SPF級ICR小鼠60只，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，體重為22-24g。SPF級動物房飼養(yǎng)，12h光照/12h黑暗，自由攝取飼料和水。實驗方法1、造模方法除正常對照組動物外，將其余的動物隨機分為5組，用，0-Y射線照射一次，劑量為7.50Gy(劑量率為450倫/分)。2、給藥情況(l)正常對照組，(2)模型組，(1)(2)組小鼠分別給予體積為0.lml/10g的生理鹽水；(3)(4)組分別為利可君高、低劑量組小鼠分別給予劑量為40mg/kg、10mg/kg的利可君；(5)(6)(7)組分別為APL-l高、中、低劑量組小鼠分別給予劑量為100mg/kg、25rag/kg、5mg/kg的APL-1。以上各組均為照射前7天灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14天。末次給藥24h后，摘眼球取血，檢測血中白細胞數(shù)(WBC)，并計算升白率=[(給藥組白細胞數(shù)-模型組白細胞數(shù))/模型組白細胞數(shù)]X100。/。，結果見表2。表2蟛蜞菊內(nèi)酯對6°Co-Y照射損傷小鼠血液學的影響(X±SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*表示/7<0.05，與模型組相比，有顯著性差異；a表示P〈0.05，與正常組相比，有顯著性差異。結果顯示，APL-1高、中劑量組的白細胞數(shù)與模型組相比有顯著性差異，并且療效和安全性明顯優(yōu)于陽性對照藥-利可君。APL-l對，o-Y照射所致外周白細胞減少有明顯的保護、治療作用。實施例4蟛蜞菊內(nèi)酯抵抗環(huán)磷酰胺對小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的抑制作用實驗動物雄性SPF級KM小鼠60只，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，體重為22-24g。SPF級動物房飼養(yǎng)，12h光照/12h黑暗，自由攝取飼料和水。實驗方法1、造模方法除正常對照組外，將其余的動物隨機分為5組，腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg造成白細胞減少癥模型；2、給藥情況(l)正常對照組，(2)模型組，(1)(2)組小鼠分別給予體積為0.lml/10g的生理鹽水；(3)(4)組分別為利可君高、低劑量組小鼠分別給予劑量為40rag/kg、10mg/kg的利可君;(5)(6)(7)組分別為APL-l高、中、低劑量組小鼠分別給予劑量為100mg/kg、25mg/kg、5mg/kg的APL-1。以上各組均為造模前提前3天灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。本實驗通過環(huán)磷酰胺造模前提前3天給藥，從而使藥物在血液中的濃度明顯升高，達到治療有效量。末次給藥24h后，眼眶放血處死動物，稱體重，解剖取胸腺和脾臟，并用電子天平精密稱重，計算各組動物的胸腺指數(shù)(胸腺指數(shù)=胸腺重量/體重)和脾指數(shù)(脾指數(shù)=脾重量/體重)。結果見表3。蟛蜞菊內(nèi)酯對免疫功能低下小i艮的脾、胸腺指數(shù)的影響(X士SD,n:<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>*表示;<0.05，與模型組相比，有顯著性差異;a表示P〈0.05，與正常組相比，有顯著性差異。實驗結果表明，腹腔注射環(huán)磷酰胺后，與正常對照組相比，模型組小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)顯著降低，表明造模成功。大、中劑量的APL-l可顯著增加免疫功能低下小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，且差異具有顯著性(P〈0.05)。因此，APL-1能夠顯著對抗免疫抑制劑引起的免疫器官萎縮，對免疫器官具有保護作用，說明APL-1可改善免疫抑制小鼠的非特異免疫功能。實施例5制備片劑利用常規(guī)技術，混合以下組分，然后直接壓片，制備片劑形式的藥物組合物，其配方如表4、表5和表6。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表5<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實施例6制備注射劑注射劑的配方如表7所示。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>制備方法如下①將亞硫酸氫鈉加于500ml注射用水中，加入羧甲基纖維素鈉，混勻，浸泡過夜(24小時)，全溶后，用210目尼龍布過濾；②將溶液①水浴加熱，加入吐溫-80，混勻；③至水浴沸騰，加入蟛蜞菊內(nèi)酯，混勻，繼續(xù)加熱30分鐘，取出冷卻至室溫，G3垂熔玻璃漏斗過濾；④加注射用水至1000ml，混勻，灌封，用10(TC30分鐘滅菌。在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。權利要求1.一種式I所示的香豆草醚類化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或者含式I所示的香豆草醚類化合物或其藥學上可接受的鹽或酯的提取物的用途，式中，R1代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C1-C8烷基；R3和R4各自獨立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；其特征在于，被用于制備預防或治療白細胞減少的組合物。2.如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述的藥學上可接受的鹽或酯是式I化合物與選自下組的酸所形成的鹽或酯氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羥乙磺酸。3.如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述的藥學上可接受的鹽是式I化合物與選自下組的堿金屬或堿土金屬所形成的鹽鈉、鉀、鈣或鎂。4.如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物或所述的提取物是從菊科植物中提取的。5.如權利要求4所述的用途，其特征在于，所述的菊科植物選自鱧腸、蟛蜞菊。6.如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述的式I所示化合物是式II所示的蟛蜞菊內(nèi)酯7.如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述的白細胞減少選自下組白細胞減少癥、粒細胞減少癥。8.如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述的組合物還用于預防或治療免疫抑制。9.一種組合物，其特征在于，所述的組合物含有(a)作為主要活性成分的0.05-99wty。的式I所示化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或者含式I所示化合物或其藥學上可接受的鹽或酯的提取物式中，R代表氫原子、羥基、甲氧基；R2代表氫原子、羥基、C「Cs垸基；R3和R4各自獨立地選自氫原子、鹵素原子、羥基、甲氧基；(b)有效量的選自下組的一種或多種輔助活性成分維生素B4、輔酶A、脫氧核糖核酸、鯊肝醇、集落刺激因子、重組人類粒細胞集落刺激因子、粒細胞一巨噬細胞集落刺激因子；和(c)藥學上可接受的載體。10.如權利要求9所述的組合物，其特征在于，所述組合物的劑型選自注射劑、注射用無菌粉末、片劑、膠囊、醑劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、酊劑、氣霧劑、粉霧劑、栓劑。全文摘要本發(fā)明屬于藥物學領域，公開了一種香豆草醚類化合物、含有該化合物的組合物在預防或治療白細胞減少相關疾病方面的應用。因而香豆草醚類化合物或其組合物可用于治療各種原因引起的白細胞減少，特別是有效改善放療、化療后病人白細胞減少的癥狀，有效對抗化療藥物引起的免疫抑制，提高機體的免疫反應。文檔編號A61K31/366GK101416960SQ20071004744公開日2009年4月29日申請日期2007年10月26日優(yōu)先權日2007年10月26日發(fā)明者強俞申請人:上海安普生物科技有限公司